Asociacija sumažėjusio išraiška RASSF1A su promotoriaus metilinimo pirminės skrandžio vėžiu nuo pacientų centrinėje Kinijoje

Asociacija sumažėjusio išraiškos RASSF1A su promotoriaus metilinimo pirminės skrandžio vėžiu nuo pacientų centrinėje Kinijoje
Anotacija pervežimas Background pervežimas Nors metilinimo tarpininkaujant nukenksminimo išraiškos RASSF1A, kandidatas auglio slopinamojo geno, buvo pastebėta keletas žmogaus vėžio, duomenys apie keitimu RASSF1A saviraiškos ir metilinimo Kinijos pirminis navikas yra menki. Be to, tiesioginis įrodymų tarp baltymų raiškos RASSF1A ir pirminių žmogaus vėžio asociaciją trūksta. Šio tyrimo tikslas buvo ištirti RASSF1A išraišką audinio pirminis navikas (GC) prie mRNR ir baltymų koncentracijos, ir nustatyti galimą ryšį tarp DNR metilinimo statusą ir baltymų raiškos RASSF1A kinų kalba.
Metodai
penkiasdešimt keturių pacientams, sergantiems pirmine skrandžio vėžio buvo įtraukta į RASSF1A iRNR išraiška ir metilinimo statuso tarp vėžio audinyje ir atitinkamos gretimuose normaliuose audiniuose tyrimas. 20 iš 54 pacientų buvo įtraukta į tyrimą RASSF1A baltymų išraiška. Iš RASSF1A išraiška mRNR ir baltymų koncentracijos buvo nustatomas pagal RT-PGR ir Vakarų-blotingo metodu, atitinkamai. RASSF1A rengėjas metilinimas buvo aptikta metilinimas specifinio PGR
rezultatai
RASSF1A mRNR ir baltymų posakių GC buvo reikšmingai sumažėjo, palyginti su atitinkamų normaliuose audiniuose (OT vertė:. 0,2589 ± 0,2407 vs 0,5448 ± 0,2971, p
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, p
< 0,0001, atitinkamai). Metilinimas dažnumas RASSF1A pirminės GC yra didesnis nei, kad į atitinkamus normaliuose audiniuose (66,7%, palyginti su 14,8%, P
< 0,0001). Be to, RASSF1A iRNR raiška metilinimo grupės GC buvo dar labiau sumažintos, lyginant su unmethylation grupės GC (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, p
< 0,0001)
sudarymo
išraiška RASSF1A. buvo sumažintas audinio GC ne mRNR ir baltymų lygius. Sumažėjo išraiška RASSF1A buvo susijęs su promotoriaus metilinimo.
Background
Skrandžio vėžys (GC) yra vienas iš labiausiai paplitusių piktybinių navikų virškinimo trakto ligų. Nors sergamumas GC mažėja išsivysčiusiose apskrityse, ji vis dar yra pagrindinė mirties priežastis nuo vėžio daugelyje besivystančių šalių. Abu buvo laikomi genetiniai ir aplinkos veiksniai, įskaitant H. pylori
infekcijos prisidėti prie GC plėtrai. Neseniai keli tyrimai parodė, kad tyla navikas slopintuvas genų iki epigenetinio pakeitimas yra esminis mechanizmas nukenksminti vėžiu susijusių genų žmogaus vėžio patogenezėje [1]. Iš Ypač reikia paminėti ir tai, kad rengėjas hypermethylation vaidina svarbų vaidmenį funkcija auglio slopinamojo genų praradimo.
Alelių praradimas ne chromosomos 3p21.3 yra viena iš dažniausių genetinių pokyčių įvairių tipų žmogaus vėžio [2 ]. Per 90-ųjų pabaigoje, Dammann [3] ir Burbee [4] ir kt nustatė RASSF1A, romanas genas iš bendro homozigotiniu išbraukta srityje ne 3p21.3. Šis genas akcijos homologija su žinduolių RAS vykdomuosius. Yra septyni RASSF1 izoformų (A-G) generuojami per alternatyvios sandūrų RASSF1A buvo įrodyta, kad sumažinti tumorogeniš- in vivo ir dažnai inaktyvuotų į pirminių žmogaus vėžio įvairovė. Genetines mutacijas šios izoformos yra labai reti. Ji yra žinoma, kad epigenetinio yra nuslopinami iš RASSF1A asocijuojasi su CpG salos metilinimo Promotorių regione. Bisulfatu DNR seka rodo, kad hypermethylation nuo promotoriaus regione inaktyvuoja RASSF1A išraišką pagrindinių žmogaus vėžio. Tai patvirtina ir pakartotinai reikšti RASSF1A stebėjimo įvairių vėžio ląstelių linijų gydomiems demetilinimą agenturos [4-7]. Iki šiol, keli tyrimai parodė, kad nukrypusiu nuo normos promotoriaus metilinimo RASSF1A ir praradimo ar nenormalus mažos raiškos RASSF1A pirminės GC buvimą, o tai rodo, kad inaktyvinimas RASSF1A išraiška yra glaudžiai susijęs su promotoriaus metilinimo [5, 8-10]. Mūsų žiniomis, nėra duomenų, susiję su RASSF1A ir metilinimo statuso išraiška GC Kinijos gyventojų nėra. Šiame tyrime mes nustatėme, išraiška RASSF1A tiek mRNR ir baltymų koncentracijos, o jų bendravimas su RASSF1A skatinti metilinimo būklės Kinijos pirminės GC centrinėje Kinijoje.
Metodai
Pacientų
Penkiasdešimt keturių pacientų su pirminės GC buvo įregistruota Wuhan universiteto Zhongnan ligoninės ir Hubei provincijos vėžio ligoninėje nuo 2003 gruodžio iki 2005 m, ir visi pacientai patyrė gydomasis rezekcija su sisteminiu limfmazgių skrodimo. GC audiniai ir atitinkami gretimuose normaliuose skrandžio audiniai buvo gautos iš veiklos prieš chemoterapiją. Įtrauktų pacientų 35 vyrai ir 19 moterys, amžiaus vidurkis 57,6 ± 13,7 metai (svyravo nuo 30 iki 85 metų). Diagnostika ir diferenciacija GC lėmė histopatologinių egzaminų ir TNM klasifikacija. Demografiniai ir klinikos duomenys pacientams yra apibendrinti 1 lentelėje Tarp 54 pacientai, sergantys GC, 20 atvejų buvo įtraukti tyrimo baltymų raiškos RASSF1A. Tyrimo protokolas buvo patvirtintas etikos komiteto Wuhan universiteto Zhongnan ligoninėje. Naviko ir gretimuose normaliuose audiniuose, buvo gauta operacijos metu, spragtelėjimu užšaldomos skystame N 2 ir saugomi -80 ° C temperatūroje, kol naudojamas. Imties skyriai buvo tamsintas H & E ir išnagrinėjo du patyrę pathologists.Table 1 asociacija RASSF1A genų metilinimas su demografijos ir klinikos ypatybių pirminis navikas (n = 54)

metilinimas pervežimas pervežimas pervežimas P verte
ARBA (95% PI)

Taip

Nėra


Lytis
Vyriška
24 11
0,766
1,273 (0,393 ~ 4,117)
Moteris
12
7
Amžius
< 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60 19
5
navikas svetainių
Ertmė
14
7
kūno ir širdies
22
11
1,000
1.000 (0.313 ~ 3.192)
Stages
anksti
1
2
0.255
0,229 (0,019 ~ 2,708)
išplėstas
35
16
Limfmazgių metastazės
taip
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7.882 )
ne
14
11
Tolima metastazės
taip
5
1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424)
nėra 31
17
diferenciacijos
gerai ir vidutinio
18
12
0,384
0.500 (0,154 ~ 1,624)
prastos
18
6
Lauren anketa
Žarnų tipas
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
Difuzinė tipas
24 8
DNR ir RNR ekstraktą
DNR iš šaldytų audinių buvo gryninamas fenolio /chloroformo ir etanoliu kritulių ir ištirpinama 50 pL distiliuotu vandeniu ir laikomi -20 ° C temperatūroje, kol naudojimo. Iš viso RNR buvo išskirta naudojant Trizol rinkiniai (Molekulinė tyrimų centras Inc, Cincinatis, JAV) pagal gamintojo nurodymus.
Pusiau kiekybinis AT-PGR
Trys mikrogramų visos RNR buvo transkribuoti naudojant RevertAid ™ First Strand kDNR sintezės rinkinys ( "Fermentas" Inc. ", Vilnius, Lietuva). Visi RNR buvo gydomi DNaze išvengti užteršimo genomo DNR. Už RASSF1A ir glyceraldehydes-3-fosfato dehidrogenazės gruntai (GAPDH) buvo sukurta remiantis RASSF1A geno (GeneBank Stojimo #: NM_007182) ir GAPDH geno (GeneBank Stojimo #: NM_002046). Už RASSF1A pradmenys buvo 5'-CTT TTA BMT Persijos CAA GGA TGC-3 "ir 5'-ŠMC BTK BMK" AGA GTC PGS TTC, C-3 ". Į gruntai GAPDH (5'-CAT GAA AAC TTT GGT, ATC GTG-3 "ir 5'-GTG TCG KTG TTG ARG TCG TBS GA-3") buvo naudojami kaip vidaus kontrolės. Kad šiluminio apdorojimo ciklai buvo: 94 ° C 5 min, o po to 35 ciklų 94 ° C temperatūroje ir 30 sek, 55 ° C temperatūroje 45sec ir 72 ° C temperatūroje 60sec, ir galiausiai 72 ° C temperatūroje 5 min pratęsimo. PGR produktai buvo atskirtos 2% agarozės gelio elektroforezės metu ir atvaizduojami etidžio bromido dažymo, ir kiekybiškai naudojant vaizdo analizės sistema (UVP Bioimaing sistemas, JAV). Sugeneruoto PGR produktai buvo 265bp už RASSF1A ir 370 bp GAPDH. buvo apskaičiuojamas optinis tankis (OT) vertė iRNR raiška.
bisulfato modifikacija
DNR nuo navikų audiniuose ir atitinkami gretimuose normaliuose audiniuose buvo atliktas bisulfato gydymo pagal Herman et al [11]. Trumpai, 2 mikrogramai genominės DNR sustabdytas 50 pL distiliuoto vandens, denatūruotas 0,2 M NaOH 10 min 37 ° C temperatūroje, ir pridėta 30 pL šviežiai paruošto 3 M natrio bisulfato (pH 5,0). Mėginiai buvo per sluoksniuotos su mineralinės alyvos padengti paviršių vandeninės fazės, ir inkubuojami 50 ° C temperatūroje 16 ~ 20 h. DNR mėginys buvo gėlinta per Wizard DNR valymo sistema kolonėlės (Promega, Viskonsinas, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Mėginiai buvo gydomi 0,3 M NaOH 5 min kambario temperatūroje ir nusodinama etanoliu. Bisulfato modifikuotas genominės DNR buvo resuspenduotas 50 mikrol TE buferyje (10 mM Tris · Cl, 1 mM EDTA, pH7.6) ir prie -80 ° C temperatūroje,.
Metilinimas-specifinis PGR (MSP) Viesbutis The metilinimas statusas RASSF1A nulėmė JEP. Bisulfato gydymas genominės DNR konvertuoja citozino į uracilo bazių bet neturi įtakos methylcytosine poveikį. tada konkretus PGR buvo naudojamas atskirti denatūruotu ir nedenatūruotą DNR sekų A Hotstar TaqE PGR aparato (TAKARA bio, Co, Ltd, Tokijas, Japonija). Už denatūruotą forma pradmenys buvo 5'-ggg TTT TGC GAG "AGC GCG-3" ir 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3 ", o už nedenatūruotu forma pradmenys buvo 5'-ggg GTT TTG TGA GAG TGTG -3 "ir 5'-ACT AAC AAA ŠMC AAA tipo CCA AAC-3" (Genų bankas prisijungimas: AC002481). PGR sąlyga sudarė vieną inkubavimo 15 min 95 ° C temperatūroje, po kurio eina ne 94 ° C temperatūroje, naudojant 40 ciklų 30 sek denatūruojant, 50 s esant renatūracijos temperatūroje (64 ° C temperatūroje metilintas ir 59 ° C temperatūroje nemetilintas pradmenis) , ir 30 sek pratęsimas 72 ° C, ir galutinis išplėtimas 72 ° C temperatūroje 10 min. PGR produktai buvo atskirtos 8% poliakrilamido gelių elektroforezės. Genomo DNR, denatūruotu in vitro CpG metiltransferazei (SSS i) po gamintojo nurodymus (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA), buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Vandens tuščias buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Kiekvienas pradmenų rinkinio generuoja 169 bp produktą.
Imunoblotingu
Penkiasdešimt mg mėginiai buvo homogenizuotas ir centrifuguojamas 12,000-15,000 g 10-15 min į ledinio 50 mm Hepes buferio (pH 7,4), kuriame yra 150 mm NaCl , 50 mM Tris · Cl (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF 5 mikrogramai /ml leupeptiną, 1% NP-40, ir 10% glicerolio. Supernatantas buvo surenkami, o vėliau baltymo koncentracija buvo matuojamas naudojant BSA, kaip šalia BCA baltymų Analizės reagentas (Pierce biotechnologijos. Inc, Rockford, JAV) standartą. Lygiomis dalimis (100 mikrogramų) visų baltymų iš audinių buvo elektroforezė SDS-poliakrilamido geliai (10% gelio) ir perkelti į polyvinylidine difluoridas (PVDF) Ieškoti membranų 30 min bysemi sausas sugeriamojo. Membranos buvo blokuojamas 2 valandas kambario temperatūroje su bloko tirpalu, gaunama ECL rinkinio (Baltymų detektorius LumiGLO rezervas ™ Imunoblotingo Kit, KPL, Maryland, JAV), ir tada inkubuojami 45 min su 1: 100 praskiedimas pagrindinis antikūnas RASSF1A. Pagrindinis antikūnų naudojamas Vakarų blot analizė buvo giminingumas išgrynintas ožkos polikloninis antikūnas RASSF1A C-12 (SC-18.724, Santa Cruz Biotechnologijos Inc, Santa Krusas, Kalifornija., JAV). tada PVDF Membranos buvo plaunamos 30 min naudojant ploviklio, o po to 1 h inkubacijos su anti-ožkų antikūno konjuguotas su krienų peroksidazės, turintys briketų tirpalo (triušio prieš-ožkos IgG, Chemicon International, Inc., Temecula, Kalifornija, JAV ). ThePVDF membranos vėl buvo plaunami ir imunoreaktyvių juostos buvo aptikta glaudesnio cheminės liuminescencijos ir regimos vaizdo analizės sistema (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, JAV). GAPDH (Abcam biotechnologijos, Kembridžas, Jungtinė Karalystė) buvo naudojama kaip kontrolės.
Statistinė analizė
Statistinė duomenų analizė atlikta naudojant SPSS11.5 programinė įranga (SPSS Inc., Čikaga, IL). Tarp kintamųjų skirtumai buvo įvertinti chi kvadrato testą arba t-testais pagal duomenis. Statistinis reikšmingumas skirtumų buvo nustatyti kaip P
< 0,05.
Rezultatai
RASSF1A iRNR raiška skrandžio vėžio
RASSF1A iRNR raiška 54 GC audiniuose buvo 50%, kad gretimų atitinkančių sveikų audinių, kuris atskleidė iRNR išraišką navikų buvo gerokai sumažintas palyginti su įprasti audiniai, kaip parodyta Fig. 1. 1 pav išraiška RAASF1A mRNR pirminėje skrandžio vėžio (T) ir atitinkantis normalų audinį (N). AT-PGR produktai RASSF1A buvo kiekybiškai densitometric nuskaitymo etidžio bromidas-tamsintas geliai, palyginti su GAPDH.
RASSF1A baltymų ekspresija skrandžio vėžio
nuoseklu į mRNR ekspresijos sumažėjimas, 2 paveiksle matyti, kad baltymų ekspresija navikai buvo tik 21,4% nuo kiekio ir normaliuose audiniuose, kurie leidžia manyti, kad baltymo lygis RASSF1A išraiškos taip pat buvo sumažintas su palyginti su atitinkamais normaliuose audiniuose. 2 pav baltymų ekspresija RASSF1A pirminės skrandžio vėžio (T) ir atitinkantis normalų audinį (N). Baltymų lygis RASSF1A buvo įvertintas Vakarų sugeriamojo palyginti su GAPDH.
RASSF1A iRNR raiška ir DNR metilinimo ir propaguotojo RASSF1A geno pirminės skrandžio vėžio
Kaip parodyta Fig. 3, metilinimas dažnumas RASSF1A į GC buvo 3,5 karto didesnis nei, kad į atitinkamus normaliuose audiniuose (66,7%, lyginant su 14,8%, p < 0,0001). RASSF1A iRNR raiška tarp metilinimas ir unmethylation grupes GC buvo gerokai skiriasi, buvęs 2,6 karto mažesnis nei pastarasis (
0,1384 ± 0.1142 vs 0.5018 ± 0,2463, p < 0,0001). Rezultatai parodė, kad hypermethylation tuo CpG saloje RASSF1A rengėjas yra stipriai susijęs su žymiai sumažintas iRNR raiška RASSF1A. 3 pav metilinimo RASSFIA pirminėje skrandžio vėžio ir atitinkamą normalaus audinio JEP. Lane 3, 4 ir juostos, 6, 7 rodo reprezentatyvi rezultatą iš naviko ir normaliai mėginio, atitinkamai. U: papildyta produktas gruntas pripažįstant nedenatūruotą sekomis; M: papildyta produktas gruntas pripažįstant denatūruoti sekas. Genominės DNR, metilinti vitro CpG metilazę (Sss I) buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Vandens tuščias buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. PGR produktai buvo išspręstas 8% poliakrilamido geliai
asociaciją tarp metilinimo ir klinikos parametrų skrandžio vėžio Viesbutis The asociacijos tarp promotoriaus metilinimo ir atitinkamų demografinių ir klinikos ypatumus, taip pat lyties, amžiaus, auglio vietą, limfmazgių metastazių, tolima metastazės, diferenciacija, etapas ir Lauren tipas buvo parodyta 1 lentelėje nebuvo reikšmingas ryšys tarp promotoriaus metilinimo ir klinikos parametrus.
Diskusijos
Šiame tyrime mes pateikė įrodymų, kad RASSF1A išraiška GC buvo sumažintas mRNR ir baltymų kiekis, o į promotoriaus regione RASSF1A geno metilinimas buvo 3,5 karto dažnesni pirminėje GC nei per atitinkamą normalius audinius. Be to, iš GC pacientams, dažnis su RASSF1A promotoriaus metilintas per nemetilintas buvo 2 kartus didesnis. Tai rodo, kad RASSF1A išraiška GC buvo labai susijęs su promotorius metilinimo būklės RASSF1A geno. Siekiant dar labiau patvirtina, kad tarp išraiškos RASSF1A ir promotoriaus metilinimo santykius, mes palyginti RASSF1A iRNR raiška tarp metilinimas ir unmethylation audinių GC, ir nustatė, kad netipinė metilinimas iš RASSF1A geno promotoriaus regione yra atsakinga už mažinimo ar praradimo RASSF1A mRNR išraiška pirminėje GC. Mūsų tyrimas atitiko vieno tyrimo, kuris parodė, kad 45,6% pirminės GC nieżonaci ar neįprastai mažą iRNR išraišką RASSF1A [5]. Tarp 30 suderintų rinkinių iš tos pačios pacientų buvo nustatyta 73,3% GC turėti mažesnį RASSF1A išraišką [5]. Mūsų žiniomis, buvo pranešta jokia RASSF1A baltymų ekspresijos tyrimas GC. Mes toliau analizuojami RASSF1A išraiška baltymų lygiu imunoblotingo 20 GC pacientams, ir nustatė, kad baltymo ekspresija navikuose yra tik 21,4% nuo normaliuose audiniuose išraiška. Šis rezultatas rodo, kad RASSF1A baltymų ekspresija GC buvo gerokai mažesnis nei per atitinkamą gretimuose normaliuose audiniuose. Tai atitinka prie iRNR raiška RASSF1A.
Lengvatinių ar engiamų RASSF1A išraiškos mechanizmo gali būti sukeltas promotoriaus metilinimo ir /ar mutacija RASSF1A geno. Tačiau kai kurie tyrimai parodė, kad mutacija RASSF1A geno yra labai retas [4, 5, 7, 12, 13]. Taigi, RASSF1A genas yra turbūt inaktyvuoja mechanizmų methyltion. [5] nustatė Byun ir kt, kad 41 pirminės GC su nuostolių ar nenormalus mažinimo RASSF1A išraiškos, 39 buvo denatūruotas, o tiek GC ir normaliuose audiniuose su normaliu RASSF1A išraiška nė buvo denatūruotas. Į et al [10] parodė, kad hypermethylation iš RASSF1A promotoriaus buvo nustatyta 25,8% GC ir 11,1% iš skrandžio žarnyno metaplazijos (MP), atitinkamai. Mūsų duomenys rodo, kad RASSF1A metilinimo GC dažnis buvo didesnis nei aukščiau pateikti duomenys. GC labai paplitusi Kinijoje ir aukštos metilinimo RASSF1A gali iš dalies paaiškinti, kodėl GC dažnis yra didesnis Kinijos priežastį. Įdomu tai, kad RASSF1A rengėjas hypermethylation yra didesnis EBV teigiamą GC nei EBV neigiamas karcinoma (66,7% vs 3,6%), gali pasiūlyti glaudų ryšį tarp EBV ir nukrypusiu nuo normos metilinimo GC. Iš tiesų, ankstesnė ataskaita nurodė, kad virusinė onkogenezėje gali netipiško metilinimas, todėl nukenksminimo navikas slopintuvas genų [9].
Mes nustatėme, kad metilinimas dažnis RASSF1A pirminės GC ir atitinkamuose normaliuose audiniuose buvo 66,7%, o 14,8%, atitinkamai. Mūsų duomenys rodo, kad iš 54 GC pacientų 36 buvo metilo ir 18 buvo nemetilintas, rodo metilintas GC yra labiau paplitęs, susitarusi su kitomis ataskaitomis. Ankstesnis tyrimą [14] pasiūlė, kad skrandžio yra vienas iš normaliuose audiniuose, kuriuose yra didelis dažnis senėjimu susiję metilinimo ir skrandžio vėžys yra viena iš navikų su aukšto dažnio CpG salos metilinimo. [15] Kang ir kt studijavo metilinimo statusą 11 genų nonneoplastic skrandžio gleivinės ir jie nustatė, kad netipinė CpG sala metilinimas dažnai pasireiškė lėtinis gastritas, kurie parodė, senėjimo santykius ir, kad senėjimas susijusių metilinimas buvo genų tipo konkretus. RASSF1A genas buvo retai denatūruotas, be senėjimo santykius. Be to, kiti autoriai pranešė [3-5], kad sveikuose audiniuose, nėra Metilinti RASSF1A aleliai buvo aptikta. Tačiau mūsų duomenys rodo, kad į atitinkamus normalių audinių, RASSF1A metilinimas frenquency buvo didelis procentas (14,8%). Tarp mūsų duomenų ir kitų autorių neatitikimas "gali būti dėl to, mėginių skirtumo, kurį mes studijavo buvo ne nesoplasia skrandžio audiniai pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, ir tai labai tikėtina, kad yra lėtiniu gastritu audinius, ypač žarnyno Metaplasia audinių atitinkantis gretimuose normaliuose audiniuose. Ankstesnis tyrimas pranešė, kad keli genai dažnai buvo metilo lėtinis gastritas, ypač žarnyno Metaplasia audiniuose. Į et al [10] išnagrinėjo 8 naviko susijusių genų metilinimo būklė, įskaitant RASSF1A skrandžio žarnyno metaplazijos pacientams, sergantiems ir be skrandžio vėžio, ir jie nustatė, kad metilinimo dažnis RASSF1A į vėžio ir žarnyno metaplazijos buvo 25,8% ir 11,1% , atitinkamai. Rezultatas buvo suderinta su mūsų. Iš tiesų, mes sekas MSP produktus keliais pavyzdžiais. Seka buvo nuoseklūs, kad seka prognozuojama, (duomenys, kurie nėra parodyti). Mes nustatėme, kad nedenatūruotą juostos visada egzistuoti kartu su denatūruotu juostų daugelyje pirminės GC ir atitinkamas gretimuose normaliuose audiniuose, nepaisant mažinimo ar praradimo RASSF1A išraiškos, suderinamas su ankstesnėmis ataskaitomis [4, 10]. Tai labiausiai tikėtina šiuos rezekcijos navikų nebuvo microdissected ir buvo užteršti stromos ląstelėse. Be to, JEP yra labai jautri. Bai ir kt [16] maniau, kad aptikimo šių dviejų juostų reiškia arba viduje alelių heterogeniškumas CpG salos metilinimo ar metilinimo salos svyruoja nuo alelio su alelio. Arba mūsų rezultatas gali rodyti, kad dalinis metilinimas iš RASSF1A geno promotoriaus yra pakankamai nutildyti genų transkripciją nuo praradimo vieno geno kopiją yra pakankamai skatinti auglio susidarymą [17, 18]. Tommasi ir kt [19] pastebėjo, kad heterozigotinės RASSF1A pelç buvo žymiai navikų tikimybė, tiek lėtam auglių susidarymo ir chemiškai sukelti augliai. Tai gali reikšti, kad RASSF1A genas turi pripažintos haploinsufficiency kai tik vienas alelis yra prarastas savybes.
Mes taip pat ištirti ryšį tarp promotoriaus hypermethylation ir atitinkamų clinicopathologic parametrų, įskaitant amžių ir lytį pacientų, svetainėje karcinoma, histologinio diferenciacijos asociaciją, Lauren tipas ir metastazių GC. Mes nustatėme, kad iš RASSF1A geno metilinimo dažnis buvo žymiai didesnis pažangių navikų lyginant su ankstyvuoju veiklos etapu navikų (68,6% vs 33,3%) ir didesnis blogai diferencijuotų navikų (75% vs 60%), palyginti su gerai ir vidutiniškai diferencijuoti navikai , Tačiau šie skirtumai neturi statistiškai reikšmingas. Byun et al [5] parodė, kad inaktyvacija RASSF1A buvo koreliuoja su naviko etape ir lygio, bet ne su histologinių tipų navikų. Nesutapimas gali paaiškinti ribotos mėginių, skirta iš anksto GC mūsų tyrimo.
Transfekavimas RASSF1A genas sumažina žmogaus vėžio ląstelių augimą in vitro ir in vivo [3, 4], remti kaip auglio slopinamojo geno, vaidmenį, RASSF1A. RASSF1A aktyvuoti RAS gali reikalauti heterodimerization iš RASSF1A ir romano Ras EFFECTOR (NORE1) ir sukelti apoptozę per jos sąveiką su Ras, NORE1, jungties stipriklis su KRS (CNK) ir proapoptozinis MST1 kinazės [20]. Keletas grupės, pranešė, kad RASSF1A yra mikrotubulės surišantis baltymas ir reguliuoja mitozinę progresavimą [21-25], ir gali veikti signalo perdavimo būdų, dalyvaujant RAS kaip maži GTPase baltymų. Tommasi ir kt [19] parodė, kad Rassf1a UAB - /- ir Rassf1a +/-
peles padidėja naviko išplitimas ir naviko dydį, taip pat rodo, naviko slopinimą RASSF1A vaidmenį, kuris gali paaiškinti, kaip dažnai epigenetinius nukenksminimą žmogaus navikų.
Išvada
Apibendrinant, RASSF1A išraiška buvo ženkliai sumažintas iki nenormalaus lygio arba visiškai prarado pirminėje GC palyginti su gretimuose normaliuose audiniuose, ir buvo susijusi su hypermethylation nuo RASSF1A geno promotoriaus. Reikia toliau dirbti siekiant išsiaiškinti tikslią savo funkciją ir sąveiką su kitais veiksniais kurti strategijas ankstyvosios diagnostikos, prevencijos ir gydymo skrandžio vėžio
deklaracijų
Padėka
šis darbas parėmė suteikimo (Nr. 2004AA301C91 ) iš Hubei mokslo ir technologijų pagrindą Mei jūs ir bičiulystės nuo tyrimų centro virškinimo ligų Wuhan universiteto Zhongnan ligoninėje. Autoriai dėkoja prof Tan Jinquan kritinių pasiūlymus ir darbuotojų iš pagrindinių laboratorijos alergijos ir imuninės sistemos ligų, susijusių su Wuhan universiteto medicinos mokyklos techninei pagalbai.
Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau yra nuorodos į autorių originalių pateiktų failų vaizdų. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Autorių originalus failas 1 pav 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Autorių originalaus failo 2 pav 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Autorių originalaus failo 3 pav konkuruojančių interesų
Autorius (-iai) deklaruoja, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.

• Timidinfosforilazės /β-tubulino III posakiai prognozuoti Kinijos išplitusiu skrandžio vėžiu pacientams pirmos eilės kapecitabinu plius paclitaxel
• Vertinant pagalbą kompiuteris įvertinti skrandžio simptomus (ECaSS):.? Studijų protokolą atsitiktinių imčių kontroliuojamas trial