Association vun manner Ausdrock vun RASSF1A mam Promoteur methylation am primäre gastric Kriibs vu Patienten vun Mëtt China

Association vun manner Ausdrock vun RASSF1A mam Promoteur methylation am primäre gastric Kriibs vu Patienten vun Mëtt China VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Obwuel methylation- mediated inactivation vun Ausdrock vun RASSF1A, engem Gene Kandidat entholl suppressor, huet an e puer Mënsch Cancers observéiert goufen, sinn déi Donnéeën iwwer den Aménagement vun RASSF1A Ausdrock an methylation an Chinese Primärschoul gastric Kriibs stattfannen. Ausserdeem, ass suivéiert d'Associatioun tëscht FAQ Ausdrock vun RASSF1A an alleréischter Mënsch Cancers direkte Beweis weist. D'Zil vun dëser Etude war RASSF1A Ausdrock an Otemschwieregkeeten vun der Primärschoul gastric Kriibs (GC) op mRNA an FAQ Niveauen ze ermëttelen, an de méiglech Relatioun tëscht DNA methylation Status an FAQ Ausdrock vun RASSF1A an Chinesesch. VerfÜgung Produktivitéit ze etabléieren VerfÜgung fofzeg-véier Patienten mat der Primärschoul gastric Cancers waren an der Etude vun RASSF1A mRNA Ausdrock an methylation Status tëscht dem Kriibs Otemschwieregkeeten an den entspriechende bascht normal Otemschwieregkeeten abegraff. 20 aus 54 Patienten goufen fir Etude vun RASSF1A FAQ Ausdrock abegraff. Den Ausdrock vun RASSF1A um mRNA an FAQ Niveauen war vun RT-Hinnen alleguer a Western-blotting bestëmmt, bzw.. D'RASSF1A Promoteur methylation war vun methylation-spezifesch Hinnen alleguer festgestallt VerfÜgung Resultater VerfÜgung RASSF1A mRNA an FAQ Ausstralung an GC sech vill mat Verglach zu den entspriechende normal Stoffer (sel Wäert reduzéiert:. 0,2589 ± 0,2407 vs 0,5448 ± 0,2971, P
&Si besteet; 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, P VerfÜgung &Si besteet; 0,0001, bzw.). Methylation Frequenz vun RASSF1A am primäre GC ass méi héich wéi déi vun de jeeweilegen normal Stoffer (66,7% vs. 14,8%, P VerfÜgung &Si besteet; 0.0001). Doriwwer eraus, war RASSF1A mRNA Ausdrock vun methylation Grupp vun GC weider reduzéiert wann Verglach zu der unmethylation Grupp vun GC (0.1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Expression vun RASSF1A. an Otemschwieregkeeten vun GC war um mRNA an FAQ Niveau reduzéiert. Manner Ausdrock vun RASSF1A war mat de Promoteur methylation assoziéiert. VerfÜgung Background VerfÜgung Gastric Kriibs (GC) ee vun de stäerkste gemeinsam malignancies zu gastrointestinal Krankheeten ass. Obwuel Heefegkeet vun GC ass am entwéckelt Grofschaften zréckgeet, ass et nach eng Virreiderroll Doudesursaach vum Cancers am meeschten Entwécklungslänner. Béid genetesch an Ëmwelt Faktoren dorënner H. pylori VerfÜgung Wonn goufen zu der Entwécklung vun GC zu bäidroen considéréiert. Kuerzem, hunn e puer Studien gewisen, datt Hammers vun entholl suppressor Genen vun epigenetic Verännerung eng fundamental Mechanismus ass fir inactivation vu Kriibs-Zesummenhang Genen vun der pathogenesis vum Mënsch Kriibs [1]. Vun de bestëmmte notéieren ass d'Tatsaach, datt Promoteur hypermethylation eng wesentlech Roll an de Verloscht vun der Funktioun vun entholl suppressor Genen spillt. VerfÜgung Allelic Verloscht um chromosome 3p21.3 ass eng vun den heefegsten genetesch Verännerungen zu verschiddenen Zorte vu mënschlechen Cancers [2 ]. Am spéiden 90 ass, Dammann [3] an Burbee [4] et al identifizéiert RASSF1A, e Roman Gentherapie aus der gemeinsamer homozygous Läschen Beräich um 3p21.3. Dëst Gentherapie deelt homology mat mammalian RAS effectors. Et gi siwe RASSF1 isoforms (A bis G) entsteet duerch alternativ splicing RASSF1A gewise gouf tumorigenicity zu VIVO ze reduzéieren an ass an enger Rei vu Primärschoul Mënsch Cancers dacks inactivated. Genetesch Projet'en an dësem isoform sinn rar. Et ass dat epigenetic silencing vun RASSF1A Mataarbechter mat CpG Inselen methylation vun de Promoteur Regioun bekannt. Bisulfate DNA sequencing huet bewisen, datt hypermethylation vum Promoteur Regioun RASSF1A Ausdrock am groussen Mënsch Cancers inactivates. Dëst ass duerch d'Observatioun vun Re-Ausdrock vun RASSF1A zu verschiddenen Kriibs Zell Linnen behandelt mat demethylating Agenten ënnerstëtzt [4-7]. Fir Datum, hunn e puer Studien d'Präsenz vun aberrant Promoteur methylation vun RASSF1A a Verloscht oder anormal héich Ausdrock vun RASSF1A am primäre GC gewisen, suggeréiert datt inactivation vun RASSF1A Ausdrock enk mat de Promoteur methylation [5, 8-10] verbonnen ass. Fir eis beschte Wëssen, betreffend keng Daten vum Ausdrock vun RASSF1A an methylation Status vun GC zu chinesescher Populatioun sinn. Am Moment studéieren, hunn mir Ausdrock vun RASSF1A souwuel mRNA an FAQ Niveaue festleet, an hir Associatioun mat RASSF1A methylation Status an Chinese Primärschoul GC zu der Mëtt China förderen. VerfÜgung Method VerfÜgung kennen VerfÜgung fofzeg-véier Patienten mat der Primärschoul GC waren an der Wuhan University Zhongnan Hospital an der Hubei Provincial Cancer Klinik vum Dezember 2003 bis Juni 2005, ugemellt an all vun de Patienten curative resection mat systematesch lymph Node dissection mécht. GC Stoffer an entspriechend bascht normal gastric Stoffer sech aus Operatiounen virun Chimiotherapie kritt. D'Patienten dorënner 35 Männercher an 19 Weibercher, Alter 57,6 ± 13,7 Joer (Gamme vun 30 bis 85 Joer) heeschen. Diagnos an differentiations vun GC sech duerch histopathological Examen an der TNM klasséieren alles. D'Demographie an clinicopathological Daten vun de Patienten an Table 1. Dorënner 54 Patiente mat GC zesummegefaasst sinn, 20 Fäll goufen fir Etude vun FAQ Ausdrock vun RASSF1A abegraff. De Protokoll vun der Etude war déi ethnesch Comité vun Wuhan University Zhongnan Hospital guttgeheescht. Entholl an bascht normal Stoffer an der Zäit vun Agrëff kritt huet, virgezunnen-gefruer an flësseg N 2 an bei -80 ° C gespäichert bis benotzt. E an huet déi zwee erfuerene pathologists.Table 1 Association vun RASSF1A Gentherapie methylation mat DEMOGRAPHIQUES an clinicopathological Charakteristike vun der Primärschoul gastric Kriibs iwwerpréift (n = 54) VerfÜgung <; Sample Rubriken waren am H &Kierchefënster Protokoll> zu Methylation
P Wäert
ODER (95% CI)
VerfÜgung Jo
Nee
zu zu Geschlecht VerfÜgung männlech VerfÜgung 24 zu 11 VerfÜgung 0,766 VerfÜgung 1,273 (0.393 ~ 4.117) VerfÜgung weiblech VerfÜgung 12 VerfÜgung 7 VerfÜgung Alter VerfÜgung &Si besteet; 60 zu 17 zu 13 VerfÜgung 0,145 VerfÜgung 0.344 (0.101 ~ 1.167) VerfÜgung ≥ 60 zu 19 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung entholl Siten VerfÜgung antrum VerfÜgung 14
7 VerfÜgung Kierper a Fra VerfÜgung 22 zu 11 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 1000 (0.313 ~ 3.192) VerfÜgung Grondsteen
1 VerfÜgung 2 VerfÜgung 0,255
0.229 (0.019 ~ 2.708)
35 fortgeschratt VerfÜgung 16 VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung jo VerfÜgung 22 VerfÜgung 7 VerfÜgung 0,154 VerfÜgung 2.469 (0.774 ~ 7,882 ) VerfÜgung kee VerfÜgung 14 zu 11 VerfÜgung wäit Metastasen VerfÜgung jo VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 1 VerfÜgung 0,651 VerfÜgung 2.742 (0.296 ~ 25.424) VerfÜgung kee VerfÜgung 31 zu 17 VerfÜgung Differentiations VerfÜgung gutt an moderéiert VerfÜgung 18 zu 12 VerfÜgung 0,384 VerfÜgung 0.500 (0.154 ~ 1.624) VerfÜgung aarmséileg VerfÜgung 18 VerfÜgung 6
Lauren d'VerfÜgung Intestinal Typ VerfÜgung 12 zu 10 VerfÜgung 0,148 VerfÜgung 0.400 (0.125 ~ 1.275) VerfÜgung Typ Firwat VerfÜgung 24 VerfÜgung 8 VerfÜgung DNA an RNS Extrait
DNA aus gefruerenem Stoffer war vun phenol /chloroform an Ethanol Nidderschlag sidd an 50 μl destilléiert Waasser a gespäichert bei -20 ° C bis benotzen opgeléist. Total RNS war mat der Trizol Trikoten (cuisine Research Center Galaxy Cincinnati, USA) isoléiert no der Uweisunge d'Hiersteller. VerfÜgung Semi-grouss RT-Hinnen alleguer VerfÜgung Dräi micrograms vun insgesamt RNS sech reversely ausserdeem benotzt RevertAid ™ éischt staarkt cDNA Synthes Kit (Fermentas Galaxy Vilnius, Litauen). All total RNS sech duerch DNase behandelt kontaminéierte Frankräich DNA ze verhënneren. an GAPDH Gentherapie (GeneBank Zougank #: NM_002046): D'primers fir RASSF1A an glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) baséieren op RASSF1A Gentherapie (NM_007182 GeneBank Zougank #) entworf. D'primers fir RASSF1A sech 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'an 5'-CAC CTC CCC Agées GTC ATT TTC C-3 ". D'primers fir GAPDH (5'-CAT GAC AAC Eenzelzäitfueren GGT ATC GTG-3 ", an 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3") goufen, wéi intern Kontroll benotzt. D'thermesch geknuppt: 94 ° C fir 5 Minutte, gefollegt vun 35 Zykle vun 94 ° C fir 30sec, 55 ° C fir 45sec an 72 ° C fir 60sec, an endlech 72 ° C fir 5 Minutte fir Endung. D'Hinnen alleguer Produite sech an 2% agarose gelies an electrophoresis an visualized mat ethidium bromide staining getrennt, a laachen e Bild Analyse System (UVP Bioimaing Systemer, USA) benotzt. D'generéiert Hinnen alleguer Produite goufen 265bp fir RASSF1A an 370 BP fir GAPDH. Optesch Dicht (sel) Wäert vun der mRNA Ausdrock war berechent. VerfÜgung Bisulfate Modifikatioun VerfÜgung DNA aus entholl Stoffer an entspriechend bascht normal Stoffer sech ze bisulfate Traitement ënnerworf no Herman et al [11]. 2 μg vu Frankräich DNA zu 50 μl Sursis gefrot, Waasser destilléiert, denatured mat 0,2 M NaOH fir 10 min bei 37 ° C, an dobäi 30 μl frësch preparéiert 3 M Natrium bisulfate (pH 5.0). D'Echantillon waren iwwer mat Quelle Ueleg layered Uewerfläch vun der meng Phas ze decken, an den 16 ~ 20 h op 50 ° C incubated. Den DNA Prouf war duerch eng Kolonn vu Wizard DNA Clean-up System (Promega, Wisconsin, USA) desalted no den Instruktioune vum Produzent. D'Echantillon waren mat 0.3 M NaOH fir 5 min bei Raumtemperatur a Preisen, mat Ethanol behandelt. D'bisulfate-geännert Frankräich DNA war zu 50 μl TE Prellbock (10 mm Tris · Cl, 1 mm héich, pH7.6) an gespäichert bei -80 ° C fir benotzen. VerfÜgung Methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP) s-gespaart VerfÜgung D'methylation Status vun RASSF1A war vun MSP alles. Bisulfate Behandlung vu Frankräich DNA konvertéiert ze uracil Base cytosine awer keen Effet op methylcytosine huet. Déi spezifesch Hinnen alleguer deemools tëscht methylated an unmethylated DNA Message vun enger HotStar TaqE Hinnen alleguer Maschinn (TaKaRa Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japan) zu z'ënnerscheeden benotzt. D'primers fir d'methylated Form waren 5'-GGG Eenzelzäitfueren TGC Série AGC GCG-3 'an 5'-Gat AAC AAA CGC GAA CCG-3 ", an der primers fir d'unmethylated Form waren 5'-GGG GTT TTG Name Série TGTG -3 "an 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3" (Gene Bank Zougank: AC002481). D'Hinnen alleguer Conditioun bestoung vun ee incubation vun 15 min bei 95 ° C, gefollegt vun 40 Zykle vun engem 30 sec denaturation bei 94 ° C, 50 sec op eng annealing Temperatur (64 ° C fir methylated an 59 ° C fir unmethylated spezifesch primers) , an enger 30 sec Extensioun bei 72 ° C, an engem leschte Extensioun bei 72 ° C fir 10 min. Hinnen alleguer Produite sech an 8% polyacrylamide gels zu electrophoresis getrennt. Frankräich DNA, methylated kënschtlech duerch CpG methyltransferase (Terrainen ech) folgenden Fabrikant d'Richtungen (New England BioLabs Galaxy, Beverly, MA), huet als eng positiv Kontroll benotzt. Waasser eidel war wéi eng negativ Kontroll benotzt. All primer Formatioun entsteet eng 169 BP Produit. VerfÜgung Western blotting VerfÜgung fofzeg mg Echantillon waren homogenized a fir 10-15 min an Äis-kal 50 mm HEPES Prellbock (pH 7.4) mat 150 mm NaCl um 12,000-15,000 g centrifuged , 50 mm Tris · Cl (pH 8.0), 1% Triton X-100, 2 mm héich, 2 mm PMSF, 5 μg /ml leupeptin, 1% NP-40, an 10% glycerol. Supernate war gesammelt an FAQ Konzentratioun war dann BSA als Standard vun der BCA Protein Assay Reagent gemooss benotzt (Pierce Biotechnologie. Galaxy, Rockford, USA). Gläich Quantitéiten (100 μg) vun insgesamt FAQ vu Stoffer sech op SDS-polyacrylamide gels (10% gelies) an transferéiert ze polyvinylidine difluoride (PVDF) filter Schläimhait fir 30 min bysemi-dréchen blotting electrophoresed. 100 dilution vun der: d'Schläimhait sech fir 2 h bei Raumtemperatur mat der Spär Léisung vun der ECL Kit (Protein heescht LumiGLO Reservéiert ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), an dann incubated fir 45 min mat engem 1 gëtt gespaart Primärschoul antibody zu RASSF1A. Der Primärschoul antibody fir Western blot Analyse benotzt gouf eng Affinitéit sidd Geess polyclonal antibody zu RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Déi Galaxy Santa Cruz, ersetze kéint., USA). D'PVDF Schläimhait sech dann fir 30 min zou engem wäschen Léisung benotzt, gefollegt vun engem 1 h incubation mat anti-Geess antibody zu horseradish peroxidase conjugated zu Spär Léisung (Kanengchen anti-Geess IgG, Chemicon Internation Galaxy, Temecula, Kalifornien, USA ). ThePVDF Schläimhait sech nees zou an der immunoreactive Bands sech duerch verstäerkte chemiluminescence fonnt ginn an duerch Bild Analyse System visualized (Bio-Rad Laboratoiren, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Déi, Cambridge, UK) war als Kontroll benotzt. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung statistique Analysë der SPSS11.5 Software standing benotzt (SPSS Galaxy, Chicago, IL). D'Ënnerscheeder tëschent der Verännerlechen sech duerch Chi Feld Test oder T-Tester évaluéieren d'Donnéeën no. Statistesch Bedeitung vun Differenzen war den P VerfÜgung &dra setzen; 0,05. VerfÜgung Resultater VerfÜgung RASSF1A mRNA Ausdrock vun gastric Kriibs VerfÜgung RASSF1A mRNA Ausdrock vun 54 GC Stoffer war 50% vun deem vun der bascht entspriechend normal Stoffer, déi vill Verglach reduzéiert war zu erhéijen mRNA Ausdrock réischt mat deem vun déi normal Stoffer wéi zu Lalumi gewisen. 1. D'Grondidee 1 Expression vun RAASF1A mRNA am primäre gastric Kriibs (T) an entspriechend normal Otemschwieregkeeten (N). RT-Hinnen alleguer Produiten fir RASSF1A laachen sech duerch densitometric Scannen vun am ethidium bromide-Kierchefënster gels Verglach mat GAPDH. VerfÜgung RASSF1A FAQ Ausdrock vun gastric Kriibs VerfÜgung haalt un d'Ofsenkung mRNA Ausdrock, Figur 2 weist, datt d'FAQ Ausdrock vun erhéijen war nëmmen 21,4% vun deem vun normal Stoffer, déi proposéiert, datt d'FAQ Niveau vun RASSF1A Ausdrock och mat Verglach zu den entspriechende normal Stoffer reduzéiert huet. Figur 2 Protein Ausdrock vun RASSF1A am primäre gastric Kriibs (T) an entspriechend normal Otemschwieregkeeten (N). Protein Niveau vun RASSF1A war laachen vum Western-blotting Verglach mat GAPDH. VerfÜgung RASSF1A mRNA Ausdrock an DNA methylation zu Promoter vun RASSF1A Gentherapie am primäre VerfÜgung gastric Kriibs Als gewisen an Figebam. 3, methylation Frequenz vun RASSF1A am GC war 3,5-fantastesch méi héich wéi déi vun de jeeweilegen normal Stoffer (66,7% géint 14,8%, P &Si besteet; 0.0001). RASSF1A mRNA Ausdrock tëscht methylation an unmethylation Gruppen am GC sech vill verschidden, de fréiere ass 2,6-fantastesch niddreg wéi d'Pescht (0.1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P VerfÜgung &Si besteet; 0.0001). D'Resultater weisen, datt hypermethylation um CpG Insel am RASSF1A Promoteur staark mat bedeitend reduzéiert mRNA Ausdrock vun RASSF1A verbonnen ass. Figur 3 Methylation vun RASSFIA am primäre gastric Kriibs an entspriechend normal Otemschwieregkeeten vun MSP. Lane 3, 4 a Geschäftswelt 6, 7 show engem Vertrieder Resultat vun enger entholl an normal Echantillonen, bzw.. U: Implikatioune Produit mat primer unmethylated Message ginn; M: Implikatioune Produit mat primer methylated Message ginn. Frankräich DNA, methylated kënschtlech duerch CpG methylase (Terrainen ech) huet als eng positiv Kontroll benotzt. Waasser eidel war wéi eng negativ Kontroll benotzt. D'Hinnen alleguer Produiten waren op enger 8% polyacrylamide gels geléist VerfÜgung Association tëscht methylation an clinicopathological Parameter vun gastric Kriibs VerfÜgung der Associatioun tëscht Promoteur methylation a relevant demographesch a clinicopathological Charakteristiken dorënner Geschlecht, Alter, entholl Site, lymph Node Metastasen, wäit Metastasen, dat, Etapp an Typ d'Lauren waren an Table 1. Et gouf kee groussen Veräin tëscht Promoteur methylation an der clinicopathological Parameteren gewisen. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung am Moment studéieren mir Beweiser gëtt, datt RASSF1A Ausdrock am GC war um mRNA reduzéiert an FAQ Niveauen an der methylation zu Promoteur Regioun vun der RASSF1A Gentherapie war 3,5-fantastesch méi heefeg am primäre GC wéi am normale Stoffer entspriechend. Ausserdeem war d'Heefegkeet vun GC Patienten mat RASSF1A Promoteur methylated iwwer unmethylated 2-fantastesch héich. Dës hindeit datt RASSF1A Ausdrock am GC war absolut mat de Promoteur methylation Status vun der RASSF1A Gentherapie assoziéiert. Fir weider der Relatioun tëscht Ausdrock vun RASSF1A an der methylation vun de Promoteur confirméieren, am Verglach mir RASSF1A mRNA Ausdrock tëscht methylation an unmethylation Stoffer zu GC, an fonnt dass aberrant methylation vun der RASSF1A Gentherapie Promoteur Regioun ass responsabel fir d'Reduktioun oder Verloscht vun RASSF1A mRNA Ausdrock vun der Primärschoul GC. Eis Etude war mat ee studéieren konsequent déi weisen, datt 45,6% Primärschoul GC keent huet oder abnormal niddereg mRNA Ausdrock vun RASSF1A [5]. Dorënner 30 reagéiert baut aus der selwechter Patienten 73,3% vun GC war fonnt reduzéiert RASSF1A Ausdrock ze hunn [5]. Fir eis beschte Wëssen, kee Etude vun RASSF1A FAQ Ausdrock am GC huet gemellt ginn. Mir analyséieren weider RASSF1A Ausdrock um FAQ Niveau vun Western blotting zu 20 GC Patienten a fonnt, datt d'FAQ Ausdrock vun erhéijen nëmmen 21,4% vun den Ausdrock vun normal Stoffer ass. Dëst Resultat uginn dass RASSF1A FAQ Ausdrock am GC war wesentlech méi niddreg wéi an bascht normal Stoffer entspriechend. Dëst ass fir d'mRNA Ausdrock vun RASSF1A konsequent. VerfÜgung De Mechanismus vun reduzéiert oder RASSF1A Ausdrock entsat konnt duerch Promoteur methylation an /oder stattfannen vun RASSF1A Gentherapie verursaacht ginn. Allerdéngs hunn eng Rei Etuden gewisen, datt stattfannen vun RASSF1A Gentherapie ass ganz seelen [4, 5, 7, 12, 13]. Soumat ass RASSF1A Gentherapie wahrscheinlech duerch Mechanisme vun methyltion inactivated. Byun et al [5] fonnt, datt vun der 41. Primärschoul GC mat Verloscht oder anormal Reduktioun vun RASSF1A Ausdrock, 39. methylated goufen ënnersicht a béid GC an normal Stoffer mat normal RASSF1A Expressioun keent methylated goufen. Fir et al [10] weisen datt hypermethylation vun RASSF1A Promoteur war an 25,8% vun GC an 11,1% vun de gastric intestinal metaplasia (IM), bzw. fonnt. Eis Daten huet gewisen, datt d'Frequenz vun RASSF1A methylation am GC war méi héich wéi déi virun Donnéeën gemellt. GC ass héich verwandelt an China an héich methylation vun RASSF1A erkläre kënnen deelweis de Grond fir firwat GC Heefegkeet ass an der chinesescher héich. Spannen, ass de Fait, dass RASSF1A Promoteur hypermethylation héich am EBV positive GC wéi am EBV negativ carcinoma (66,7% vs 3.6%) kënnt eng enk Associatioun tëscht EBV an aberrant methylation am GC schloen. Tatsächlech huet e virdrun Rapport uginn dass Haren oncogenesis aberrant methylation Debate kéint geplatzt inactivation vun entholl suppressor Genen [9]. VerfÜgung fonnt Mir datt d'methylation Frequenz vun RASSF1A am primäre GC an am entspriechende normal Stoffer goufen 66,7% an 14,8%, respektiv. Eis Daten huet, datt aus 54 GC Patienten 36 methylated waren a 18 goufen unmethylated, methylated GC suggeréiert méi heefeg ass, am Accord mat der aner Rapporten. Déi viregt Etude [14] ugeholl, datt de Mo ass eent vun de normal Stoffer mat engem héich Frequenz vun aller-Zesummenhang methylation, an gastric Kriibs ass eent vun de erhéijen mat engem héich Frequenz vun CpG Insel methylation. Kang et al [15] studéiert der methylation Status vun 11 Genen vun nonneoplastic gastric mucosa an se fonnt dass aberrant CpG Insel methylation Priedegt dacks zu chronescher gastritis, déi Alterungsprozess Relatioun huet, an dat aller-Zesummenhang methylation war Gentherapie Typ-spezifesch. RASSF1A Gentherapie war selten methylated, mat kee Alterungsprozess Relatioun. Ausserdeem, aner Auteuren gemellt [3-5] datt zu normal Stoffer, huet kee methylated RASSF1A alleles fonnt. Mä, huet eis Daten datt d'RASSF1A methylation frenquency am entspriechende normal Stoffer, war héich Prozentsaz (14.8%). D'Ënnerscheeder tëschent eisen Daten an aner Auteuren "kënnt op d'Differenz vun der Echantillon wéinst ginn, wat mir studéiert d'Net-nesoplasia gastric Stoffer an Patienten mat gastric Kriibs goufen an et ass ganz wahrscheinlech chronescher gastritis Stoffer ze gehéieren, besonnesch intestinal metaplasia Stoffer an der Niewendru normal Stoffer entspriechend. Déi viregt Etude confirméiert, datt e puer Genen chronescher gastritis, virun allem zu intestinal metaplasia Stoffer dacks methylated goufen. Fir et al [10] déi 8 entholl-Zesummenhang Gentherapie methylation Status dorënner RASSF1A zu gastric intestinal metaplasia zu Patiente mat an ouni gastric Kriibs iwwerpréift, an hunn se, datt d'Frequenz vun methylation zu RASSF1A zu Kriibs an intestinal metaplasia ware 25,8% an 11,1% bzw.. D'Resultat war konsequent mat eis. An Tatsaach, Nepgen mir de MSP Produite fir verschidde Echantillon. D'Haaptrei huet sech konsequent fir d'Haaptrei virausgesot (Donnéeë weisen net). Mir hu fonnt, datt unmethylated Bands ëmmer mat methylated Gruppen zu stäerkste Primärschoul GC leescht an bascht normal Stoffer trotz Reduktioun oder Verloscht vun RASSF1A Ausdrock, konsequent mat virdrun Rapporten [4, 10] entspriechend. Dëst ass héchstwahrscheinlech dës resected erhéijen sech net microdissected a sech mat stromal Zellen strapazéiert. Ausserdeem, ass MSP extrem sensibel. Bai et al [16] gemengt, Detectioun vun dësen zwou Gruppen entweder Zollformalitéiten-allelic heterogeneity vun der CpG Insel methylation oder methylation vun der Insel duerstellt aus allele verännerlech zu allele. Alternativ, kéint eis Resultat weisen, datt partiell methylation vun der RASSF1A Gentherapie Promoteur genuch ass der Gentherapie Transkriptiouns a Rou well Verloscht vun engem eenheetlechen Gentherapie Kopie genuch ass entholl Équipe ze förderen [17, 18]. Tommasi et al [19] observéiert datt heterozygous RASSF1A Knockout Mais mein entholl-ufälleg, souwuel fir spontan entholl Équipe a fir d'chemesch entschlof erhéijen. Dëst kann hindeit, datt d'RASSF1A Gentherapie d'Charakteristiken vun Laureaten haploinsufficiency huet den eenzege allele verluer ass. VerfÜgung Mir och d'Associatioun tëscht Promoteur hypermethylation a relevant clinicopathologic Parameteren dorënner Alter a Geschlecht vun de Patienten, Site vun carcinoma, histological dat ermëttelen, Lauren d'Aart a Metastasen vun GC. Mir hu fonnt, dass déi meescht vun de methylation vun RASSF1A Gentherapie zu fortgeschratt erhéijen Ofstand héich war am Verglach mat fréi Etapp erhéijen (68.6% vs 33,3%), an méi am kaum ënnerscheet erhéijen (75% géint 60%) wéi mat gutt Verglach an mëttelméisseg ënnerscheet erhéijen . Mä, do net dës Ënnerscheeder statistesch Bedeitung erreechen. Byun et al [5] hu gewisen, datt inactivation vun RASSF1A mat entholl Etapp an Schouljoer soll sech awer net mat histological Zorte vun erhéijen. D'Ënnerscheeder kann duerch limitéiert Echantillon fir fréi GC zu eiser Etude erklären. VerfÜgung Transfection vun RASSF1A Gentherapie de Wuesstem vun mënschlech Kriibs Zell kënschtlech an VIVO [3, 4] verklengert, eng Roll fir RASSF1A als entholl suppressor Gentherapie ënnerstëtzen. RASSF1A RAS activating kann heterodimerization vun RASSF1A an der Verfilmung Ras effector (NORE1) verlaangen, a mat Ras, NORE1, déi bewegen enhancer vun KSR (CNK) an der pro-apoptotic MST1 kinase [20] apoptosis duerch seng Interaktioun induce. Verschidden Gruppen hu bericht, dass RASSF1A engem microtubule-verbindlech FAQ ass an mitotic Werdegang reguléieren [21-25], an RAS wéi kleng GTPase Proteinen am Signal transduction Weeër Funktioun ka sensibiliséieren. Tommasi et al [19] huet bewisen, datt Rassf1a VerfÜgung - /- an Rassf1a +/- VerfÜgung Mais hunn entholl Zuel fräi an entholl Gréisst, proposéiert weider d'Roll vun entholl Ennerdréckung vun RASSF1A, déi hir heefeg epigenetic inactivation erkläre kënnen mënschlechen erhéijen. VerfÜgung Conclusioun am Resumé VerfÜgung, war den Ausdrock vun RASSF1A zu engem Manque Niveau Ofstand reduzéiert oder komplett am primäre GC Verglach mat bascht normal Otemschwieregkeeten verluer, a gouf zu hypermethylation vun de Promoteur vun der RASSF1A Gentherapie soll. Weider Aarbecht ass néideg seng exakt Funktioun an Interaktioun mat anere Facteuren, fir Strategien fir fréi Diagnos, Préventioun a Behandlung vun gastric Kriibs ze entwéckelen VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dës Aarbecht vun Subventiounen ënnerstëtzt gouf (nee:. 2004AA301C91 ) aus Hubei Wëssenschaft an Technologie Foundation zu Mei Ye a Gemeinschaft vun Research Center vun Digestive Krankheeten vun Wuhan University Zhongnan Spidol. D'Auteuren Merci Prof. Tan Jinquan fir kritesch Suggestiounen a Membere vum Personal vun der Key schafft Allergiker an immun-Contenu Krankheeten Wuhan University School of Medezin fir technesch Assistenz. VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn drënner der Linken op der original deposéiert Fichieren fir Biller "Auteuren. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Auteuren' original Datei fir Figur 2 original Datei '12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Auteuren fir Figur 3 Wettsträit Interessen VerfÜgung Den Auteur (s) erklären, datt se keng Competitioun Interessen hunn.

• Thymidine phosphorylase /β-tubulin III Ausstralung viraus d'Äntwert zu Chinese fortgeschratt Patienten gastric Kriibs feieren éischte-Linn capecitabine plus paclitaxel
• Evaluéieren engem Computer Hëllef fir Fliessband Mo. Symptomer (ECASS): Etude Protokoll fir eng zoufälleg kontrolléiert Prozess