Högt uttryck av DEK förutspår dålig prognos av magcancer

Högt uttryck av DEK förutspår dålig prognos av gastrisk adenokarcinom Bild Sammanfattning
Bakgrund
DEK, som ett onkoprotein, spelar en viktig roll vid cancerutveckling och progression. Denna studie syftade till att undersöka klinisk-patologisk betydelse DEK uttryck hos patienter med magcancer.
Material och metoder
uttrycket av DEK protein utvärderades genom immunohistokemisk (IHC) infärgning av 172 magcancer prover med kompletta kliniskt patologiska egenskaper, och korrelationen mellan DEK uttryck och kliniskt patologiska egenskaper undersöktes. Överlevnaden beräknades också med hjälp av Kaplan-Meier metoden gastric patienter med fullständiga data överlevnads cancer.
Resultat
DEK protein visade en strikt nukleära färgningsmönstret i magcancer med IHC och immunofluorescens. Den starkt positiva hastighet av DEK protein var 60,5% (104/172) i gastric cancer, vilket var betydligt högre än i antingen gastric dysplasi (19,4%, 7/36) eller närliggande normal slemhinna (0%, 0/27). DEK uttryck i magcancer korrelerad till tumörstorlek, differentiering, kliniskt stadium, sjukdomsfri överlevnad och total överlevnad priser. Ytterligare analyser visade att patienter med tidig magcancer och hög DEK uttryck hade kortare sjukdomsfri överlevnad och total längd överlevnad än de med låg DEK uttryck.
Slutsats
Hög DEK proteinuttryck förutspår dålig prognos av patienter med magcancer. DEK uttryck kan potentiellt användas som en fristående effektiv biomarkör för prognostisk utvärdering av magcancer Review, Virtual diabilder
virtuella slide (s) för den här artikeln hittar du här:. Http: //www. Diagnosticpathol nik. diagnomx. eu /vs /5050145571193097
Nyckelord
Gastric adenokarcinom DEK Immunohistokemi Överlevnadsanalys analys~~POS=HEADCOMP Inledning
Gastric cancer är en av de vanligaste cancersjukdomarna i världen, och det är den näst vanligaste orsaken av cancerdöd [1]. Under de senaste åren har utvecklingen av molekylära läkemedel och traditionell kinesisk medicin är inriktade onkogena vägar ledde till en förbättring av behandlingsresultat i magcancer [2]. Dessutom har de biomarkörer för prognostisk utvärdering av patienter med magsäckscancer också undersökt i stor utsträckning. Exempelvis Gao et al.
Rapporterade att uttrycket av E-cadherin och claudin korrelerades med lymfatiska metastas [3]. Geng et al.
Visade att uttryck av Pgp, GST-π och Topo II relaterade till magcancer chemosensitivity [4]. Vidare Canzonieri et al.
Också visat att endokrin differentiering, moget exokrina och endokrina gastriska fenotyper är förknippade med dålig prognos [5]. Emellertid har prognosen för magcancer inte förbättrats avsevärt. Därför krävs upptäckten av nya biomarkörer för magcancer för tidig diagnos och för att ge nya terapeutiska mål
Human DEK ursprungligen visat sig vara föremål för en återkommande ton. (6, 9) translokation som genererar fusion med CAN i en delmängd av akut myeloisk leukemi (AML) patienter [6]. Den identifierades som ett onkoprotein och har en molekylvikt av 42Kda. DEK spelar en viktig roll i cellprocesser och deltar i en mängd olika cellulära metaboliska funktioner, såsom global heterokromatin integritet [7], transkriptionskontroll [8], mRNA-splitsning [9], DNA-replikation [10], DNA-skador reparation och känslighet [11].
roller arkitektur proteiner av kromatin i en mängd olika cellulära mekanismer är oreglerad i tumörceller, såsom förändrade uttrycksnivåer och förändrad affinitet till DNA, och resulterar i beläggning av promotorer och förstärkare av andra gener [12 ]. Till exempel, Sanchez-Carbayo et al.
Rapporterade att DEK differentiellt uttrycktes mellan tidig och invasiva kluster av cancer i urinblåsan med hjälp av cDNA microarrays [13]. Casas et al.
Upptäckt DEK uttrycksnivåer i 41 vuxna patienter med AML med hjälp av kvantitativ realtids-PCR, och konstaterade att DEK överuttrycktes i 98% av fallen [14]. Vi har tidigare fann också att DEK betydligt överuttrycktes i kolorektal cancer och att uttrycket korrelerade till fattiga prognostiska faktorer med kolorektal cancer [15]. Dessa resultat tyder på att förändrad expression av DEK är associerat med flera humana maligniteter. Men relationerna mellan DEK uttryck och magcancer är inte klart.
I den aktuella studien fann vi att uttrycket av DEK var uppreglerat i magcancer vävnader, och DEK kan vara en oberoende biomarkör för att förutsäga magcancer prognos , vilket tyder på att DEK spelar en viktig roll i utvecklingen och utvecklingen av magcancer.
Material och metoder
etik uttalande
Denna studie uppfyllt principerna i Helsingforsdeklarationen och godkändes av den mänskliga etik och forskningsetiska kommittéer Yanbian University Medical College i Kina. Patienterna informerades om att deras utskurna prover lagrades vid vårt sjukhus och potentiellt användas för vetenskaplig forskning, och att deras integritet skulle bibehållas. Uppföljningsöverlevnadsdata samlades in i efterhand genom medicinsk-post analyser.
Kliniska prover
rutinmässigt diagnostiseras primära gastriska cancervävnader (172 fall) med kliniska funktioner samlades in från patienter som genomgick operation mellan februari 2002 och maj 2004 av Shanghai träffa Biotech Co Ltd (träffa Biotech) och tumörvävnad Bank of Yanbian University Medical College. Av de 172 fall har 67 väl differentierade, 82 var måttligt differentierade, och 23 var dåligt differentierade cancer. En patologisk scen för varje tumör tilldelades med hjälp av UICC (7: e upplagan) kriterier och Världshälsoorganisationen klassificeringar (patologi och genetik Tumörer i matsmältningssystemet) [16]. Totalt prover bestod 92 fall med stadium 0-II och 80 fall med stadium III-IV. Före operationen, hade inga patienter fick kemoterapi eller hade metastaser. Uppföljnings tiden för den primära magcancer kohort var i intervallet 5-8 år. I december 2012 hade 98 patienter dog och 64 patienter förblev vid liv.
Immunofluorescens (IF) färgning för DEK i MKN-1 magcancer cellinje
MKN-1 gastric cancerceller odlade på täck fixerades med 4% paraformaldehyd i PBS under 10 min vid rumstemperatur och permeabiliserades med 0,5% TritonX-100 under 10 min. Sedan tvättades återigen med PBS och blockering genomfördes med 3% Albumin Bovine V (A8020, Solarbio, Beijing, Kina) under en timme vid rumstemperatur (RT). Primära antikroppar mot DEK (01:50; BD Biosciences, USA) och β-tubulin (1:50; Santa Cruz Biotechnology, USA) inkuberades med cellerna vid 4 ° C över natten. Efter flera tvättar, inkuberades celler med Alexa Fluor® 488 get anti-kanin IgG (H + C) (A11008, 1: 1000, Invitrogen, USA) och Alexa Fluor® 568 get anti-mus IgG (H + L) (A11004 , 1: 1000, Invitrogen, USA) under 1 h. Därefter tillsattes celler tvättning igen med PBS och motfärgades med 2- (4-Amidinofenyl) -6-indolecarbamidine dihydroklorid (C1006, Beyotime, Kina). Täck monterades med antifade Mounting Medium (P0126, Beyotime, Kina) [17]. Slutligen har immunofluorescens signaler visualiseras och registreras av Leica SP5II konfokalmikroskop.
Immunohistokemi (IHC) för DEK i paraffininbäddade vävnader
Som beskrivits tidigare [15], en Dako LSAB kit (Dako A /S, Glostrup , Danmark) användes för att utföra immunohistokemisk analys. Fyra-mikrometer tjocka vävnadssnitt avparaffinerades, rehydreras och inkuberades med 3% H 2O 2 i metanol. Därefter tillsattes den antigen hämtas, följt av inkubering med 1% bovint serumalbumin. Objektglas inkuberades därefter med en DEK antikropp (1:50; BD Biosciences Pharmingen, San José, USA) vid 4 ° C över natten. Normalt getserum användes som negativ kontroll. Efter inkubering med en sekundär antikropp vid rumstemperatur under 30 min tillsattes glasen inkuberades med streptavidin-peroxidas-komplex. Peroxidas reaktionen framkallades med 3,3-diaminobensidin och motfärgades med Mayers hematoxylin. Kanin-IgG-isotopen användes som en negativ kontroll och positiva vävnadssnitt bearbetades utelämna den primära antikroppen som en ytterligare negativ kontroll.
Utvärdering av IHC-färgning
Alla objektsglas utvärderades oberoende av två patologer utan tidigare kunskap om kliniska resultat. Vi observerade första färgning i hela mag-skada, och sedan kvantifieras 50 representativa områden. Endast det nukleära färgningsmönstret ansågs som positivt. Immunfärgning bedömdes som "-" (negativ, ingen eller mindre än 5% positiva celler), "+" (5-25% positiva celler), "++" (26-50% positiva celler) och "+++ "(mer än 50% positiva celler). Den starkt positiva deskriptor (DEK uttryck) tilldelades till "++" och "+++" skåra celler. För överlevnadsanalys, var DEK expressionsnivå betecknad som högt uttryck ( "++" och "+++") och låg expression. ( '-' Och '+') [15] Statistisk
analyser
Statistiska analyser genomfördes med hjälp av SPSS 17,0. Association mellan DEK uttryck och kliniskt patologiska egenskaper utvärderades genom Chi-square test och Fishers exakta test. Kaplan-Meier-metoden användes för analys av överlevnadskurvorna, och den statistiska signifikansen bedömdes med hjälp av log-rank test. Multivariat överlevnadsanalys utfördes på alla viktiga egenskaper mätt med univariat överlevnadsanalys (kön, ålder, tumörstorlek, differentiering, lymfkörtel metastas, serosala invasion, tumörstadium, och DEK uttryck) genom Cox proportionella riskregressionsmodell. AP
värde. ≪
0,05 ansågs statistiskt signifikant
Resultat
DEK protein överuttryckt i magcancer
DEK protein visade en strikt nukleära färgningsmönstret i magcancer med IF (Figur 1) och IHC (Figur 2). Den positiva hastigheten för DEK proteinuttryck var 70,3% (121/172) i magcancer vävnader, vilket var betydligt högre än i antingen gastric dysplasi (41,7%, 15/36) eller normal intilliggande slemhinnor (18,5%, 5/27) . På liknande sätt, den starkt positiva hastigheten för DEK protein (60,5%, 104/172) var också signifikant högre än antingen gastrisk dysplasi (19,4%, 7/36) eller närliggande normal magslemhinna (0%, 0/27) (P
< 0,01, respektive) (Tabell 1). Figur 1 Immunofluorescens färgning för DEK och β-tubulin proteiner i MKN-1 gastric cancerceller. DEK protein strikt beläget på kärnan av MKN-1 gastric cancerceller. (Red för DEK, grön för β-tubulin, och blå för DAPI).
Figur 2 Immunhistokemisk färgning av DEK protein i magcancer och normal slemhinna. A: DEK är negativ i normal magslemhinna. B: DEK protein är starkt positiv i kärnan av gastriska cancerceller med lymfkörteln metastasering. C: DEK protein visade spridda färgningsmönster i magcancer utan metastaser. D: DEK är positivt i invasiva cancerceller runt nerven (pil
) i serosala skikt (Original förstoring, x 200) katalog Tabell 1 DEK proteinuttryck i magcancer
Diagnos
Nej. av fallen
DEK uttryck
positivt värde (%)
Starkt positivt värde (%)
- + ++ + ++
Gastric cancer
172
51 17 67 37
70,3% **
60,5% **
dysplasi
36
21 8 7 0
41,7% **
19,4% **
Normal
27
22 5 0 0
18,5%
0
** P Hotel < 0,01, jämfört med normal slemhinna och dysplasi av gastrisk. Dysplasi: gastric dysplasia; Cancer: magcancer; Positivt värde: andelen positiva fall med "+", "++" och "+++" färgning poäng; Starkt positiv hastighet. Andelen positiva fall med "++" och "+++" färgnings poäng
Korrelation mellan kliniskt patologiska egenskaper och DEK uttryck
Vi analyserade sambandet mellan DEK uttryck och kliniskt patologiska egenskaper hos gastric cancer. Den starkt positiva hastighet av DEK uttryck var betydligt högre i magcancer med ≥5 cm tumörstorlek (55/73, 75,3%) än i fall med < 5 cm tumörstorlek (49/99 49,5%) (P Hotel < 0,05). På samma sätt, DEK uttryck var betydligt högre i dåligt differentierade gastric cancer (32/44, 72,7%) än i måttligt (26/47, 55,3%) eller väl differentierade gastric cancer (46/81, 56,8%) (P Hotel <. 0,05) Hus till TNM klinisk stadieindelning, fann vi en starkt positiv hastighet av DEK uttryck av 71,3% (57/80) i framskridet stadium (III-IV) gastric cancer, och bara 51,1% (47/92) i tidigt stadium (0-II) fall (P Hotel < 0,01). Ändå var DEK uttryck i magcancer inte är relaterade till ålder, kön, Lauren typer och serosala invasion (tabell 2) .table 2 Förhållandet mellan DEK proteinuttryck och kliniskt patologiska egenskaper hos magcancer
Kliniska funktioner
Nej . av fallen
starkt positiva fall (%)
χ
2
P
värde
Ålder
0,915
0.340 Hotel < 56
96
55 (57,3%) katalog ≥56
76
49 (64,5%) Review Kön
0,011
0,918
Man
102
62 (60,8%) Review Kvinna
70
42 (60,0%) Review Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP
10,501
0,001 **
≥5 cm
73
55 (75,3%) Hotel < 5 cm
99
49 (49,5%) Review serosala invasion
0,283
0,596
Ja
81
46 (56,8%) Review Ingen
91
48 (52,7%) Review Lauren typer
5,581
0,118
Intestinal typ
89
47 (52,8%) Review Diffus typ
72
51 (70,8%) Review blandad typ
11
6 (54,5%) Review Differentiering
19,732
0,000 **
Tja
67
27 (40,3%) Review Måttligt
82
58 (70,7%) katalog Dåligt
23
19 (82,6%) Review LN Metastas
1,417 0,235
Negativ
89
50 (56,2%) katalog Positiv
83
54 (65,1% ) katalog kliniska stadiet
7,277
0,007 **
0-II
92
47 (51,1%) Review III-IV
80
57 (71,3 %) katalog ** P Hotel < 0,01.
Samband mellan DEK uttryck och överlevnad av patienter med magsäckscancer
totalt 172 patienter med magcancer identifierades för analys av prognostiska utvärderingen. Både sjukdomsfri överlevnad och total överlevnad var signifikant högre hos gastric patienter med låg DEK uttryck än i de med hög DEK uttryck (Figur 3) cancer. Av gastric patienter 172 cancerpatienter, 92 var tidigt stadium och 80 var långt framskridna. För patienter med tidigt stadium (I-II) magcancer, visat överlevnadsanalys som en DEK nivå associerades med lägre sjukdomsfria och övergripande överlevnad (P
= 0,003 och P
= 0,002 respektive log -rank) (Figur 4). Men uttrycket status DEK proteinet inte korrelerar med överlevnad hos patienter med framskridet stadium (III-IV) magcancer (P
= 0,255 och P
= 0,137 respektive log-rank). Figur 3 Kaplan-Meier-analys av sjukdomsfri och total överlevnad i 172 gastric cancerpatienter i förhållande till DEK proteinuttryck. Gastric patienter med DEK-positiva uttryck cancer hade lägre sjukdomsfria (A) och total överlevnad (B) priser än de med DEK-negativa uttryck som bestäms med hjälp av Kaplan-Meier-metoden. (+, Positiv, - negativ).
Figur 4 Kaplan-Meier-analys av sjukdomsfri överlevnad och total överlevnad i 172 patienter med eller utan DEK uttryckt magcancer i förhållande till klinisk fas. A-B: I ett tidigt stadium, DEK uttryck negativt korrelerad till sjukdomsfri överlevnad och total överlevnad, respektive. CD:. I slutskedet, överlevnaden inte korrelerad till DEK uttryck
DEK uttryck är en oberoende prognostisk faktor i magcancer av Cox proportionella riskregressionsmodell
Använda univariat analys fann vi att gastric cancerpatienter med hög DEK uttryck hade signifikant lägre sjukdomsfria och övergripande överlevnad än de med låga DEK uttrycks tumörer. Dessutom, serosala invasion, lymfkörtel metastas, och tumörstadium var också i samband med sjukdom och total överlevnad, vilket tyder på att DEK skulle kunna vara en värdefull prognostisk faktor i magcancer. Därför var multivariat analys enligt Cox proportional hazards modell för alla viktiga variabler som undersöktes i univariata analysen. Vi fann att förekomsten av lymfkörtelmetastaser (hazard ratio (HR): 1,490, 95% konfidensintervall (CI): 0,091-2,036, P
= 0,012) och sent (HR: 1,837, 95% CI: 1,323 -2,551, P
= 0,000) visade sig vara oberoende dåliga prognostiska faktorer för överlevnad i magcancer. Viktigt är hög DEK uttryck framkom också som en betydande oberoende dålig prognostisk faktor i magcancer (HR: 1,422, 95% CI: 1,033-1,956, P
= 0,031) (tabell 3) .table 3 Cox regressionsmodell analys av olika faktorer i 172 patienter med magcancer
Egenskaper
B
SE
Wald
HR
95% CI
vid P
värde

Lower
Övre
Univariat
Age
0.308
0.158
3.808
1.360
0.999
1.853
0.051
Gender
0.135
0.155
0.750
1.144
0.844
1.551
0.386
Tumor storlek
0,306
0,159
3,688
1,358
0,994
1,856
0,055
serosala invasion
0,397
0,157
6,343
1,487
1,092
2,024
0,012 *
Lauren types
0.135
0.118
1.318
1.145
0.909
1.442
0.251
Differentiation
0.219
0.116
3.584
1.245
0.992
1.561
0.058
LN metastas
0,556
0,156
12,712
1,744
1,285
2,368
0,000 **
Klinisk stage
0.810
0.160
25.619
2.247
1.642
3.074
0.000**
DEK
0.455
0.160
8.111
1.576
1.152
2.155
0.004**
Multivariat
serosala invasion
0,224
0,162
1,904
1,251
0,910
1,718
0,168
klinisk fas
0,608
0,167
13,187
1,837
1,323
2,551
0,000 **
LN metastasis
0.399
0.159
6.272
1.490
1.091
2.036
0.012*
DEK
0.352
0.163
4.671
1.422
1.033
1.956
0.031*
B: koefficient; SE: standardfel; Wald: wald statistik; HR: hazard ratio;
CI: konfidensintervall
* P Hotel < 0,05, ** P Hotel < 0,01.
Diskussion
human DEK genen anses allmänt som en proto-onkogen på grund av sin inblandning i kromosomtranslokation i AML och dess uppreglering i ett flertal humana maligniteter [6, 18]. Hittills tyder ackumulera bevis från studier ett samband mellan DEK och flera typer av humana maligniteter, såsom melanom [19], glioblastom [20], bröstcancer [21] och blåscancer [22], men lite är känt om magcancer . Detta är den första studien, så vitt vi vet, att korrelera DEK nivåer i GAC med histologiska prognostiska faktorer för att förstå betydelsen av DEK uppreglering i magsäckscancer progression. Här har vi utfört IF och IHC färgning av DEK protein och överlevnad dataanalys med hjälp av 36 av gastric dysplasi och 172 i GAC och deras intilliggande normal vävnad motsvarigheter. Vi fann att höga nivåer av DEK uttryck var associerade med dålig prognos i gastric cancerpatienter. Vi observerade också att förändrade expressionsnivåer av DEK protein i magcancer vävnader, som var betydligt högre än de båda intilliggande noncancerous vävnader och normala magen vävnader. Våra resultat tyder på den viktiga roll som DEK protein i prognosen för patienter med magcancer.
Som DEK kan förekomma vid högre nivåer i omogna celler än i differentierade motsvarigheter [11], kan det också bidra till att mäta differentiering potential tumörceller. Våra tidigare uppgifter [15] visade att DEK protein var starkt positivt i kolorektal cancer och dysplastiska adenom i kolon, men negativ i intilliggande normal slemhinna, vilket visar att DEK proteinexpressionsnivåer kan användas som en biomarkör för tidig diagnos av kolorektal cancer. Khodadoust et al.
Rapporterade att DEK expressionsnivåer kan skilja godartade naevi från maligna melanom, vilket tyder på att detta protein kan visa sig vara mycket användbar för att differentiera diagnos [19]. Dessutom Kappes et al.
Undersökte lokaliseringen av DEK hela cellcykeln och fann det var alltid på kromatin och som en komponent i mitotiska kromosomer [23]. Här fann vi att DEK protein strikt ligger i kärnan av gastriska cancerceller med hjälp av IF och IHC färgning, och uttrycksnivån för DEK signifikant uppregleras i magcancer och dysplasi än i angränsande normal magslemhinna, vilket indikerar att DEK uppreglering är en tidig händelse i utvecklingen av magcancer.
Trots den starka sambandet mellan DEK uttryck och cancer, rapporter om DEK uttryck baserade resultatet i tumörpatienter är begränsad. Vår tidigare studie [15] rapporterade att hög DEK uttryck i samband med serosala invasion, lymfkörtel metastas, tumörstorlek och differentiering, som är avgörande histologiska egenskaper som hör ihop med dålig prognos vid kolorektalcancer. Även DEK uttryck samtidigt med någon av dessa funktioner korrelerade med betydligt lägre 5-årsöverlevnaden än de utan DEK uttryck. I enlighet med denna rapport, 2013 Wang et al
. visade att akut myeloisk leukemi patienter med låg DEK uttryck hade högre totala överlevnad jämfört med patienter med högt DEK uttryck [24]. På samma sätt, Liu et al
. rapporterade att DEK protein visade högre expressionsnivåer i < sjukdomsfri överlevnad bröstcancer patienter 3- år än det gjorde i ≥3 år patienter överlevnadssjukdomsfria [21]. Här fann vi också att DEK uttryck var starkt förknippad med överlevnad i tumörer tidigt skede, och var signifikant högre i DEK låg uttryckt patienter än i DEK högt uttryckt patienter. Sålunda kunde IHC undersökning av DEK användas som ett ytterligare verktyg för att identifiera patienter med ventrikelcancer med risk för malignt progression, och uttryck analys DEK kan även vara användbar för att optimera individuell magcancer terapi ledning, gynnar en mer aggressiv regim i tumörer med hög DEK uttryck.
Särskilt har många studier rapporterat att DEK inblandad i flera signalvägar i tumörceller och spelade viktig roll i cancerutveckling. Wise-Draper et al
. rapporterade att DEK fördröjning differentiering av keratinocyter i ett p53-oberoende sätt [25]. Wise-Draper et al
. rapporteras också DEK att fungera som en negativ regulator av p53 verksamhet på ett sätt som påverkade cellöverlevnad [26]. Sandén et al
. rapporterade att DEK-NUP214 fusionsgenen ökade proliferationen av myloid cellproliferation genom uppreglering av mTOR [27]. Dessa data tyder på att förändrade DEK uttrycksmönster kan reglera en viss signalväg för att spela en onkogen roll i cancerutveckling och progression. Kanske kan banorna regleras av DEK representerar en ny strategi för cancerterapier och fortsatta studier krävs också för att ta reda på den exakta signalväg som regleras av förändrad DEK i magsäckscancer progression.
Sammanfattningsvis verkar DEK uttryck att förknippas med gastric cancer progression, och DEK kan potentiellt användas som en biomarkör för prognostisk utvärdering och som ett terapeutiskt mål i magcancer.
Notes
Junjie Piao, Yongjun Shang bidragit lika för detta arbete.
förklaringar
bekräftelser
Denna studie har finansierats med bidrag från National Natural Science fonder i Kina (61371067) och projekten för forskning och & Innovation Jilin ungdomsledare och Team (20130521017JH).
Författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 13000_2014_960_MOESM1_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 1 13000_2014_960_MOESM2_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 2 13000_2014_960_MOESM3_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 3 13000_2014_960_MOESM4_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 4 Konkurrerande intressen
Författarna förklarar att de har inga konkurrerande intressen.
Författarnas bidrag
PJ, SY och LS deltog i studien utformning, konstruktion och fall val. LY, CX och PY utförs fall samling. PJ, LY och LZ utfört experiment och skrev manuskriptet. Alla författarna läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Sen debut peritoneal återfall av avancerad magsäckscancer 20 år efter primär resection
• Ezrin uttryck förutspår dålig prognos av gastric adenocarcinoma