Associação de expressão diminuída de RASSF1A com metilação do promotor no cancro gástrico primário de pacientes da região central da China

Associação de expressão diminuída de RASSF1A com metilação do promotor no cancro gástrico primário de pacientes da região central da China
Abstract Background
Embora methylation- inactivação mediada de expressão de RASSF1A, um gene supressor de tumor candidato, tem sido observado em vários cancros humanos, os dados relativos a alteração da expressão do RASSF1A e metilação no cancro gástrico primário chinês são escassos. Além disso, evidências diretas mostrando a associação entre a expressão da proteína de RASSF1A e cânceres humanos primários está faltando. O objetivo deste estudo foi investigar a expressão RASSF1A no tecido de câncer gástrico primário (GC) em níveis de mRNA e proteína, e estabelecer a possível relação entre o estado de metilação do DNA e expressão da proteína de RASSF1A em chinês.
Métodos
cinquenta e quatro pacientes com cancros gástricos primários foram incluídos no estudo do estado de metilação e expressão de ARNm RASSF1A entre o tecido canceroso e no tecido adjacente normal correspondente. 20 de 54 pacientes foram incluídos para o estudo da expressão da proteína RASSF1A. A expressão de ARNm em RASSF1A e os níveis de proteína foi determinada por RT-PCR e Western blotting, respectivamente. A metilação do promotor RASSF1A foi detectada por PCR específicos de metilação
Resultados
RASSF1A ARNm e expressão de proteínas em GC foram significativamente reduzidos, com comparação com os tecidos normais correspondentes (valor OD:. ± 0,2589 0,2407 ± 0,2971 0,5448 vs, P
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 0,6654 ± 0,2201 vs, P
< 0,0001, respectivamente). A metilação de frequência RASSF1A em GC principal é mais elevada do que nos tecidos normais correspondentes (66,7% versus 14,8%, P
< 0,0001). Além disso, a expressão de ARNm em RASSF1A grupo metilação de CG foi ainda mais reduzido quando comparado com o grupo de unmethylation GC (0,1384 ± 0,1142 0,5018 ± 0,2463 vs, P
< 0,0001)

Conclusão A expressão de RASSF1A. foi reduzida em tecido de GC em níveis de ARNm e de proteína. expressão diminuída de RASSF1A foi associado com a metilação do promotor.
Fundo
O câncer gástrico (GC) é uma das neoplasias mais comuns em doenças gastrointestinais. Embora a incidência de GC está em declínio nos municípios desenvolvidos, ainda é uma das principais causas de morte por cânceres na maioria dos países em desenvolvimento. Ambos os factores genéticos e ambientais, incluindo a infecção por H. pylori
foram consideradas contribuir para o desenvolvimento de GC. Recentemente, vários estudos têm mostrado que o silêncio de genes supressores de tumor por modificação epigenética é um mecanismo fundamental para a inativação de genes relacionados ao câncer na patogênese do câncer humano [1]. De nota especial é o facto de hipermetilação do promotor desempenha um papel essencial na perda da função dos genes supressores tumorais.
Perda alélica no cromossoma 3p21.3 é um dos mais frequentes alterações genéticas em diversos tipos de cancros humanos [2 ]. No final dos anos 90, Dammann [3] e Burbee [4] et al RASSF1A identificado, um novo gene da área deleção homozigótica comum em 3p21.3. Este gene partilha homologia com efectores RAS mamíferos. Há sete isoformas RASSF1 (A a G) gerados através RASSF1A splicing alternativo foi mostrado para reduzir a tumorigenicidade in vivo e é frequentemente inativados em uma variedade de cancros humanos primários. As mutações genéticas neste isoforma são raros. Sabe-se que o silenciamento de epigenética RASSF1A associados com CpG ilhas de metilação da região promotora. A sequenciação de ADN demonstrou que bissulfato hipermetilação da região promotora inactiva a expressão RASSF1A nos principais cancros humanos. Isto é apoiado pela observação de re-expressão de RASSF1A em várias linhas celulares de cancro tratados com agentes demetilantes [4-7]. Até à data, vários estudos têm demonstrado a presença de metilação do promotor aberrante de RASSF1A e perda ou baixa expressão anormal de RASSF1A em GC principal, sugerindo que a inactivação de expressão RASSF1A está intimamente associada com o promotor metilação [5, 8-10]. Para nosso melhor conhecimento, não existem dados relativos à expressão do estado RASSF1A e metilação em GC na população chinesa estão disponíveis. No presente estudo, nós determinamos expressão de RASSF1A em ambos os níveis de mRNA e proteína, e sua associação com RASSF1A promover estado de metilação no GC primária chinesa na China central.
Métodos
Pacientes
Cinquenta e quatro pacientes com GC primária foram registrados no Hospital Universitário Zhongnan Wuhan e do Hospital do Câncer Hubei Provincial de dezembro de 2003 a junho de 2005, e todos os pacientes foram submetidos à ressecção curativa com dissecção sistemática dos linfonodos. tecidos GC e tecidos gástricos normais adjacentes correspondentes foram obtidos de operações antes da quimioterapia. Os pacientes incluídos 35 homens e 19 mulheres com idade média de 57,6 ± 13,7 anos (variação de 30 a 85 anos). Diagnóstico e diferenciações de GC foram determinadas por exames histopatológicos e a classificação TNM. Os dados demográficos e clínico-patológicos de pacientes estão resumidas na Tabela 1. Entre os 54 pacientes com GC, foram incluídos 20 casos para o estudo da expressão da proteína de RASSF1A. O protocolo do estudo foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade de Wuhan Zhongnan Hospital. Tumor e tecidos normais adjacentes foram obtidos no momento da cirurgia, congelado em N líquido 2 e armazenadas a -80 ° C até serem usadas. seções de amostra foram coradas em H & E e foram examinados por dois pathologists.Table experiente 1 Associação de metilação do gene RASSF1A com dados demográficos e características clínico-patológicas do câncer gástrico primário (n = 54)

metilação
valor P
OR (IC 95%)

Sim
Sem


Sexo
masculino
24
11
0,766
1.273 (0.393 ~ 4.117)
feminina
12
7
Age Art < 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1.167)
≥ 60
19
5
tumor sites
antro
14
7
corpo e
cardíaca 22
11
1.000
1.000 (0.313 ~ 3.192)
Estágios
início
1 | 2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2.708)
avançado
35
16
metástases linfonodais
sim
22
7
0,154
2.469 (0,774 ~ 7,882 )
não
14
11
metástases à distância
sim
5
1 | 0,651
2.742 (0,296 ~ 25,424)
não
31
17
diferenciações
bem e moderada
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1.624)
pobres
18
6
tipo intestinal
de Lauren
12
10
0,148
0.400 (0.125 ~ 1.275)
tipo difuso
24
8
DNA e RNA extrato
ADN a partir de tecidos congelados foi purificado por extracção com fenol /clorofórmio e precipitação com etanol e dissolvido em 50 uL de água destilada e armazenado a -20 ° C até à sua utilização. O ARN total foi isolado utilizando o kit TRIZOL (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, EUA) de acordo com as instruções do fabricante.
Semi-quantitativo de RT-PCR
três microgramas de ARN total foram reversamente transcritos utilizando RevertAid ™ primeira cadeia síntese de cDNA kit (Fermentas Inc., Vilnius, Lituânia). Todos os ARN total foram tratados por ADNase para evitar a contaminação do ADN genómico. Os iniciadores para RASSF1A e glyceraldehydes-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) foram concebidos com base no gene RASSF1A (GeneBank Accession #: NM_007182) e o gene de GAPDH (GeneBank Accession #: NM_002046). Os iniciadores para RASSF1A foram 5'-CTT GCC ATT CCT CAA GGA TGC-3 'e 5'-CAC CAC CTC AGA GTC TTC ATT C-3'. Os primers para GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 ', 5'GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3, e') foram usados ​​como controle interno. Os ciclos térmicos foram: 94 ° C durante 5min, seguido de 35 ciclos de 94 ° C durante 30 seg, 55 ° C durante 45 s e 72 ° C durante 60 seg, e finalmente 72 ° C durante 5 minutos para extensão. Os produtos de PCR foram separados em gel de agarose a 2% em electroforese e visualizados com coloração com brometo de etídio, e quantificada utilizando um sistema de análise de imagem (UVP sistemas Bioimaing, EUA). Os produtos de PCR gerados foram 265bp para RASSF1A e 370 pb para GAPDH. foi calculado o valor de densidade óptica (OD) da expressão de ARNm.
ADN modificação
Bissulfato de tecidos de tumor e tecidos normais adjacentes correspondentes foram submetidas a tratamento de bissulfato de acordo com Herman et ai [11]. Resumidamente, 2 ug de ADN genómico suspenso em 50 ul de água destilada, desnaturadas com 0,2 M de NaOH durante 10 min a 37 ° C, e adicionaram-se 30 ul de recém-preparada de bissulfato de sódio 3 M (pH 5,0). As amostras foram mais camadas com o óleo mineral para cobrir a superfície da fase aquosa, e incubou-se a 50 ° C durante 16 ~ 20 h. A amostra de DNA foi dessalinizado através uma coluna de sistemas de purificação de DNA Wizard (Promega, Wisconsin, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. As amostras foram tratadas com NaOH 0,3 M durante 5 min à temperatura ambiente e precipitou-se com etanol. O ADN genómico modificado com bissulfato foi re-suspenso em 50 ul de tampão TE (Tris · Cl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,6) e armazenado a -80 ° C para utilização.
PCR específica à metilação (MSP)
O estado de metilação de RASSF1A foi determinada pelo MSP. tratamento bissulfato de ADN genómico converte citosina a bases de uracilo, mas não tem efeito sobre metilcitosina. A PCR específica foi, em seguida, utilizada para distinguir entre sequências de ADN metilado e não metilado em uma máquina de HotStar TaqE PCR (Takara Bio, Co., Ltd., Tóquio, Japão). Os iniciadores para a forma metilada foram 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'e 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', e os iniciadores para a forma não metilado eram 5'-GGG GTT TTG TGA GAG tgtg -3 'e 5'-AAA CAC AAC ACT AAA CCA AAC-3' (Gene Bank Adesão: AC002481). A condição de PCR consistiu de uma incubação de 15 min a 95 ° C, seguido de 40 ciclos de desnaturação de 30 segundos a 94 ° C, 50 segundos a uma temperatura de emparelhamento (64 ° C durante metilado e 59 ° C durante iniciadores específicos não metilados) e uma extensão de 30 segundos a 72 ° C, e uma extensão final a 72 ° C durante 10 min. Os produtos de PCR foram separados em géis de poliacrilamida 8% em electroforese. O ADN genómico, metilado in vitro por CpG metiltransferase (SSS I) seguindo as instruções do fabricante (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA), foi utilizado como um controlo positivo. em branco de água foi utilizado como um controlo negativo. Cada conjunto de iniciadores geraram um produto de 169 pb.
Western blotting
Cinquenta mg amostras foram homogeneizadas e centrifugadas a 12,000-15,000 g durante 10-15 min em tampão arrefecido com gelo 50 mM de HEPES (pH 7,4) contendo 150 mM de NaCl , Tris 50 mM-Cl (pH 8,0), 1% de Triton X-100, EDTA 2 mM, PMSF 2 mM, 5 ug /mL de leupeptina, 1% de NP-40, e 10% de glicerol. Sobrenadante foi recolhido e a concentração de proteína foi então medida usando BSA como um padrão pelo BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology., Inc., Rockford, EUA). Quantidades iguais (100 ug) de proteína total a partir de tecidos foram sujeitos a electroforese em géis de poliacrilamida-SDS (gel a 10%) e transferidos para membranas de polivinilidina (PVDF) de filtro, durante 30 min blotting bysemi-seco. As membranas foram bloqueadas durante 2 h à temperatura ambiente com a solução de bloqueio fornecido com o kit ECL (Proteína Detector LumiGLO Reserva ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, EUA), e, em seguida, incubadas durante 45 minutos com uma diluição de 1: 100 do anticorpo primário para RASSF1A. O anticorpo primário utilizado para a análise de transferência de Western foi um anticorpo policlonal de cabra purificado por afinidade para RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Calif., EUA). As membranas PVDF foram, em seguida, lavou-se durante 30 minutos utilizando uma solução de lavagem, seguida de uma incubação de 1 h com anticorpo anti-cabra conjugado com peroxidase de rábano em solução de bloqueio (IgG de coelho anti-cabra, Chemicon Internation, Inc., Temecula, Califórnia, EUA ). ThePVDF membranas foram lavadas novamente e as bandas imunorreactivas foram detectadas por quimiluminescência aumentada e visualizados pelo sistema de análise de imagem (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, EUA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, UK) foi utilizado como controle.
Análise estatística
As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS11.5 (SPSS, Inc., Chicago, IL). As diferenças entre as variáveis ​​foram avaliadas pelo teste qui-quadrado ou teste t de acordo com os dados. A significância estatística das diferenças foi definida como P <
; 0,05.

Resultados da expressão do mRNA no cancro gástrico RASSF1A
RASSF1A expressão de ARNm em tecidos de GC 54 foi de 50% do que nos tecidos normais correspondentes adjacentes, o que revelou a expressão de ARNm em tumores foi significativamente reduzida em comparação com a de os tecidos normais, como mostrado na Fig. 1. A Figura 1 A expressão de ARNm RAASF1A no cancro gástrico primário (T) e tecido normal (N) correspondente. Os produtos de RT-PCR para RASSF1A foram quantificados por varrimento densitométrico dos géis em etídio brometo coradas em comparação com GAPDH.
expressão de proteína RASSF1A no cancro gástrico
Consistente com a redução na expressão de mRNA, a figura 2 mostra que a expressão da proteína nas tumores foi de apenas 21,4% do que em tecidos normais, o que sugeria que o nível de expressão da proteína RASSF1A também foi reduzido com comparação com os tecidos normais correspondentes. Figura 2 A expressão da proteína de RASSF1A no cancro gástrico primário (T) e tecido normal (N) correspondente. nível de proteína de RASSF1A foi quantificada por Western-blotting em comparação com GAPDH. expressão do mRNA
RASSF1A e metilação de ADN no promotor do gene RASSF1A em cancro primário
gástrico Como mostrado na Fig. 3, a frequência de metilação RASSF1A em GC foi 3,5 vezes mais elevada do que nos tecidos normais correspondentes (66,7% versus 14,8%, P < 0,0001). a expressão de ARNm RASSF1A entre grupos de metilação e unmethylation em GC foram significativamente diferentes, o primeiro é 2,6 vezes menor do que o último (0,1384 ± 0,1142 0,5018 ± 0,2463 vs, P
< 0,0001). Os resultados mostraram que a hipermetilação na ilha CpG no promotor RASSF1A está fortemente associada com a expressão de ARNm significativamente reduzido de RASSF1A. Figura 3 A metilação do RASSFIA no câncer gástrico primário e tecido normal correspondente pelo MSP. Pista 3, 4 e pista 6, 7 mostram um resultado representativo de uma amostra de tumor e normal, respectivamente. L: produto amplificado com o iniciador reconhecer sequências não metilados; H: produto amplificado com o iniciador reconhecer sequências metiladas. O ADN genómico, metilado in vitro por CpG metilase (SSS I) foi utilizado como um controlo positivo. em branco de água foi utilizado como um controlo negativo. Os produtos de PCR foram resolvidos em um 8% géis de poliacrilamida
Associação entre metilação e os parâmetros clínico de câncer gástrico
A associação entre a metilação do promotor e características demográficas e clínico-patológicos relevantes, incluindo sexo, idade, local do tumor, metástase linfonodal, distante metástase, diferenciação, estágio e tipo de Lauren foram apresentados na Tabela 1. não houve associação significativa entre a metilação do promotor e os parâmetros clínico.
Discussão no presente estudo forneceu evidências de que a expressão RASSF1A no GC foi reduzido em mRNA e os níveis de proteína e a metilação da região promotora do gene RASSF1A foi 3,5 vezes mais frequente em GC primário do que nos tecidos normais correspondentes. Além disso, a incidência de pacientes com GC promotor RASSF1A metilado não metilado era mais de duas vezes mais elevada. Estes sugerem que a expressão RASSF1A no GC foi altamente associado com o status de metilação do promotor do gene RASSF1A. Para confirmar ainda mais a relação entre a expressão de RASSF1A e a metilação do promotor, comparou-se a expressão do mRNA RASSF1A entre metilação e unmethylation tecidos em GC, e descobriu que a metilação aberrante da região promotora do gene RASSF1A é responsável pela redução ou perda de ARNm RASSF1A expressão em GC primário. Nosso estudo era consistente com um estudo que mostrou que 45,6% GC primário tinha nenhum ou anormalmente baixa expressão de mRNA de RASSF1A [5]. Entre 30 conjuntos combinados dos mesmos pacientes foi encontrado 73,3% do GC ter expressão RASSF1A reduzida [5]. Para nosso melhor conhecimento, nenhum estudo da expressão da proteína RASSF1A em GC tem sido relatada. Analisou-se ainda mais a expressão a nível RASSF1A proteína por transferência de Western em 20 pacientes GC e verificou-se que a expressão da proteína em tumores é apenas 21,4% da expressão em tecidos normais. Este resultado indicou que a expressão da proteína RASSF1A no GC foi significativamente menor do que nos correspondentes tecidos normais adjacentes. Isto é consistente com a expressão de ARNm de RASSF1A.
O mecanismo de expressão RASSF1A reduzida ou silenciada poderia ser causada por metilação do promotor e /ou a mutação do gene RASSF1A. No entanto, vários estudos têm demonstrado que a mutação do gene RASSF1A é muito raro [4, 5, 7, 12, 13]. Assim, o gene é provavelmente RASSF1A inactivados por mecanismos de methyltion. Byun et al [5] descobriu que de 41 GC primária com perda ou redução anormal de expressão RASSF1A, 39 foram metilado, enquanto que em ambos GC e tecidos normais com o normal nenhuma expressão RASSF1A foram metilado. Para et al [10] mostraram que a hipermetilação do promotor de RASSF1A foi encontrada em 25,8% de GC e em 11,1% da metaplasia intestinal gástrica (IM), respectivamente. Os nossos dados mostraram que a frequência de metilação RASSF1A em GC foi maior do que o relatado acima dados. GC é altamente prevalente na China e alta metilação do RASSF1A pode explicar, em parte, a razão por que a incidência GC é maior nos chinês. Curiosamente, o fato de que o promotor RASSF1A hipermetilação é maior em GC EBV positiva do que em carcinoma negativo EBV (66,7% vs 3,6%) pode sugerir uma estreita associação entre EBV e metilação aberrante em GC. Com efeito, um relatório anterior indicou que a oncogénese viral pode envolver metilação aberrante, resultando na inactivação de genes supressores de tumor [9].
Descobrimos que a frequência de metilação RASSF1A em GC primária e nos tecidos normais correspondentes foram 66,7% e 14,8%, respectivamente. Nossos dados mostraram que, dos 54 pacientes do GC 36 eram metilado e 18 eram não metilado, sugerindo GC metilado é mais comum, de acordo com os outros relatórios. O estudo anterior [14] sugeriram que o estômago é um dos tecidos normais com uma elevada frequência de metilação relacionadas com o envelhecimento, e cancro gástrico é um dos tumores com uma elevada frequência de CpG island methylation. Kang et al [15] estudaram o estado de metilação de 11 genes na mucosa gástrica não-neoplásica e eles descobriram que aberrante CpG ilha metilação ocorreu frequentemente em gastrite crônica, que mostrou relação de envelhecimento, e que a metilação relacionadas com o envelhecimento era de tipo específico de gene. gene RASSF1A raramente foi metilado, sem relação de envelhecimento. Além disso, outros autores relataram [3-5] que, em tecidos normais, não há alelos metilados RASSF1A foram detectados. No entanto, os nossos dados mostraram que nos tecidos normais correspondentes, o frenquency RASSF1A metilação foi elevada percentagem (14,8%). A discrepância entre os nossos dados e outros autores 'pode ser devida à diferença das amostras, que foram estudados foram os tecidos gástricos não-nesoplasia em doentes com cancro gástrico e é muito provável que incluem tecidos gastrite crónica, tecidos metaplasia especialmente intestinais no correspondentes tecidos normais adjacentes. O estudo anterior relatou que vários genes eram frequentemente metilado na gastrite crônica, especialmente em tecidos metaplasia intestinal. Para et al [10] analisou a situação 8 relacionados com o tumor gene metilação incluindo RASSF1A na metaplasia intestinal gástrica em pacientes com e sem câncer gástrico, e eles descobriram que a frequência de metilação em RASSF1A no cancro e metaplasia intestinal foram de 25,8% e 11,1% , respectivamente. O resultado foi consistente com o nosso. Na verdade, nós sequenciaram os produtos de OEM para várias amostras. A sequência era consistente com a sequência prevista (dados não mostram). Descobrimos que as bandas não metilados sempre coexistir com bandas metilados em mais GC primária correspondente e tecidos normais adjacentes, apesar da redução ou perda de expressão RASSF1A, consistente com relatos anteriores [4, 10]. Isto é mais provável que estes tumores ressecados não foram microdissecadas e foram contaminadas com células estromais. Além disso, MSP é extremamente sensível. Bai et al [16] pensou que a detecção destas duas bandas representa quer heterogeneidade intra-alélica da metilação ilha CpG ou metilação da ilha variando de alelo para o alelo. Alternativamente, o nosso resultado pode indicar que a metilação parcial do promotor do gene RASSF1A é suficiente para silenciar a transcrição do gene uma vez que a perda de um gene de cópia única é suficiente para promover a formação de tumor [17, 18]. Tommasi et al [19] observaram que camundongos knockout RASSF1A heterozigotos foram significativamente tumor propenso, tanto para a formação de tumores espontâneos e para os tumores induzidos quimicamente. Isto pode sugerir que o gene RASSF1A tem as características de conferir haploinsuficiência quando apenas um alelo se perde.
Nós também investigar a associação entre a hipermetilação do promotor e parâmetros clínico-patológicas relevantes, incluindo idade e sexo dos pacientes, local de carcinoma, diferenciação histológica, tipo e metástase de GC de Lauren. Descobrimos que a frequência da metilação do gene RASSF1A foi marcadamente maior em tumores mais avançados em comparação com tumores em fase inicial (68,6% vs 33,3%), e maior em tumores pouco diferenciados (75% vs 60%), quando comparado com o bem e tumores moderadamente diferenciados . No entanto, essas diferenças não atingiram significância estatística. Byun et al [5] mostraram que a inativação de RASSF1A foi correlacionada com o estágio do tumor e grau, mas não com tipos histológicos de tumores. A discrepância pode explicar por amostras limitadas por GC cedo no nosso estudo.
Transfecção do gene RASSF1A reduz o crescimento de células de cancro humano in vitro e in vivo [3, 4], apoiando um papel para RASSF1A como um gene supressor de tumor. RASSF1A activar o RAS pode exigir a heterodimerização de RASSF1A e o novo Ras efectora (NORE1), e induz a apoptose através da sua interacção com Ras, NORE1, o intensificador de conector de KSR (CNK) e a cinase-apoptótica MST1 Pro [20]. Vários grupos relataram que RASSF1A é uma proteína de ligação a microtúbulo e regula progressão mitótica [21-25], e pode funcionar em percursos de transdução de sinal que envolvem proteínas RAS como GTPase pequenas. Tommasi et al [19] demonstraram que RASSF1A
- /- e +/- RASSF1A
ratos aumentaram a multiplicidade de tumores e o tamanho do tumor, sugerindo ainda a função de supressão de tumor de RASSF1A, o que pode explicar a sua inactivação epigenética frequente em tumores humanos.

Conclusão em resumo, a expressão de RASSF1A foi marcadamente reduzida para um nível anormal ou completamente perdido em GC primária em comparação com o tecido normal adjacente, e foi correlacionado com a hipermetilação do promotor do gene RASSF1A. São necessários mais estudos para elucidar sua função exata e interação com outros fatores para desenvolver estratégias para o diagnóstico precoce, prevenção e tratamento do cancro gástrico
Declarações
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por uma concessão (. No: 2004AA301C91 ) a partir de Hubei Ciência e Tecnologia Fundação de Mei Ye e comunhão de Centro de Pesquisa de Doenças digestivas de Wuhan Universidade Zhongnan Hospital. Os autores agradecem Prof. Tan Jinquan para sugestões críticos e membros do pessoal da chave do Laboratório de Alergia e Doenças relacionadas ao sistema imunológico em Wuhan University School of Medicine para assistência técnica. Arquivos enviados originais
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O autor (s) declaram que não têm interesses conflitantes.

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