Identifikation og validering af gener involveret i gastrisk tumorigenese

Identifikation og validering af gener involveret i gastrisk tumorgenese
Abstract
Baggrund
mavekræft er en af ​​de almindelige kræftformer ses i det sydlige Indien. Desværre mere end 90% fremføres, når de rapporterer til et tertiært center i landet. Der er et presserende behov for at karakterisere disse kræftformer og forsøge at identificere potentielle biomarkører og nye terapeutiske mål.
Materialer og metoder
Vi brugte 24 gastrisk kræft, 20 Forbundne normale (PN) og 5 tilsyneladende normale gastriske væv fra patienter med ikke-gastrisk kræft (Tilsyneladende normal - AN) til microarray undersøgelse efterfulgt af validering af de betydelige gener (n = 63) ved relativ kvantificering hjælp Taqman Low Density Array Real Time PCR. Vi brugte derefter en skræddersyet Quantibody proteinarray at validere ekspressionen af ​​15 proteiner i gastrisk væv (4 AN, 9 PN og 9 gastriske kræft). Samme array format blev anvendt til at undersøge plasmaniveauer af disse proteiner i 58 patienter med gastrisk kræft og 18 fra patienter med normale /ikke-maligne gastriske betingelser.
Resultater
Sytten gener (AspN, CCL15 /MIP-1δ , MMP3, SPON2, PRSS2, CCL3, TMEPAI /PMEPAI, SIX3, MFNG, SOSTDC1, SGNE1, SST, IGHA1, AKR1B10, FCGBP, ATP4B, NCAPH2) viste sig at være udtrykt forskelligt mellem tumorer og den parrede normale for første tid. EpCAM (p = 0,0001), IL8 (p = 0,0003), CCL4 /MIP-1β (p = 0,0026), CCL20 /MIP-3α (p = 0,039) og TIMP1 (p = 0,0017) vævsprotein niveauer signifikant forskellige (Mann Whitney U test) mellem tumorer versus AN & PN. Desuden median plasmaniveauer af IL8, CXCL9 /MIG, CCL3 /MIP-1α, CCL20 /MIP-3α, PDGFR-B og TIMP1 proteiner var signifikant forskellig mellem den ikke-maligne gruppen og mavekræft gruppen. De post-kirurgiske niveauer af EpCAM, IGFBP3, IL8, CXCL10 /IP10, CXCL9 /MIG, CCL3 /MIP-1α, CCL20 /MIP-3α, SPP1 /OPN og PDGFR-B viste et ensartet fald i alle prøver undersøgt.
konklusioner
Vores undersøgelse har identificeret flere gener udtrykkes forskelligt i gastrisk kræft, nogle for første gang. Nogle af disse er blevet bekræftet på proteinniveauet, så godt. Nogle af disse proteiner vil skulle evalueres yderligere for deres potentielle som diagnostiske biomarkører i gastrisk kræft, og nogle kunne være nyttige som opfølgende markører i mavekræft.
Introduktion
mavekræft er en af ​​de almindelige kræftformer ses i Sydindien, rangeret 2 nd blandt mænd og 5 th blandt kvinder i Chennai Metropolitan område [1]. Af de patienter, der til den tertiære institution, er mere end 90% frem til præsentation og kun palliativ ledelse er muligt i disse patienter [2]. I 2005 og 2006 blev der i alt 1239 mavecancerpatienter set på instituttet, hvoraf 211 patienter tidligere er blevet behandlet andetsteds. Blandt behandling naive patienter (n = 1028), blev 61% lokalt fremskreden og 39% var med fjernmetastaser. I betragtning af den avancerede sygdommens art og på grund af dårlig performance status, kun 91 patienter kom op til operation med forsæt til at helbrede. Dette understreger problemet med mangel på tidlig påvisning for mavekræft i Indien.
I Japan, som har en høj forekomst af mavekræft, er photofluorography screening udført som et screeningsprogram for befolkningen, hvilket resulterer i tidlig påvisning af læsioner, nogle begrænset til slimhinden kun [3]. En sådan procedure er usandsynligt, at være løsningen i et stort land som Indien. I betragtning af de subtile symptomer såsom fordøjelsesbesvær, gradvis vægttab som generelt ignoreres fleste patienter stede med fremskreden sygdom. Det er derfor vigtigt at udvikle pålidelige screeningstest, som kan hjælpe i tidlig påvisning af sygdommen. Serum baserede tests for Pepsinogen og H. pylori antistof har ikke vundet udbredt accept og er ikke blevet overvejet til screening individer af National Cancer Center, Tokyo, Japan [3]. Den diagnostiske test skal være helst prøve blod eller urin baserede og skal være specifik.
Blandt de store risikofaktorer for mavekræft, kost spiller en vigtig rolle. Forbruget af saltet fødevarer (fisk og kød) og tobak er forbundet med en øget risiko [4-6]. Kronisk atrofisk gastritis og intestinale metaplasi er blevet betragtet som præmaligne forandringer i maveslimhinden. Tobaksrygning, H. pylori, er kost med højt indhold af salt, nitrit og nitrat, og lavt indtag af frugt og grønt kendt risikofaktorer for kronisk atrofisk gastritis [7]. Den sydlige Indiske kost traditionelt består af højt kølige indhold og dybe stegt mad, med olien, der anvendes til stegning undergår adskillige cyklusser af brug inden den kasseres og dermed indeholder et højt indhold af carcinogener [5, 8, 9].
Gastriske cancere er overvejende adenokarcinomer og kunne være af tre sub-typer - Intestinal, diffuse og Blandet [10]. Den Intestinal type mavekræft er normalt ses i den distale del af maven, har forstadier etaper og består af sammenhængende kræftceller danner kirtel lignende strukturer [11]. De fleste af de intestinale typer er godt til moderat differentieret (WHO Classification). Den Diffus typen består af individuelle kræftceller infiltrerer og spreder langt ud over sine makroskopiske grænser. De er som regel dårligt differentieret til udifferentieret [12]. I Chennai, distale tumorer er mere udbredt end proksimale kræftformer.
Genekspressionsstudier i forskellige kræftformer har hjulpet med at identificere gener involveret i processen med tumorigenese [13]. Microarray undersøgelser, der sammenligner de genekspression forskelle mellem normal mave og mavekræft [14], mellem unge og ældre gastric kræftpatienters tumorer [15], mellem primær tumor og metastatiske læsioner [16] er blevet rapporteret. Vores undersøgelse sammenligner genekspression mellem tilsyneladende normale gastriske væv fra patienter med ikke-gastriske cancere (tilsyneladende normal - AN), gastriske vævsprøver godt væk fra tumoren og bekræftet af frosne afsnit ikke at have tumorceller (parret normal - PN) og gastriske cancere (Tumorer - T). Dette er den første undersøgelse for at se på de genekspressionsmønstre af gastrisk kræft i syd indiske patienter og validere nogle af disse gener på proteinniveauet for deres potentiale som biomarkører for mavekræft.
Materialer og metoder
Fem AN prøver (2 fra patienter med hypopharyngeal cancer, 1 fra øvre øsofageale pladecellekarcinom, 1 fra peri-ampullary carcinom, 1 fra pancreascancer) fra patienter, som gennemgik mave resektion som en del af deres primære kirurgi blev inkluderet i undersøgelsen. Desuden blev 24 gastriske cancere og 20 PN inkluderet i studiet. Alle patienter, forudsat at deres informerede samtykke til undersøgelsen, som blev godkendt af Institutional Etiske udvalg.
Den operative prøver blev straks behandlet og sektioner blev taget for frosset sektion. Tumorprøver med mere end 70% cancerceller; PN og AN prøver med ingen tegn på tumorceller og tilsyneladende normal morfologi blev inkluderet i undersøgelsen.
Derudover blev blodprøver indsamlet fra individer gennemgår oesophagogastroduodenoscopy (OGDscopy) for dyspeptiske symptomer, og at udelukke enhver øvre mavetarmkanal patologi. Heraf blev 58 fundet at være gastriske cancere, blev 6 sig at have benign patologi i maven (gastritis, godartet ulcus) og 12 havde en normal OGDscopy rapport. I 8 mavekræft patienter, som gennemgik radikale indgreb, var postoperativ blodprøve også indsamlet mellem dag 7 og dag 15, undtagen to patienter, hvor prøven blev indsamlet i forbindelse med deres første opfølgning efter operationen (dag 55 og 64) .
RNA-ekstraktion
RNA blev ekstraheret fra vævsprøverne ved hjælp af RNeasy RNA-ekstraktion kittet (Qiagen, GmbH, Hilden, Cat no: 74106) ifølge producentens instruktioner. Kvaliteten af ​​RNA anvendes til mikroanalyse blev kontrolleret under anvendelse af Bioanalyzer og prøver med en RNA Integrity Number (RIN) på 7 og derover blev inkluderet i undersøgelsen. RNA blev kvantificeret ved anvendelse NanoDrop ™ ND1000 (NanoDrop Technologies, USA) spektrofotometer.
Påvisning af H pylori
Analyse for H pylori i mavens vævsprøver blev udført ved anvendelse af PCR som tidligere beskrevet [17]. PCR-primere designet til at amplificere S2 region for Vac A genet i H pylori genomet, blev anvendt til detektion. Reaktionen forstærker et amplikon ca. 194 bp længde
Microarray eksperiment
1 ug totalt RNA fra tumoren /PN /AN prøve og universel RNA (Stratagene; Cat No: 740.000 til 41). Blev revers transkriberet under anvendelse Array script ved 42 ° C i 2 timer til opnåelse af cDNA under anvendelse af amino Allyl MessageAmp II aRNA amplifikation kit (Ambion, Austin, Tx, Cat no: AM1797). CDNA blev opformeret, mærket, hybridiseret og dias scannet som tidligere beskrevet [18]
Alle de rå datafiler er blevet forelagt for GEO med et tildelt GEO tiltrædelse nummer -.. GSE17154
Microarray dataanalyse
forgrund og Baggrund Median intensitet for Cy3 og Cy5, blev importeret til BRB-ArrayTools software [19] ved hjælp af Importer guiden funktionen. Baggrund korrektion blev ikke gjort. Global normalisering blev anvendt til at median center log-procenter på hvert array for at korrigere for forskelle i intensiteterne af Cy3 og Cy5 farvestoffer mærkning. Dataene blev analyseret ved hjælp af klasse sammenligning modulet [20] i BRB-ArrayTools software.
Klasse Sammenligning i BRB-Array Værktøj
Vi identificerede gener, der var udtrykkes forskelligt blandt de 3 klasser (tumor /PN /AN) ved hjælp af klasse Sammenligning modulet. Univariate F-test blev anvendt, og de gener blev betragtet som statistisk signifikant, hvis deres p-værdien var < 0,001. Desuden krævedes en to ganges forskel mellem de forskellige klasser
kvantitativ real time PCR
Realtids validering af genekspressionen blev udført under anvendelse af TLDA real time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, katalognr.: 4.342.261). Tredobbelte cDNA template prøver blev amplificeret og analyseret på ABI Prism 7900HT Detektionssekvensen systemet (Applied Biosystems, Foster City, CA) som tidligere beskrevet [18].
De rå data fra Prism 7900HT detektionssekvensen system blev indført til Microsoft Excel software til statistisk analyse af data. Blandt de endogene reference- gener opført på Array (18S ribosomale gen, ACTB) blev ACTB valgt efter at visualisere den globale Ct-værdi distribution, for normalisering af data. Desuden HSPE1 som var blevet inkluderet baseret på den differentielle ekspression set på Microarray, blev fundet at have minimal variation og derfor var inkluderet som en yderligere endogen kontrol. De TLDA assays blev kørt ved LabIndia Instruments Pvt Ltd laboratorierne på Gurgaon, New Delhi.
Den AN prøver blev anvendt som kalibratorer og de relative kvantificeringsfremgangsmåder værdier blev beregnet for alle de gener og prøverne.
Gene ontologi Analyse
generne viser sig at være differentielt udtrykt i tumorer og parret normaler 'baseret på microarray data blev importeret til Fatigo modul Babelomics [21] og analyseret for overrepræsentation af GO vilkår i forhold til resten af ​​genomet, hjælp Fishers eksakte test for 2 × 2 kontingenstabeller. Den p-værdi blev fastsat til < 0.05.
Udarbejdelse af Tissue proteinlysater og Indsamling af plasma
Proteinlysater til analyse ved hjælp af antistof arrays blev fremstillet af 60-80 mg af frosne gastrisk vævsprøver. Vævsprøverne blev formalet i nærværelse af flydende nitrogen under anvendelse af morter og støder. Det pulveriserede væv blev resuspenderet i væv lysepuffer (Tris. HCI pH 7,5, 150 mM natriumchlorid, 1% natriumdeoxycholat 1% NP40). Før anvendelse blev lyseringsbuffer suppleret med Complete mini ™ proteaseinhibitorcocktail (Roche Diagnostics GmbH, Tyskland). De proteinlysater blev underkastet sonikering under anvendelse Vibra cell ™ (Sonics Inc., USA) sonikator. Lysaterne blev klaret ved centrifugering og kvantificeret ved anvendelse af Coomassie Plus-Bradford assay ™ reagens (Pierce Inc., USA) ifølge producentens protokol. Kvaliteten af ​​proteinerne blev analyseret ved at løse 50 ug af lysatet på 10% natriumdodecylsulfat polyacrylamid (SDS) gel og derefter visualiseret ved farvning under anvendelse Coomassie Blue.
Plasma blev opnået ud fra 5 ml blod opsamlet i nærvær af 200 pi 10% ethylen diamin tetra eddikesyre (EDTA). Plasmaet isoleres fra blodprøverne blev centrifugeret ved 3000 g og opbevaret ved -80 ° C i alikvoter
Antibody Arrays
Tilpassede antistof-arrays Quantibody ™ array (Katalog nr: QAA-CUST). Baseret på en multiplex ELISA-system til kvantitativ måling af multiple proteiner, der er købt fra Ray Biotech, Inc., blev USA anvendt til at undersøge protein-ekspressionsniveauer i gastriske væv og plasmaprøver [22, 23]. Følgende gener (CXCL5 /ENA-78, CXCL8 /IL8, CXCL10 /IP10, CXCL9 /MIG, CCL3 /MIP-1α, CCL15 /MIP-1δ, EpCAM, MMP3, SPP1 /OPN, TIMP1, Adipsin /CFD, CCL4 /MIP-1β, CCL20 /MIP-3α, PDGFR-B og IGFBP-3) fundet at være overudtrykt i gastriske cancere forhold til PN og AN (med undtagelse af CFD /Adipsin som blev overudtrykt i PN forhold til gastriske cancere og AN) blev undersøgt for deres protein niveauer i tumor, svarende PN og i en væv. Desuden blev plasmaniveauer af disse proteiner i patienter, som havde gennemgået OGDscopy estimeres ved anvendelse af samme array format (58 gastriske cancerpatienter, 6 med benign mavesår eller duodenalsår eller gastritis og 12 med normal OGDscopy betænkning). I 8 mavecancerpatienter som havde fået foretaget radikale indgreb, før og efter operation blev udtaget og analyseret.
Assayet blev udført som beskrevet af fabrikantens protokol. Kort fortalt, i tilfældet med de væv lysater 100 ug af proteinet lysat blev fremstillet ved fortynding af væv lysat stamopløsningen under anvendelse prøve diluentbuffer leveret af producenten til en slutkoncentration på 1 mg /ml. 100 pi fortyndet lysat blev inkuberet i array kammer i 2 timer. I tilfælde af plasmaprøverne blev plasmaet fortyndet med prøve diluentbuffer leveres med kittet i et forhold på 1: 1. 100 pi af den fortyndede plasmaprøve blev inkuberet i array kammer i 2 timer. For hver matrix eksperiment blev standarder leveret sammen med kittet frisk fremstillet som beskrevet af fabrikantens protokol og inkluderet sammen med en prøve diluentbuffer kontrol (negativ kontrol) som hverken havde standard eller prøver. Opstillingerne blev forarbejdet som beskrevet af fabrikantens protokol. Objektglassene blev scannet ved 5 μ opløsning og en PMT på 70 under anvendelse af Pro Scan Array ™ (Perkin Elmer Inc., USA). På disse scanner indstillinger signalerne fra den højeste standard koncentration ikke nåede mætning. Dataene blev analyseret ved hjælp af Quantibody Q-Analyzer, en række specifikke, Microsoft Excel baseret program, der følger med de brugerdefinerede arrays.
Statistisk analyse
median og interval for plasma-værdier beregnet ved hjælp af Microsoft Excel ™ regneark software (Microsoft, Inc.,). Mann Whitney U-testen (http:... //Fakultet Vassar edu /Lowry /Utest html) blev anvendt til undersøgelse af betydningen af ​​de medianværdier af plasmaet og to halet test blev anvendt til opnåelse af p værdi.
Resultater
den klinisk-patologiske oplysninger om alle de patienter, hvis prøver blev anvendt til microarray analyse og deres tumor prøver, er givet i supplerende fil 1 og 2. de klinisk-patologiske oplysninger om patienter fra hvem blodprøver blev opnået for estimering af plasmaniveauerne af cytokiner /kemokiner /vækstfaktorer er givet i supplerende fil 3.
af de 24 patienter, hvis tumor prøver blev anvendt til microarray undersøgelse, 16 blev på over 45 år og 8 var 45 år eller derunder; 18 var mænd og 6 var kvinder; 5 var tumorer opstår i regionen Cardia, 2 fra kroppen og 17 fra antrum. Alle fireogtyve tumorer var adenocarcinomer med en af ​​dem er dårligt differentieret adenocarcinom med områder af neuro-endokrine funktioner. Blandt adenocarcinomer, Intestinal subtype var den mest almindelige (n = 16), mens diffus subtype blev set i 5 og blandet i 2. grad III tumorer fremherskende (n = 20), med ingen grad I tumorer i vores serie. Sytten af ​​24 var node positive og 4 havde fjernmetastaser ved præsentationen.
Baseret på klasse Sammenligning analyse (p-værdi = 0,001 og 2 gange forskel), havde vi 61 gener overudtrykt i kræft, 66 i parret normal og 61 med ap værdi < 1e-07 i tilsyneladende normal (Ekstra File 4). Vi anvendte Taqman Relativ Kvantificering RT-PCR for validering af nogle af generne identificeret ved microarray analyse. ACTB blev valgt som en endogen kontrol, som var ud over 18S kontrollere stede i TLDA kortet.
Alle de 49 prøver arbejdede i TLDA analysen men 2 gener, C11orf42 og IGLL1 ikke havde arbejdet. HSPE som havde vist sig at have differentieret udtryk i prøverne i vores microarray analyse viste ikke nogen variation i niveauerne, i TLDA assay og blev inkluderet som en ekstra endogen kontrol. Normalisering blev udført ved anvendelse ACTB og HSPE som endogene kontroller. Af de 63 gener valgt, bortset de endogene kontroller (ACTB og HSPE) samt de to gener, som ikke havde arbejdet, havde vi 59 gener til yderligere analyse.
Tre af generne (REG4, CLDN18, MXRA5) var medtaget for validering af deres potentiale som prognostiske markør for fiasko. Men i intervallet mellem det tidspunkt, hvor microarray analyse blev afsluttet og RQ-RT-PCR-analyse blev udført (ca. 3 måneder) var der yderligere patienter, som fik recidiv og dermed gener blev ikke anset for yderligere analyse som prognostiske markører. Imidlertid blev de inkluderet for at vurdere, om de differentielt blev udtrykt mellem PN og tumorer.
Listen af ​​gener, der blev identificeret til at være differentielt udtrykt i gastriske cancere er angivet i tabel 1 og tabel 2. Tabel 1 lister generne identificeret til være differentielt udtrykt i gastrisk cancer for første gang og tabel 2, viser de gener, der er kendt at være forbundet med gastrisk cancer, og også fundet i vores undersøgelse. (Yderligere filer 5 og 6 giver oplysninger om disse gener og de tilsvarende referencer). Der er fire forskellige mønstre af genekspression - M.1 - overudtrykt i PN og i Tumorer; M.2 - overudtrykt i PN men nedreguleret i tumorer; Mønster 3 - minimal ændring i PN men overudtrykt i tumorer og M.4 - minimal ændring i PN men nedreguleret i Tumorer (figur 1) .table 1 Gener rapporteret at være udtrykt forskelligt for første gang i gastrisk kræft [Referencer og detaljer i Ekstra fil 4]
SNO
GENE SYMBOL
opregulering rapporteret i
REFERENCE
1
CCL15 /MIP5 /MIP-1d /LKN1
NSCLC
[SF5-R1]
2
AspN
brystkræft
[SF5-R2]
3
MMP3
colorectal cancer
[SF5-R3]
4
SPON2
Lung, æggestokkene, prostatakræft
[SF5-R4]
[SF5-R5]
[SF5-R6]
5
PRSS22
ovariecancer
[SF5-R7]
6
CCL3 /MIP 1A
oral SCC
[SF5-R8 ]
7
TMEPAI /PMEPAI
Neuro-endokrine tumorer
[SF5-R9]
8
SIX3
9
MFNG
nedreguleret i livmoderhalskræft
[SF5-R10]
10
SGNE1 /SCG5
endokrine tumorer
11
SOSTDC1
nedreguleret i nyrekræft
[SF5-R11]
12
SST
nedreguleret i spiserøret adenocarcinom
[SF5-R12]
13
IGHA1
14
AKR1B10
Øget i Barretts epitel
[SF5-R13]
15
FCGBP
Down reguleret i tyktarmen ca
[SF5-R14]
16
ATP4B
17
NCAPH2
Tabel 2 Gener vides at være involveret i mavekræft tumorigenese identificeret i denne undersøgelse [Referencer og detaljer i Ekstra File 5]
S NO
GENE SYMBOL
op eller ned reguleret
REFERENCE
1
CTSB
opreguleret især i cardia tumours
[SF6-R1]
2
SPARC/Osteonectin
Up-regulated
[SF6-R2]
3
COL1A1
Up-regulated
[SF5-R3]
4
COL1A2
Up-regulated
[SF5-R3]
5
COL4A1/Arresten
Up-regulated
[SF5-R4]
6
CXCL1/GRO1/MGSA
Up-regulated
[SF5-R5]
7
SPP1/osteopontin
Up-regulated
[SF5-R6]
8
CXCL9/MIG
Up-regulated
[SF5-R7]
9
IL8/CXCL8
Up-regulated
[SF5-R8]
10
TIMP1
Up-regulated
[SF5-R9]
11
LUM/SLRR2D/LDC
Up-regulated
[SF5-R10]
12
CXCL5/ENA78
Up-regulated
[SF5-R11]
13
CXCL10/INP10/IP10
Up-regulated
[SF5-R4]
14
CEACAM6
Up-regulated
[SF5-R12]
15
REGIV
Up-regulated
[SF5-R13]
16
S100A10/ANX2L/CAL1L
Up-regulated
[SF5-R14]
17
SERPINH1/HSP47/CBP1
Up-regulated
[SF5-R15]
18
CDH3
Up-regulated
[SF5-R16
19
TACSTD1/EPCAM/CD326
Up-regulated
[SF5-R17]
20
IFITM1/LEU13
Up-regulated
[SF5-R18]
21
CTHRC1
Up-regulated
[SF5-R19]
22
SULF1
Up-regulated
[SF5-R20]
23
RNASE1
Down-regulated
[SF5-R21]
24
PGC
Down-regulated
[SF5-R22]
25
PGA5
Down-regulated
[SF5-R22]
26
GIF
Down-regulated
[SF5-R23]
27
LTF
Down-regulated
[SF5-R24]
28
TFF1
Down-regulated
[SF5-R25]
29
CLDN18
Down-regulated
[SF5-R26]
30
CFD/Adipsin
Secreted ved gastrisk ca celle lines
[SF5-R27]
31
GHRL/Obestatin
Down-regulated
[SF5-R28]
32
LIPF
Down-regulated
[SF5-R29]
33
ANXA10
Down-regulated
[SF5-R30]
Figur 1 RK-værdier over forbundne raske (PN) (n = 20) og Tumor (n = 24) under anvendelse tilsyneladende normal (AN) (n = 5) som kalibrator. Fold-change er i forhold til de tilsyneladende raske.
Vi fortsatte derefter at bekræfte proteinekspression for nogle af generne i AN (n = 4), PN (n = 9) og tumorer (n = 9). Vi bruges Quantibody array, som er baseret på princippet om sandwich-ELISA for at bestemme proteinniveauer af 15 cytokiner, kemokiner og vækstfaktorer [22, 23]. Medianen værdier og Range af niveauerne er angivet i tabel 3. CFD /Adipsin median niveauer fandtes at være lavere i tumorer i forhold til niveauerne i PN og AN (p = 0,0324), mens CXCL5 /ENA78, CCL20 /MIP- 3α, IGFBP3, SPP1 /OPN og TIMP1 blev forhøjet i PN og tumorer i forhold til en, med højere niveauer set i tumorer. I modsætning hertil EpCAM, IL8, CXCL10 /IP10, CCL3 /MIP-1α, CCL4 /MIP-1β, CCL15 /MIP-1δ, PDGFR-B blev overvejende forhøjet i tumorer i forhold til AN og PN. EpCAM (p = 0,0001), IL8 (p = 0,0003), MIP-1β (p = 0,0026), MIP-3α (p = 0,039) og TIMP1 (p = 0,0017) niveauer var signifikant forskellige (Mann Whitney U test) mellem tumorer versus AN & PN. Derudover EpCAM (p = 0,0004), IL8 (p = 0,0015) og MIP-1β (p = 0,0061) var signifikant forhøjet i tumorer sammenlignet med deres tilsvarende PN.Table 3 medianværdier for cytokiner og chemokiner i en PN og tumorlysater

EN
EN
PN

PN
Tumor
tumor

Median i pg /ml
Range i pg /ml
median i pg /ml
Range i pg /ml
median i pg /ml
Range i pg /ml
CFD /Adipsin
27295,0
22097,9 til 31759,9
27162,9
19515,1 til 38224,3
13021,0 *
9441,5 til 36873,1
CXCL5 /ENA-78
283,8
39,3-4206,1
2922,7
84,9-31628,7
3978,0
723,9-40669,6
EpCAM
1466,0
905,7-2266,6
2243,5
915-8885,8
18717,6 *** /## #
8966,1 - 34529
IGFBP-3
3149,8
124,0-17530,2
12286,0
134,6-34036,3
17662,7
196,9-55671,5
IL-8 /CXCL8
22,1
0-62,3
53,1
27,4 til 190,6
1240,4 *** /###
93,1-3660,7
CXCL10 /IP-10
20,4
1,4-146,1
147,0
,8-3940,9
384,4
,7-1643,1
CXCL9 /MIG
369,5
0-8569,7
4336,1
1077,2 - 19396,6
7540,3
727,7-73975,9
CCL3 /MIP-1α
0,0
0 til 187,4
203,6
0-1177,2
359,0
0-3231,5
CCL4 /MIP-1β
49,5
0 til 261,8
94,3
0 til 335,8
578,6 ** /#
28,7-1185,2
CCL15 /MIP-1δ
86,0
54 til 157,3
169,3
51,7 til 748,9
374,3
63,4-2825,4
CCL20 /MIP-3α
859,3
76,1-1784,8
3049,6
893-16262,9
4773,4 *
1014,4 til 13280,7
MMP-3
269,0
0 til 648,6
143,9
0 til 353,1
0,0
0-2908,2
SPP1 /OPN
447,0
9,1-896,3
2054,0
193,6-3183,7
1407,1
12,6-5819,2
PDGF RB
222,3
174,3-521,4
295,3
184,9-1079,3
578,6
123,7-1516,8
TIMP-1
9676,2
4373,3 til 17133,2
27022,2
17028,3 - 194387,8
139365,6 **
48146,4 til 367203,2
AN - Tilsyneladende normal; PN - Parret normale
p-værdi væsentligt for AN + PN versus tumor -
* - < 0,05; ** - ≪ 0,005; *** - ≪ 0,0005 af Mann Whitney U test
p-værdi væsentligt for PN versus tumor -
# - < 0,01; ## - ≪ 0,005; ### - ≪ 0,0005 af Mann Whitney U test
Plasmakoncentrationerne af de 15 cytokiner /kemokiner /vækstfaktorer blev estimeret ved hjælp af Quantibody array. De 18 ikke-maligne tilfælde (12 uden opdaget af OGDscopy og 6 med godartet patologi i maven abnormitet) blev slået sammen, og median-værdier blev sammenlignet mellem tumorer og den ikke-maligne gruppe. Mann Whitney U-testen blev udført for at vurdere den statistiske signifikans (to ensidet test). IL8, CXCL9 /MIG, CCI3 /MIP-1α, CCL20 /MIP-3a, PDGFR-B og TIMP1 plasmaniveauer var signifikant forskellig mellem den ikke-maligne gruppen og mavekræft gruppen (tabel 4). SPP1 /OPN niveau var også højere i mavecancerpatienter sammenlignet med den ikke-maligne gruppe, men var borderline signifikant (p = 0,05). De post-kirurgiske niveauer af EpCAM, IGFBP3, IL8, CXCL10 /IP10, CXCL9 /MIG, CCL3 /MIP-1α, CCL20 /MIP-3α, SPP1 /OPN og PDGFR-B viste et ensartet fald i alle de 8 prøver undersøgt. I modsætning TIMP1, faktisk CCL15 /MIP-1δ og CFD /Adipsin niveauer steg i den post-operative periode i de fleste af prøverne (figur 2) .table 4 Median værdier for cytokiner og chemokiner i plasma fra ikke-maligne patienter versus plasma fra patienter med gastrisk karcinom

MEDIAN for ikke-maligne (n = 18) (i pg /ml)
RANGE (i pg /ml)
MEDIAN for tumorer (n = 58) (i pg /ml)
RANGE (i pg /ml)
CFD /Adipsin
71520,0
58000,8 til 77527,9
69236,4
27926,9 til 95255,7
CXCL5 /ENA-78
1100,6
0-7203,2
1702,8
0-11588,5
EpCAM
1789,8
0-13627,3
3527,1
0-35009,2
IGFBP-3
119467,1
20164,6 - 174498
110395,1
0-979359,6
IL-8 /CXCL8
22,5
0-69,9
48,9 *
0 til 396,3
CXCL10 /IP-10
670,2
0-3328,9
931,1
0-5158,9
CXCL9 /MIG
6069,2
0-18739,7
7561,8 *
505-6 - 86.999
CCL3 /MIP-1α
1464,8
0 - 10602,2
2335,1 *
0 - 32199
CCL4 /MIP-1β
43,0
0 til 440,1
127,9
0-2138,5
CCL15 /MIP-1δ
6628,8
1237,8 til 13178,1
5577,9
696,3-11054,4
CCL20 /MIP-3α
139,9
0-1994,1
654,6 #
0-12013,1
MMP-3
10966,2
3891,2 til 38928,9
13680,1
1358,7 til 80588,8
SPP1 /OPN
4621,5
0-20518,1
8680,5
0-110373,2
PDGF RB
1391,5
0-5461,8
2300,5 *
0-34754,4
TIMP-1
31048,9
15603,8 til 220729,6
98054,6 #
6252,5 - 463.941
# - p-værdi < 0,01; * - P værdi < 0,05 af Mann Whitney U test
Figur 2 Pre (1) og Postoperativ (2) plasma niveauer af cytokinerne /chemokiner /vækstfaktorer i gastriske cancere (n = 8). Plasmaniveauerne blev målt ved anvendelse af Quantibody array, som anvender princippet om sandwich-ELISA i en multiplex-format. Detaljerne for estimering af niveauer i afsnittet Metoder.
Plasmakoncentrationerne af cytokiner /kemokiner /vækstfaktorer blev derefter korreleret med klinisk-patologiske træk. 28 af de 58 mavecancerpatienter havde undergået en potentiel kurativ radikal kirurgi (R0 resektion) og 6 patienter gennemgik kun R1 resektion. Disse 34 patologiske prøver var tilgængelige for patologiske korrelationer (pT, PN, pStage, perinodal spredning, lymfe emboli, vaskulær emboli), mens overlevelse analyse blev udført på 28 patienter, der havde gennemgået en R0 resektion. Ti patienter gennemgik palliative kirurgiske procedurer, mens 13 patienter faldt kirurgi eller var uegnet til andre formål end understøttende behandling intervention. Én patient havde et udifferentieret cancer, som om supplerende Immunohistokemiske undersøgelser viste sig at være en primær gastrisk lymfom, diffust storcellet B-celle type. Plasma niveauer for MMP3 hvor højere hos mænd sammenlignet med kvinder (Median værdi 16772,1 pg /ml versus 8512,5 pg /ml) (p-værdi = 0,011);

• Korrelation mellem HER-2 /neu (erbB-2) ekspressionsniveau og terapeutiske virkning af kombinationsbehandling med HERCEPTIN og kemoterapeutiske midler i gastrisk cancercellelinie lines
• Fase I undersøgelse med neoadjuverende kemo- og stråleterapi med S-1 plus hver anden uge cisplatin for avancerede mavecancerpatienter med lymfeknude metastaser: -KOGC04-