Klinisk-patologisk betydning claudin-4 i gastrisk carcinoma

klinisk-patologisk betydning claudin-4 i gastrisk karcinom
Abstract
Baggrund
afvigende ekspression af claudin proteiner er blevet rapporteret i mange forskellige cancere. Tidligere undersøgelser har vist, at overekspression af claudin kan fremme tumorgenese og metastase gennem øget invasion og overlevelse af tumorceller. Men den prognostiske betydning af claudin-4 i gastrisk cancer stadig uklar. Salg Metoder
Immunhistokemi blev anvendt til at analysere ekspressionen af ​​claudin-4 i 329 kliniske gastrisk cancer prøver og 44 normale mave prøver, 21 intestinal metaplasi prøver, og 21 i nærheden forstadielæsioner dysplasi prøver. Statistiske analysemetoder blev anvendt til at vurdere forholdet mellem claudin-4-ekspression og forskellige klinisk-patologiske parametre. Univariate og multivariate analyser blev udført henholdsvis at opdage de uafhængige prædiktorer for overlevelse.
Resultater
Claudin-4-ekspression var til stede i kun 7 (15,9%) normale gastriske prøver, men udtryk for claudin-4 i den intestinale metaplasi læsioner og dysplasi læsioner var 90,5% og 95,2%, henholdsvis. Udtrykket af claudin-4 var signifikant associeret med histologisk differentiering (P
< 0,001) og tumor vækstmønstre (P
< 0,001), men ikke i forbindelse med patientens overlevelse. Men mellemliggende form farvning af claudin-4 udviste en tendens til korrelation med patienternes overlevelse (P
= 0,023). De fem-års overlevelse med lav udtryk for claudin-4 i mellemliggende type (76,4%) svarede til ekspanderende type (64,5%), mens den høje udtryk gruppen (46,6%) var tættere på infiltrativ type (50,7%).
konklusioner
resultaterne i denne undersøgelse demonstrerer claudin-4 afvigende udtryk i mavekræft og prækursorer læsioner. Udtrykket af claudin-4 kunne tjene som grundlag for at identificere mavekræft af det mellemliggende type.
Nøgleord
Gastric karcinom claudin-4 Tight junctions Baggrund
mavekræft er en af ​​de mest almindelige maligne sygdomme, og ca. 738.000 dødsfald på grund af mavekræft i 2008 på verdensplan. Over 70% af nye tilfælde og dødsfald sker i udviklingslande, især i Østasien [1]. Mavekræft forstås generelt at udvikle sig som en flertrins progression af kronisk gastritis, atrofisk gastritis, intestinal metaplasi, dysplasi, og endelig kræft [2]. Under denne proces er tab af cellepolaritet og sprængning af celle-celle kryds hyppigst observerede, og dette spiller en vigtig rolle i udviklingen af ​​kræft.
Tight junctions (TJs) er kritiske for opretholdelse normale struktur og fysiologiske funktion af epitelet og endotel [3, 4]. TJs ikke blot tjene som en fysisk barriere for at forhindre opløste stoffer og vand i at passere frit gennem den paracellulære rum mellem epitel- og endotelcelle ark, men også spille kritiske roller i at opretholde celle polaritet og signaltransduktion [3, 5, 6]. Men kræftceller ofte udviser unormal TJ funktion [7].
Claudins er medlemmer af en stor familie af transmembrane proteiner, som er blandt de væsentlige elementer i TJs, og claudin-afvigende udtryk potentielt fører til strukturel og funktionel beskadigelse af TJs [ ,,,0],8]. I øjeblikket har i alt 24 claudin gener blevet identificeret i pattedyr, og de viser ofte vævsspecifikke mønstre udtryksformer [9]. For nylig har adskillige undersøgelser vist den afvigende ekspression af claudins i flere humane cancere [10, 11]. Så vidt vi ved, har ekspressionen af ​​Claudin-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 18 og 23 blevet rapporteret i gastriske cancere [12-23]. Blandt de forskellige claudin proteiner relateret til gastrisk cancer, funktionen af ​​claudin-4 var ikke konsekvent. For eksempel Jung et al
. [15] og Ohtani et al
. [19] fandt, at ekspressionen af ​​claudin-4 signifikant korreleret med gunstige overlevelse for patienter med gastrisk cancer i 72 og 124 tilfælde hhv. Imidlertid Resnick et al
. [13] rapporterede, at moderat til stærk claudin-4-farvning i gastrisk cancer var signifikant associeret med ringe overlevelse i 146 tilfælde. Soiniet al
. [14] fundet nogen klar sammenhæng mellem claudin-4-ekspression og patient prognose i 118 tilfælde. Interessant også har ekspressionen af ​​claudin-4 vist sig at spille en rolle, når matrixmetalloproteinase (MMP) -aktivitet, hvilket indikerer, at claudin-4 kunne have medieret invasion gennem aktiveringen af ​​MMP'er [24, 25]. Endvidere tidligere undersøgelser rapporteret, at claudin-4 kan have potentiale som en behandling af cancer [26-28]. Således er yderligere undersøgelser for at klarlægge disse kontroversielle resultater og de reelle funktioner af claudin-4. I denne undersøgelse, vi havde til formål at identificere de klinisk-patologiske foreninger og prognostisk værdi claudin-4-ekspression i mavekræft.
Metoder
Patienter og vævsprøver
I denne undersøgelse, vævsprøver fra i alt 329 patienter med mavekræft blev opnået mellem 1998 og 2004 på Kirurgisk afdeling Onkologisk, det første hospital i Kina Medical University. Alle patienter undergik helbredende radikal gastrektomi med standard lymfeknude dissektion. Den histopatologisk diagnose af 21 intestinal metaplasi, 21 dysplasi, 44 mikroskopisk normal maveslimhinden, og 329 gastrisk adenocarcinom prøver fra de 329 patienter blev udført af to uafhængige patologer. Vi opnåede skrevet informeret samtykke fra alle patienter, og undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité i Kina Medical University. Ingen af ​​patienterne havde modtaget kemoterapi eller strålebehandling før det kirurgiske indgreb. De detaljerede postoperative patologi diagnose rapporter blev opnået og omfattede køn, alder, tumor placering, størrelse, differentiering status, vækstmønster, og tumor-node-metastaser (TNM) fase. Kriterierne for TNM klassifikationen for gastrisk karcinom var i overensstemmelse med det 7. 2010 amerikanske fælles udvalg om kræft (AJCC) iscenesættelse manual [29]. Kriteriet for histopatologisk sortering af differentiering var i overensstemmelse med 2000 WHO klassifikation af gastrisk karcinom [30]. Kriteriet for mønstret af tumorvækst var i overensstemmelse med den japanske klassifikation af gastrisk karcinom, 3rd engelsk udgave. Alle patienters karakteristika er sammenfattet i tabel 1. Den patientprøve omfattede 238 mænd og 91 kvindelige patienter med en gennemsnitsalder på 57 år (interval 26 til 81 år). Alle patienter blev fulgt op via telefon forespørgsel eller spørgeskema, og opfølgeren tid varierede fra 1 til 136 måneder (median på 56 måneder) .table 1 Clinicopathologic karakteristika 329 patienter med gastrisk karcinom
Variabel
Value

Alder ved kirurgi, y
Mean
57,0
Range
26-81
Køn, nummer
Mand
238
Female
91
Tumor størrelse, cm
Mean
5,0
Range
1,0, 15,0
Tumor placering, antal
Øvre
31
Mellemøsten
53
Lavere
245
Differentiering status, nummer
godt differentieret
47
Moderat differentieret
54
Dårligt differentieret
218
Udifferentieret
10
vækst mønster, nummer
Udvidelse
76
Intermediate
81
infiltrativ
172
Tumor (T) fase, nummer
T1
44
T2
52
T3
164
T4
69
Node (N) fase, nummer
n0
100
N1
39
N2
76
N3
114
Lymfe invasion, nummer
Negativ
248
Positiv
81
Tumor fase, nummer
IA, IB
63
IIA, IIB
86
IIIA, IIIB, IIIC
180
Vital statistik, nummer
Alive
152
Dead, alle årsager
177
Dead, mavekræft
143
Dead, relateret
22
Information utilgængelig
12
Immunhistokemi
formalin-fikseret og paraffin-indstøbt (FFPE) vævsblokke blev skåret i 5-um-tykke snit, derefter afparaffiniseret med xylen og rehydreret med en gradueret serie af ethanol. Snittene blev inkuberet i kogende citronsyre-buffer (pH 6,0) for antigen hentning i en damp trykkoger. Sektionerne blev inkuberet natten over ved 4 ° C med de følgende primære antistoffer: anti-claudin-4 monoklonalt antistof, 1: 100 fortynding, klon 3E2C1, Zymed Laboratories Inc., CA, USA. Immunhistokemisk farvning blev udført under anvendelse af MaxVision TMHRP-Polymer anti-Mouse /Rabbit IHC Kit (Fuzhou Maixin, Kina) med 3 amino-9-ethyl carbazol (AEC) som enzymsubstratet. Snittene blev derefter let modfarvet med hæmatoxylin. Positive kontroller var colon slimhinde og prøverne, hvor det primære antistof blev erstattet med ikke-reaktive antistoffer tjente som negative kontroller.
Immunofarvning resultater blev fortolkes uafhængigt af to patologer hjælp af en semi-kvantitativ pointsystem [31]. Immunofarvningen reaktioner blev vurderet ved farvning intensitet (0, ingen plet, 1, svag; 2, moderat, 3, stærk) og procentdelen af ​​farvede epitelceller (0, < 5%, 1, 5 til 25%; 2, 26 til 50%; 3 51 til 75% og 4, > 75%). Den procentvise positivitet af epitelceller og farvningsintensitet blev derefter multipliceret til dannelse immunoreaktiviteten score (IS) for hvert tilfælde. Prøver blev rescored hvis der var uoverensstemmelser i ER mellem de to patologer, indtil enighed var nået. Vi delte prøverne i to grupper baseret på resultaterne af immunfarvning i vævene: lav ekspression (IS < 4) og høj ekspression (IS ≥ 4). Denne evaluering system til claudin-4 er blevet anvendt i tidligere undersøgelser [32].
Statistisk analyse
En meta-analyse blev udført for at bekræfte rolle claudin-4 i mavekræft. Vi søgte den engelske litteratur for relevante undersøgelser offentliggjort før 1. juni, 2013 ved hjælp af PubMed database med følgende ordlyd: »mave neoplasma" og "claudin-4 'i mesh (mesh). Henvisninger i de hentede artikler blev yderligere screenet for tidligere originale undersøgelser. inklusionskriterierne var patienter med gastrisk cancer, herunder en prognostisk sammenligning mellem høj og lav ekspression af claudin-4. De tilsvarende forfattere blev kontaktet for at få manglende oplysninger, og nogle undersøgelser blev udelukket, hvis kritiske oplysninger stadig manglede efter gentagne anmodninger.
For den kvantitative sammenlægning af overlevelse resultater, den observerede forventet (OE) statistik og varians blev kombineret til at give den effektive værdi. De O-E værdier og varianser blev estimeret ud fra tilgængelige data ved hjælp af metoder, rapporteret af Tierney et al
. [33]. Hvis undersøgelsen gav et hazard ratio (HR), blev O-E værdier og varianser estimeret baseret på denne. Hvis undersøgelsen ikke give en HR men rapporterede data i form af en overlevelse kurve blev overlevelsesrater ekstraheret ved visse bestemte tidspunkter at rekonstruere en anslået HR og dens varians.
Vi brugte chi-squared test for at evaluere forholdet mellem claudin-4-ekspression og forskellige klinisk-patologiske parametre. Overlevelse analyse blev udført under anvendelse af Kaplan-Meier-metoden, og forskelle mellem grupperne blev analyseret under anvendelse af log-rank test. Cox regression multivariat model blev anvendt på en trinvis fremad måde at detektere de uafhængige prædiktorer for overlevelse. To-halet P
-værdier mindre end 0,05 blev anset for at indikere et statistisk signifikant resultat. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS software (version 17,0, SPSS til Windows, Chicago, IL, USA). Og RevMan 5,2 analysesoftware (The Cochrane Collaboration)
Resultater
Claudin-4 immunfarvning skete i en overvejende membranøs mønster kan visse prøver viser et lavt niveau af cytoplasmatisk farvning. Kun 15,9% (7/44) af den normale maveslimhinden udviste høje ekspressionsniveauer af claudin-4. Derimod 90,5% (19/21) af de intestinale metaplasi læsioner og 95,2% (20/21) af de gastriske epitel dysplasi læsioner udviste høje ekspressionsniveauer af claudin-4. Af de gastrisk karcinom prøver undersøgte, 53,2% (175/329) af tilfældene viste høj claudin-4-ekspression (figur 1). Figur 1 Claudin-4 immunfarvning. (A) Normal gastrisk muscoma, ingen farvning; (B) intestinal metaplasi, høj ekspression; (C) moderat differentieret til veldifferentieret mavekræft, høj ekspression; (D) dårligt differentieret gastrisk cancer, ingen farvning. Forstørrelse x 200.
Ekspressionsniveauet af claudin-4 var signifikant korreleret med tumor differentiering (P
< 0,001), køn (P
= 0,003), alder (P
= 0,025) og tumor placering (P
= 0,033). Ifølge mikroskopisk inspektion af mønstret tumorvækst, blev 76 sager klassificeret som det ekspanderende type og 172 tilfælde som det infiltrativ type, mens 81 sager blev bestemt til at være den mellemliggende type. Ekspressionsniveauet af claudin-4 blev også signifikant korreleret med mønster tumorvækst (P
< 0,001). Høj ekspression af claudin-4 blev observeret hos 69,7% af det ekspanderende type og 72,8% af den mellemliggende type mavekræft, mens kun 36,6% af den infiltrativ typen udviste høj ekspression. Men vores resultater viste ingen signifikant korrelation mellem ekspressionen af ​​claudin-4 og tumorstørrelse, dybde af invasion, lymfeknudemetastase, lymfe invasion, og tumor stadium (figur 2, tabel 2). Figur 2 Angivelse af claudin-4 i normal mave slimhinde, tarm metaplasi, dysplasi og cancer (herunder ekspanderende, mellemliggende og infiltrative typer).
Tabel 2 Statistiske resultater af relationer mellem claudin-4 udtryk og diverse clinicopathologic egenskaber
Variabel
Total patienter (%)
Patienter med lav claudin-4-ekspression (%)

Patienter med højt claudin-4expression (%)
P- værdi
329
154 (46,8)
175 (53,2)
Alder ved kirurgi , y
0,025
≤ 60
192
100 (52,1)
92 (47,9)
> 60
137
54 (39,4)
83 (60,6)
Køn
0,003
Mand
238
99 (41,6)
139 (58,4)
Female
91
55 (60,4)
36 (39,6)
patofysiologiske funktioner
Tumor størrelse (cm)
0,055
≤ 5
199
102 (51,3)
97 (48,7)
> 5
130
52 (40,0)
78 (60,0)
Tumor placering
0,033
Øvre
31
9 (29,0)
22 (71,0)
Mellemøsten
53
31 (58,5)
22 (41,5)
Lavere
245
114 (46,5)
131 (53,5)
Histologisk typen
< 0,001
Differentieret (WD, MD)
101
24 (23,8)
77 (76,2)
Udifferentieret (PD, UD)
228
130 (57,0)
98 (43,0)
vækst mønster
< 0,001
Udvidelse
76
23 (30,3 )
53 (69,7)
Intermediate
81
22 (27,2)
59 (72,8)
infiltrativ
172
109 (63,4)
63 ( 36,6)
T etape
0,147
T1 /2
96
51 (53,1)
45 (46,9)
T3 /4
233
103 ( 44,2)
130 (55,8)
lymfeknudemetastase
0,905
Negativ
101
48 (47,5)
53 (52,5)
Positiv
228
106 (46,5)
122 (53,5)
lymfatisk invasion
0,898
Negativ
248
117 (47,2)
131 (52,8)
Positiv
81
37 (45,7)
44 (54,3)
Tumor fase
0,589
IA, IB
63
33 (52,4)
30 (47,6)
IIA, IIB
86
38 (44,2)
48 (55,8)
IIIA, IIIB, IIIC
180
83 (46,1)
97 (53,9)
WD
, veldifferentieret; MD
, moderat differentieret; PD
, dårligt differentieret, UD
, udifferentieret.
I alt 19 studier blev oprindeligt identificeret. Fjorten studier blev udelukket, fordi de ikke omfatter en prognostisk sammenligning mellem høj og lav ekspression af claudin-4. En yderligere undersøgelse blev udelukket, fordi der manglede vigtige oplysninger [14]. Kun én undersøgelse udført den prognostiske sammenligning baseret på årsag-specifikke overlevelse (CSS) [13], så det var udelukket, og vi gjort samlet overlevelse (OS) det primære endepunkt i vores meta-analyse. Tre studier mødte inklusionskriterierne og blev inkluderet i den endelige analyse [15, 19, 34]. Poolet analyse viste, at OS af patienter med for højt claudin-4 var bedre end hos dem med den lave claudin-4 (figur 3). Figur 3 Forest plot af sammenhængen mellem samlet overlevelse og udtryk for claudin-4. O-E, observeret forventet.
Ifølge univariat overlevelse analyse blev claudin proteinekspression ikke er forbundet med patienternes CSS (P
= 0,637) eller OS (P
= 0,469). Stratificeret underklasse overlevelse analyser blev udført for T og N-status, lymfe invasion, og tumor scenen, og ingen prognostisk forskel blev fundet (Yderligere fil 1: Figur S1). I sammenligning af CSS, kun TNM stadie (P
< 0,001) og lymfe invasion (P
< 0,001) var væsentlige prognostiske faktorer. Efter Cox multivariat analyse, kun TNM stadie var en betydelig prognostisk faktor (P
< 0,001). Der blev ikke observeret nogen forskel i overlevelse mellem de tre typer af tumorvækst mønster (P
= 0,069, figur 4A). Yderligere stratificeret analyse viste ingen signifikant prognostisk forskel mellem patienter, der udviste høj versus lav ekspression af claudin-4 i at udvide og infiltrativ typen mavekræft. Men i mellemliggende typen vækstmønster mavekræft, prognosen for patienter, der udviser lave ekspressionsniveauer af claudin-4 var signifikant bedre i forhold til dem med høje ekspressionsniveauer (P
= 0,023, figur 4B). Dette resultat blev også bekræftet af Cox multivariat analyse (P
= 0,037). Den femårige kræftspecifikke overlevelsesrate for patienter med lave claudin-4 ekspressionsniveauer i mellemliggende type mavekræft var 76,4%, hvilket svarede til alle ekspanderende type gastrisk kræft (64,5%). Vores resultater viste, at den femårige CSS sats for patienter, der udviser en høj ekspressionsniveauer af claudin-4 i mellemliggende type mavekræft var 46,6%, hvilket svarede til infiltrativ-gastriske kræftformer (50,7%) (figur 4C). Gennem farvningen af ​​claudin-4 i det mellemliggende type, omklassificeret vi den lave ekspression af claudin-4 ind ekspanderende type og høj ekspression af claudin-4 ind infiltrativ type og sammensat to hidtil ukendte undergrupper. Der var en signifikant forskel i prognosen mellem disse to hidtil ukendte undergrupper (P
= 0,003, figur 4D). Efter underklasse overlevelse analyse stratificeret af T-status, N-status, lymfe invasion og tumor stadium, fandt vi, at de prognostiske forskelle på to hidtil ukendte undergrupperne var signifikant i pT3 /4, LN (+), stadium III, lymfe invasion (-) ( Yderligere fil 2: Figur S2). I multivariat analyse, romanen klassifikation var en betydelig prognostisk faktor (P
= 0,007). Figur 4 Kaplan-Meier-overlevelseskurver. (A) Sammenligning af overlevelse for tre typer af tumorvækst mønster; (B) sammenligning af overlevelse hos patienter med lave og høje ekspressionsniveauer af claudin-4 i mellemliggende type vækstmønster mavekræft; (C) Kaplan-Meier-overlevelseskurver for ekspanderende type, lave ekspressionsniveauer af claudin-4 i mellemliggende type, høje ekspressionsniveauer af claudin-4 i mellemliggende type og infiltrativ-type gastriske kræftformer. (D) Sammenligning af overlevelse i to hidtil ukendte undergrupper.
Diskussion
claudin familie af proteiner spiller en vigtig rolle i opretholdelsen af ​​TJ funktion, og ekspressionsniveauerne ofte udviser en vævsspecifik mønster. For nylig er et akkumulerende antal undersøgelser påvist ektopisk eller afvigende ekspression af claudins i mange tumortyper [25, 32, 35-37]. Blandt claudin undertyper, er udtryk for claudin-4 ofte ændret i forskellige tumorvæv. Claudin-4 er et integreret membranprotein, der hører til claudin familien. Dette protein er en komponent af TJs, og er kritisk for forsegling cellulære ark og styring paracellulær ionstrøm [10].
Relativt få studier har undersøgt ekspressionsniveauerne af claudin-4 i forstadielæsioner. Cunningham et al
. [38] rapporterede en 15% ekspressionsniveau af claudin-4 i den normale mave, mens der i både intestinal metaplasi og dysplasi ekspressionen af ​​claudin-4 nåede 100%. Matsuda et al
. [36] rapporterede også, at claudin-4 blev detekteret i epitel af intestinal metaplasi, men ikke i normalt epitel. Vores farvningsresultater prækursorer læsion prøver var i konkordans med disse undersøgelser. Den høje ekspression på claudin-4 i normal gastrisk mucosa var meget lav (kun 15,9%), mens intestinale metaplasi læsioner og gastriske epitel dysplasi læsioner udviste et højt ekspressionsniveau tæt på 100%. Fordi CLdN-4
udtrykkes ved høje niveauer i den normale tyndtarmen og tyktarmen [11], er dens forøget ekspression i intestinal metaplasi let forstået. Men den differentielle ekspression af claudin-4 i normal slimhinde og celler udviser dysplasi fortsat uklar. De primære morfologiske træk af epitelial dysplasi er cellulær atypi, unormal differentiering og uorganiseret slimhinde arkitektur; disse ændringer er potentielt forbundet med forhøjet claudin-4 udtryk. De specifikke underliggende mekanismer skal yderligere belyst. Tilsammen vores resultater viser, at claudin-4 potentielt kunne tjene som en molekylær markør for intestinal metaplasi og dysplasi i maveslimhinden.
I den foreliggende undersøgelse fandt vi, at nedsat ekspression af claudin-4 var signifikant associeret med histologisk differentiering i gastrisk cancer. Den differentierede gruppe udviste en højere ekspression på claudin-4 sammenlignet med den udifferentierede gruppe. Lee et al
. [18] rapporterede, at reduceret ekspression af claudin-4 korreleret med afbrydelse af glandulær struktur og tab af differentiering, som var i konkordans med vores resultater.
Rolle claudin-4 for prognosen er stadig kontroversiel. Resnicket al
. [13] rapporterede, at øget claudin-4-ekspression var en dårlig prognostisk faktor for CSS i 146 patienter, og Soini et al
. [14] foreslået, at claudin-4 ikke forbinder med OS. Men resultaterne af den meta-analyse af denne undersøgelse tyder, at OS af patienter med højt claudin-4 var bedre end den for patienter med lav claudin-4. Resultaterne overlevelse analyse baseret på patienter i vores institution viste, at claudin-4 ikke var forbundet med CSS eller OS, hvilket svarede til resultaterne af Soini et al
., Men adskiller sig fra andre undersøgelser.
Nogle tidligere undersøgelser har foreslået, at opregulering af visse claudins potentielt bidrager til neoplasi ved direkte at ændre TJ funktion [39]. Overekspression af claudin-3 og 4, kan føre til en stigning i invasion, motilitet og tumorcelleoverlevelse [25]. Tværtimod i pancreas carcinoma, overekspression af claudin-4 er blevet forbundet med en markant reduceret invasivitet både in vitro
og in vivo
[40]. Selvom vores undersøgelse omfatter næsten det største antal sager på nuværende tidspunkt, den prognostiske rolle claudin-4 i mavekræft forbliver tvetydige (P
= 0,637). Det er muligt, at forskellige populationer og forskellige miljøer bidrager til disse forskellige resultater. Yderligere undersøgelse, herunder et større antal prøver er berettiget.
Histologiske vækstmønstre er vigtige parametre for vurdering af den biologiske opførsel af mavekræft. Baseret på mønstre af vækst og invasiv, Ming [41] rapporterede to typer af mavekræft, det ekspanderende og infiltrativ type.The japanske Gastric Cancer Association opdelt mavekræft i tre typer baseret på tumor-infiltrerende (INF) vækst i det omgivende væv: i infA, tumor viser ekspanderende vækst med en distinkt grænsen fra det omgivende væv; i INFb, tumoren viser en mellemliggende mønster mellem infA og INFc; i INFc, tumoren viser infiltrativ vækst uden tydelig grænse med det omgivende væv [42]. Denne sidste type er tættere på vores kliniske praksis, hvori det mellemliggende typen findes og er vanskeligt at klassificere (figur 5). I vores resultater, der var forskelle i overlevelse mellem de tre typer, men ikke signifikant (P
= 0,069). Overlevelsesrater i patienter med den mellemliggende typen var mellem det ekspanderende og infiltrative typer. Interessant nok i stratificeret analyse fandt vi, at høj claudin-4-ekspression var associeret med dårlig prognose i det mellemliggende vækstmønster (P
= 0,023). De fem-års overlevelse med lav udtryk for claudin-4 i den mellemliggende type (76,4%) svarede til det ekspanderende type (64,5%), mens gruppen med høj ekspression af claudin-4 (46,6%) var tættere på infiltrativ type (50,7%). Således kunne vi potentielt klassificere mellemprodukt-type patienter i henhold til farvningen af ​​claudin-4. Vi omklassificeret patienter med lav ekspression af claudin-4 i det mellemliggende gruppe som har den ekspanderende type, og patienter med høj ekspression af claudin-4 som havende den infiltrativ type tumor. Både univariate og multivariate analyser bekræftede, at der var betydelige forskelle i overlevelse mellem disse to undergrupper. Efter stratificerede underklasser overlevelse analyse fandt vi, at de prognostiske forskelle i de to hidtil ukendte undergrupperne var signifikant i pT3 /4, LN (+), stadium III, lymfe invasion (-). Selv om der ikke signifikant forskel blev fundet i andre underklasser, en vis tendens stadig eksisterede, og vi fandt, at de negative resultater af den statistiske analyse var på grund af den relativt lille stikprøve. Således kunne ekspressionen af ​​claudin-4 potentielt anvendes som et grundlag for yderligere at identificere gastriske cancere i den mellemliggende type. Figur 5 Hematoxylin-eosin-farvning. De tre forskellige vækstmønstre af mavekræft: (A) udvide typen; (B) mellemliggende type (C) infiltrativ type. Forstørrelse × 100.
biologiske rolle claudin-4 i mavekræft er fortsat uklart. Det er tidligere blevet rapporteret, at CLDN18
specifikt udtrykkes i normal gastrisk mucosa, men ikke CLDN4
[11, 22]. Claudin-4 opreguleres i gastriske adenokarcinomer og forøget claudin-4-ekspression er mere almindeligt ses i tarm-typen i modsætning til diffundere-type tumorer [13, 17]. Imidlertid er claudin-18 nedreguleret i tarm-typen gastrisk cancer [22]. Disse resultater antyder, distributions- og ekspressionsniveauerne for claudin proteiner kan variere i forskellige celler og væv i kroppen [43]. Ektopisk ekspression af claudin er potentielt associeret med tumorudvikling. Yderligere undersøgelser er berettiget til at belyse funktionen af ​​claudin-4 i progressionen af ​​gastrisk cancer.
Konklusioner
Vi demonstrerede opregulering af claudin-4 i intestinal metaplasi og gastrisk epitel dysplasi, hvilket antyder dens potentielle anvendelighed som biomarkør i gastrisk adenocarcinom forstadielæsioner. Ekspression af claudin-4 var ikke forbundet med overlevelse, men det blev forbundet med dårlig histologisk differentiering og infiltrative mønstre af tumorvækst. Desuden denne undersøgelse viste, at ekspressionen af ​​claudin-4 potentielt kunne udnyttes som grundlag for yderligere at identificere gastrisk kræft i den mellemliggende type.
Noter
Jin-Liang Zhu, Peng Gao bidrog ligeligt til dette arbejde.
Forkortelser
AEC:
3 amino-9-ethyl carbazol
AJCC:
amerikanske Blandede Udvalg om kræft

CLdN:
Claudin gen
CSS:
forårsage-specifikke overlevelse
FFPE:
formalin -Fast og paraffin-indstøbt
HR:
hazard ratio
INF:
tumor infiltrerer

IS:
immunoreaktivitet score
MeSH:
mesh
MMP:
matrixmetalloproteinase
OS:
samlede overlevelse
TJ:
tight junction
TNM:.
tumor-node-metastaser
erklæringer
Taksigelser
vi takker Kirurgisk afdeling Onkologisk af det første hospital i Kina Medical University for at yde menneskelig gastrisk væv prøver. Vi takker også College of China Medical University for teknisk bistand i eksperimenter. Dette arbejde blev støttet af National Science Foundation of China (nr 30.972.879 nr 81.201.888 og nr 81.172.370) og Program for Education Department i Liaoning-provinsen (L2011137). | Electronic supplerende materiale
12957_2013_1360_MOESM1_ESM.tiff Yderligere fil 1: Figur S1: underklasse overlevelse analyse stratificeret af T-status, N-status, lymfe invasion og tumor fase ifølge farvning af claudin-4. Sammenligning af overlevelse mellem patienter med lave ekspressionsniveauer af claudin-4 og høj ekspressionsniveauer i PT1-pT2 (A), pT3-pT4 (B), LN (-) (C), LN (+) (D), trin I (E), trin II (F), stadium III (G), lymfatisk invasion (-) (H), og lymfe invasion (+) (I). (TIFF 678 KB) 12957_2013_1360_MOESM2_ESM.tiff Yderligere fil 2: Figur S2: Underklasse overlevelsesanalyse stratificeret af T-status, N-status, lymfe invasion og tumor fase i henhold til de to nye undergrupper. A-B. Sammenligning af overlevelsen mellem infiltrativ + mellemprodukt (H) vs. ekspanderende + mellemprodukt (L) i pT1- pT2 (A), pT3-pT4 (B), LN (-) (C), LN (+) (D), trin I (E), trin II (F), trin Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Mekanisme (r) for underliggende gastrobeskyttende virkning af ethylacetat fraktion opnået fra den rå methanoliske blade ekstrakt af Muntingia calabura
• Laparoskopi-assisteret versus åben D2 radikal gastrektomi for avanceret mavekræft uden serøse invasion: en sag kontrol undersøgelse