Association of minskad uttryck för RASSF1A med promotor metylering i primär magsäckscancer från patienter i centrala China

Association of minskad uttryck för RASSF1A med promotor metylering i primär magsäckscancer från patienter i centrala Kina Bild Sammanfattning
Bakgrund
Även methylation- medierad inaktivering av uttryck av RASSF1A, en kandidat tumörsuppressorgen, har observerats i flera humana cancerformer, uppgifter om ändring av RASSF1A uttryck och metylering på kinesiska primär magsäckscancer är knappa. Dessutom är direkta bevis som visar sambandet mellan proteinuttryck av RASSF1A och primära humana cancer saknas. Syftet med denna studie var att undersöka RASSF1A uttryck i vävnad av primär magcancer (GC) på mRNA och proteinnivåer, och för att fastställa eventuella sambandet mellan DNA-metylering status och proteinuttryck av RASSF1A på kinesiska.
Metoder
femtiofyra patienter med primära gastric cancer inkluderades i studien av RASSF1A mRNA-expression och metyleringsstatus mellan cancervävnad och motsvarande intilliggande normal vävnad. 20 av 54 patienter inkluderades för studie av RASSF1A proteinuttryck. Uttrycket av RASSF1A vid mRNA och proteinnivåer bestämdes med hjälp av RT-PCR och Western-blotting, respektive. Den RASSF1A promotor metylering upptäcktes genom metylering specifika PCR
Resultat och proteinuttryck i GC
RASSF1A mRNA reducerades signifikant med jämförelse med motsvarande normala vävnader (OD-värde. 0,2589 ± 0,2407 mot 0,5448 ± 0,2971 P
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 mot 0,6654 ± 0,2201 P Hotel < 0,0001, respektive). Metylering frekvens av RASSF1A i primär GC är högre än det i de motsvarande normala vävnader (66,7% mot 14,8%, P
< 0,0001). Vidare RASSF1A mRNA-uttryck i metylering grupp av GC minskades ytterligare i jämförelse med den unmethylation grupp av GC (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001) Review Slutsats
Uttryck av RASSF1A. reducerades i vävnad av GC vid mRNA och proteinnivåer. Minskad expression av RASSF1A var associerad med promotorn metylering.
Bakgrund
Magcancer (GC) är en av de vanligaste maligniteter i mag-tarmsjukdomar. Även förekomsten av GC minskar i de utvecklade länen, är det fortfarande en ledande dödsorsaken från cancer i de flesta utvecklingsländer. Både genetiska och miljömässiga faktorer, inklusive H. pylori
infektion har ansetts bidra till utvecklingen av GC. Nyligen har flera studier visat att tystnad tumörsuppressorgener genom epigenetiska modifiering är en grundläggande mekanism för inaktivering av cancerrelaterade gener i patogenesen av human cancer [1]. Av särskilt intresse är det faktum att promotor hypermethylation spelar en viktig roll i förlust av funktion av tumörsuppressorgener.
Allelisk förlust på kromosom 3p21.3 är en av de vanligaste genetiska förändringar i olika typer av humana cancerformer [2 ]. I slutet av 90-talet, Dammann [3] och Burbee [4] et al identifierade RASSF1A, en ny gen från den gemensamma homozygot deletion område på 3p21.3. Denna gen delar homologi med däggdjurs RAS effektorer. Det finns sju RASSF1 isoformer (A till G) som genereras genom alternativ splitsning RASSF1A har visat sig minska tumörbildning in vivo och ofta inaktive i en mängd olika primära humana cancerformer. Genetiska mutationer i denna isoform är sällsynta. Det är känt att epigenetisk tysta RASSF1A associerar med CpG öar metylering av promotorregionen. -igt DNA-sekvensering har visat att hypermetylering av promotorregionen inaktiverar RASSF1A uttryck i de viktigaste humana cancerformer. Detta stöds av observationen av åter uttryck av RASSF1A i olika linjer cancercell som behandlats med demetylering medel [4-7]. Hittills har flera studier visat att förekomsten av avvikande promotor metylering av RASSF1A och förlust eller onormal lågt uttryck av RASSF1A i primär GC, vilket tyder på att inaktivering av RASSF1A uttryck är nära förknippad med promotorn metylering [5, 8-10]. Såvitt vi vet, inga uppgifter om uttrycket av RASSF1A och metylering status i GC i kinesiska befolkningen finns. I den aktuella studien har vi fastställt uttryck av RASSF1A både mRNA och proteinnivåer, och deras förening med RASSF1A främja metylering status på kinesiska primära GC i centrala Kina.
Metoder
Patienter
Femtiofyra patienter med primär GC registrerades i Wuhan University Zhongnan sjukhuset och Hubei Provincial Cancer Hospital i december 2003 till juni 2005 och alla patienter genomgick kurativ resektion med systematisk lymfkörtel dissekering. GC vävnader och motsvarande intilliggande normala mag vävnader erhölls från den löpande verksamheten före kemoterapi. De patienter som ingick 35 män och 19 kvinnor, medelålder 57,6 ± 13,7 år (intervall från 30 till 85 år). Diagnos och differentieringar av GC bestämdes genom histopatologiska undersökningar och TNM klassificeringen. De demografiska och kliniskt patologiska data från patienter sammanfattas i tabell 1. Bland 54 patienter med GC, var 20 fall ingår för studier av proteinuttryck av RASSF1A. Protokollet för studien godkändes av etisk kommitté Wuhan University Zhongnan Hospital. Tumör och angränsande normala vävnader erhölls vid tidpunkten för kirurgi, snabbfrystes i flytande N 2 och lagrades vid -80 ° C tills de användes. Prov snitt färgades i H & E och undersöktes av två erfarna pathologists.Table ett Association of RASSF1A gen metylering med demografi och kliniskt patologiska egenskaper hos primär magcancer (n = 54) katalog vid Metylering
P-värde
OR (95% CI)

Ja
Nej
vid vid Kön
male
24 11
0,766
1.273 (0,393 ~ 4,117) katalog kvinnliga
12 7
Age Hotel < 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167) katalog ≥ 60
19
5
Tumör platser
antrum
14
7
kropp och hjärt
22
11
1,000
1,000 (0,313 ~ 3,192) katalog Stages
tidigt
en 2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708) katalog avancerade
35
16
Lymfkörtel metastaser
ja
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7,882 ) katalog ingen
14
11
fjärrmetastaser
ja
5 1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424) katalog ingen
31
17
Skillnader
väl och måttliga
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624) katalog dålig
18
6
Laurens
Intestinal typ
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275) katalog Diffus typ
24 8
DNA och RNA-extrakt
DNA från frusna vävnader renades genom fenol /kloroform och etanolutfällning och löstes i 50 fil destillerat vatten och förvarades vid -20 ° C fram till användning. Totalt RNA isolerades med hjälp av TRIzol kit (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) enligt tillverkarens anvisningar.
Semi-kvantitativ RT-PCR
Tre mikrogram totalt RNA var omvänt transkriberades med användning av RevertAid ™ första strängen cDNA-synteskit (Fermentas Inc., Vilnius, Litauen). Alla total RNA behandlades med DNas för att undvika kontaminering av genomiskt DNA. Primrarna för RASSF1A och glyceraldehydes-3-fosfatdehydrogenas (GAPDH) designades baserat på RASSF1A gen (Genebank Accession #: NM_007182) och GAPDH-genen (Genebank Accession #: NM_002046). Primrarna för RASSF1A var 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'och 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Primrarna för GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 ', och 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') användes som intern kontroll. De termiska cyklerna var: 94 ° C under 5 min, följt av 35 cykler vid 94 ° C under 30 sek, 55 ° C under 45 sek och 72 ° C under 60 sekunder, och slutligen 72 ° C under 5 min för förlängning. PCR-produkterna separerades i 2% agarosgel i elektrofores och visualiserades med etidiumbromid-färgning, och kvantifieras med användning av ett bildanalyssystem (UVP Bioimaing system, USA). De genererade PCR-produkterna var 265bp för RASSF1A och 370 bp för GAPDH. Optisk densitet (OD) värdet på mRNA-expression beräknades.
Natriumbisulfat modifiering
DNA från tumörvävnader och motsvarande intilliggande normala vävnader utsattes för bisulfat behandling enligt Herman et al [11]. Kortfattat, 2 ^ g av genomiskt DNA suspenderades i 50 | il destillerat vatten, denaturerade med 0,2 M NaOH för 10 min vid 37 ° C, och tillsattes 30 pl av nyframställd 3 M natriumbisulfat (pH 5,0). Proven var över skiktades med mineralolja för att täcka ytan av den vattenhaltiga fasen, och inkuberades vid 50 ° C under 16 ~ 20 timmar. DNA-provet avsaltades genom en kolonn av Wizard DNA Clean-up System (Promega, Wisconsin, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Proven behandlades med 0,3 M NaOH under 5 minuter vid rumstemperatur och utfälldes med etanol. Den bisulfat modifierade genom-DNA återsuspenderades i 50 | il TE-buffert (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 7,6) och lagrades vid -80 ° C för användning.
Metylering-specifik PCR (MSP)
metyleringsstatus av RASSF1A bestämdes genom MSP. Bisulfat behandling av genomiskt DNA omvandlar cytosin till uracil-baser men har ingen effekt på metylcytosin. Den specifika PCR användes sedan för att skilja mellan metylerade och ometylerade DNA-sekvenser i en HotStar TaqE PCR-maskin (Takara Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japan). Primrarna för den metylerade formen var 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'och 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', och primrarna för den ometylerade formen var 5'-GGG GTT TTG TGA GAG TGTG -3 'och 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Gene Bank åtkomstnr: AC002481). PCR-villkoret bestod av en inkubation av 15 min vid 95 ° C, följt av 40 cykler av en 30 sek denaturering vid 94 ° C, 50 sekunder vid en glödgningstemperatur (64 ° C under metylerade och 59 ° C under ometylerade specifika primrar) och en 30 sek förlängning vid 72 ° C, och en slutlig förlängning vid 72 ° C under 10 min. PCR-produkterna separerades i 8% polyakrylamidgeler vid elektrofores. Genomiskt DNA, metylerat in vitro genom CpG metyltransferas (Sss I) genom att följa tillverkarens anvisningar (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA), användes som en positiv kontroll. Vatten blank användes som en negativ kontroll. Varje primeruppsättning genererade en produkt 169 bp.
Western blotting
Femtio mg prover homogeniserades och centrifugerades vid 12,000-15,000 g under 10-15 min i iskall 50 mM HEPES-buffert (pH 7,4) innehållande 150 mM NaCl , 50 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF, 5 | ig /ml leupeptin, 1% NP-40, och 10% glycerol. Supernatanten uppsamlades och proteinkoncentrationen mättes sedan med användning av BSA som en standard med BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology., Inc., Rockford, USA). Lika mängder (100 ^ g) av totalt protein från vävnader underkastades elektrofores på SDS-polyakrylamid-geler (10% gel) och överfördes till polyvinyliden difluorid (PVDF) filtermembran under 30 min bysemi-torr blotting. Membranen blockerades under 2 h vid rumstemperatur med blocket lösning tillhandahålls i ECL-kit (Protein Detector LumiGLO Reserve ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), och inkuberades sedan under 45 min med en 1: 100-spädning av primär antikropp till RASSF1A. Den primära antikroppen som användes för Western blot-analys var en affinitetsrenad get polyklonal antikropp mot RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Calif., USA). De PVDF-membran tvättades sedan under 30 min med användning av en tvättlösning, följt av en 1 h inkubation med anti-get-antikropp konjugerad till pepparrotsperoxidas i blocklösning (Kanin-anti-get-IgG, Chemicon Internation, Inc., Temecula, Kalifornien, USA ). ThePVDF tvättades membranen igen och de immunreaktiva band detekterades genom förstärkt kemiluminescens och visualiserades genom bildanalyssystem (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, UK) användes som kontroll.
Statistisk analys
Statistiska analyser utfördes med hjälp av SPSS11.5 mjukvara (SPSS, Inc., Chicago, IL). Skillnaderna mellan variablerna bedömdes av chi square test eller t-test enligt de uppgifter. Den statistiska signifikansen av skillnader fastställdes till P Hotel < 0,05.
Resultat
RASSF1A mRNA-uttryck i magcancer
RASSF1A mRNA-uttryck i 54 GC vävnader var 50% av den i de angränsande motsvarande normala vävnader, som visade mRNA-uttryck i tumörer reducerades signifikant jämfört med den hos de normala vävnaderna, såsom visas i Fig. 1. Figur 1 Expression av RAASF1A mRNA i primär magcancer (T) och motsvarande normal vävnad (N). RT-PCR-produkter för RASSF1A kvantifierades genom densitometrisk scanning av i etidiumbromid-färgade geler jämfört med GAPDH.
RASSF1A proteinexpression i magcancer
Konsekvent till minskningen i mRNA-expression, visar figur 2 att den proteinexpression i tumörer var endast 21,4% av den i normala vävnader, som tydde på att proteinet nivån RASSF1A expression reducerades även med jämförelse med motsvarande normala vävnader. Figur 2 Proteinexpression av RASSF1A vid primär magcancer (T) och motsvarande normal vävnad (N). Proteinnivå RASSF1A kvantifierades genom Western-blotting jämfört med GAPDH.
RASSF1A mRNA-expression och DNA-metylering i promotorn hos RASSF1A genen i primära magcancer
Såsom visas i fig. 3, metylering frekvens av RASSF1A i GC var 3,5-faldigt högre än den i motsvarande normala vävnader (66,7% mot 14,8%, P < 0,0001). RASSF1A mRNA-uttryck mellan metylering och unmethylation grupper i GC var signifikant olika, är den tidigare 2,6-faldigt lägre än den senare (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001). Resultaten visade att hypermetylering på CpG-ö i RASSF1A promotorn är starkt förknippad med signifikant minskad mRNA-uttryck av RASSF1A. Figur 3 Metylering av RASSFIA i primär magsäckscancer och motsvarande normal vävnad av MSP. Bana 3, 4 och bana 6, 7 visar ett representativt resultat från en tumör och normala provet, respektive. U: förstärkt produkt med primer erkänner ometylerade sekvenser; M: förstärkt produkt med primer erkänner metylerade sekvenser. Genomiskt DNA, metylerat in vitro genom CpG-metylas (Sss I) användes som en positiv kontroll. Vatten blank användes som en negativ kontroll. PCR-produkterna upplöstes på en 8% polyakrylamidgeler
associering mellan metylering och kliniskt patologiska parametrar för magcancer
association mellan promotor metylering och relevanta demografiska och kliniskt patologiska egenskaper, inklusive kön, ålder, tumörstället, lymfkörtel metastas, avlägsen metastas, differentiering, scen och Lauren typ visades i tabell 1. det fanns inget signifikant samband mellan promotor metylering och kliniskt patologiska parametrar.
Diskussion
i den aktuella studien vi fram bevis för att RASSF1A uttryck i GC reducerades vid mRNA och proteinnivåer och metyleringen i promotorregionen av RASSF1A genen var 3,5-faldigt mer frekventa i primära GC än i motsvarande normala vävnader. Dessutom förekomsten av GC patienter med RASSF1A promotor metylerad över ometylerade var två gånger högre. Dessa tyder på att RASSF1A uttryck i GC var mycket associerad med promotorn metylering status RASSF1A genen. För att ytterligare bekräfta sambandet mellan uttryck av RASSF1A och metylering av promotorn, jämförde vi RASSF1A mRNA-expression mellan metylering och unmethylation vävnader i GC, och fann att avvikande metylering av RASSF1A genpromotorregionen är ansvarig för att minska eller förlust av RASSF1A mRNA uttryck i primär GC. Vår studie överensstämde med en studie som visade att 45,6% primär GC hade ingen eller onormalt låg mRNA-uttryck av RASSF1A [5]. Bland 30 matchade uppsättningar från samma patienter 73,3% av GC befanns ha reducerad RASSF1A uttryck [5]. Såvitt vi vet, har ingen studie av RASSF1A proteinuttryck i GC rapporterats. Vi analyserade vidare RASSF1A uttryck vid proteinnivån genom Western blotting i 20 GC patienter och fann att proteinexpression i tumörer är endast 21,4% av expression i normala vävnader. Detta resultat indikerade att RASSF1A proteinuttryck i GC var signifikant lägre än i motsvarande intilliggande normala vävnader. Detta överensstämmer med mRNA expression av RASSF1A.
Mekanismen för minskad eller tystas RASSF1A expression kan orsakas av promotor metylering och /eller mutation av RASSF1A genen. Emellertid har flera studier visat att mutation av RASSF1A genen är mycket sällsynt [4, 5, 7, 12, 13]. Således RASSF1A gen sannolikt inaktiverad av mekanismer för methyltion. Byun et al [5] fann att av 41 primära GC med förlust eller onormal minskning av RASSF1A uttryck, 39 metylerades, medan både GC och normala vävnader med normal RASSF1A uttryck ingen metylerades. Till et al [10] visade att hypermetylering av RASSF1A promotorn konstaterades i 25,8% av GC och 11,1% av mag tarm metaplasi (IM), respektive. Våra data visar att frekvensen av RASSF1A metylering i GC var högre än de ovan rapporterade data. GC är mycket vanligt i Kina och hög metylering av RASSF1A kan förklara delvis orsaken till varför GC förekomst är högre i den kinesiska. Intressant nog kan det faktum att RASSF1A promotor hypermethylation är högre i EBV positiva GC än i EBV negativ cancer (66,7% mot 3,6%) tyder på en nära koppling mellan EBV och avvikande metylering i GC. I själva verket har en tidigare rapport indikerade att viral onkogenes kan innebära avvikande metylering, vilket resulterar i inaktivering av tumörsuppressorgener [9].
Vi fann att metylering frekvensen av RASSF1A i primär GC och i motsvarande normala vävnader var 66,7% och 14,8%, respektive. Våra data visar att av 54 GC patienter 36 var metylerade och 18 var ometylerade, vilket tyder på metylerade GC är vanligare, i samförstånd med de andra rapporterna. Den tidigare studien [14] har föreslagit att magen är en av de normala vävnader med en hög frekvens av åldrande-relaterad metylering, och magcancer är en av tumörerna med en hög frekvens av CpG-ö-metylering. Kang et al [15] studerade metylering status av 11 gener i icke-neoplastisk magslemhinnan och de fann att avvikande CpG-ö metylering skedde ofta i kronisk gastrit, som visade åldrande relation, och att åldersrelaterade metylering var gen typspecifika. RASSF1A genen sällan metyleras, utan åldrande relation. Vidare rapporterade andra författare [3-5] som i normala vävnader, inga metylerade RASSF1A alleler detekteras. Men våra data visade att i motsvarande normala vävnader, i RASSF1A metylering frenquency var hög andel (14,8%). Skillnaden mellan våra data och andra författare "kan bero på att skillnaden mellan de prover som vi studerade var de icke-nesoplasia gastric vävnader hos patienter med magcancer och det är mycket sannolikt att omfatta kronisk gastrit vävnader, särskilt tarm metaplasi vävnader i motsvarande intilliggande normala vävnader. Den tidigare studien rapporterade att flera gener var ofta denaturerad i kronisk gastrit, speciellt i tarm metaplasi vävnader. Till et al [10] undersökte åtta tumörrelaterad gen metylering status inklusive RASSF1A i gastric intestinal metaplasi hos patienter med och utan magcancer, och de fann att frekvensen av metylering i RASSF1A i cancer och tarm metaplasi var 25,8% och 11,1% , respektive. Resultatet överensstämde med vårt. I själva verket, vi sekvens MSP produkter för flera prover. Sekvensen överensstämde med sekvensen förutsagda (data visar inte). Vi fann att ometylerade band alltid samexistera med denaturerad band i de flesta primära GC och motsvarande intilliggande normal vävnad trots minskning eller förlust av RASSF1A uttryck, i linje med tidigare rapporter [4, 10]. Detta är troligen dessa utskurna tumörer inte microdissected och var kontaminerade med stromaceller. Dessutom är MSP extremt känslig. Bai et al [16] trodde att upptäcka dessa två band representerar antingen intra-allel heterogenitet av CpG-ö metylering eller metylering av ön varierar från allel till allel. Alternativt kan våra resultat tyder på att delvis metylering av RASSF1A genpromotorn är tillräckligt för att tysta gentranskription sedan förlusten av en enda gen kopia är tillräcklig för att främja tumörbildning [17, 18]. Tommasi et al [19] konstaterade att heterozygota RASSF1A knockoutmöss var signifikant tumörbenägna, både för spontan tumörbildning och för de kemiskt inducerade tumörer. Detta kan tyda på att den RASSF1A genen har egenskaper som ger haploinsufficiency när endast en allel går förlorad.
Vi undersöker också sambandet mellan promotor hypermethylation och relevanta clinicopathologic parametrar inklusive ålder och kön av patienterna, platsen för cancer, histologiska differentiering, Lauren typ och metastasering av GC. Vi fann att frekvensen av metylering av RASSF1A gen var markant högre i avancerade tumörer jämfört med tidigt stadium tumörer (68,6% vs 33,3%), och högre i dåligt differentierade tumörer (75% vs 60%) jämfört med väl och måttligt differentierade tumörer . Men dessa skillnader inte statistiskt säkerställd. Byun et al [5] har visat att inaktivering av RASSF1A var korrelerad med tumörstadium och grad men inte med histologiska typer av tumörer. Skillnaden kan förklara med begränsade prover för tidigt GC i vår studie.
Transfektion av RASSF1A genen minskar tillväxten av mänskliga cancerceller in vitro och in vivo [3, 4], som stöder en roll för RASSF1A som en tumörsuppressorgen. RASSF1A aktiverande RAS kan kräva heterodimerisering av RASSF1A och romanen Ras-effektor (NORE1), och inducera apoptos genom dess interaktion med Ras, NORE1, kontaktdonet förstärkare av KSR (CNK) och pro-apoptotiska MST1 kinas [20]. Flera grupper har rapporterat att RASSF1A är en mikrotubuli-bindande protein och reglerar mitotisk progression [21-25], och kan fungera i signaltransduktionsvägar som involverar RAS som små GTPas-proteiner. Tommasi et al [19] har visat att Rassf1a
- /- och Rassf1a +/-
möss har ökad tumörmångfald och tumörstorleken, vilket ytterligare tyder på rollen av tumörundertryckning av RASSF1A, vilket kan förklara dess frekventa epigenetisk inaktivering i humana tumörer.
Slutsats
Sammanfattningsvis var uttrycket av RASSF1A markant reducerad till en onormal nivå eller fullständigt förlorad i primära GC jämfört med intilliggande normal vävnad, och var korrelerad till hypermetylering av promotom av RASSF1A genen. Ytterligare arbete är nödvändigt för att klargöra dess exakta funktion och samverkan med andra faktorer för att utveckla strategier för tidig diagnos, prevention och behandling av magcancer
Förklaringar
Tack
Detta arbete stöddes av ett bidrag (nr. 2004AA301C91 ) från Hubei vetenskap och teknik Foundation Mei Ye och gemenskap från Research Center of Digestive Diseases i Wuhan University Zhongnan Hospital. Författarna tackar Prof. Tan Jinquan för kritiska förslag och anställda vid Key Laboratory of Allergy och immun-relaterade sjukdomar i Wuhan University School of Medicine för tekniskt stöd.
Författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan är länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Författaroriginalfilen för figur 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Författaroriginalfilen för figur 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Författaroriginalfilen för figur 3 Konkurrerande intressen
författare (s) förklarar att de inte har några konkurrerande intressen.

• Tymidinfosforylas /β-tubulin III uttryck förutsäga svaret i kinesiska avancerad magsäckscancer patienter som får första linjens capecitabin plus paklitaxel
• Utvärdera en dator stöd för bedömning av magen symptom (ECASS): studieprotokollet för en randomiserad kontrollerad studie