Association of redusert uttrykk for RASSF1A med arrangøren metylering i grunnskolen magekreft fra pasienter i det sentrale Kina

Association of redusert uttrykk for RASSF1A med arrangøren metylering i grunnskolen magekreft fra pasienter i det sentrale Kina
Abstract
Bakgrunn
Selv metylering-mediert inaktivering av uttrykk for RASSF1A, en kandidat tumor suppressor genet, har blitt observert i flere kreft hos mennesker, de data som gjelder endring av RASSF1A uttrykk og metylering i kinesisk primære magekreft er knappe. Videre er direkte bevis som viser sammenhengen mellom protein uttrykk for RASSF1A og primære humane kreftformer mangler. Målet med denne studien var å undersøke RASSF1A uttrykk i vev av primær magekreft (GC) på mRNA og protein nivå, og for å etablere den mulige sammenhengen mellom DNA metylering status og protein uttrykk for RASSF1A på kinesisk.
Metoder
femti-fire pasienter med primær mage kreft ble inkludert i studien av RASSF1A mRNA uttrykk og metylering status mellom kreft vev og tilsvarende tilstøtende normalt vev. 20 av 54 pasienter ble inkludert for studier av RASSF1A protein uttrykk. Ekspresjonen av RASSF1A på mRNA og proteinnivåer ble bestemt ved hjelp av RT-PCR og Western-blotting, respektivt. Den RASSF1A promoter metylering ble oppdaget ved metylering spesifikk PCR
Resultater
RASSF1A mRNA og protein uttrykk i GC ble betydelig redusert med sammenlignet med tilsvarende normale vev (OD verdi. 0,2589 ± 0,2407 vs 0,5448 ± 0,2971, P
< 0,0001, 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, P
< 0,0001, henholdsvis). Metylering frekvens av RASSF1A i primær GC er høyere enn i de tilsvarende normale vev (66,7% vs. 14,8%, P
< 0,0001). Videre RASSF1A mRNA uttrykk i metylering gruppe GC ble ytterligere redusert i forhold til unmethylation gruppen av GC (0,1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001)
Konklusjon
Expression of RASSF1A. ble redusert i vev av GC på mRNA og proteinnivå. Redusert uttrykk for RASSF1A var assosiert med arrangøren metylering.
Bakgrunn
Magekreft (GC) er en av de vanligste kreftformen hos gastrointestinale sykdommer. Selv om forekomsten av GC er synkende i de utviklede fylker, er det fortsatt en ledende dødsårsak av kreft i de fleste utviklingsland. Både genetiske og miljømessige faktorer inklusive H. pylori-infeksjon
har vært ansett for å bidra til utvikling av GC. Nylig har flere studier vist at taushet av tumorsuppressorgener ved epigenetisk modifikasjon er en grunnleggende mekanisme for inaktivering av cancer-relaterte gener i patogenesen av kreft hos mennesker [1]. Av spesiell notatet er det faktum at arrangøren hypermethylation spiller en viktig rolle i tap av funksjon av tumorsuppressorgener.
Allelic tap på kromosom 3p21.3 er en av de hyppigste genetiske endringer i ulike typer kreft hos mennesker [2 ]. På slutten av 90-tallet, Dammann [3] og Burbee [4] et al identifisert RASSF1A, en roman gen fra de vanlige homozygot delesjon område på 3p21.3. Dette genet aksjer homologi med pattedyr RAS effektorer. Det er sju RASSF1 isoformer (A til G) som genereres gjennom alternativ spleising RASSF1A har vist seg å redusere tumorigenicity in vivo og er ofte inaktivert i en rekke primære humane kreftformer. Genetiske mutasjoner i denne isoform er sjeldne. Det er kjent at epigenetisk stanse av RASSF1A forbinder med CpG øyer metylering av promotorområdet. Bisulfate DNA-sekvensering har vist at hypermethylation av arrangøren regionen inaktiverer RASSF1A uttrykk i de store menneskelige kreft. Dette støttes av den observasjon av re-ekspresjon av RASSF1A i forskjellige cancercellelinjer behandlet med demethylating midler [4-7]. Til dags dato har flere studier vist tilstedeværelse av avvikende arrangøren metylering av RASSF1A og tap eller unormal lav uttrykk for RASSF1A i primær GC, noe som tyder på at inaktivering av RASSF1A uttrykk er nært forbundet med arrangøren metylering [5, 8-10]. Til vår beste kunnskap, ingen data vedrørende uttrykk for RASSF1A og metylering status i GC i kinesiske befolkningen er tilgjengelig. I denne studien har vi bestemt uttrykk for RASSF1A på både mRNA og proteinnivåer, og deres tilknytning til RASSF1A fremme metylering status på kinesisk primære GC i det sentrale Kina.
Metoder
Pasienter
Femti-fire pasienter med primær GC ble registrert i Wuhan University Zhongnan Hospital og Hubei Provincial Cancer Hospital fra desember 2003 til juni 2005, og alle pasientene gjennomgikk kurativ reseksjon med systematisk lymfeknute disseksjon. GC vev og tilsvarende tilstøtende normale mage vev ble oppnådd fra driften før kjemoterapi. Pasientene inkludert 35 menn og 19 kvinner, gjennomsnittsalder 57,6 ± 13,7 år (varierer fra 30 til 85 år). Diagnostisering og differensiering av GC ble bestemt av histopatologiske undersøkelser og TNM klassifisering. De demografiske og clinicopathological data for pasientene er oppsummert i tabell 1. Blant 54 pasienter med GC, ble 20 tilfeller inkludert for studium av protein ekspresjon av RASSF1A. Protokollen av studien ble godkjent av etikk komité av Wuhan University Zhongnan Hospital. Tumor og tilstøtende normale vev ble oppnådd ved tidspunktet for kirurgi, hurtigfrosset i flytende N 2 og lagret ved -80 ° C inntil anvendelse. Eksempel på seksjoner ble farget i H & E og ble undersøkt av to erfarne pathologists.Table en Association of RASSF1A genet metylering med demografi og clinicopathological funksjoner i primærmagekreft (n = 54)

Metylering
P-verdi
OR (95% CI)

Ja
Nei


Kjønn
male 24
11
0,766
1,273 (0,393 ~ 4,117)
kvinnelige
12
7
Age
< 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1.167)
≥ 60
19
5
Tumor nettsider
antrum
14
7
kropp og hjerte
22
11
1,000
1,000 (0,313 ~ 3,192)
Stages
tidlig
1 2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708)
avansert
35
16
lymfeknutemetastaser
ja
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7,882 )
ingen
14
11
Distant metastase
ja
5
1 0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424)
ingen
31
17
differentiations
vel og moderate
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624)
dårlig
18
6
Lauren
Tarm typen
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
Diffus typen
24
8
DNA og RNA ekstrakt
DNA fra frosne vev ble renset ved hjelp av fenol /kloroform og etanolutfelling og oppløst i 50 ul destillert vann og lagret ved -20 ° C inntil bruk. Total RNA ble isolert ved hjelp av TRIzol sett (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) i henhold til produsentens anvisninger.
Semi-kvantitativ RT-PCR
Tre mikrogram total RNA ble omvendt transkribert ved hjelp RevertAid ™ første tråd cDNA syntese kit (Fermentas Inc., Vilnius, Litauen). Alt total RNA ble behandlet med DNase for å unngå forurensning av genomisk DNA. Primerne for RASSF1A og glyceraldehydes-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) ble konstruert basert på RASSF1A gen (Genebank Accession #: NM_007182) og GAPDH-genet (Genebank Accession #: NM_002046). De primere for RASSF1A var 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'og 5' CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3 '. Primerne for GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 ', og 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') ble brukt som intern kontroll. De termiske sykluser var: 94 ° C i 5 min, etterfulgt av 35 sykluser ved 94 ° C i 30 sek, 55 ° C i 45sec og 72 ° C i 60sec, og til slutt 72 ° C i 5 min for forlengelse. PCR-produktene ble separert på 2% agarose-gel-elektroforese i og visualisert med etidiumbromidfarging, og kvantifiseres ved hjelp av et bildeanalysesystem (UVP Bioimaing systemer, USA). De genererte PCR-produktene ble 265bp for RASSF1A og 370 bp for GAPDH. Optisk tetthet (OD) verdien av det mRNA-ekspresjon ble beregnet.
Bisulfat modifikasjon
DNA fra tumorvev og tilsvarende tilstøtende normale vev ble underkastet hydrogensulfat behandling i henhold til Herman et al [11]. I korthet ble 2 pg av genomisk DNA ble suspendert i 50 ul destillert vann, denaturert med 0,2 M NaOH i 10 minutter ved 37 ° C, og tilsatt 30 ul av nyfremstilt 3 M natriumhydrogensulfat (pH 5,0). Prøvene var over lagvis med mineralolje for å dekke overflaten av den vandige fase, og inkubert ved 50 ° C i 16 ~ 20 timer. DNA-prøven ble avsaltet gjennom en kolonne av Wizard DNA Opprydding System (Promega, Wisconsin, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Prøvene ble behandlet med 0,3 M NaOH i 5 minutter ved værelsestemperatur og utfelles med etanol. Bisulfatet-modifiserte genom-DNA ble resuspendert i 50 ul TE-buffer (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 7,6) og lagret ved -80 ° C til bruk.
Metylering-spesifikk PCR (MSP)
metylering status for RASSF1A ble bestemt av MSP. Bisulfat behandling av genomisk DNA omdanner cytosin til uracil-baser, men har ingen effekt på metylcytosin. Den spesifikke PCR ble så brukt til å skille mellom denaturert og unmethylated DNA-sekvenser i et HotStar TaqE PCR maskin (Takara Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japan). Primerne for det metylerte formen var 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'og 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', og primere for unmethylated formen var 5'-GGG GTT TTG TGA GAG TGTG -3 'og 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Genbank Tiltredelse: AC002481). PCR tilstand besto av en inkubering på 15 minutter ved 95 ° C, etterfulgt av 40 sykluser av en 30 sek denaturering ved 94 ° C, 50 sek ved en glødetemperatur (64 ° C i denaturert og 59 ° C i unmethylated spesifikke primere) og 30 sek forlengelse ved 72 ° C, og en endelig forlengelse ved 72 ° C i 10 min. PCR-produktene ble separert på 8% polyakrylamidgeler i elektroforese. Genomisk DNA, metylert in vitro av CpG metyltransferase (Sss jeg) etter produsentens anvisninger (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA), ble brukt som en positiv kontroll. Vann blank ble anvendt som en negativ kontroll. Hvert primersett som genereres et 169 bp produkt.
Western blotting
Femti mg prøver ble homogenisert og sentrifugert ved 12,000-15,000 g i 10-15 min i iskald 50 mM HEPES-buffer (pH 7,4) inneholdende 150 mM NaCl , 50 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF, 5 ug /ml leupeptin, 1% NP-40, og 10% glycerol. Supernatant ble samlet og proteinkonsentrasjonen ble deretter målt ved bruk av BSA som en standard ved BCA Protein Assay Reagent (Pierce Bioteknologi., Inc., Rockford, USA). Like mengder (100 ug) av totalt protein fra vev ble underkastet elektroforese på SDS-polyakrylamid-geler (10% gel) og overført til polyvinylidin difluorid (PVDF) filtermembraner i 30 minutter bysemi-tørrblotting. Membranene ble blokkert i 2 timer ved romtemperatur med blokken løsningen gitt i ECL-sett (Protein Detector LumiGLO Reserve ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), og deretter inkubert i 45 minutter med en 1: 100 fortynning av primært antistoff til RASSF1A. Det primære antistoff benyttet for Western blot-analyse var en affinitetsrenset geit polyklonalt antistoff til RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Calif., USA). PVDF-membranene ble deretter vasket i 30 minutter ved anvendelse av en vaskeoppløsning, etterfulgt av 1 time inkubasjon med anti-geit-antistoff konjugert til pepperrotperoksidase i blokk oppløsning (kanin anti-geite-IgG, Chemicon International, Inc., Temecula, California, USA ). ThePVDF Membranene ble vasket igjen og de immunoreaktive bånd ble påvist ved forsterket kjemiluminescens og visualisert ved bildeanalysesystem (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, UK) ble brukt som kontroll.
Statistisk analyse
Statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS11.5 programvare (SPSS Inc., Chicago, IL). Forskjellene mellom variablene ble vurdert av khikvadrattest eller t-tester i henhold til dataene. Den statistiske signifikans av forskjeller ble angitt som P
< 0,05.
Resultater
RASSF1A mRNA-ekspresjon i magekreft
RASSF1A mRNA-ekspresjon i 54 GC vev var 50% av det i de tilstøtende tilsvarende normale vev, noe som åpenbart mRNA-ekspresjon i tumorer ble betydelig redusert sammenlignet med den til de normale vev, som vist i fig. 1. Figur 1 Ekspresjon av RAASF1A mRNA i primær magekreft (T) og tilsvarende normale vev (N). RT-PCR produktene for RASSF1A ble kvantifisert ved densitometrisk skanning av i etidiumbromid-farget geler sammenlignet med GAPDH.
RASSF1A protein uttrykk i magekreft
Konsekvent til nedgangen i mRNA uttrykk, viser figur 2 at proteinet uttrykk i tumorer var bare 21,4% av det i normale vev, noe som antydet at proteinnivået av RASSF1A ekspresjon ble også redusert med sammenligning med de tilsvarende normale vev. Figur 2 Protein ekspresjon av RASSF1A i primær magekreft (T) og tilsvarende normale vev (N). Proteinnivået av RASSF1A ble kvantifisert ved hjelp av Western-blotting i forhold til GAPDH.
RASSF1A mRNA-ekspresjon og DNA-metylering i promoteren av genet RASSF1A i primær magekreft
Som vist på fig. 3, metylering frekvens på RASSF1A i GC var 3,5 ganger høyere enn i de tilsvarende normale vev (66,7% vs. 14,8%, P < 0,0001). RASSF1A mRNA uttrykk mellom metylering og unmethylation grupper i GC var signifikant forskjellig, det tidligere er 2,6 ganger lavere enn den sistnevnte (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001). Resultatene viste at hypermethylation på CpG øya i RASSF1A promoter er sterkt assosiert med signifikant redusert mRNA ekspresjon av RASSF1A. Figur 3 metylering av RASSFIA i grunnskolen magekreft og tilsvarende normalt vev av MSP. Felt 3, 4 og spor 6, 7 viser et representativt resultat fra en tumor og normal prøve, respektivt. U: forsterket produkt med primer erkjenner unmethylated sekvenser; M: forsterket produkt med primer gjenkjenne denaturert sekvenser. Genomisk DNA, metylert in vitro av CpG-metylase (Sss I) ble anvendt som en positiv kontroll. Vann blank ble anvendt som en negativ kontroll. PCR-produktene ble løst på en 8% polyakrylamidgeler
Association mellom metylering og clinicopathological parametere av magekreft
sammenheng mellom arrangøren metylering og relevante demografiske og clinicopathological egenskaper inkludert kjønn, alder, tumorlokalisering, lymfeknutemetastase, fjernt metastase, differensiering scenen og Lauren typen ble vist i tabell 1. det var ingen signifikant sammenheng mellom arrangøren metylering og clinicopathological parametere.
diskusjon
i denne studien vi gitt bevis for at RASSF1A uttrykk i GC ble redusert på mRNA og proteinnivåer og metylering i promoter-regionen til RASSF1A genet var 3,5 ganger mer hyppig i primær GC enn i tilsvarende normale vev. I tillegg var forekomsten av GC pasienter med RASSF1A promoter metylert løpet unmethylated var 2 ganger høyere. Dette tyder på at RASSF1A ekspresjon i GC var sterkt assosiert med promotoren metylering status for RASSF1A genet. For ytterligere å bekrefte forholdet mellom ekspresjonen av RASSF1A og metylering av promoteren, sammenlignet vi RASSF1A mRNA-ekspresjon mellom metylering og unmethylation vev i GC, og fant at avvikende metylering av den RASSF1A genpromoteren region er ansvarlig for reduksjon eller tap av RASSF1A mRNA uttrykk i primær GC. Vår studie var i samsvar med en studie som viste at 45,6% primære GC hadde ingen eller unormalt lavt mRNA uttrykk for RASSF1A [5]. Blant 30 tilpassede sett fra de samme pasientene 73,3% av GC ble funnet å ha redusert RASSF1A uttrykk [5]. Til vår beste kunnskap, har ingen studier av RASSF1A protein uttrykk i GC blitt rapportert. Vi har videre analysert RASSF1A ekspresjon på proteinnivå ved Western blotting i 20 GC-pasienter, og fant at proteinet uttrykket i tumorer er bare 21,4% av ekspresjon i normale vev. Dette resultat indikerte at RASSF1A protein ekspresjon i GC var betydelig lavere enn i tilsvarende tilstøtende normale vev. Dette er konsistent med mRNA-ekspresjon av RASSF1A.
Mekanismen for redusert eller dempet RASSF1A ekspresjon kunne være forårsaket av promoter metylering og /eller mutasjon av RASSF1A genet. Imidlertid har flere studier vist at mutasjon av RASSF1A gen er svært sjelden [4, 5, 7, 12, 13]. Således er RASSF1A gen sannsynligvis inaktivert ved mekanismer methyltion. Byun et al [5] fant at av 41 primær GC med tap eller unormal reduksjon av RASSF1A uttrykk, 39 ble metylert, mens i både GC og normalt vev med normal RASSF1A uttrykk ingen ble metylert. Til et al [10] har vist at hypermethylation av RASSF1A promoteren ble funnet i 25,8% av GC og i 11,1% av intestinal metaplasi gastrisk (IM), respektivt. Våre data har vist at hyppigheten av RASSF1A metylering i GC var høyere enn de ovenfor angitte data. GC er svært utbredt i Kina og høy metylering av RASSF1A kan forklare delvis grunnen til at GC forekomsten er høyere i kinesisk. Interessant nok, kan det faktum at RASSF1A promoter hypermethylation er høyere i EBV-positive GC enn i EBV negativ karsinom (66,7% mot 3,6%) foreslår en nær sammenheng mellom EBV og avvikende metylering i GC. Faktisk har en tidligere rapport antydet at viral onkogenese kan innebære avvik metylering, noe som resulterer i inaktivering av tumorsuppressorgener [9].
Vi fant at metylering hyppigheten av RASSF1A i primær GC og i de tilsvarende normale vev var 66,7% og 14,8%, respektivt. Våre data viste at av 54 GC pasienter 36 var metylert og 18 var unmethylated, noe som tyder metylert GC er mer vanlig, i samråd med de andre rapportene. Den tidligere studie [14] har foreslått at magen er en av de normale vev med en høy frekvens av aldring relaterte metylering, og magekreft er en av tumorer med en høy frekvens av CpG øy metylering. Kang et al [15] har studert metylering status av 11 gener i nonneoplastic mageslimhinne, og de fant at avvikende CpG øy metylering forekom hyppig i kronisk gastritt, som viste aldring forhold, og at aldring relaterte metyleringen var genet typespesifikk. RASSF1A genet ble sjelden metylert, uten aldring forholdet. Videre andre forfattere rapportert [3-5] som i normalt vev, ble det ikke denaturert RASSF1A alleler oppdaget. Imidlertid våre data viste at i de tilsvarende normale vev, det RASSF1A metyleringen frenquency var høy andel (14,8%). Avviket mellom våre data og andre forfattere "kan være på grunn av forskjellen av prøvene, som vi studerte var de ikke-nesoplasia mage vev hos pasienter med magekreft, og det er svært sannsynlig å inkludere kronisk gastritt vev, spesielt intestinal metaplasi vev i tilsvarende tilstøtende normale vev. Den tidligere studie rapporterte at flere gener var ofte metylert i kronisk gastritt, spesielt i intestinal metaplasi vev. Til et al [10] undersøkte 8 tumor-relatert gen metylering status inkludert RASSF1A i mavetarm metaplasi hos pasienter med og uten magekreft, og de fant at frekvensen av metylering i RASSF1A i kreft og intestinal metaplasi var 25,8% og 11,1% hhv. Resultatet var i overensstemmelse med vår. Faktisk sekvensert vi MSP produkter for flere prøver. Sekvensen var konsekvent til sekvensen spådd (data ikke vist). Vi fant at unmethylated bånd alltid eksistere sammen med denaturert bånd i de fleste primære GC og tilsvarende tilstøtende normale vev til tross for reduksjon eller tap av ekspresjon RASSF1A, i samsvar med tidligere rapporter [4, 10]. Dette er mest sannsynlig at disse resected svulstene ble ikke microdissected og ble forurenset med stromale celler. I tillegg er MSP ekstremt følsom. Bai et al [16] tenkte at påvisning av disse to bandene representerer enten intra-alleliske heterogenitet av CpG island metylering eller metylering av øya varierende fra allel til allel. Alternativt kan vårt resultat indikerer at delvis metylering av den RASSF1A genpromoteren er nok til å slå av gentranskripsjon siden tap av et enkelt gen kopi er tilstrekkelig til å fremme tumordannelsen [17, 18]. Tommasi et al [19] observert at heterozygote RASSF1A knockout-mus var signifikant tumor utsatt både for spontan tumordannelse og for de kjemisk induserte tumorer. Dette kan tyde på at RASSF1A genet har preg av overdragelse haploinsufficiency når bare ett allel er tapt.
Vi undersøker også sammenhengen mellom arrangøren hypermethylation og relevante clinicopathologic parametere som alder og kjønn av pasientene, stedet for karsinom, histologisk differensiering, Lauren type og metastasering av GC. Vi fant at frekvensen for metylering av RASSF1A genet var markert høyere i avanserte tumorer sammenlignet med tidlig stadium tumor (68,6% vs. 33,3%), og høyere i dårlig differensierte tumorer (75% mot 60%) sammenlignet med brønn og moderat differensierte tumorer . Men disse forskjellene ikke statistisk signifikans. Byun et al [5] har vist at inaktivering av RASSF1A var korrelert med tumorstadium og klasse, men ikke med histologiske typer svulster. Avviket kan forklare ved begrensede eksempler for tidlig GC i vårt studium.
Transfeksjon av RASSF1A gen reduserer veksten av humane kreftceller in vitro og in vivo [3, 4], som støtter en rolle for RASSF1A som et tumorsuppressorgen. RASSF1A aktivering RAS kan kreve heterodimerisering av RASSF1A og romanen Ras effektor (NORE1), og indusere apoptose gjennom sitt samspill med Ras, NORE1, kontakten enhancer av KSR (CNK) og pro-apoptotiske MST1 kinase [20]. Flere grupper har rapportert at RASSF1A er en microtubule-bindende protein og regulerer mitotisk progresjon [21-25], og kan fungere i signaloverføringsveier som involverer RAS som små GTPase proteiner. Tommasi et al [19] har vist at Rassf1a Anmeldelser - /- og Rassf1a +/-
mus har økt svulst mangfold og tumorstørrelse, noe som tyder på ytterligere rollen svulst undertrykkelse av RASSF1A, noe som kan forklare den hyppige epigenetisk inaktive i humane tumorer.
Konklusjon
Oppsummert ble ekspresjonen av RASSF1A markert redusert til et unormalt nivå eller helt borte i primær GC sammenlignet med tilstøtende normalt vev, og er korrelert til hypermethylation av promoteren til RASSF1A genet. Videre arbeid er nødvendig for å belyse sin eksakte funksjon og samspill med andre faktorer for å utvikle strategier for tidlig diagnostisering, forebygging og behandling av magekreft
Erklæringer
Takk
Dette arbeidet ble støttet av en bevilgning (nr.: 2004AA301C91 ) fra Hubei Science and Technology Foundation til Mei Ye og fellesskap fra Research Center of Digestive Diseases av Wuhan University Zhongnan Hospital. Forfatterne takker professor Tan Jinquan for kritiske innspill og ansatte i Key Laboratory of Allergy og immunrelaterte sykdommer i Wuhan University School of Medicine for teknisk assistanse.
Forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er de linker til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 3 konkurrerende interesser
forfatteren (e) erklærer at de ikke har noen konkurrerende interesser.

• Tymidinfosforylase /β-tubulin III uttrykk forutsi responsen i kinesiske avanserte magekreftpasienter som får førstelinje kapecitabin pluss paklitaxel
• Vurderer en datamaskin hjelpemiddel for å vurdere magesymptomer (ECASS):.? Studieprotokoll for en randomisert kontrollert trial