Združenie zníženej expresie RASSF1A s metylácie promótorom v primárnej rakoviny žalúdka u pacientov s centrálnou Číny

Združenie zníženej expresie RASSF1A s metylácie promótorom v primárnej rakoviny žalúdka u pacientov centrálnej Číny
abstraktné
pozadia
Hoci metylácie sprostredkovanú inaktiváciu expresie RASSF1A, supresorového génu nádoru kandidát, bol pozorovaný v niekoľkých ľudskej rakoviny, údaje týkajúce sa zmena RASSF1A expresie a metylácie v čínskej primárnej rakoviny žalúdka sú zriedkavé. Okrem toho priame dôkazy ukazujúce vzťah medzi expresiou proteínu RASSF1A a primárnych ľudských nádorov chýba. Cieľom tejto štúdie bolo zistiť RASSF1A expresiu v tkanive primárnej rakovinou žalúdka (GC) na mRNA a proteínovej úrovni a stanoviť možný vzťah medzi stavom metylácie DNA a proteínové expresie RASSF1A v čínštine.
Metódy
päťdesiat štyri pacientov s primárnou karcinómov žalúdka boli zahrnuté do štúdie RASSF1A mRNA expresie a metylácie stavu medzi tkanive rakoviny a zodpovedajúce priľahlé normálneho tkaniva. 20 z 54 pacientov bolo zahrnuté do štúdie expresie RASSF1A proteínu. Expresie RASSF1A na mRNA a na úrovni proteínu bola stanovená pomocou RT-PCR a westernovým prenosom, v danom poradí. RASSF1A metylácie promótorom bola detekovaná metylácie-špecifickú PCR
Výsledky
RASSF1A mRNA a proteínové výrazy v GC sa významne znížili u porovnaní so zodpovedajúcimi normálnymi tkanivami (OD hodnota :. 0,2589 ± 0,2407 vs. 0,5448 ± 0,2971, p
< 0,0001, 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, P Hotel <0,0001, v uvedenom poradí). Metylácia frekvencia RASSF1A v primárnej GC je vyššia ako v zodpovedajúcich normálnych tkanivách (66,7% verzus 14,8%, P Hotel &0,0001). Okrem toho, expresia mRNA v RASSF1A metylácie skupiny GC bola ďalej znížená v porovnaní s unmethylation skupiny GC (0,1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P Hotel &0,0001)
záver
Vyjadrenie RASSF1A. bola znížená v tkanive GC na úrovni mRNA a bielkovín. Znížená expresia RASSF1A bola spojená s metylácie promótorom.
Pozadie
Karcinóm žalúdka (GC) je jedným z najčastejších malignít u gastrointestinálnych ochorení. Aj keď výskyt GC klesá v rozvinutých krajín, je stále hlavnou príčinou úmrtí na rakovinu vo väčšine rozvojových krajín. Ako genetických a environmentálnych faktorov, vrátane H. pylori
infekcie boli považované za prispieť k rozvoju GC. V poslednej dobe niekoľko štúdií ukázalo, že ticho tumor supresorových génov epigenetické modifikácie je základným mechanizmom pre inaktiváciu génov súvisiacich s rakovinou v patogenéze rakoviny u ľudí [1]. Z zmienku stojí skutočnosť, že promótor hypermetylace hrá zásadnú úlohu pri strate funkcie supresorových génov nádoru.
Strata alelické na chromozóme 3p21.3 je jedným z najčastejších genetických zmien u rôznych typov ľudských nádorov [2 ]. V neskorých 90. rokov, Dammann [3] a Burbee [4] et al identifikovaný RASSF1A, nový gén zo spoločného homozygotná delécie oblasti v 3p21.3. Tento gén zdieľa homológie s cicavčích efektory Ras. Existuje sedem RASSF1 izoformy (A až G), vytvorené alternatívnym zostrihom RASSF1A bolo preukázané, že znižuje tumorigeničnosti in vivo a je často inaktivované v rôznych primárnych ľudských nádorov. Genetické mutácie v tejto izoformy sú zriedkavé. Je známe, že epigenetické umlčanie RASSF1A spolupracovníkov s CPG ostrovov metyláciou promotorové oblasti. Bisulfát DNA sekvencovania ukázalo, že hypermetylace z promotorové oblasti inaktivuje RASSF1A expresiu v hlavných ľudských nádorov. To je podporovaná pozorovaním re-expresie RASSF1A v rôznych nádorových bunkových línií, liečených demetylovaného činidiel [4-7]. K dnešnému dňu, niekoľko štúdií preukázalo prítomnosť aberantne metylácie promótorom z RASSF1A a straty alebo abnormálne nízkou expresiou RASSF1A v primárnej GC, čo naznačuje, že inaktivácia RASSF1A expresie je úzko spojená s metylácie promótorom [5, 8-10]. Do našich najlepších znalostí, žiadne údaje týkajúce sa vyjadrenia RASSF1A a metylačného statusu v GC v čínskej populácii sú k dispozícii. V tejto štúdii sme zistili, expresiu RASSF1A na oboch mRNA a proteínovej úrovni, a ich spojenie s RASSF1A podporovať metylačného statusu v čínskej základnej GC v centrálnej Číne.
Metódy
pacientov
Päťdesiat štyri pacientov s primárnou GC bolo registrované v Wuhan University Zhongnan nemocnice a nemocnice v Hubei zemskom Cancer od decembra 2003 do júna 2005, a všetci pacienti podstúpili kuratívny resekcii so systematickým lymfadenektómia. GC tkaniva a zodpovedajúce priľahlé normálne žalúdočné tkaniva boli získané z prevádzkovej činnosti pred chemoterapiou. Pacienti bolo zahrnuté 35 mužov a 19 žien, priemerného veku 57,6 ± 13,7 rokov (rozmedzie 30 až 85 rokov). Diagnostika a členenie GC boli stanovené histopatologických vyšetrenia a TNM klasifikácia. Demografické a klinicko-patologické dáta pacientov sú zhrnuté v tabuľke 1. Z 54 pacientov s GC, 20 prípadov boli zahrnuté pre štúdium expresie proteínu z RASSF1A. Protokol štúdie bol schválený etickou komisiou Univerzity Wuhan Zhongnan nemocnice. Tumoru a priľahlé normálneho tkaniva boli získané v čase chirurgického zákroku, snap-zmrazený v kvapalnom dusíku 2 a uloží sa pri teplote -80 ° C až do použitia. Vzorové rezy boli zafarbené v H &E a boli skúmané dva skúseným pathologists.Table 1 asociácie RASSF1A génovej metylácii demografických a klinicko vlastností primárnej rakoviny žalúdka (n = 54)

metylácie
hodnotou P
OR (95% CI)

Áno
Nie


Pohlavie
male
24
11
0,766 1,273
(0,393 ~ 4,117)
samica
12
7
Age Hotel < 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60
19
5
lokalizačné
Antrum
14
7
telo a srdcové
22
11
1,000
1.000 (0,313 ~ 3.192)
Etapy
čoskoro
1
2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708)
pokročilé
35
16
lymfatických uzlín
áno
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7.882 )
žiadny
14
11
vzdialenej metastázy
áno
5
1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424)
nie
31
17
Odlišnosti
dobre a umiernené
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624)
zlé
18
6

Črevné typovej Lauren
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
Typ difúznu
24
8
DNA a RNA extrakt
DNA zo zmrazených tkanív bol prečistí pomocou fenol /chloroformom a zrážaním etanolom a rozpustená v 50 ul destilovanej vody a uloží sa pri teplote -20 ° C až do použitia. Celková RNA bola izolovaná pomocou TRIzolu súprav (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) podľa inštrukcií výrobcu.
Semi-kvantitatívna RT-PCR
tri mikrogramov celkovej RNA bola reverzne transkribovaných s použitím prvého vlákna RevertAid ™ syntéza cDNA kit (Fermentas Inc., Vilnius, Litva). Všetky celkovej RNA bolo liečených DNázy, aby sa zabránilo kontaminácii genómovej DNA. Priméry pre RASSF1A a glyceraldehydes-3-fosfátdehydrogenázy (GAPDH), boli navrhnuté na základe RASSF1A génu (GeneBank prístupové č: NM_007182) a GAPDH génu (GeneBank prístupové č: NM_002046). Primery pre RASSF1A boli 5'-CTT TTA SCS GCC CAA GGA TGC-3 'a 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Primery pre GAPDH (5'-CAT AAC GAC TTT GGT ATC GTG-3 'a 5'-TCG CTG GTG TTG AAG TCA TCG GA-3') boli použité ako vnútorná kontrola. Tepelné cykly boli nasledujúce: 94 ° C po dobu 5 minút, nasleduje 35 cyklov pri teplote 94 ° C počas 30 s, 55 ° C počas 45 s a 72 ° C počas 60 sekúnd, a nakoniec 72 ° C po dobu 5 minút pre predĺženie. Produkty PCR boli rozdelené v 2% agarózovom géli v elektroforéze a vizualizované farbením etidiumbromidom, a kvantifikované za použitia systému pre analýzu obrazu (UVP Bioimaing systémy, USA). Generované PCR produkty boli 265bp pre RASSF1A a 370 bp pre GAPDH. bola vypočítaná optická hustota (OD), hodnota výrazu mRNA.
hydrogénsíranu modifikácie
DNA z nádorového tkaniva a zodpovedajúce priľahlé normálneho tkaniva boli podrobené ošetreniu hydrogénsíranu podľa Herman et al [11]. Stručne, 2 ug genómovej DNA suspenduje v 50 ul destilovanej vody, denaturovaný 0,2 M NaOH počas 10 minút pri teplote 37 ° C, a pridá sa 30 ul čerstvo pripraveného 3 hydrogénsíranu sodného (pH 5,0). Vzorky boli v priebehu prevrství minerálnym olejom na pokrytie povrchu vodnej fázy, a inkubujú sa pri teplote 50 ° C počas 16 až 20 hodín. Vzorka DNA sa odsolí na stĺpci DNA Clean-up System Wizard (Promega, Wisconsin, USA) podľa inštrukcií výrobcu. Vzorky sa spracujú s 0,3 M NaOH počas 5 minút pri teplote miestnosti a vyzrážaniu etanolom. Bisulfátová modifikované genomická DNA bola resuspendované vo 50 ul TE pufra (10 mM Tris · Cl, 1 mM EDTA, pH 7,6) a skladované pri -80 ° C pre použitie.
Metylácia špecifická PCR (MSP)
stav metylácie RASSF1A bola stanovená MSP. Bisulfát liečba genómovej DNA konvertuje cytozín na uracil báz, ale nemá žiadny vplyv na metylcytosinem. Konkrétne PCR bol potom použitý na rozlíšenie medzi metylovaných a nemethylovaných sekvencií DNA v stroji HotStar TaqE PCR (Takara Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japonsko). Primery pre methylata formy boli 5'-GGG GAG TTT TGC AGC GCG-3 'a 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', a priméry na nemethylované forme boli 5'-GGG GTT TTG GAG TGA TGTG 3 'a 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Gene Bank pristúpení: AC002481). Stav PCR pozostával z jednej inkubácii 15 min pri teplote 95 ° C, nasledovalo 40 cyklov 30 sekúnd denaturácie v 94 ° C, 50 s pri žíhacie teplote (64 ° C počas methylata a 59 ° C počas nemethylovaných špecifickými primermi) a predĺženie 30 s pri 72 ° C a konečná extenzia pri teplote 72 ° C počas 10 min. PCR produkty boli rozdelené do 8% polyakrylamidovom gélu v elektroforéze. Genómovej DNA, methyluje in vitro CPG metyltransferáza (PP I) nasledujúceho návodu výrobcu (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA), bol použitý ako pozitívna kontrola. Voda blank bola použitá ako negatívna kontrola. Každá sada primérov generované produkt so 169 bp.
Western blotting
Päťdesiat vzorky mg boli homogenizované a centrifugovány pri 12,000-15,000 g počas 10-15 minút v ľadovo chladného 50 mM HEPES pufra (pH 7,4), ktorý obsahuje 150 mM NaCl , 50 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF, 5 ug /ml leupeptinu, 1% NP-40, a 10% glycerolu. Kvapalina nad zrazeninou bola oddelená a koncentrácia proteínu bola meraná s použitím BSA ako štandardu BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology., Inc., Rockford, USA). Rovnaká množstvo (100 ug) z celkového proteínu z tkanív boli podrobené elektroforéze na SDS-polyakrylamidovom gélu (10% gél) a prevedená do polyvinylidine difluoride (PVDF) filtračných membrán počas 30 minút Byse suché Blot. Membrány boli blokované po dobu 2 hodín pri teplote miestnosti s roztokom bloku poskytnuté v ECL kitu (Protein detektor LumiGLO Reserve ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), a potom inkubované po dobu 45 minút s 1: 100 zriedenie primárna protilátka sa RASSF1A. Primárne protilátka použitá pre Western blot analýzu bol afinitnej čistený kozie polyklonálne protilátka proti RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA). Membrány PVDF boli potom premyté počas 30 minút za použitia pracieho roztoku, nasledovaný 1 h inkubácie s anti-kozie protilátkou konjugovanou s chrenovou peroxidázou v blokovacom roztoku (králičie anti-kozie IgG, Chemicon Internation, Inc., Temecula, Kalifornia, USA ). ThePVDF membrány boli znovu premyté a imunoreaktívnych pásy boli detekované zvýšenej chemiluminiscencie a vizualizované systému analýzy obrazu (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). GAPDH (abca Biotechnology, Cambridge, UK) bol použitý ako kontrola.
Štatistická analýza
Štatistické analýzy boli vykonané pomocou softvéru SPSS11.5 (SPSS, Inc., Chicago, IL). Rozdiely medzi premennými boli stanovené testom chi-kvadrátu, alebo t-testy podľa údajov. Štatistická významnosť rozdielov bola stanovená ako P Hotel < 0,05.
Výsledky
RASSF1A mRNA expresie v karcinómu žalúdka
RASSF1A mRNA expresie v 54 GC tkanivách bola 50%, že v priľahlých zodpovedajúcich normálnych tkanivách, ktoré odhalili expresiu mRNA v nádore bol významne znížený v porovnaní so situáciou normálne tkanivá, ako je znázornené na obr. 1. Obrázok 1 Expresia mRNA RAASF1A primárneho karcinómu žalúdka (T) a zodpovedajúce normálne tkanive (N). RT-PCR produkty pre RASSF1A boli kvantifikované denzitometrické skenovaním v etidiumbromidom farbených gélov oproti GAPDH.
RASSF1A expresie proteínov v karcinómu žalúdka
konzistentné s poklesom expresie mRNA, obrázok 2 ukazuje, že expresia proteínu v nádory bolo iba 21,4% z ceny, ktoré v normálnych tkanivách, z ktorých vyplýva, že hladina proteínu RASSF1A expresie bola tiež znížená porovnaní so zodpovedajúcimi normálnymi tkanivami. Obrázok 2 Expresia proteínu z RASSF1A v primárnej rakoviny žalúdka (T) a zodpovedajúce normálne tkanive (N). Hladina proteínu RASSF1A bola kvantifikovaná pomocou Western-blotting v porovnaní s GAPDH.
RASSF1A mRNA expresie a metylácie DNA v promótorom génu RASSF1A v primárnej rakoviny žalúdka
Ako je znázornené na Obr. 3, metylácie frekvencia RASSF1A v GC bola 3,5-krát vyššia ako v zodpovedajúcich normálnych tkanivách (66,7% verzus 14,8%, p 0,0001). RASSF1A expresie mRNA medzi metylácie a unmethylation skupín v GC boli výrazne odlišné, prvý je 2,6-krát nižšia ako u druhej skupiny (0,1384 ± 0.1142 0.5018 vs ± 0,2463, P Hotel &0,0001). Výsledky ukázali, že hypermetylace na CPG ostrova v promótorom RASSF1A je silne spojený s významne zníženou expresiou mRNA RASSF1A. Obrázok 3 Metylácia RASSFIA v primárnej rakovinou žalúdka a zodpovedajúce normálne tkanivá MSP. Dráha 3, 4 a dráha 6, 7 znázorňujú reprezentatívne výsledky z nádorové a normálne vzorky, v danom poradí. U: amplifikovanej produkt sa primer rozpoznávajúci nemetylované sekvencie; M: amplifikovanej produkt sa primer rozpoznávajúci methylata sekvencie. Genómovej DNA, methyluje in vitro CPG metyláza (PP I) bol použitý ako pozitívna kontrola. Voda blank bola použitá ako negatívna kontrola. PCR produkty boli rozdelené na 8% polyakrylamidovom gélu počas
pridružení medzi metylácie a klinicko-parametrov rakovinou žalúdka
Súvislosť medzi metylácie promótorom a príslušných demografických a klinicko-charakteristikami, vrátane pohlavia, veku, nádoru mieste, lymfatických uzlín, vzdialená metastázy, diferenciácie, stupeň a typ Laurenův boli uvedené v tabuľke 1. nebol žiadny významný vzťah medzi metylácie promótorom a klinicko parametrov.
Diskusia
v tejto štúdii sme preukázali, že expresia v RASSF1A GC bola znížená na mRNA a množstvo bielkoviny a metylácie v promotorové oblasti génu RASSF1A bola 3,5-krát častejšie v primárnej GC než zodpovedajúce normálne tkanivá. Okrem toho výskyt pacientov s GC RASSF1A promótorom methyluje za nemethylovaný sa 2-krát vyššia. Tie ukazujú, že expresia v RASSF1A GC bola veľmi spojená s stavu metylácie promótorom génu RASSF1A. Pre ďalšie potvrdenie vzťah medzi expresiou RASSF1A a metylácie promótorom, porovnali sme RASSF1A expresiu mRNA medzi metylácie a unmethylation tkaniva v GC, a zistili, že aberantne metylácie oblasti RASSF1A promótorom génu je zodpovedný za zníženie alebo straty RASSF1A mRNA expresie v primárnom GC. Naše štúdie bolo v súlade s jedným štúdie, ktorá ukázala, že 45,6% primárnej GC mal žiadne alebo abnormálne nízku expresiu mRNA RASSF1A [5]. Medzi 30 uzavreté sád z týchto pacientov bolo zistené 73,3% GC mať zníženú expresiu RASSF1A [5]. Do našich najlepších znalostí, bola hlásená žiadna štúdia expresie RASSF1A proteínov v GC. Ďalej sme analyzovali RASSF1A expresiu na úrovni proteínov metódou Western blot u 20 pacientov GC a zistilo sa, že expresia proteínu v nádoroch, je iba 21,4% z expresie v normálnych tkanivách. Tento výsledok je uvedené, že expresia proteínu v RASSF1A GC bola významne nižšia ako u zodpovedajúcej priľahlej normálneho tkaniva. To je v súlade s expresiou mRNA RASSF1A.
Mechanizmus zníženú alebo tlmičom expresie RASSF1A by mohli byť spôsobené metylácie promótorom a /alebo mutácií RASSF1A génu. Avšak, niekoľko štúdií ukázalo, že mutácia génu RASSF1A je veľmi zriedkavé [4, 5, 7, 12, 13]. Tak, RASSF1A génu je pravdepodobne deaktivovaný mechanizmy methyltion. Byun et al [5] zistili, že 41 primárne GC so stratou alebo abnormálne zníženie RASSF1A prejavu, 39 bolo methyluje, zatiaľ čo v oboch GC a normálneho tkaniva s normálnym RASSF1A expresným žiadna z nich nebola methyluje. Do et al [10] ukázal, že hypermetylace z RASSF1A promótorom bola zistená u 25,8% GC a 11,1% žalúdočné črevnej metaplázia (IM), v danom poradí. Naše dáta ukázali, že početnosť RASSF1A metylácie v GC bola vyššia ako vyššie uvedených údajov. GC je veľmi rozšírené v Číne a vysoká metylácie RASSF1A môže vysvetliť čiastočne dôvod, prečo GC incidencia je vyššia u Číňanov. Zaujímavé je, že skutočnosť, že RASSF1A promótor hypermetylace je EBV pozitívne GC vyššie ako u EBV negatívnu karcinómu (66,7% vs. 3,6%), sa môže navrhnúť blízky vzťah medzi EBV a aberantne metylácie v GC. V skutočnosti, predchádzajúca správa ukázala, že vírusové onkogenézy môže aberantne metylácie, čo vedie k inaktivácii tumor supresorových génov, [9].
Zistili sme, že metylácie frekvencia RASSF1A v primárnej GC a v zodpovedajúcich normálnych tkanivách bola 66,7% a 14,8%, v uvedenom poradí. Naše dáta ukazujú, že z 54 pacientov GC 36 boli methylata a 18 boli nemethylovaný, čo naznačuje, denaturovaný GC je častejšie, po dohode s ostatnými správami. Predchádzajúce štúdie [14] naznačujú, že žalúdok je jedným z normálnych tkanív s vysokou frekvenciou metylácie starnutia súvisiacich, a rakovina žalúdka je jedným z nádorov s vysokou frekvenciou CPG ostrova metylácie. Kang et al [15] študovali metylačného statusu 11 génov v nonneoplastic žalúdočnej sliznice, a zistili, že aberantne CPG ostrov metylácie došlo často chronické gastritídy, ktorý ukázal, starnutie vzťah, a že starnutie súvisiace metylácie bol gén typu špecifické. RASSF1A gén bol zriedka methyluje, bez starnutia vzťahu. Okrem toho, ďalší autori uvádzajú [3-5], ktoré v normálnych tkanivách, boli zistené žiadne methylata RASSF1A alely. Avšak, naše dáta ukazujú, že v zodpovedajúcich normálnych tkanivách sa RASSF1A metylácie Frenquency bol vysoký podiel (14,8%). Rozpor medzi našimi dátami a iných autorov 'môže byť v dôsledku rozdielu vzoriek, ktoré sme študovali boli non-nesoplasia žalúdočné tkaniva u pacientov s karcinómom žalúdka a je veľmi pravdepodobné, že patrí chronické gastritídy tkaniva, najmä črevnej metaplázia tkanivách zodpovedajúce priľahlé normálneho tkaniva. Predchádzajúce štúdie uvádza, že niektoré gény boli často methylata v chronickej gastritídy, a to najmä v črevnej metaplázia tkanivách. Do et al [10] skúmali stav 8 tumor-súvisiace gen metylácie vrátane RASSF1A žalúdka črevnej metaplázia u pacientov s a bez karcinómu žalúdka, a zistili, že frekvencia metylácie v RASSF1A rakoviny a črevné metaplázia bola 25,8% a 11,1% , v uvedenom poradí. Výsledok bol v súlade s našimi. V skutočnosti sme sekvenovania MSP produkty pre niekoľko vzoriek. Sekvencia bolo v súlade so sekvencie predpokladaná (dáta nevykazujú). Zistili sme, že nemethylovaný kapely vždy koexistovať s denaturovaným kapiel vo väčšine primárnej GC a zodpovedajúce priľahlé normálneho tkaniva napriek zníženiu alebo straty RASSF1A prejavu, v súlade s predchádzajúcimi správami [4, 10]. To je s najväčšou pravdepodobnosťou tieto operaciindikováni nádory neboli microdissected a boli kontaminované stromálne bunky. Navyše MSP je veľmi citlivý. Bai et al [16] si myslí, že detekcia týchto dvoch pásov predstavuje buď vnútri alelickou heterogénnosť ostrovný metylácie CPG metylácie alebo ostrova sa pohybuje od alely na alelu. Alternatívne, náš výsledok môže znamenať, že parciálny metylácie promótorom génu RASSF1A stačí na umlčanie transkripcie génu, pretože strata jediné kópie génu je dostatočná na podporu tvorby nádoru [17, 18]. Tommasi et al [19] zistilo, že heterozygotnou RASSF1A knockout myší významne boli tumor-prone, a to ako pre spontánnu vzniku nádorov a na chemicky indukované nádory. To môže naznačovať, že gén RASSF1A má vlastnosti udeľujúci haploinsufficiency, kedy dôjde k strate iba jedna alela.
Tiež skúmať spojitosť medzi promótor hypermetylace a príslušnými patologickým parametrov, vrátane veku a pohlavia pacientov, pozemok karcinómu, histologické diferenciácie, typ a metastázy GC Lauren. Zistili sme, že frekvencia metylácie RASSF1A génu bola výrazne vyššia u pokročilých nádorov v porovnaní so začiatkom štádiu nádoru (68,6% vs. 33,3%), a vyššia v zle diferencovaných nádorov (75% vs. 60%), v porovnaní s dobre a stredne diferencovaných tumorov , Tieto rozdiely však nie sú štatisticky významné. Byun et al [5] ukázali, že inaktivácia RASSF1A korelovala s štádiu nádoru a triedy, ale nie s histologických typov nádorov. Nesúlad možno vysvetliť obmedzenými vzorky pre včasnú GC v našej štúdii.
Transfekcia RASSF1A génu znižuje rast ľudské nádorové bunky in vitro a in vivo [3, 4], podporujúce úlohu pre RASSF1A ako tumor supresorového génu. RASSF1A aktivácia RAS môže vyžadovať heterodimerizaci o RASSF1A a román Ras efektor (NORE1), a apoptózu prostredníctvom interakcie s Ras, NORE1, konektor zosilňovače KSR (CNK) a proapoptický MST1 kinázy [20]. Niekoľko skupín hlásili, že RASSF1A je proteín viažuci mikrotubuly a reguluje mitotické progresiu [21-25], a môžu fungovať v signálnych transdukčných dráh zahŕňajúcich RAS ako malé GTPázy proteínov. Tommasi et al [19] preukázal, že Rassf1a
- /- a Rassf1a +/-
u myší k zvýšenému výskytu nádorov a veľkosť nádoru, čo ďalej naznačuje úlohu potlačenie nádoru RASSF1A, čo môže vysvetliť jeho časté epigenetické inaktiváciu v ľudských nádoroch.
Záver
v súhrne, expresie RASSF1A sa výrazne zníži na abnormálne úroveň alebo úplne stratené v primárnej GC v porovnaní s priľahlou normálnou tkanivom, a bola korelované s hypermetylace promótorom génu RASSF1A. Ďalšie práce je potrebné objasniť jej presný funkciu a interakciu s inými faktormi vyvíjať stratégie pre včasnej diagnostike, prevencii a liečbe rakoviny žalúdka
deklarácia
Poďakovanie
Táto práca bola podporená grantom (No :. 2004AA301C91 ) od Hubei Science and Technology Foundation Mei Ye a priateľstva z výskumného centra choroby zažívacieho ústrojenstva Wuhan fakultnej nemocnice Zhongnan. Autori ďakujú Prof. Tan Jinquan pre kritické pripomienky a počet zamestnancov Kľúčové Laboratórium alergie a imunitný súvisiace choroby v Wuhan University School of Medicine na technickú pomoc. Pôvodné predložené súbory
autorov pre obrázky
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodné predložených súborov autorov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg autorského 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg autorov pôvodného súboru na pôvodnom súboru Obrázok 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg autorského na obrázku 3 protichodnými záujmami
Autor (ri) vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Thymidinfosforylase /β-tubulín III výrazy predpovedať odozvu u čínskych pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka liečených v prvej línii kapecitabín navyše paclitaxel
• Vyhodnotenie počítačovú podporu pre posudzovanie žalúdočné príznaky (ECASS):.? Protokol štúdie pre randomizovanej kontrolovanej trial