Implication de facteur de nécrose tumorale-α dans la régulation positive de l'expression de CXCR4 dans le cancer gastrique induite par Helicobacter pylori

Implication de facteur de nécrose tumorale-α dans la régulation positive de l'expression de CXCR4 dans le cancer gastrique induite par l'arrière-plan de Helicobacter pylori
Résumé
H. pylori, dont l'infection augmente invasivité tumorale et les métastases, est généralement étiqueté comme le risque le plus fort facteur pour le développement d'un cancer gastrique. Il ne semble pas être une coïncidence qu'il existe également une surexpression de CXCR4 et une implication évidente dans les métastases du cancer gastrique. Le but de cette étude tente d'enquêter et de poursuivre pour établir un lien entre eux. Expression de méthodes de par H. pylori étant un puissant inducteur du TNF-α, que le TNF-α, un promoteur de tumeur, est impliquée dans l'induction de l'expression de CXCR4 par H. pylori a également été l'objet de recherches dans cette étude. de CXCR4, le TNF-α, IL-6 et IL-1β ARNm a été déterminée par PCR en temps réel. CXCR4 expression de la protéine a été détectée par Western blot. Les concentrations de TNF-α, IL-6 et IL-1β dans le surnageant de culture cellulaire ont été mesurées en utilisant le kit Quantikine ELISA. Les résultats de l'expression d'abroger le TNF-α dans les cellules HGC27, on a utilisé le TNF-a ARNi plasmide pour transfecter les. Niveaux de CXCR4 et de TNF-α d'ARNm étaient significativement plus élevés dans les cancers gastriques positifs à H. pylori (n = 19) par rapport à ceux pylori négatifs H. (n = 15). Le test de corrélation de rang A de suite Spearman a montré qu'il y avait une corrélation positive entre le niveau d'ARNm CXCR4 et que du TNF-α dans 34 cancers gastriques primaires. Autres résultats ont suivi: Expression de CXCR4 et le TNF-α a été régulée à la hausse dans la cellule de cancer gastrique MKN45 et HGC27 après l'infection par H. pylori 26695 (cag PAI +) ou Tx30a (cag PAI -); L'induction de l'expression de CXCR4 par H. pylori a été inhibée de manière significative par un anticorps neutralisant le TNF-α, l'infliximab; l'expression de CXCR4 était régulée positivement dans les cellules MKN45 après le traitement avec le TNF-α exogène ou co-culture avec des macrophages et a été régulée à la baisse dans HGC27 cellules après transfection avec le TNF-a ARNi plasmide. Conclusions de Il y avait une augmentation significative de la migration des cellules MKN45 traités par H. pylori 26695, et une inhibition forte quand AMD 3100, un antagoniste CXCR4, ou infliximab, a été ajouté.
Nos résultats ont montré que H. pylori expression de CXCR4 régule à la hausse dans le cancer gastrique par le TNF-α.
Contexte
Il est bien admis que Helicobacter pylori (H. pylori) est un facteur de risque important pour le développement de diverses maladies gastriques, à savoir la gastrite chronique, les ulcères peptiques, lymphome gastrique associé aux muqueuses tissu lymphoïde et le cancer gastrique, et il est reconnu que l'interaction entre H. pylori et les cellules épithéliales contribue à cette évolution. En effet, l'infection à H. pylori induit une inflammation dans le micro-environnement de l'estomac associé à l'induction de cytokines pro-inflammatoires telles que le facteur onconécrosant-α (TNF-α), l'interleukine-1β (IL-1β) et l'IL-6 [3/1 ], ce qui rend la carcinogenèse gastrique favorable.
H. infection pylori augmente également invasivité tumorale et les métastases [4-6], bien que le mécanisme est toujours pas bien compris. Le processus de métastases du cancer est pas aléatoire, et différents cancers ont leurs sites préférés homing. Tout comme le trafic leucocytaire, la migration des cellules tumorales est critique régulée par le système de récepteur de chimiokine /chimiokine. Un autre centre de notre attention est faite sur CXCR4, récepteur de chimiokine le plus commun surexprimé dans une série de cancers (cancer gastrique inclus) de loin [7, 8]. Des études ont montré l'axe CXCL12 /CXCR4 est impliqué dans les métastases du cancer gastrique [9]. Par conséquent, il suscite de grands intérêts à trouver un lien entre l'infection à H. pylori et CXCR4 surexpression dans le cancer gastrique.
Un des médiateurs chimiques clés impliqués dans les cancers de l'inflammation associée est le TNF-α, et il est prouvé maintenant substantiel dans son implication dans la promotion et la progression des cancers expérimentaux et humains [10, 11]. Fidèle à son nom, de fortes doses de TNF-α régionale peut conduire à une nécrose hémorragique par la destruction sélective des vaisseaux sanguins de la tumeur. Cependant, de manière inattendue, il peut agir comme promoteur de tumeur endogène quand elle est produite dans le microenvironnement tumoral. par conséquent, notre intérêt est attirée sur son implication dans l'induction de l'expression de CXCR4 par H. pylori, un puissant inducteur du TNF-α, qui est connu pour upregulate une série de cytokines, des chimiokines, des molécules d'adhésion et des facteurs de croissance dans les cancers.
méthodes
lignées cellulaires de cancer de l'estomac et des échantillons de tissus
La cellule de cancer de l'estomac MKN45 et humain ont été obtenues auprès HGC27 Keygen Biotech. Co. (Nanjing, Chine) et ont été cultivées dans du RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum bovin foetal, à 37 ° C dans un incubateur humide avec 5% de CO 2. 34 spécimens de cancer gastrique primaires ont été acquis auprès de patients en fonctionnement avec tout leur consentement éclairé à l'hôpital Shengjing, Université de médecine chinoise, et ont été congelées dans l'azote liquide immédiatement après l'ablation chirurgicale. sections Haematoxylin- et éosine-coloration ont été préparés pour l'évaluation du pourcentage de cellules tumorales, et seulement avec des spécimens > les cellules tumorales 70% ont été choisis pour l'analyse. Cette étude a été réalisée avec l'approbation du comité d'éthique de l'Université médicale de Chine. Toutes les expériences ont été faites au moins trois fois.
Lignée cellulaire macrophage RAW264.7
La cellule de macrophage RAW 264.7 a été fourni par l'American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA), et a été maintenue dans un milieu de Eagle modifié par Dulbecco , complété avec du sérum de veau fœtal à 10%, à 37 ° C dans un incubateur humide avec 5% de CO 2.
H. pylori souches
H. pylori souche 26695 (ATCC 700392, cag PAI +) et Tx30a (ATCC 51932, cag PAI -) ont été offerts par l'ATCC (Rockville, MD, USA). Elles ont été cultivées sur des plaques de gélose au sang de mouton à 37 ° C dans des conditions microaérophiles. Les bactéries ont été transférées après 48 h dans un bouillon Brucella contenant du sérum bovin fœtal à 5% pendant 24 heures. Une multiplicité d'infection de 100 a été utilisé dans toutes les études.
Temps réel transcription inverse de l'ARN total de PCR a été isolé à partir des tissus et des lignées cellulaires par Trizol (Takara, Dalian, Chine) selon le protocole fourni par le les fabricants. L'ADNc a été synthétisé en utilisant Takara RNA PCR Kit 3,0 (Takara, Dalian, Chine) dans un volume total de 10 ul, contenant la transcriptase inverse AMV, 0,5 ul; aléatoire 9 amorce, 0,5 pi; mM MgCl 25 2, 2 pi; 10 x tampon RT, 1 ul; mélange de dNTP (10 mM chacun), 1 ul; inhibiteur de RNase, 0,25 ul; 1 ul de l'ARN; dH 2O, 3,75 ul. Les conditions de la RT sont les suivantes: 30 ° C pendant 10 minutes, 42 ° C pendant 25 minutes, 99 ° C pendant 5 minutes et 5 ° C pendant 5 minutes. PCR en temps réel a été réalisée en utilisant le système LightCycler conjointement avec le DNA Master SYBR Green I kit LightCycler (Roche Diagnostics). Le volume total est de 20 ul, contenant mM MgCl 25 2, 3 pi; 10 × Buffer, 5 pi; 10 uM Primer avant, 1 pl; 10 uM de l'amorce inverse, 1 ul; LightCycler DNA Master SYBR Green I, 2 pi; ADNc, 2 pi; dH 2O, 6 pi. Les conditions de PCR étaient les suivantes: 50 ° C pendant 2 minutes, 95 ° C pendant 10 minutes, puis 40 cycles de 5 secondes à 95 ° C et 20 secondes à 60 ° C. Le gène de ménage glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH
) a été utilisé comme témoin interne. L'expression génique a été quantifié par le procédé CT comparatif, en normalisant les valeurs CT pour GAPDH
et à calculer des valeurs relatives d'expression. Les séquences des amorces ont été fournies par Takala (Dalian, Chine) comme suit: CXCR4
avant, 5'-GAGGAAATGGGCTCAGGG-3 ', inverse, 5'-AGTCAGCAGGAGGGCAGGGA-3'; TNF-α
avant, 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 ', inverse, 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3'; IL-1β
avant, CCACCACTACAGCAAGGG 5'-3 ', inverse, 5'-GAACTGGGCAGACTCAAA-3'; IL-6
avant, CCTTCGGTCCAGTTGCCTTCT 5'-3 ', inverse, 5'-GCATTTGTGGTTGGGTCA-3'; GAPDH
avant, 5'-GGGAAACTGTGGCGTGAT-3 ', inverse, 5'-AAAGGTGGAGGAGTGGGT-3'.
Western blot
lysats cellulaires ont été préparés avec un tampon d'échantillon [50 mmol /L de Tris-HCl (pH 6,8 ), 100 mmol /l de DTT, 2% de SDS, 0,1% de bleu de bromophénol et 10% de glycerol] et ont été soumis à un sulfate de 12% de dodécylsulfate de sodium (SDS) /gel d'acrylamide. Les protéines sur le gel d'acrylamide ont été transférées sur une membrane en nylon, qui a été bloquée pendant une nuit (4 ° C dans du PBS avec 0,1% de Tween et 10% de lait en poudre). Les anticorps polyclonaux pour CXCR4 (Santa Cruz, CA, Amérique), et les anticorps secondaires correspondants (Santa Cruz, CA, Amérique) ont été appliqués avant immunotransfert. La β-actine de gènes humains
(Santa Cruz, CA, Amérique) a été utilisé comme témoin interne. Les transferts ont été visualisés avec le système FX pro plus (Bio-Rad) et quantifiées à l'aide Scion logiciel Image 4.03. Interférences
ARN
TNF-a ARNi plasmidique et nonsilencing contrôle ARNi plasmidique ont été achetés chez Takala (Dalian, Chine). Les cellules ont été ensemencées dans une plaque de 24 puits à une densité de 2 x 10 5. Le jour suivant, les cellules ont été transfectées avec le TNF-a siRNA ou Contrôle siRNA en utilisant Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Royaume-Uni) selon les instructions du fabricant.
Elisa pour cytokines dans la cellule culture surnageants
Les concentrations de TNF-α, IL-1β et de l'IL-6 dans les surnageants de culture cellulaire ont été mesurées en utilisant le kit Quantikine ELISA (Boster, Wuhan, Chine) selon les instructions du fabricant. La sensibilité du test était de 2 pg /ml pour le TNF-α, 4 pg /ml pour l'IL-1β et 4 pg /ml pour l'IL-6.
Essais de migration
la migration des cellules en culture a été analysée en utilisant du Matrigel chambre d'invasion (format 24 puits, 8 pores um; BD Pharmingen). Les cellules (5 x 10 5) ont été ajoutés à la chambre supérieure et du milieu supplémenté avec CXCL12 (100 ng /ml, Sigma) a été ajouté à la chambre inférieure. des dosages de migration ont été mises en incubation pendant 18 heures à 37 ° C et 5% de CO 2. cellules migrés sur la surface inférieure ont été colorées en utilisant 1% bleu de toluidine après fixation avec 100% de méthanol. Pour chaque Transwell, le nombre de cellules ayant migré dans 10 champs de moyenne puissance (x 20) a été compté. L'analyse statistique
Mann-Whitney U
-test a été utilisé pour comparer l'expression de l'ARNm entre H. pylori positive et les tumeurs à H. pylori négatifs. Corrélation entre l'expression de CXCR4 et d'expression de TNF-α dans des échantillons de cancer de l'estomac a été analysée en utilisant le test de corrélation de rang de Spearman. L'expression de l'ARNm dans des lignées cellulaires gastriques a été comparée à l'aide de t de Student
-test ou d'une manière ANOVA. L'analyse statistique a été réalisée à l'aide du logiciel SPSS version 11.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Différence a été considérée comme significative lorsque P
-value était < Expression de 0,05.
Résultats de CXCR4 et de TNF-α ARNm dans CXCR4 ARNm de cancers gastriques primaires a été déterminée par temps réel transcription inverse PCR dans 34 cancers gastriques, et son expression dans chaque échantillon a été standardisé à l'expression de la GAPDH. Les résultats ont révélé son niveau significativement plus élevé dans les cancers gastriques H. pylori-positifs (n = 19) par rapport à ceux H. pylori-négatifs (n = 15) (7,2 fois, P
< 0,01, figure 1A). Dans la même cohorte de tumeurs, le TNF-α expression de l'ARNm a également été détectée en temps réel par transcription inverse par PCR, et on a trouvé plus forte dans les cancers de l'estomac positifs à H. pylori par rapport à H. pylori ceux-négatives (4,3 fois, P
< 0,01, figure 1B). Le test de corrélation de rang de Spearman vérifié en outre une corrélation positive d'expression CXCR4 avec le TNF-α dans ces 34 cancers gastriques (P
< 0,01, figure 1C). Figure 1: Expression de CXCR4 et de TNF-α ARNm dans les cancers gastriques primaires par PCR en temps réel. (A) et (B) les cancers gastriques H. pylori-positifs (colonnes grises, n = 19) exprimées plus haut niveau de CXCR4 (A) et le TNF-α (B) par rapport à l'ARNm de cancers gastriques pylori-négatifs H. (colonnes noires , n = 15), * P
< 0,01. Les lignes horizontales: un moyen de niveau de l'ARNm. (C) Niveau de CXCR4 ARNm a été positivement corrélée avec celle du TNF-α ARNm dans 34 cancers gastriques, P
< 0,01. losanges noir: cancers gastriques H. pylori-négatifs; losanges gris:. cancers gastriques H. pylori-positifs
Induction de CXCR4 et de TNF-α expression par H. pylori dans les cellules cancéreuses gastriques
PCR en temps réel et Western blot ont été utilisés pour détecter l'expression de CXCR4 dans MKN45 et HGC27 les cellules (figure 2A, B); et le révéler significativement régulée positivement dans les après l'infection par H. pylori 26695 pendant 24 heures (P
< 0,01, respectivement, la figure 2A, B). Par la suite, ils ont été traités avec un cag PAI négatif H. pylori, Tx30a pour déterminer son implication dans la régulation positive, et il est également trouvé pour induire l'expression de CXCR4 dans les cellules MKN45 et HGC27 (P
< 0,01, respectivement, la figure 2A , B). Figure 2: Expression de CXCR4 et de TNF-α dans les cellules MKN45 et HGC27 après l'infection par H. pylori. (A) et (B) l'expression de CXCR4 a été surexprimés dans MKN45 et HGC27 cellules après l'infection par H. pylori 26695 (* P
< 0,01, respectivement, vs
pylori H.) ou Tx30a (* P
< 0,01, respectivement, vs
H. pylori). (C) et (D) l'expression du TNF-α a été augmenté en MKN45 et HGC27 cellules après l'infection par H. pylori 26695 (* P
< 0,01, respectivement, vs
pylori H.) ou Tx30a (* P
< 0,01, respectivement, vs
H. pylori). Les données sont exprimées en moyenne ± SD, n = 3.
L'effet de l'infection à H. pylori sur l'expression du TNF-α a été encore étudiée en utilisant PCR en temps réel et Elisa, et la détection ont révélé que l'infection par 26695 ou Tx30a 12 heures ont pu conduire à la fois plus l'expression de l'ARNm du TNF-α (P
< 0,01, respectivement) et plus sécrétion de la protéine TNF-α dans le surnageant de culture (P
< 0,01, respectivement) dans MKN45 et effet de cellules HGC27 (figure 2C, D). de l'infliximab, un anticorps neutralisant le TNF-α, sur l'induction de l'expression de CXCR4 par H. Pylori
la découverte d'une régulation positive de l'expression du TNF-α dans cette affaire portée nous pour faire avancer la recherche sur son implication dans l'induction de l'expression de CXCR4 par H. pylori. Un anticorps neutralisant le TNF-α, l'infliximab (4 ug /ml, Sigma), a ensuite été utilisée pour traiter les cellules MKN45 et HGC27 après une infection par 26695, et l'induction de CXCR4 a été inhibée de manière significative (P
< 0,01, respectivement, , la figure 3A, B). Des résultats similaires ont été observés lorsque ces cellules ont été traitées avec l'infliximab après une infection par Tx30a (P
< 0,01, respectivement Figure3C, D). Figure 3: Effet de l'infliximab sur l'induction de l'expression de CXCR4 par H. Pylori. (A) et (B) CXCR4 régulation positive induite par H. pylori 26695 a été inhibée dans les cellules MKN45 et HGC27 après le traitement avec l'infliximab, * P
< 0,01, respectivement, vs
26695 + inf. (C) et (D) CXCR4 régulation positive induite par H. pylori Tx30a a également été inhibée dans les cellules MKN45 et HGC27 après le traitement avec l'infliximab, * P
< 0,01, respectivement, vs
Tx30a + inf. Les données sont exprimées en moyenne ± écart-type, n = 3. inf. La régulation positive de l'infliximab d'expression de CXCR4 dans les cellules de cancer de l'estomac par le TNF-α
cellules MKN45, qui secrète de niveau inférieur de la protéine TNF-α, ont été traités avec 1, 10 ou 50 ng /ml de TNF-α (Sigma) pendant 6 heures à tenter d'explorer davantage le rôle du TNF-α dans la régulation positive de l'expression de CXCR4, et PCR en temps réel et la détection Western blot a révélé qu'il a été régulée à la hausse de manière significative d'une manière dépendante de la dose (P
< 0,01, figure 4A, B), et même des plis de 15,8 avec 50 ng /ml de TNF-α traitement. Figure 4 La régulation positive de l'expression de CXCR4 dans les cellules cancéreuses gastriques par le TNF-α. (A) et (B) l'expression de CXCR4 ont été surexprimés dans les cellules MKN45 par le TNF-α exogène d'une manière dépendante de la dose, * P
< 0,01. (C) et (D) Le système de co-culture de cellules MKN45 et RAW264.7 ont exprimé plus CXCR4, * P
< 0,001, vs
M; ** P
< 0,001, vs
R. La surexpression d'expression CXCR4 a été inhibée après traitement par infliximab, *** P
< 0,001, vs
M + R + inf. M: MKN45; R: RAW264.7; inf: infliximab. (E) L'expression de TNF-α était absente dans les cellules après transfection HGC27 avec le TNF-a ARNi plasmide. expression (F) CXCR4 ARNm a été downregulated dans HGC27 cellules après transfection avec le TNF-a ARNi plamid, * P
< 0,001, vs
Non ARNi; ** P
< 0,001, vs
contrôle ARNi. Les données sont exprimées en moyenne ± écart type, n = 3.
Ensuite, l'expression de CXCR4 dans un système de co-culture a été examinée, étant donné que les macrophages associés aux tumeurs servent également en tant que source de TNF-α dans le microenvironnement du cancer gastrique. Une co-culture de cellules MKN45 avec des cellules RAW264.7 pendant 24 heures indiqué, il a exprimé significativement plus CXCR4 ARNm et la protéine (P
< 0,001, la figure 4C, D); cette augmentation, cependant, a été significativement inhibée par infliximab (P
< 0,001, figure 4C, D)
Enfin, endogène TNF-α a été ciblé pour évaluer sa réglementation sur l'expression de CXCR4 dans HGC27 cellules, qui secrets supérieurs. niveau de la protéine TNF-α. TNF-a ARNi plasmide a été utilisé pour transfecter des cellules HGC27 et nonsilencing correspondante plasmide ARNi a été utilisé dans la contrepartie comme témoin. Il a été observé que l'expression de TNF-α était absente dans les cellules après transfection HGC27 avec le TNF-a ARNi plasmide (figure 4E). Ensuite, l'expression de CXCR4 a été détectée par PCR en temps réel, et il a été noté dans la détection du fait que, après la transfection avec le TNF-a ARNi plasmide, l'expression de CXCR4 ARNm est régulée à la baisse de manière significative dans les cellules HGC27, par rapport aux cellules avec un contrôle d'ARNi dans des cellules sans ARNi (P
< 0,001, respectivement, figure 4F).
induction de cytokines dans les macrophages par temps réel de H. pylori PCR et Elisa ont été utilisées pour évaluer l'effet de H. pylori 26695 sur l'expression des cytokines dans les cellules RAW264.7, car il est généralement admis que les cytokines sont impliquées dans des processus inflammatoires chroniques provoquées par H. pylori. La détection par PCR en temps réel a montré une expression de TNF-α, IL-1β et de l'IL-6 a été régulée à la hausse de l'ARNm dans les cellules traitées par 26695 par rapport aux cellules non traitées (26695-TNF-a, P
< 0,001; IL-1β , P
< 0,001 et IL-6, P
< 0,001, figure 5A). Et les résultats ELISA ont indiqué plus de protéines de TNF-α, IL-1β et de l'IL-6 ont été sécrétées dans le surnageant de culture à 26695 cellules traitées par rapport aux cellules non traitées 26695-a (TNF-a, P
< 0,001; IL-1β , P
< 0,001 et IL-6, P
< 0,001, figure 5B). Figure 5 L'induction de cytokines dans les macrophages par H. pylori. (A) et (B) L'expression de TNF-α, IL-1β et IL-6 ont été régulés à la hausse dans les cellules traitées par 26695 RAW264.7 * P
< 0,001, vs
cellules non traitées. (C) et (D), ni de l'IL-1β, ni de l'IL-6 peuvent réguler positivement l'expression de CXCR4 dans les cellules MKN45. Les données sont exprimées en moyenne ± écart type, n = 3. Enfin
MKN45 cellules ont été traitées avec l'IL-1β exogène (50 ng /ml) et IL-6 (50 ng /ml), respectivement, pour exclure la possibilité que l'IL -1β et l'IL-6 peut upregulate expression de CXCR4 comme TNF-α. Ni l'IL-1β, ni de l'IL-6 a été trouvé à réguler positivement l'expression de CXCR4 de façon significative (Figure 5C, D).
Analyse de migration
analyse de migration a été réalisée à l'aide de la chambre d'invasion de Matrigel dans une tentative pour déterminer si la fonction était régulée positivement CXCR4 . Dans la phase initiale de l'expérience avec 100 ng /ml de CXCL12 dans la chambre inférieure, il y avait une augmentation significative (jusqu'à 4,5 plis) dans la migration des cellules MKN45 avec 26.695 traitement dans la chambre supérieure, en comparaison avec des cellules témoins sans 26.695 traitement (P
< 0,001, figure 6A). Par la suite, cependant, l'augmentation est inhibée lorsque remarquablement AMD 3100 (1 ug /ml, Sigma), un antagoniste CXCR4 ou l'infliximab, ont été ajoutés (P
< 0,01, respectivement, la figure 6A). Figure 6 étude des migrations. (A) cellules MKN45 ont montré une augmentation significative de leur migration après le traitement avec 26695 * P
< 0,001, vs
contrôle. L'augmentation de la migration des cellules MKN45 induites par 26695 a été inhibée lorsque AMD 3100 (** P
< 0,01, vs
26695 + AMD), ou infliximab (*** P
< 0,01, vs
26695 + inf) a été ajouté. AMD: AMD3100; inf: infliximab. (B) TNF-α augmente la migration des cellules MKN45, * P
< 0,001, vs
contrôle. Ni l'IL-1β, ni IL-6 peuvent augmenter de manière significative la migration des cellules MKN45. Les données sont exprimées en moyenne ± écart type, n = 3.
En outre, l'effet des cytokines sur la migration des cellules MKN45 a également été examinée, et le TNF-α (50 ng /ml) a été trouvée pour augmenter la migration des cellules MKN45 significativement (P
< 0,001, figure 6B). Rapport de Toutefois, ni de l'IL-1β (50 ng /ml), ni de l'IL-6 (50 ng /ml) a été démontrée pour favoriser la migration des cellules MKN45 considérablement (figure 6B).
H. pylori est blâmé pour infecter environ 50% de la population mondiale comme cancérogène gastrique définitif pour l'homme [12]. Pathogenèse de son infection inclut souvent l'inflammation, lésions des muqueuses, ou l'atrophie gastrique, et nécessite des interactions étroites entre les bactéries et les cellules épithéliales gastriques, l'activation des voies de signalisation, la modification des fonctions cellulaires de l'hôte, et conduisant à des réponses épithéliales chroniques [13.14]. Il y a maintenant des preuves considérables reliant l'inflammation chronique à des cancers humains [15-17], et l'inflammation chronique spécifiquement, H. pylori-induite et des cytokines dans microenvironnement de l'estomac locale servir de contributeurs les plus courants [18-20]. Cette étude met en évidence le fait que le niveau de la muqueuse du TNF-α de l'ARNm était significativement plus élevée chez les patients positifs à H. pylori que celle chez les patients négatifs en utilisant une PCR quantitative en temps réel, et deux cellules de cancer gastrique également sécrété protéine TNF-α in vitro. Elle invoque en outre l'hypothèse que le TNF-α peut être impliqué dans la carcinogenèse gastrique H. pylori positif en tant que segment de liaison indispensable et solide entre l'inflammation et le cancer [21].
Bien que le mécanisme d'induction du TNF-α par H.pylori reste relativement floue, une famille de protéines a été décrite dans la dernière décennie, y compris Helicobacter pylori-membrane protein-1 (HP-MP1) et le TNF-α induisant la protéine (Tipα) [22-24]. Tipα gène, identifié à partir de H. pylori souche 26695, est homologue à gène HP-MP1 avec 94,3% d'homologie, et les deux d'entre eux montrent une forte capacité à induire l'expression du gène TNF-α. Dans l'étude, H. pylori 26695 a été trouvé à upregulate expression de TNF-α significativement dans les cellules MKN45 et HGC27 et cag PAI souche négative Tx30a a également été repéré à l'induire de toute évidence, ce qui peut être dû en partie au fait que HP-MP1 /famille Tipα est pas dans cag région PAI. Cependant, il a également été noté que l'effet de Tx30a sur le TNF-α induction a été plus faible que celle de 26695 (2,3 plis vs
3.1 plis dans les cellules MKN45), qui a suggéré H. pylori dans les produits de cag PAI peut également être impliqué dans l'induction. En fait, il a été rapporté que cagA de H. pylori pourrait induire le TNF-α dans l'estomac échantillons de biopsies de cancer [25]. En outre, purifié uréase de H. pylori a également été trouvé pour induire des cellules MKN45 pour exprimer le TNF-α [26].
TNF-α, une cytokine clé dans de nombreuses maladies inflammatoires chroniques, a été marqué comme un facteur sérique pour l'induction de la nécrose hémorragique des tumeurs solides chez les souris greffées. Cependant, actuellement il est communément identifié comme un promoteur de tumeur dans microenvironnement tumoral local, et donc la suppression ou l'inhibition de c'est censé réduire l'incidence des cancers expérimentaux. /TNF-R1 knock down souris TNF-a- sont résistants à la carcinogenèse induite chimique [27, 28]. Il est fréquemment détectée dans les biopsies provenant d'une variété de cancers chez l'homme, produite soit par des cellules tumorales ou des cellules épithéliales stromales. En outre, il se trouve aussi, bien que dans faible quantité, dans la sécrétion de nombreuses lignées cancéreuses in vitro sans stimuli inflammatoires, bien que le mécanisme est pas encore tout à fait clair.
TNF-α a été trouvé non seulement impliqué dans la transformation et la prolifération cellulaire mais aussi dans les métastases tumorales. Une telle constatation est d'abord basée sur un modèle animal avec cancer du côlon, dans lequel l'injection de LPS amélioré le développement des métastases pulmonaires dépendant de la production de TNF-α par des cellules hôtes [29]. Les résultats suivants montrent la métastase tumorale accrue inhibée par la neutralisation du TNF-α anticorps [30]. Ceux-ci ont conduit à notre spéculation que l'un des mécanismes sous-jacents de TNF-α dans les métastases tumorales peuvent être liés à la régulation positive des récepteurs de chimiokines /chimiokines. Tout d'abord, il y avait une régulation à la hausse significative de CXCR4 dans les cellules cancéreuses gastriques après avoir été traitées avec le TNF-α exogène. Une autre évidence une régulation positive de l'expression de CXCR4 dans les cellules cancéreuses après qu'ils ont été co-cultivés avec des macrophages, une autre source de TNF-α dans le microenvironnement de cancer gastrique. Comme on s'y attendait, cette régulation positive peut être inhibée par le TNF-α anticorps neutralisant l'infliximab. Il y avait par conséquent une diminution remarquable de l'expression de CXCR4 dans les cellules après HGC27 ARNi a été utilisé pour abroger l'expression de TNF-α dans ces cellules, ce qui indique endogène de TNF-α peut également réguler positivement l'expression de CXCR4. La surexpression de Les résultats globaux ont conduit à notre conclusion que le TNF-α, avec lui-même impliqué dans la métastase du cancer gastrique, upregulates expression de CXCR4. De CXCR4, dont l'implication dans diverses tumeurs humaines est bien connu, a été fréquemment observé dans les tissus de cancer gastrique pour augmenter les métastases du cancer gastrique. Certaines cellules de carcinome gastrique humains expriment également CXCR4 ARNm et la protéine à des niveaux élevés [7, 8]. Notre étude a montré infection à H. pylori a augmenté la migration des cellules MKN45 par la surexpression d'expression CXCR4. Le traitement avec un antagoniste de CXCR4 AMD3100 a entraîné une suppression significative de la migration des cellules MKN45 in vitro. Une autre étude a montré AMD3100 a supprimé de manière significative le développement de la carcinomatose péritonéale dans un modèle murin de cancer de l'estomac, qui a été mis en évidence par la réduction de la croissance tumorale et la formation de liquide d'ascite [9]. Les recherches antérieures ont conduit à notre conclusion que CXCR4 surexpression dans un échantillon de biopsie de cancer gastrique primaire peut servir d'évaluation préopératoire des risques pour l'apparition de carcinose péritonéale. La participation de
Macrophages dans l'invasion et les métastases [31, 32 carcinogenèse et de la tumeur ] est généralement blâmé pour motiver TAMs (tumeur de macrophages associés), une source importante de TNF-α dans microenvironnement de la tumeur, de libérer une variété de facteurs de croissance, cytokines, et des médiateurs inflammatoires. L'étude a révélé qu'il y avait une expression significative de TNF-α induite par H. pylori, et en même temps la régulation positive de l'IL-1 bêta et l'IL-6 dans les cellules RAW264.7 Cependant, la variation de celle-ci n'a pas réussi à induire l'expression de CXCR4 dans les cellules MKN45.
des études ont finalement attribué l'activation anormale de NF-kB dans les cellules cancéreuses à la sécrétion excessive de TNF-α, dont le rôle dans la régulation positive de CXCR4 est ensuite supposé être lié à des voies médiées par les NF-kB. D'autres résultats ont révélé des antagonistes du TNF-α peuvent inhiber la régulation positive de l'expression de CXCR4 par H. pylori, et les deux antagonistes CXCR4 et peuvent supprimer la migration accrue des cellules de cancer gastrique in vitro. Ces résultats suggèrent que les antagonistes seuls ou en combinaison avec d'autres thérapies, peuvent servir de thérapies efficaces pour les patients atteints de cancer gastrique.
TNF-α de conclusions est impliqué dans la régulation positive de l'expression de CXCR4 dans le cancer gastrique induite par H. Déclarations
Remerciements pylori.
Ce travail a été soutenu par une subvention de la Division de l'éducation, province du Liaoning, en Chine (2009A751). les fichiers originaux soumis de
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Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.

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