Association d'expression réduite de RASSF1A avec la méthylation du promoteur dans le cancer gastrique primaire à partir de patients du centre China

Association d'expression réduite de RASSF1A avec la méthylation du promoteur dans le cancer gastrique primaire à partir de patients de Résumé
Contexte Chine centrale
Bien methylation- inactivation à médiation par l'expression de RASSF1A, un gène suppresseur de tumeur candidate, a été observée dans plusieurs cancers humains, les données relatives à la modification de l'expression de RASSF1A et de la méthylation dans le cancer gastrique primaire chinois sont rares. De plus, la preuve directe montrant l'association entre l'expression de la protéine de RASSF1A et les cancers humains primaires fait défaut. Le but de cette étude était d'étudier l'expression de RASSF1A dans les tissus du cancer gastrique primaire (GC) à des niveaux d'ARNm et de protéines, et d'établir la relation possible entre le statut de méthylation d'ADN et de l'expression des protéines de RASSF1A en chinois.
Méthodes
cinquante-quatre patients atteints de cancers gastriques primaires ont été inclus dans l'étude de l'expression d'ARNm et de RASSF1A état de méthylation entre les tissus cancéreux et le tissu adjacent normal correspondant. 20 sur 54 patients ont été inclus pour l'étude de l'expression des protéines de RASSF1A. L'expression de RASSF1A à des niveaux d'ARNm et de protéines a été déterminée par RT-PCR et Western Blot, respectivement. La méthylation du promoteur de RASSF1A a été détectée par PCR méthylation-spécifique
Résultats
RASSF1A ARNm et des expressions protéiques dans GC a été réduite de manière significative par comparaison aux tissus normaux correspondants (valeur de DO. 0,2589 ± 0,2407 vs 0,5448 ± 0,2971 P
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, P
< 0,0001, respectivement). la fréquence de méthylation de RASSF1A GC primaire est supérieure à celle dans les tissus normaux correspondants (66,7% contre 14,8%, p
< 0,0001). En outre, l'expression de l'ARNm de RASSF1A dans le groupe de méthylation du GC a été réduite en comparaison au groupe de méthylation de GC (0,1384 ± 0,1142 0,5018 ± 0,2463 par rapport à P
< 0,0001)
Conclusion Expression de RASSF1A. a été réduite dans les tissus du GC à des niveaux d'ARNm et de protéines. expression Diminué de RASSF1A a été associée à la méthylation du promoteur.
Contexte
cancer gastrique (GC) est l'une des tumeurs malignes les plus courantes dans les maladies gastro-intestinales. Bien que l'incidence de la GC est en baisse dans les comtés développés, il est encore une des principales causes de décès par cancers dans la plupart des pays en développement. Des facteurs génétiques et environnementaux, y compris l'infection à H. pylori
ont été considérés comme contribuant au développement de la CG. Récemment, plusieurs études ont montré que le silence des gènes suppresseurs de tumeurs par modification épigénétique est un mécanisme fondamental pour l'inactivation de gènes liés au cancer dans la pathogenèse du cancer humain [1]. De la note particulière est le fait que le promoteur hypermethylation joue un rôle essentiel dans la perte de la fonction des gènes suppresseurs de tumeurs.
Perte allélique sur le chromosome 3p21.3 est l'un des changements génétiques les plus fréquentes dans divers types de cancers humains [2 ]. À la fin des années 90, Dammann [3] et Burbee [4] et al RASSF1A identifié, un nouveau gène de la zone homozygote commune de suppression à 3p21.3. Ce gène partage une homologie avec effecteurs RAS de mammifère. Il y a sept isoformes de RASSF1 (A à G) générées par épissage alternatif RASSF1A a été montré pour réduire la tumorigénicité in vivo et est fréquemment inactivé dans une variété de cancers humains primaires. Les mutations génétiques dans ce isoforme sont rares. Il est connu que le silençage épigénétique de RASSF1A associe îlots CpG méthylation de la région promoteur. Le séquençage d'ADN bisulfate a démontré que l'hyperméthylation de la région de promoteur d'inactiver l'expression de RASSF1A dans les principaux cancers humains. Cette hypothèse est étayée par l'observation de la ré-expression de RASSF1A dans diverses lignées de cellules cancéreuses traitées avec des agents de déméthylation [4-7]. À ce jour, plusieurs études ont montré la présence de aberrante méthylation du promoteur de RASSF1A et de la perte ou de faible expression anormale de RASSF1A en GC primaire, ce qui suggère que l'inactivation de l'expression RASSF1A est étroitement associée à la méthylation du promoteur [5, 8-10]. À notre connaissance, aucune donnée concernant l'expression de RASSF1A et la méthylation statut GC dans la population chinoise sont disponibles. Dans la présente étude, nous avons déterminé l'expression de RASSF1A aux niveaux d'ARNm et de protéines, et leur association avec RASSF1A promouvoir le statut de méthylation dans GC primaire chinoise dans la Chine centrale.
Méthodes
Cinquante-quatre patients
patients avec GC primaire ont été enregistrés dans l'hôpital universitaire de Zhongnan de Wuhan et de l'hôpital provincial du Hubei cancer de Décembre 2003 à Juin 2005, et tous les patients ont subi une résection curative systématique dissection des ganglions lymphatiques. tissus GC et tissus gastriques normaux adjacents correspondants ont été obtenus à partir d'opérations avant la chimiothérapie. Les patients inclus 35 hommes et 19 femmes, âge moyen 57,6 ± 13,7 années (gamme de 30 à 85 ans). Diagnostic et différenciations de GC ont été déterminées par des examens histopathologiques et la classification TNM. Les données démographiques et clinicopathologiques des patients sont résumées dans le tableau 1. Parmi 54 patients avec GC, 20 cas ont été inclus pour l'étude de l'expression des protéines de RASSF1A. Le protocole de l'étude a été approuvée par le comité d'éthique de l'hôpital Zhongnan Université de Wuhan. Tumeur et les tissus normaux adjacents ont été obtenus au moment de la chirurgie, snap-congelées dans l'azote liquide 2 et stockés à -80 ° C jusqu'à utilisation. sections exemples ont été colorées en H & E et ont été examinés par deux pathologists.Table expérimenté 1 Association des RASSF1A méthylation des gènes avec les données démographiques et les caractéristiques clinico de cancer gastrique primaire (n = 54)

méthylation
valeur P
OR (IC à 95%)

Oui
Non


Sexe masculin
24
11
0,766
1.273 (0,393 ~ 4.117)
femelle 12
7
Âge
< 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60
19
5
sites tumoraux
antrum
14
7
corps et
cardiaque 22
11
1.000
1.000 (0.313 ~ 3.192)
Stages
début
1 2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2.708)
avancé
35
16
métastases ganglionnaires
oui
22
7
0,154
2.469 (0.774 ~ 7.882 )
pas
14
11
métastases à distance
oui
5 1
0,651
2.742 (0,296 ~ 25,424)
pas
31
17
différenciations
puits et modérés
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624)
pauvres
18
6
Type Intestinal
Lauren
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
Type diffuse
24 8
ADN et l'ARN extrait
ADN à partir de tissus congelés a été purifié par phénol /chloroforme et précipitation à l'éthanol et dissous dans 50 ul d'eau distillée et conservé à -20 ° C jusqu'à utilisation. L'ARN total a été isolé en utilisant les kits Trizol (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) selon les instructions du fabricant.
Semi-quantitative RT-PCR
Trois microgrammes d'ARN total ont été transcrites en utilisant RevertAid inverse ™ premier brin synthèse d'ADNc kit (Fermentas Inc., Vilnius, Lituanie). Tous les ARN total ont été traités par la DNase pour éviter la contamination de l'ADN génomique. Les amorces pour RASSF1A et glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) ont été conçues en se basant sur le gène de RASSF1A (GenBank Accession #: NM_007182) et le gène de la GAPDH (GenBank Accession #: NM_002046). Les amorces pour RASSF1A étaient 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'et 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Les amorces pour GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 'et 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') ont été utilisés comme contrôle interne. Les cycles thermiques étaient les suivants: 94 ° C pendant 5 min, suivie de 35 cycles de 94 ° C pendant 30 secondes, 55 ° C pendant 45 s et 72 ° C pendant 60 secondes et enfin 72 ° C pendant 5 minutes pour l'extension. Les produits de PCR ont été séparés dans un gel d'agarose à 2% dans l'électrophorèse et visualisés avec du bromure d'éthidium et quantifiés à l'aide d'un système d'analyse d'image (système UVP Bioimaing, USA). Les produits de PCR générés étaient 265bp pour RASSF1A et 370 pb pour GAPDH. La valeur de densité optique (DO) de l'expression de l'ARNm a été calculé. Le plus modification
ADN bisulfate de tissus tumoraux et les tissus normaux adjacents correspondants ont été soumis à un traitement de bisulfate selon Herman et al [11]. En bref, 2 pg d'ADN génomique en suspension dans 50 ul d'eau distillée, dénaturé avec du NaOH 0,2 M pendant 10 min à 37 ° C et on a ajouté 30 ul de fraîchement préparé bisulfate de sodium 3 M (pH 5,0). Les échantillons ont été au-dessus de couches avec une huile minérale pour couvrir la surface de la phase aqueuse, et on fait incuber à 50 ° C pendant 16 ~ 20 h. L'échantillon d'ADN a été dessalée à travers une colonne du système de nettoyage de l'ADN Wizard (Promega, Wisconsin, USA) selon les instructions du fabricant. Les échantillons ont été traités avec du NaOH 0,3 M pendant 5 min à température ambiante et on précipite avec de l'éthanol. L'ADN génomique du bisulfate modifié a été remis en suspension dans du tampon TE 50 pl (Tris 10 mM de Cl, 1 mM d'EDTA, pH 7,6) et stockés à -80 ° C pour une utilisation.
PCR spécifique de la méthylation (MSP) The état de méthylation de RASSF1A a été déterminée par MSP. traitement bisulfate de l'ADN génomique convertit cytosine aux bases uracile, mais n'a aucun effet sur méthylcytosine. La PCR spécifique a ensuite été utilisé pour distinguer entre les séquences d'ADN méthylés et non méthylés dans une machine HotStar TaqE PCR (Takara Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japon). Les amorces pour la forme méthylé étaient 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'et 5'-GAT AAC AAA CCG GAA GCC-3', et les amorces pour la forme non méthylé étaient 5'-GGG GTT TTG TGA GAG TGTG -3 'et 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Gene Bank adhésion: AC002481). La condition de PCR consistait en une incubation de 15 min à 95 ° C, suivie de 40 cycles d'une dénaturation de 30 secondes à 94 ° C, 50 s à une température de recuit (64 ° C pendant méthylé et 59 ° C pour les amorces spécifiques non méthylées) et une extension de 30 secondes à 72 ° C, et une extension finale à 72 ° C pendant 10 min. Les produits de PCR ont été séparés dans des gels à 8% de Polyacrylamide en électrophorèse. L'ADN génomique, méthylé in vitro par CpG méthyltransférase (Sss I) suivant les instructions du fabricant (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA), a été utilisé comme témoin positif. blanc de l'eau a été utilisée comme témoin négatif. Chaque ensemble amorce généré un produit de 169 pb.
Western blot
Cinquante échantillons de mg ont été homogénéisés et centrifugé à 12000-15000 g pendant 10-15 min dans un tampon glacé 50 mM HEPES (pH 7,4) contenant 150 mM de NaCl , 50 mM de Tris · Cl (pH 8,0), 1% de Triton X-100, 2 mM d'EDTA, 2 mM de PMSF, 5 ug /ml de leupeptine, 1% de NP-40 et 10% de glycérol. Le surnageant a été recueilli et la concentration de protéine a ensuite été mesurée en utilisant la BSA comme étalon par le BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology., Inc., Rockford, USA). des quantités égales (100 ug) de protéines totales de tissus ont été soumis à une électrophorèse sur SDS-polyacrylamide gels (gel de 10%) et transférés à polyvinylidène membranes (PVDF) de filtre pendant 30 min bysemi sec blot. Les membranes ont été bloquées pendant 2 h à température ambiante avec la solution de bloc fourni dans le kit ECL (Protein Detector Lumiglo Reserve ™ Western blot Kit, KPL, Maryland, États-Unis), puis incubées pendant 45 min avec une dilution 1: 100 de la l'anticorps primaire à RASSF1A. L'anticorps primaire utilisé pour l'analyse Western blot était une chèvre polyclonaux anticorps purifiés par affinité à RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, en Californie., USA). Les membranes de PVDF ont ensuite été lavées pendant 30 min à l'aide d'une solution de lavage, suivie d'une incubation de 1 h avec un anticorps anti-chèvre conjugué à la peroxydase de raifort dans une solution de bloc (de lapin anti-IgG de chèvre, Chemicon Internation, Inc., Temecula, Californie, États-Unis ). membranes ThePVDF ont été lavées à nouveau et les bandes immunoréactives ont été détectées par chimioluminescence amplifiée et visualisés par le système d'analyse d'image (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, Royaume-Uni) a été utilisé comme témoin.
Analyse statistique
analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le logiciel de SPSS11.5 (SPSS, Inc., Chicago, IL). Les différences entre les variables ont été évaluées par test de chi carré ou t-tests selon les données. La signification statistique des différences a été défini comme P
< RASSF1A ARNm L'expression de 0,05.
Résultats dans le cancer gastrique
RASSF1A expression de l'ARNm dans les tissus 54 GC était de 50% de celle dans les tissus adjacents normaux correspondants, qui a révélé l'expression d'ARNm dans les tumeurs a été considérablement réduite par rapport à celle de la les tissus normaux, comme le montre la Fig. 1. Figure 1: Expression de l'ARNm RAASF1A dans le cancer gastrique primaire (T) et de tissu normal (N) correspondante. Les produits de RT-PCR pour RASSF1A a été quantifiée par balayage densitométrique d'éthidium de gels bromure teinté par rapport à la GAPDH. l'expression
protéine de RASSF1A dans le cancer gastrique
Conformément à la diminution de l'expression de l'ARNm, la figure 2 montre que l'expression des protéines dans les tumeurs était seulement 21,4% de celle dans les tissus normaux, ce qui suggère que le niveau d'expression de la protéine de RASSF1A a également été réduite par comparaison aux tissus normaux correspondants. La figure 2 l'expression des protéines de RASSF1A dans le cancer gastrique primaire (T) et de tissu normal (N) correspondante. RASSF1A niveau de la protéine a été quantifiée par Western Blot comparativement à la GAPDH.
RASSF1A expression d'ARNm et de méthylation de l'ADN dans le promoteur du gène de RASSF1A dans le cancer gastrique primaire
Comme le montre la Fig. 3, la fréquence de méthylation de RASSF1A GC était de 3,5 fois plus élevé que dans les tissus normaux correspondants (66,7% contre 14,8%, p < 0,0001). expression de l'ARNm de RASSF1A entre méthylation et méthylation groupes GC étaient significativement différents, le premier est 2,6 fois plus faible que ce dernier (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001). Les résultats montrent que l'hyperméthylation à l'îlot CpG dans le promoteur de RASSF1A est fortement associée à l'expression de l'ARNm significativement réduite de RASSF1A. Figure 3 méthylation de RASSFIA dans le cancer gastrique primaire et le tissu normal correspondant par MSP. Piste 3, 4 et piste 6, 7 montrent un résultat représentatif d'un échantillon tumoral et normal, respectivement. U: produit amplifié avec l'amorce reconnaissant des séquences non méthylés; M: produit amplifié avec l'amorce reconnaissant des séquences méthylés. ADN génomique méthylée in vitro par la CpG méthylase (Sss I) a été utilisé comme témoin positif. blanc de l'eau a été utilisée comme témoin négatif. Les produits de PCR ont été résolus sur un 8% de gels de polyacrylamide
Association entre la méthylation et des paramètres clinicopathologiques de cancer gastrique
L'association entre la méthylation du promoteur et les caractéristiques démographiques et clinico pertinents, y compris le sexe, l'âge, le site de la tumeur, métastase ganglionnaire, distant Discussion de la
de métastases, la différenciation, le stade et le type de Lauren ont été présentés dans le tableau 1. Il n'y avait pas d'association significative entre la méthylation du promoteur et les paramètres clinicopathologiques. dans la présente étude, nous avons fourni des preuves que l'expression de RASSF1A en GC a été réduite à l'ARNm et les taux de protéine et de la méthylation dans la région promotrice du gène de RASSF1A a été 3,5 fois plus fréquent dans GC primaire que dans les tissus normaux correspondants. En outre, l'incidence des patients du GC avec le promoteur de RASSF1A méthylé sur méthylé était 2 fois plus élevée. Ceux-ci indiquent que l'expression de RASSF1A en GC est fortement associée à l'état de méthylation du promoteur du gène de RASSF1A. Pour confirmer davantage la relation entre l'expression de RASSF1A et la méthylation du promoteur, nous avons comparé l'expression d'ARNm de RASSF1A entre les tissus de méthylation et de méthylation en GC, et on a trouvé que la méthylation aberrante de la région RASSF1A du promoteur du gène est responsable de la diminution ou la perte de RASSF1A ARNm expression dans GC primaire. Notre étude était conforme à une étude qui a montré que 45,6% GC primaire avait pas ou anormalement faible expression de l'ARNm de RASSF1A [5]. Parmi les 30 ensembles assortis des mêmes patients 73,3% de GC a été constaté que l'expression de RASSF1A réduite [5]. À notre connaissance, aucune étude de l'expression de la protéine RASSF1A GC a été rapporté. Nous avons analysé l'expression de RASSF1A en outre, au niveau protéique par Western Blot chez 20 patients atteints de GC et on a trouvé que l'expression des protéines dans les tumeurs est seulement 21,4% de l'expression dans les tissus normaux. Ce résultat indique que l'expression de la protéine de RASSF1A GC était significativement plus faible que dans les tissus normaux adjacents correspondants. Cela est conforme à l'expression de l'ARNm de RASSF1A.
Le mécanisme d'expression de RASSF1A réduit ou réduit au silence pourrait être causée par la méthylation et /ou mutation du gène RASSF1A promoteur. Cependant, plusieurs études ont montré que la mutation du gène de RASSF1A est très rare [4, 5, 7, 12, 13]. Ainsi, le gène de RASSF1A est probablement par des mécanismes d'inactivation methyltion. Byun et al [5] a révélé que sur 41 GC primaire avec la perte ou la réduction anormale de l'expression RASSF1A, 39 ont été méthylé, alors que dans les deux GC et les tissus normaux avec la normale expression RASSF1A aucun n'a été méthylés. Pour et al [10] ont montré que l'hyperméthylation du promoteur de RASSF1A a été trouvé 25,8% de GC et 11,1% de la métaplasie intestinale gastrique (IM), respectivement. Nos données ont montré que la fréquence de méthylation dans RASSF1A GC était supérieure à celle qui précède les données communiquées. GC est très répandue en Chine et haute méthylation de RASSF1A peut expliquer en partie la raison pour laquelle l'incidence GC est plus élevé dans les Chinois. Fait intéressant, le fait que le promoteur de RASSF1A hyperméthylation est plus élevé dans EBV GC positif que dans le carcinome EBV négatif (66,7% vs 3,6%) peut suggérer une association étroite entre EBV et la méthylation aberrante en GC. En effet, un rapport précédent a indiqué que l'oncogenèse virale pourrait impliquer la méthylation aberrante, ce qui entraîne l'inactivation de gènes suppresseurs de tumeur [9].
Nous avons constaté que la fréquence de méthylation de RASSF1A en GC primaire et dans les tissus normaux correspondants étaient de 66,7% et 14,8%, respectivement. Nos données ont montré que sur 54 patients GC 36 étaient méthylé et 18 étaient non méthylé, ce qui suggère GC méthylé est plus commune, en accord avec les autres rapports. L'étude précédente [14] a suggéré que l'estomac est l'un des tissus normaux avec une fréquence élevée de méthylation liées au vieillissement et le cancer gastrique est une des tumeurs avec une fréquence élevée d'îlots CpG méthylation. Kang et al [15] ont étudié l'état de méthylation de 11 gènes dans la muqueuse gastrique non néoplasique et ils ont constaté que les îlots CpG méthylation aberrante a eu lieu fréquemment dans la gastrite chronique, ce qui montre la relation de vieillissement, et que la méthylation était liée au vieillissement spécifique du type de gène. gène RASSF1A était rarement méthylé, sans relation de vieillissement. En outre, d'autres auteurs ont rapporté [3-5] que dans les tissus normaux, aucun allèles RASSF1A méthylés ont été détectés. Cependant, nos données montrent que dans les tissus normaux correspondants, le frenquency RASSF1A de méthylation était élevé (14,8%). La différence entre les données et d'autres auteurs, peut être due à la différence des échantillons, que nous avons étudiés étaient les tissus gastriques non nesoplasia chez les patients atteints d'un cancer gastrique et il est très susceptible d'inclure les tissus de la gastrite chronique, les tissus métaplasie en particulier intestinaux chez le les tissus normaux adjacents correspondants. L'étude précédente a rapporté que plusieurs gènes étaient souvent méthylé dans la gastrite chronique, en particulier dans les tissus de la métaplasie intestinale. Pour et al [10] ont examiné l'état 8 liée à la tumeur gène méthylation comprenant RASSF1A dans une métaplasie intestinale gastrique chez les patients avec et sans cancer de l'estomac, et ils ont découvert que la fréquence de méthylation dans RASSF1A dans le cancer et la métaplasie intestinale était de 25,8% et 11,1% , respectivement. Le résultat était compatible avec la nôtre. En fait, nous avons séquencé les produits de MSP pour plusieurs échantillons. La séquence était conforme à la séquence prédite (données non montrent). Nous avons constaté que des bandes non méthylés coexistent toujours avec des bandes méthylés dans la plupart GC primaire et les tissus normaux adjacents correspondant en dépit de la réduction ou de la perte d'expression de RASSF1A, compatible avec les rapports précédents [4, 10]. Ceci est le plus probable que ces tumeurs réséquées étaient pas microdissection et ont été contaminées par des cellules stromales. En outre, MSP est extrêmement sensible. Bai et al [16] a pensé que la détection de ces deux bandes représente soit une hétérogénéité intra-allélique de l'îlot CpG méthylation ou la méthylation de l'îlot variant d'allele à l'allèle. En variante, notre résultat peut indiquer que la méthylation partielle du promoteur du gène de RASSF1A est suffisante pour réduire au silence la transcription des gènes car la perte d'un exemplaire d'un gène unique est suffisante pour favoriser la formation de tumeurs [17, 18]. Tommasi et al [19] ont observé que des souris knock-out hétérozygotes étaient significativement RASSF1A tumeur sujettes, tant pour la formation d'une tumeur spontanée et pour les tumeurs induites par voie chimique. Cela peut suggérer que le gène RASSF1A a les caractéristiques de conférer haploinsuffisance quand un seul allèle est perdu.
Nous étudions également l'association entre le promoteur hypermethylation et les paramètres clinicopathologiques pertinents, y compris l'âge et le sexe des patients, le site d'un carcinome, la différenciation histologique, le type et la métastase de GC de Lauren. Nous avons constaté que la fréquence de méthylation du gène de RASSF1A a été nettement plus élevée dans les tumeurs avancées par rapport aux tumeurs à un stade précoce (68,6% vs 33,3%) et plus élevé dans les tumeurs peu différencié (75% contre 60%) par rapport au puits et des tumeurs modérément différenciées . Cependant, ces différences ne parviennent pas à la signification statistique. Byun et al [5] ont montré que l'inactivation de RASSF1A a été corrélée avec le stade tumoral et le grade, mais pas avec les types histologiques de tumeurs. L'écart peut expliquer par des échantillons limités pour GC au début de l'étude. Le plus Transfection de gène de RASSF1A réduit la croissance de cellules cancéreuses humaines in vitro et in vivo [3, 4] supportant un rôle RASSF1A comme un gène suppresseur de tumeur. RASSF1A activant RAS peut exiger hétérodimérisation de RASSF1A et le roman Ras effecteur (NORE1) et induire l'apoptose par son interaction avec Ras, NORE1, l'activateur de connecteur de KSR (CNK) et la MST1 kinase-apoptotique pro [20]. Plusieurs groupes ont rapporté que RASSF1A est une protéine de microtubules contraignant et régule la progression mitotique [21-25], et peut fonctionner dans les voies de transduction du signal impliquant RAS comme petites protéines GTPase. Tommasi et al [19] ont démontré que RASSF1A
- /- et RASSF1A +/-
souris ont augmenté le nombre de tumeurs et la taille de la tumeur, ce qui suggère davantage le rôle de la suppression tumorale de RASSF1A, ce qui peut expliquer son inactivation épigénétique fréquentes dans les tumeurs humaines.

Conclusion en résumé, l'expression de RASSF1A a été considérablement réduite à un niveau anormal ou complètement perdu GC primaire par rapport au tissu normal adjacent et a été corrélée à une hyperméthylation du promoteur du gène de RASSF1A. Des travaux supplémentaires sont nécessaires pour élucider sa fonction exacte et de l'interaction avec d'autres facteurs pour élaborer des stratégies pour le diagnostic précoce, la prévention et le traitement du cancer gastrique
Déclarations Remerciements
Ce travail a été soutenu par une subvention (n °:. 2004AA301C91 ) du Hubei science et de la Fondation pour la technologie à Mei Ye et bourse du Centre de recherche des maladies digestives de l'hôpital Zhongnan Université de Wuhan. Les auteurs remercient le Professeur Tan Jinquan suggestions critiques et les membres du Laboratoire clé des allergies et des maladies liées au système immunitaire à l'école Wuhan University of Medicine pour l'assistance technique du personnel. Les fichiers originaux soumis de
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Voici la liens vers des fichiers soumis originaux des auteurs pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Auteurs Auteurs 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg fichier original pour le fichier d'origine de la figure 2 Auteurs 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg pour la figure 3 Intérêts concurrents
L'auteur (s) déclarent avoir aucun conflit d'intérêts.

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