Inblandning av tumörnekrosfaktor-α i uppreglering av CXCR4-uttryck i magcancer inducerad av Helicobacter pylori

Inblandning av tumörnekrosfaktor-α i uppreglering av CXCR4-uttryck i magcancer inducerad av Helicobacter pylori Bild Sammanfattning
Bakgrund
H. pylori, vars infektion ökar tumör invasivitet och metastasering, är i allmänhet märkt som den starkaste risk faktor för utvecklingen av gastrisk cancer. Det verkar inte vara en slump att det finns också en överuttryck av CXCR4 och en uppenbar inblandning i magcancer metastaser. Syftet med denna studie försöker undersöka och vidare att fastställa ett samband mellan dem. Med H. pylori är en potent inducerare av TNF-α, om TNF-α, en tumörpromotor, är involverad i induktionen av CXCR4 uttryck av H. pylori var även under forskning i denna studie.
Metoder
Expression av CXCR4, TNF-α, IL-6 och IL-1β-mRNA bestämdes genom realtids-PCR. CXCR4-proteinexpression detekterades genom Western blotting. Koncentrationer av TNF-α, IL-6 och IL-1β i cellodlingssupernatanter mättes med användning av Quantikine ELISA-kit. Att upphäva TNF-α-uttryck i HGC27 celler, TNF-a RNAi-plasmiden som används för att transfektera dem.
Resultat
Nivåer av CXCR4 och TNF-α-mRNA var signifikant högre i H. pylori-positiva gastric cancer (n = 19) jämfört med H. pylori-negativa (n = 15). En senare Spearmans rangkorrelationstest visade att det fanns en positiv korrelation mellan graden av CXCR4-mRNA och att TNF-α i 34 primära gastric cancer. Andra resultat följas: Expression av CXCR4 och TNF-α var uppreglerade i magcancer cell MKN45 och HGC27 efter infektion med H. pylori 26695 (CAG PAI +) eller Tx30a (CAG PAI -); Induktion av CXCR4 uttryck av H. pylori hämmades signifikant av en neutraliserande TNF-α-antikropp, infliximab; CXCR4 uttryck uppreglerades i MKN45-celler efter behandling med exogent TNF-α eller samodling med makrofager, och var nedreglerade i HGC27 celler efter transfektion med TNF-a RNAi plasmid. Det fanns en signifikant ökning i migration av MKN45 celler som behandlats med H. pylori 26695, och en stark hämning när AMD 3100, en CXCR4 antagonist, eller infliximab, tillsattes.
Slutsatser
Våra resultat visade att H. pylori uppreglerar CXCR4 uttryck i magsäckscancer genom TNF-α.
bakgrund
det är väl accepterat att Helicobacter pylori (H. pylori) är en stark riskfaktor för utvecklingen av olika magsjukdomar, nämligen kronisk gastrit, magsår, magslemhinnan associerade lymfoid vävnad lymfom och magcancer, och det är erkänt att interaktionen mellan H. pylori och epitelceller bidrar till en sådan utveckling. I själva verket inducerar H. pylori-infektion inflammation i mikromiljön i magen i samband med induktion av proinflammatoriska cytokiner, såsom tumörnekrosfaktor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β) och IL-6 [1-3 ], vilket gör gastric cancer främjar.
H. pylori-infektion ökar också tumörinvasion och metastas [4-6], men mekanismen är ännu inte klarlagd. Processen för cancermetastaser är inte slumpmässigt, och olika cancerformer har sina föredragna målsökande platser. Precis som leukocyter trafficking, är tumörcellmigration kritiskt regleras av kemokin /kemokinreceptor systemet. Ett annat fokus för vår uppmärksamhet skjul på CXCR4, den vanligaste kemokinreceptorn överuttryckt i en serie av cancer (magcancer ingår) överlägset [7, 8]. Studier har indikerat CXCL12 /CXCR4-axeln är involverad i magcancer metastas [9]. Det väcker därför stora intressen att hitta en länk mellan H. pylori-infektion och CXCR4 uttryck i magcancer. Review, en av de viktigaste kemiska mediatorer är inblandade i inflammationsassocierade cancrar är TNF-α, och det finns nu omfattande bevis i sin inblandning i marknadsföring och utveckling av experimentella och humana cancrar [10, 11]. Sann till sitt namn, kan höga doser av regionala TNF-α leder till hemorragisk nekros via selektiv destruktion av tumörblodkärl. Emellertid kan den oväntat verka som en endogen tumörpromotor vid produktion i tumörmikromiljön. Vårt intresse är därför dras till sin medverkan i induktion av CXCR4 uttryck av H. pylori, en potent inducerare av TNF-α, som är känd för att uppreglera en serie av cytokiner, kemokiner, adhesionsmolekyler och tillväxtfaktorer i cancer.
metoder
gastric cancercellinjer och vävnadsprover
human magcancer cell MKN45 och HGC27 erhölls från Keygen Biotech. Co (Nanjing, Kina), och odlades i RPMI 1640 kompletterat med 10% fetalt bovint serum, vid 37 ° C i en fuktig inkubator med 5% CO 2. 34 primära magcancer exemplaren förvärvats från patienter under drift med alla sina informerat samtycke vid Shengjing sjukhus, Chinese Medical University, och frystes i flytande kväve omedelbart efter kirurgiskt avlägsnande. Haematoxylin- och eosin-färgning sektioner bereddes för bedömning av procentandelen tumörceller, och bara exemplar med > 70% tumörceller valdes ut för analys. Denna studie genomfördes efter godkännande av den etiska kommittén i Kina Medical University. Alla experiment utfördes minst tre gånger.
Makrofagcellinje RAW264.7
makrofagcellinje RAW 264,7 tillhandahölls av American Type Culture CoUection (Rockville, MD, USA) och upprätthölls i Dulbeccos modifierade Eagles medium , kompletterat med 10% fetalt bovint serum, vid 37 ° C i en fuktig inkubator med 5% CO 2.
H. pylori-stammar
H. pylori-stam 26695 (ATCC 700392, cag PAI +) och Tx30a (ATCC 51.932, cag PAI -) erbjöds av ATCC (Rockville, MD, USA). De odlades på fårblod-agarplattor vid 37 ° C under mikroaerofila betingelser. Bakterier överfördes efter 48 h med Brucella-buljong innehållande 5% fetalt bovint serum under 24 timmar. En mångfald av infektion av 100 användes i alla studier.
Realtid omvänd-transkription-PCR
Totalt RNA isolerades från vävnader och cellinjer av Trizol (Takara, Dalian, Kina) i enlighet med det protokoll som tillhandahålls av tillverkare. cDNA syntetiserades med hjälp av Takara RNA PCR 3,0 Kit (Takara, Dalian, Kina) i en total volym av 10 pl, innehållande AMV omvänt transkriptas, 0,5 l; slumpmässig 9 primer, 0,5 pl; 25 mM MgCl 2, 2 pl; 10 × RT-buffert, 1 pl; dNTP blandning (vardera 10 mM), 1 pl; RNas-inhibitor, 0,25 pl; RNA 1 pl; dH 2O, 3,75 l. Villkor för RT var: 30 ° C under 10 minuter, 42 ° C under 25 minuter, 99 ° C under 5 minuter, och 5 ° C under 5 minuter. Realtids-PCR utfördes med användning av LightCycler systemet tillsammans med LightCycler DNA ledar- SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Den totala volymen är 20

• Interleukin-23A är associerad med tumörtillväxt hos Helicobacter-pylori relaterade humant gastric cancer
• Vanligaste robot bariatric procedurer: omdöme och tekniska aspekter