Ассоциация уменьшенного экспрессии RASSF1A с метилирования промотора в первичного рака желудка у пациентов центрального Китая

Ассоциация уменьшенного экспрессии RASSF1A с метилирования промотора в первичного рака желудка у пациентов центрального Китая
Аннотация
Справочная информация
Хотя метилирования-опосредованной инактивации экспрессии RASSF1A, ген-супрессор опухоли кандидата, было отмечено в ряде злокачественных опухолей человека, данные, касающиеся изменения экспрессии RASSF1A и метилирования в китайской первичного рака желудка недостаточны. Кроме того, прямые доказательства, показывающие связь между экспрессией белка RASSF1A и первичных злокачественных опухолей человека отсутствует. Целью данного исследования было изучение экспрессии RASSF1A в ткани первичного рака желудка (GC) на уровне мРНК и белка, а также установить возможную связь между статусом метилирования ДНК и экспрессии белка RASSF1A на китайском языке.
Методы
Пятьдесят четыре пациентов с первичного рака желудка, были включены в исследование экспрессии и метилирования статуса RASSF1A мРНК между раковой ткани и соответствующей соседней нормальной ткани. 20 из 54 пациентов были включены для изучения экспрессии белка RASSF1A. Выражение RASSF1A на мРНК и уровня белка определяли с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинг, соответственно. RASSF1A промотор метилирование был обнаружен метилирование-специфической ПЦР
Результаты
мРНК RASSF1A и белковые выражения в GC были значительно снижены с по сравнению с соответствующими нормальными тканями (значение OD:. 0,2589 ± 0,2407 против 0,5448 ± 0,2971, P
&л; 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 против 0,6654 ± 0,2201, P &
л; 0,0001, соответственно). частота метилирования RASSF1A в первичном GC выше, чем в соответствующих нормальных тканях (66,7% против 14,8%, p
≪ 0,0001). Более того, экспрессия мРНК RASSF1A в метилирования группе GC был сокращен по сравнению с unmethylation группой GC (0,1384 ± 0,1142 против 0,5018 ± 0,2463, P
&л; 0,0001)
Заключение
Выражение RASSF1A. была снижена в ткани GC на уровне мРНК и белок. Уменьшенная экспрессия RASSF1A ассоциировалось с метилирования промоторов.
Фон
Рак желудка (GC) является одним из наиболее распространенных злокачественных опухолей в желудочно-кишечных заболеваний. Хотя частота GC снижается в развитых стран, она по-прежнему является ведущей причиной смерти от рака в большинстве развивающихся стран. И генетические и экологические факторы, в том числе хеликобактерной
инфекции были рассмотрены внести свой вклад в развитие GC. В последнее время, несколько исследований показали, что молчание генов-супрессоров опухолей эпигенетическими модификации является фундаментальным механизмом инактивации генов, связанных с раком в патогенезе рака у человека [1]. Из Особо следует отметить тот факт, что промотор гиперметилирование играет существенную роль в потере функции генов-супрессоров опухолей.
Потери аллели в хромосоме 3p21.3 является одним из наиболее часто встречающихся генетических изменений в различных типах злокачественных опухолей человека [2 ]. В конце 90-х годов, Dammann [3] и Burbee [4] и др идентифицированы RASSF1A, новый ген от общего гомозиготной области удаления в 3p21.3. Этот ген разделяет гомологию с эффекторами РАН млекопитающих. Есть семь RASSF1 изоформ (от А до G), сгенерированные с помощью альтернативного сплайсинга RASSF1A было показано, что уменьшить онкогенность в естественных условиях, и часто инактивируются в различных первичных раковых заболеваний человека. Генетические мутации в этой изоформы встречаются редко. Известно, что эпигенетическому глушителей RASSF1A ассоциированных с CpG островков метилирования промоторной области. Бисульфат Секвенирование ДНК показывает, что гиперметилирование области промотора инактивирует экспрессию RASSF1A в основных раковых заболеваний человека. Это подтверждается наблюдением, повторной экспрессии RASSF1A в различных линий раковых клеток, обработанных деметилирующий агентами [4-7]. На сегодняшний день, несколько исследований показали наличие аберрантной промотора метилирования RASSF1A и потере или ненормального низкой экспрессии RASSF1A в первичном GC, предполагая, что инактивация экспрессии RASSF1A тесно связана с метилирования промоторов [5, 8-10]. Насколько нам известно, никаких данных относительно экспрессии RASSF1A и метилирования статус в GC в китайской популяции отсутствуют. В настоящем исследовании мы определили экспрессию RASSF1A на обоих уровнях мРНК и белка, а также их связь с RASSF1A способствовать повышению статуса метилирования в китайской первичной GC в центральной части Китая.
Методы
Пациентов
Пятьдесят четыре пациента с первичной GC были зарегистрированы в университете Чжуннань больницы Ухань и больницы рака провинции Хубэй с декабря 2003 года по июнь 2005 года, и все пациенты прошли целебное резекцию с систематическим лимфодиссекции. GC ткани и соответствующие соседние нормальные ткани желудка были получены от операций до химиотерапии. Пациенты включали 35 мужчин и 19 женщин, средний возраст 57,6 ± 13,7 лет (диапазон от 30 до 85 лет). Диагностика и дифференциациями ГК определялись гистопатологических обследований и классификации TNM. Демографические и клинико-патологических данных пациентов приведены в таблице 1. Среди 54 больных с GC, 20 случаев были включены в исследование экспрессии белка RASSF1A. Протокол исследования был одобрен этическим комитетом Ухань университета Чжуннань больницы. Опухоль и прилегающие нормальные ткани были получены во время операции, быстро замораживали в жидком N <к югу> 2 и хранили при -80 ° C до использования. Образцы срезы окрашивали в H &Amp; E и исследовали два опытных pathologists.Table 1 Ассоциация RASSF1A метилирования гена с демографией и клинико-патологическими особенностями первичного рака желудка (n = 54)
<й>
метилирования


P значение


OR (95% ДИ)


<й> не
Да

нет

<й>
<й>
Пол
мужчина
24
11
0,766
1,273 (0,393 ~ 4,117)
женский
12
7
Возраст
&л; 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60
19 страница 5 Опухоли сайтов
Антрум
14 <бр> 7
тела и сердца
22
11
1.000
1.000 (0.313 ~ 3.192)
Этапы
рано
1 страница 2 0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708)
расширенный
35
16
лимфоузлов метастаз
да
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7.882 )
нет
14
11
Отдаленные метастазы
да страница 5 1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424)
нет
31
17
Дифференцировки
хорошо и умеренные
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624)
бедных
18
6 <бр>
Кишечный тип Лорен
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
тип Диффузный
24
8
ДНК и РНК экстракт <бр> ДНК из замороженных тканей очищали фенол /хлороформом и осаждением этанолом и растворяли в 50 мкл дистиллированной воды и хранили при -20 ° с до использования. Общую РНК выделяли с использованием наборов TRIzol (Molecular Research Center Inc., Цинциннати, США) в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.
Полуколичественное RT-PCR
Три микрограмм тотальной РНК с использованием в противоположном направлении транскрипции RevertAid ™ первой цепи синтез кДНК комплект (Ферментас Inc., Вильнюс, Литва). Все суммарную РНК обрабатывали ДНКазой, чтобы избежать загрязнения геномной ДНК. Праймеры для RASSF1A и glyceraldehydes-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH), были разработаны на основе гена RASSF1A (GeneBank Accession #: NM_007182) и гена GAPDH (GeneBank Accession #: NM_002046). Праймеры для RASSF1A были 5'-СТТ TTA ССТ НКУ CAA GGA ТГК-3 'и 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Праймеры для GAPDH (5'-CAT GAC AAC ТТТ ГГТ АТС GTG-3 ', и 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') были использованы в качестве внутреннего контроля. Термические циклы были: 94 ° С в течение 5 минут, а затем 35 циклов при 94 ° С в течение 30 секунд, 55 ° С в течение 45 сек и 72 ° С в течение 60 секунд, и, наконец, 72 ° С в течение 5 мин для расширения. Продукты ПЦР разделяли в 2% агарозном геле при электрофорезе и визуализированы с окрашивания бромистым этидием, и количественно оценивали с помощью системы анализа образа (системы УВП Bioimaing, США). Полученные продукты ПЦР были 265bp для RASSF1A и 370 пар оснований для GAPDH. рассчитывалась Оптическая значение плотности (ОП) экспрессии мРНК.
бисульфат ДНК модификации груз из опухолевых тканей и соответствующие соседние нормальные ткани были подвергнуты бисульфата обработке в соответствии с Herman и др [11]. В кратком изложении, 2 мкг геномной ДНК суспендировали в 50 мкл дистиллированной воды, денатурированные с 0,2 М NaOH в течение 10 мин при 37 ° C, и добавляли 30 мкл свежеприготовленного 3 бисульфат М натрия (рН 5,0). Образцы были более слоистые с минеральным маслом, чтобы покрыть поверхность водной фазы, и инкубировали при 50 ° С в течение 16 ~ 20 часов. Образец ДНК обессоливают через колонку System Wizard ДНК Clean-Up (Promega, штат Висконсин, США) в соответствии с инструкциями изготовителя. Образцы обрабатывали 0,3 М NaOH в течение 5 мин при комнатной температуре и осаждают этанолом. Бисульфат-модифицированный геномную ДНК повторно суспендировали в 50 мкл ТЕ-буфера (10 мМ Трис · Cl, 1 мМ ЭДТА, рН 7,6) и хранили при -80 ° C для использования.
Метилирования специфической ПЦР (ПНС)
статус метилирования RASSF1A определялась МПВ. Бисульфатом обработка геномной ДНК превращает цитозина в урацил оснований, но не оказывает никакого влияния на метилцитозином. Специфической ПЦР затем использовали для различения между метилированных и неметилированных ДНК-последовательностей в машине HotStar TaqE PCR (Takara Bio, Co., Ltd., Токио, Япония). Праймеры для метилированной формы были 5'-GGG ТТТ ТГК ГАГ АРУ ГКГ-3 'и 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', а праймеры для неметилированной формы были 5'-GGG GTT TTG GAG TGA TGTG -3 'и 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Gene Bank Присоединение: AC002481). Условием ПЦР состояла из одной инкубации 15 мин при 95 ° С, с последующими 40 циклами 30 сек денатурация при 94 ° С, 50 сек при температуре отжига (64 ° С в течение метилированной и 59 ° С в течение неметилированных специфических праймеров) , и расширение 30 сек при 72 ° С, и окончательное удлинение при 72 ° С в течение 10 мин. Продукты ПЦР разделяли в 8% полиакриламидном геле в электрофорезе. Геномную ДНК, метилированный в пробирке CpG метилтрансферазы (SSS I) следующим инструкциям производителя (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA), использовали в качестве положительного контроля. Вода заготовки использовали в качестве отрицательного контроля. Каждый Набор праймеров генерируется продукт в 169 пар оснований.
Вестерн-блоттинга
Пятьдесят образцов мг гомогенизировали и центрифугировали при 12000-15000 г в течение 10-15 мин в охлажденном льдом 50 мМ HEPES-буфера (рН 7,4), содержащем 150 мМ NaCl, , 50 мМ Трис · Cl (рН 8,0), 1% Тритон Х-100, 2 мМ ЭДТА, 2 мМ ФМСФ, 5 мкг /мл лейпептина, 1% NP-40, и 10% глицерина. Супернатант собирали и концентрацию белка, а затем измеряли с использованием БСА в качестве стандарта ВСА Protein Assay Reagent (Pierce биотехнологии., Inc., Rockford, США). Равные количества (100 мкг) общего белка из тканей, подвергали электрофорезу на SDS-полиакриламидном геле (10% гель) и переносили в поливинилидин (ПВДФ) мембраны фильтра в течение 30 мин bysemi-сухой блоттинга. Мембраны были блокированы в течение 2 ч при комнатной температуре с блок-раствора, предусмотренного в ECL набора (Протеин детектор LumiGLO резервный ™ Вестерн блот Kit, KPL, штат Мэриленд, США), а затем инкубировали в течение 45 мин с 1: 100 разбавлении первичное антитело к RASSF1A. Первичные антитела использовали для Вестерн-блот-анализа был аффинно очищенные козьи поликлональные антитела к RASSF1A, С-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA., США). ПВДФ Мембраны затем промывали в течение 30 мин с использованием промывающего раствора, с последующим 1 ч инкубации с антителом против козьего, конъюгированного с пероксидазой хрена в растворе блок (кролик анти-IgG козьего, Chemicon, Inc. Интернешнл, Temecula, Калифорния, США ). ThePVDF мембраны промывали снова и Иммунореактивные полосы были обнаружены с помощью усиленной хемилюминесценции и визуализировали с помощью системы анализа изображений (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam биотехнологии, Кембридж, Великобритания) использовали в качестве контроля.
Статистический анализ
Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения SPSS11.5 (SPSS, Inc., Chicago, IL). Различия между этими переменными оценивали с помощью теста хи-квадрат или т-тестов по данным. Статистическая значимость различий была установлена ​​как P &
ЛТ; 0.05.

Результаты RASSF1A экспрессия мРНК при раке желудка
экспрессия мРНК RASSF1A в 54 GC ткани был 50%, что в соседних соответствующих нормальных тканях, которые показали экспрессию мРНК в опухолях была значительно снижена по сравнению с тем из нормальные ткани, как показано на рис. 1. Рисунок 1 Экспрессия мРНК RAASF1A в первичном раке желудка (Т) и соответствующей нормальной ткани (N). Продукты RT-PCR для RASSF1A были количественно денситометрическом сканирования в Окрашенный бромистым этидием гелей по сравнению с GAPDH. Выражение
RASSF1A белка в раке желудка
Consistent к снижению экспрессии мРНК, на рисунке 2 показано, что экспрессия белка в опухоли была лишь 21,4% того, что в нормальных тканях, которые предположили, что уровень белка экспрессии RASSF1A также была снижена с сравнению с соответствующими нормальными тканями. Экспрессия белка Рисунок 2 RASSF1A в первичном раке желудка (Т) и соответствующей нормальной ткани (N). Уровень белка в RASSF1A количественно с помощью вестерн-блоттинг по сравнению с GAPDH. Экспрессия мРНК
RASSF1A и метилирование ДНК в промотор гена RASSF1A в первичной желудочной
рака Как показано на рис. 3, частота метилирования RASSF1A в GC был в 3,5 раза выше, чем в соответствующих нормальных тканях (66,7% против 14,8%, P ≪ 0,0001). экспрессия мРНК RASSF1A между метилирования и unmethylation групп в GC значительно отличались, бывший в 2,6 раза ниже, чем вторые (0,1384 ± 0.1142 против 0.5018 ± 0,2463, P &
Лт; 0,0001). Результаты показали, что гиперметилирование на острове CpG в промоторе RASSF1A тесно связан со значительным снижением экспрессии мРНК RASSF1A. Рисунок 3 Метилирование RASSFIA в первичном раке желудка и соответствующей нормальной ткани ССП. Дорожка 3, 4 и полоса 6, 7 показывают, характерный результат от опухоли и нормального образца, соответственно. U: амплифицированный продукт с праймером неметилированные распознавания последовательности; М: амплифицированный продукт с праймером распознавания метилированных последовательностей. Геномную ДНК, метилированный в пробирке CpG метилазой (SSS I) использовали в качестве положительного контроля. Вода заготовки использовали в качестве отрицательного контроля. Продукты ПЦР разделяли на A 8% полиакриламидном геле
ассоциации между метилирования и клинико-патологическими параметрами рака желудка
ассоциации между метилирования промоторов и соответствующих демографических и клинико-патологическими характеристиками, включая пол, возраст, место опухоли, метастазирование узла лимфы, удаленная метастазирование, дифференцировка, стадии и типа Лорен были представлены в таблице 1. Там не было никакой значимой связи между промоутером метилирования и клинико-патологическими параметрами.
Обсуждение
в настоящем исследовании мы представили доказательства, что экспрессия RASSF1A в GC была снижена на мРНК и уровни белка и метилирование в промоторной области гена RASSF1A был в 3,5 раза чаще, в первичном GC, чем в соответствующих нормальных тканях. Кроме того, частота больных ГХ с RASSF1A промотора метилируется над неметилированная был в 2 раза выше. Они предполагают, что экспрессия RASSF1A в GC был высоко связан со статусом метилирования промоторов гена RASSF1A. Для дальнейшего подтверждения связи между экспрессией RASSF1A и метилирование промотора, мы сравнивали уровень экспрессии мРНК RASSF1A между метилирования и unmethylation тканей в GC, и обнаружили, что аберрантных метилирования области RASSF1A промотора гена несет ответственность за снижение или потерю мРНК RASSF1A выражение в первичном GC. Наше исследование согласуется с одним исследование, которое показало, что 45,6% первичных ГХ не было ни одного или аномально низкой экспрессии мРНК RASSF1A [5]. Среди 30 подобранных наборов из одних и тех же пациентов было обнаружено 73,3% ГК имеют уменьшенную экспрессию RASSF1A [5]. Насколько нам известно, не было зарегистрировано ни в одном исследовании экспрессии RASSF1A белка в GC. Кроме того, мы проанализировали экспрессию RASSF1A на уровне белка с помощью Вестерн-блоттинга у 20 пациентов GC и обнаружили, что экспрессия белка в опухолях лишь 21,4% от экспрессии в нормальных тканях. Этот результат показал, что экспрессия белка RASSF1A в GC была значительно ниже, чем в соответствующих соседних нормальных тканей. Это согласуется с экспрессией мРНК RASSF1A.
Механизм снижения или глушителем экспрессии RASSF1A может быть вызвано метилирования промоторов и /или мутации гена RASSF1A. Тем не менее, некоторые исследования показали, что мутация гена RASSF1A очень редко [4, 5, 7, 12, 13]. Таким образом, ген RASSF1A, вероятно, инактивируется механизмов methyltion. Byun и др [5] установлено, что из 41 первичного GC с потерей или уменьшением аномальной экспрессии RASSF1A, 39 были метилируется, в то время как в обоих ГХ и нормальные ткани с нормальным выражением RASSF1A ни были метилируется. Для др [10] показали, что гиперметилирование RASSF1A промотора был обнаружен в 25,8% GC, и в 11,1% от желудочной кишечной метаплазией (IM), соответственно. Наши данные показали, что частота RASSF1A метилирования в GC была выше, чем указанные выше данные. GC широко распространены в Китае и высокой метилирования RASSF1A может объяснить отчасти причину, почему GC Заболеваемость выше в китайском языке. Интересно отметить, что тот факт, что RASSF1A промотор гиперметилирование находится в EBV положительном GC выше, чем в EBV отрицательной карциномы (66,7% против 3,6%), можно предположить, тесная связь между EBV и аберрантных метилирования в GC. В самом деле, предыдущий отчет показал, что вирусный онкогенеза может включать в себя аномальное метилирование, что приводит к инактивации генов-супрессоров опухолей [9].
Мы обнаружили, что частота метилирования RASSF1A в первичном GC и в соответствующих нормальных тканях были 66,7% и 14,8%, соответственно. Наши данные показали, что из 54 пациентов GC 36 были метилированной и 18 были неметилированным, предлагая денатурат GC является более распространенным, в согласии с другими отчетами. В предыдущем исследовании [14] предположил, что желудок является одним из нормальных тканей с высокой частотой, связанные со старением метилирования, и рак желудка является одним из опухолей с высокой частотой CpG острова метилирования. Кан и др [15] исследовали статус метилирования 11 генов в неопухолевых слизистой оболочки желудка, и они обнаружили, что аберрантных CpG острова метилирование часто происходит при хроническом гастрите, показавший старение отношения, и что связанные со старением метилирование типа конкретного гена. ген RASSF1A редко метилируется, без старения отношений. Кроме того, сообщалось другие авторы [3-5], что в нормальных тканях, не были обнаружены метилированные RASSF1A аллели. Тем не менее, наши данные показали, что в соответствующих нормальных тканях, то RASSF1A метилирование Frenquency был высокий процент (14,8%). Расхождение между нашими данными и другими авторами "может быть связано с различием образцов, исследованных нами были не-nesoplasia желудка тканей у больных раком желудка, и это очень вероятно, включают хронические ткани гастрит, особенно кишечных тканей метаплазии в соответствующие соседние нормальные ткани. Предыдущее исследование показало, что некоторые гены были часто метилированный при хроническом гастрите, особенно в тканях кишечника метаплазии. Для др [10] исследовали состояние 8, связанных с опухолью метилирования гена в том числе RASSF1A в желудочно-кишечной метаплазией у пациентов с и без рака желудка, и они обнаружили, что частота метилирования в RASSF1A при раке и кишечной метаплазией были 25,8% и 11,1% соответственно. Результат согласуется с нашими. На самом деле, мы секвенировали МПВ продукты для нескольких образцов. Последовательность соответствовала последовательности предсказывали (данные не показывают). Мы обнаружили, что неметилированные полосы всегда сосуществуют с метиловым полос в большинстве первичных GC и соответствующих соседних нормальных тканей, несмотря на снижение или потеря экспрессии RASSF1A, в соответствии с предыдущими сообщениями [4, 10]. Это, скорее всего, эти резецированные опухоли не микродиссекции и были заражены стромальных клеток. Кроме того, MSP чрезвычайно чувствительна. Бай и др [16] считал, что обнаружение этих двух полос представляет собой либо внутри аллельного гетерогенность острова метилирования CpG или метилирования острова колеблется от аллеля аллеля. С другой стороны, наш результат может свидетельствовать о том, что частичное метилирование промотора гена RASSF1A достаточно, чтобы заглушить транскрипцию генов, так как потеря одного копии гена достаточно, чтобы способствовать образованию опухоли [17, 18]. Томмази и др [19] наблюдали, что гетерозиготные RASSF1A нокаутные мыши были значительно опухоли склонны, как для формирования спонтанных опухолей и для химически индуцированных опухолей. Это может свидетельствовать о том, что ген RASSF1A имеет характеристики присвоения гаплонедостаточность, когда только один аллель теряется.
Мы также исследуем связь между промоутером гиперметилированием и соответствующими клиникопатологическими параметров, включая возраст и пол пациентов, сайт карциному, гистологической дифференцировки, тип и метастазирование GC Лорен. Мы обнаружили, что частота метилирования гена RASSF1A был заметно выше, в поздних стадиях раковых заболеваний по сравнению с ранними стадиями опухолей (68,6% против 33,3%), и выше, в слабо дифференцированной опухоли (75% против 60%) по сравнению с хорошо и умеренно дифференцированные опухоли , Однако эти различия не достигли статистической значимости. Byun и др [5] др показали, что инактивация RASSF1A коррелировало со стадией опухоли и степени, но не с гистологических типов опухолей. Расхождение может объяснить ограниченностью образцов для раннего GC в нашем исследовании.
Трансфекция гена RASSF1A снижает рост раковых клеток человека в пробирке и в естественных условиях [3, 4], поддерживая роль RASSF1A как ген-супрессор опухолей. RASSF1A активации RAS может потребоваться гетеродимеризации RASSF1A и роман Ras эффектор (NORE1), и индуцируют апоптоз через его взаимодействие с Ras, NORE1, соединитель энхансер KSR (CNK) и проапоптотического MST1 киназы [20]. Несколько групп сообщили, что RASSF1A является микротрубочки связывающий белок и регулирует митоза [21-25], а также может функционировать в пути передачи сигнала с участием RAS, как маленькие белки GTPase. Томмази и др [19] показал, что RASSF1A
- /- и RASSF1A +/-
мышей увеличили множественность опухоли и размер опухоли, предполагая далее роль подавления опухоли RASSF1A, что может объяснить его частые эпигенетическую инактивацию в опухолях человека.
Заключение
в целом, экспрессия RASSF1A была заметно снижена до аномальным уровнем или полностью утрачена в первичном GC по сравнению с нормальной тканью, а также коррелировало с гиперметилированием промотора гена RASSF1A. Дальнейшая работа необходимо выяснить его точное значение функции и взаимодействие с другими факторами для разработки стратегий для ранней диагностики, профилактики и лечения рака желудка
декларациях
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом (No:. 2004AA301C91 ) из провинции Хубэй науки и техники Фонда к Мэй Е. и общение с научно-исследовательского центра болезней пищеварительного тракта Ухань университета Чжуннань больницы. Авторы благодарят профессора Тан Jinquan критических предложений и сотрудников Ключевой лаборатории аллергии и иммунных заболеваний, связанных с Ухань школы медицины университета для оказания технической помощи. Оригинальные представленные файлы для авторов изображений для изображения Ниже приведены ссылки на исходные файлы представленных авторов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Авторского 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg авторов исходного файла для исходного файла Рисунок 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Авторского для фигурного 3 конкурирующими интересами
Автор (ы) заявляют, что у них нет никаких конкурирующих интересов. <Бр>

• Тимидинфосфорилазы /β-тубулина III выражения предсказать реакцию у китайских продвинутых больных раком желуд…
• Оценка компьютерной помощи для оценки симптомов желудка (ECASS): протокол исследования для рандомизированного …