Vključevanje faktorja tumorske nekroze-a v uravnavanjem CXCR4 raka želodca s Helicobacter pylori

udeležbe faktorja tumorske nekroze-a v uravnavanjem CXCR4 raka želodca s Helicobacter pylori
Abstract
Ozadje
H. pylori, ki okužba povečuje tumorja invazivnosti in metastaze, je na splošno označena kot najmočnejši dejavnik tveganja za razvoj raka želodca. Zdi se, da ni naključje, da je tam tudi čezmernim CXCR4 in očitno vpletenost v želodcu metastaz raka. Namen te študije poskuša raziskati in nadalje vzpostaviti povezavo med njimi. S H. pylori pri čemer je močan induktor TNF-a, ali TNF-α, promotor tumor, ki je vključen v indukcijo CXCR4 H. pylori je bila tudi pod raziskave v tej študiji.
Metod
Expression za CXCR4, TNF-a, IL-6 in IL-1β mRNA smo določili z PCR v realnem času. CXCR4 protein izraz je bila odkrita z Western blot. Koncentracije TNF-a, IL-6 in IL-1β v celičnih kulturah supernatantih smo merili z uporabo kompleta Quantikine Elisa. Naj razveljavi TNF-α izraz v HGC27 celicah, je bila uporabljena TNF-a RNAi plazmid jih transfekcijo.
Rezultati
Ravni CXCR4 in TNF-alfa mRNA so bile precej višje v H. pylori pozitivnih želodčnega raka (n = 19) v primerjavi s H. pylori-negativnih (n = 15). rang test korelacije A kasneje Spearman je pokazala, da je pozitivna korelacija med stopnjo CXCR4 mRNA in da TNF-a v 34 osnovnih želodca raka. Drugi rezultati sledi: Izražanje CXCR4 in TNF-a je bila povečana pri želodčni rak celic MKN45 in HGC27 po okužbi s H. pylori 26695 (OAS PAI +) ali Tx30a (OAS PAI -); Indukcija CXCR4 H. pylori je pomembno inhibirana z nevtralizacijo TNF-α protiteles, infliksimab; CXCR4 izraz je bila povečana pri MKN45 celicah po zdravljenju z eksogeno TNF-a ali sofinanciranja kulture s makrofaga, in je navzdol reguliranih v HGC27 celicah po transfekciji s TNF-a sklepati RNAi plazmida. Tam je bilo znatno povečanje migracije MKN45 celic tretiranih s H. pylori 26695, in močno zaviranje, ko AMD 3100, antagonist CXCR4, ali infliksimab, je dodal.
Sklepi
Naše ugotovitve, je pokazala, da je H. pylori upregulates CXCR4 pri raku želodca s TNF-a.
Ozadje
To je dobro znano, da je Helicobacter pylori (H. pylori) močan dejavnik tveganja za razvoj različnih želodčnih bolezni, in sicer kronični gastritis, peptične razjede, želodčni sluznici povezan limfom limfatičnega tkiva in raka želodca, in je priznal, da je interakcija med H. pylori in epitelnih celic prispeva k takemu razvoju. V resnici, okužba H. pylori povzroča vnetje v mikrookolja v želodcu, povezanega z indukcijo vnetnih citokinov, kot tumorski nekrozni faktor-a (TNF-alfa), interlevkin-1β (IL-1β) in IL-6, [1-3 ], zaradi česar želodca nastanek raka ugodno.
H. okužba pylori tudi povečuje tumorja invazivnosti in metastaze [6/4], čeprav je mehanizem še vedno ne razumemo dobro. Proces raka metastaz ni naključno, in različne vrste raka so njihove prednostne zajemanje mesta. Tako kot trgovine levkocitov, je migracija tumorske celice kritično urejene s sistemom kemokin /kemokinski receptorja. Poudarek naše pozornosti odcepi na CXCR4, najpogostejši kemokinski receptor pretirano izražena v vrsti raka (rak želodca vključen) daleč [7, 8]. Študije so pokazale, CXCL12 /CXCR4 os je vključena v želodčnem metastaz raka [9]. Zato zbuja velike interese, da bi našli povezavo med okužbo s H. pylori in CXCR4 prekomerno raka želodca.
Eden od ključnih kemičnih mediatorjev, ki so vpletene v rakavih obolenj, povezanih z vnetjem, je TNF-α, in je zdaj tehtni dokazi v svoji vpletenosti v promocijo in napredovanje poskusne in človeških raka [10, 11]. Res je, da njegovo ime, lahko visoki odmerki regionalnega TNF-a privede do hemoragične nekroze prek selektivnega uničenja tumor krvnih žil. Vendar pa lahko nepričakovano deluje kot endogeni promotor tumorja kadar je proizveden v mikrookolju tumorja. Naš interes je zato treba na svoji vpletenosti v indukcijo CXCR4 H. pylori, ki je močan induktor TNF-a, ki je znano, da upregulate vrsto citokinov, kemokinov, adhezijskih molekul in rastnih faktorjev v raka.
metode
želodčni rak celične linije in vzorci tkiva
človeškega želodca raka celico MKN45 in HGC27 so bile pridobljene iz keygen Biotech. Co (Nanjing, Kitajska), in smo kultivirali v RPMI 1640, dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma, pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2. 34 osnovnih želodca osebki raka smo pridobili od bolnikov v okviru operacije z vsem zavestne privolitve na Shengjing bolnišnici, kitajski Medical University, in so zamrznili v tekočem dušiku takoj po kirurški odstranitvi. Haematoxylin- in eozin-barvanje odseki so bile pripravljene za oceno odstotka tumorskih celic in vzorci le z > 70% tumorskih celic smo izbrali za analizo. Ta študija je bila izvedena z odobritvijo etičnega odbora Kitajske Medical University. Vse poskuse smo storili vsaj trikrat.
Makrofagne celične linije RAW264.7
makrofagne celične RAW 264,7 je zagotovila American Type Culture Collection (Rockville, MD, ZDA), in se je ohranilo v spremenjeni mediju Dulbeccovem Eagle je dopolnjen z 10% fetalnega govejega seruma, pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2.
H. pylori sevov
H. pylori sev 26695 (ATCC 700392, OAS PAI +) in Tx30a (ATCC 51932, OAS PAI -) jih ATCC (Rockville, MD, ZDA) na voljo. Jih gojimo na agarnih ploščah ovčje krvi pri 37 ° C pod mikroaerofilnih pogojih. Bakterije smo prenesli po 48 urah v Brucella brozge, ki vsebuje 5% fetalnega govejega seruma 24 ur. Različna okužbe 100 je bila uporabljena v vseh študijah.
Realnem času obratno prepisovanje PCR
Total RNA smo izolirali iz tkiv in celičnih linij, ki jih TRIzola (Takara, Dalian, Kitajska), v skladu s protokolom, ki jih je posredoval proizvajalci. cDNA smo sintetizirali s pomočjo Takara RNA PCR 3,0 Kit (Takara, Dalian, Kitajska), v skupnem obsegu 10 ul, ki vsebujejo AMV reverzne transkriptaze, 0,5 ul; naključno 9 premaz, 0,5 ul; 25 mM MgCl 2, 2 ul; 10 x RT blažilnika, 1 ul; dNTP mešanice (vsaka 10 mM), 1 ul; RNase inhibitorja, 0,25 ul; RNK 1 ul; dH 2O, 3,75 ul. Pogoji za RT bili: 30 ° C za 10 minut, 42 ° C za 25 minut, 99 ° C za 5 minut in 5 ° C za 5 minut. PCR v realnem času smo izvedli z uporabo sistema LightCycler skupaj z LightCycler DNA Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Skupna prostornina je 20 ul, ki vsebuje 25 mM MgCl 2, 3 ul; 10 x Buffer, 5 ul; 10 uM naprej Primer, 1 ul; 10 uM povratne Primer 1 ul; LightCycler DNA Master SYBR Green I, 2 ul; cDNA, 2 ul; dH 2O, 6 ul. Pogoji za PCR so bili: 50 ° C za 2 minuti, 95 ° C za 10 minut in nato 40 ciklov po 5 sekund pri 95 ° C in 20 sekund pri 60 ° C. vzdrževalni gen gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze The (GAPDH
) smo uporabili kot notranje kontrole. Izražanje genov je količinsko z metodo primerjalne CT, normalizira CT vrednosti GAPDH
in izračun relativne izrazne vrednosti. Primer sekvence so predložili Takala (Dalian, Kitajska), kot sledi: CXCR4
naprej, 5'-GAGGAAATGGGCTCAGGG-3 ', obratno, 5'-AGTCAGCAGGAGGGCAGGGA-3'; TNF-α
naprej, 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 ", se obrne, 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3 '; IL-1β
naprej, 5'-CCACCACTACAGCAAGGG-3 ', obratno, 5'-GAACTGGGCAGACTCAAA-3'; IL-6
naprej, 5'-CCTTCGGTCCAGTTGCCTTCT-3 ', obratno, 5'-GCATTTGTGGTTGGGTCA-3'; GAPDH
naprej, 5'-GGGAAACTGTGGCGTGAT-3 ', obratno, 5'-AAAGGTGGAGGAGTGGGT-3 ".
Western blot
Celične lizate smo pripravili z vzorcem buffer [50 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8 ), 100 mmol /L DTT, 2% SDS, 0,1% bromofenol modro in 10% glicerola] in so bili podvrženi 12% natrijevega dodecilsulfata (SDS) /akrilamida gela. Proteini na akrilamida gela smo prenesli na najlonsko membrano, ki je bil blokiran preko noči (4 ° C v PBS z 0,1% Tween in 10% mleka v prahu). Poliklonalna protitelesa za CXCR4 (Santa Cruz, CA, Amerika), in ustrezne sekundarne protitelesa (Santa Cruz, CA, America) so bili uporabljeni pred imunoblotanju. Človeški gen β-aktin
(Santa Cruz, CA, Amerika) uporabimo kot notranjo kontrolo. Blots smo prikazali z FX pro plus sistema (Bio-Rad) in količinsko, z uporabo SCION IMAGE 4.03 programsko opremo. Interference
RNA
-TNF a sklepati RNAi plazmida in nonsilencing nadzor RNAi plazmida smo nabavili pri Takala (Dalian, Kitajska). Celice smo zasejali v 24 vdolbinicami z gostoto 2 x 10 5. Naslednji dan smo celice transfekciji s TNF-a siRNA ali Control siRNA uporabo Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Združeno kraljestvo) v skladu z navodili proizvajalca.
Elisa za citokinov v kulturi supernatantov celic
koncentracije TNF-a, IL-1β in IL-6 v celične kulture supernatantih so bile izmerjene v Quantikine Elisa kit (Boster, Wuhan, Kitajska), v skladu z navodili proizvajalca. Občutljivost testa je bil 2 pg /ml za TNF-a, 4 pg /ml za IL-1β in 4 pg /ml IL-6.
Migracijske analize
migracije kultiviranih celic smo analizirali z uporabo Matrigel invazija komora (format 24-dobro, 8 mikrometrov por, BD Pharmingen). Celice (5 x 10 5) dodamo k zgornji komori in medij z dodatkom CXCL12 bil (100 ng /ml, Sigma) dodamo k spodnji komori. Migracije Teste smo inkubirali 18 ur pri 37 ° C in 5% CO 2. Prehajali celice na spodnji površini smo obarvali z uporabo 1% toluidin modrega po posnetka s 100% metanola. Za vsako transwell, število preseljenih celic v 10 srednjih področjih elektrarn (× 20) je prešteti.
Statistična analiza
Mann-Whitney U
-test je bila uporabljena za primerjavo mRNA izražanja med H. pylori pozitivnih in H. pylori negativni tumorji. Korelacija med CXCR4 in TNF-alfa izražanja v želodčnih vzorcih raka smo analizirali s testom rang korelacije Spearman je. Izražanje mRNA v celičnih linijah želodca je bila v primerjavi z uporabo Studentov t
-test ali eden od načinov ANOVA. Statistična analiza je bila opravljena s pomočjo SPSS verzija 11.0 (SPSS, Chicago, IL, ZDA). Razlika je zdelo pomembno, ko P
-vrednost je < 0,05.
Rezultati
Izražanje CXCR4 in TNF-α mRNA v primarnih želodčnega raka
CXCR4 mRNA je bila določena z realnem času povratne prepisovanje PCR v 34 želodca raka, in njen izraz v vsakem vzorcu je bila standardizirana GAPDH
izraz. Rezultati so pokazali, njegova raven bistveno višja v H. pylori pozitivnih želodčnega raka (n = 19) v primerjavi s H. pylori-negativnih (n = 15) (7,2-krat, P
< 0,01, slika 1A). V isti kohorti tumorjev, smo TNF-α mRNA izraz zaznali tudi v realnem času zaustavitev-transkripcijo PCR, in ugotovljeno je bilo, močnejši v H. pylori pozitivnih želodčnega raka v primerjavi s H. pylori-negativnih (4,3-krat, P
< 0,01, slika 1B). rang test korelacije Spearman je dodatno preveriti pozitivno korelacijo CXCR4 s TNF-a v teh 34 želodčnega raka (P
< 0,01, slika 1C). Slika 1 Izražanje CXCR4 in TNF-alfa mRNA v primarnih želodčnih rakih s PCR v realnem času. (A) in (B) H. pylori pozitivni želodčni rak (sivi stolpci, n = 19), izražene višjo raven CXCR4 (A) in TNF-alfa (B) mRNA v primerjavi s H. pylori-negativnih želodčnega raka (črni stolpci n = 15), * P
< 0.01. Vodoravne črte: sredstva ravni mRNA. (C) Raven CXCR4 mRNA korelira pozitivno z učinkovitostjo TNF-alfa mRNA v 34 želodčnih rakov, P
< 0.01. Črna romb: H. pylori-negativnih želodčni rak; siva romb. H. pylori pozitivnih želodčni rak
Indukcija CXCR4 in TNF-α izražanja H. pylori v želodcu rakavih celic
realnem času-PCR in Western blot so bili uporabljeni za ugotavljanje CXCR4 v MKN45 in HGC27 celice (slika 2A, B); in razkrila, da v njih po okužbi močno navzgor regulirana s H. pylori 26695 24 ur (P
< 0,01, oziroma sliki 2A, B). Kasneje so bili obdelani s OAS PAI-negativna H. pylori, Tx30a določiti svojo udeležbo v pozitivni vpliv, in to je tudi ugotovljeno, da povzroči CXCR4 v MKN45 in HGC27 celic (P
< 0,01, oziroma, Slika 2A B). Slika 2 Izražanje CXCR4 in TNF-α v MKN45 in HGC27 celice po okužbi s H. pylori. (A) in (B) CXCR4 izražanja je bila povečana pri MKN45 in HGC27 celice po okužbi s H. pylori 26695 (* P
< 0,01, oziroma vs
H. pylori-) ali Tx30a (* p
< 0,01, oziroma vs
H. pylori-). (C) in (D), TNF-α izraz se je povečal v MKN45 in HGC27 celice po okužbi z bakterijo H. pylori 26695 (* P
< 0,01, oziroma vs
H. pylori-) ali Tx30a (* P
< 0,01, oziroma vs
H. pylori-). Podatki so izraženi kot povprečje ± SD, n = 3.
Učinek okužbe H. pylori na TNF-alfa izražanja se je še v preiskavi s pomočjo PCR v realnem času in Elisa, in odkrivanje je pokazala, da okužba z 26695 ali Tx30a za 12 čas bi lahko privedlo do tako večjo ekspresijo TNF-alfa mRNA (P
< 0,01, oziroma) in več izločanje TNF-alfa proteina v supernatantu kulture (P
< 0,01 oz) v MKN45 in HGC27 celice (slika 2c, d).
Učinek infliksimab, nevtralizatorja protitelesa proti TNF-a, na indukcijo CXCR4 H. pylori
ugotovitev uravnavanjem TNF-α izražanja v tej zadevi, ki nas za nadaljnje raziskave o svoji vpletenosti v indukcijo CXCR4 H. pylori. A nevtralizacijo TNF-α protiteles, infliksimaba (4 ug /ml, Sigma) smo nato uporabili za zdravljenje MKN45 in HGC27 celice po okužbi z 26695, ter indukcija CXCR4 signifikantno inhibira (P
< 0,01 oz Slika 3A, B). Podobne rezultate so opazili, ko so te celice zdravijo z infliksimaba po okužbi s Tx30a (P
< 0,01, oziroma, Figure3C, D). Slika 3 Vpliv infliksimaba na indukcijo CXCR4 H. pylori. (A) in (B) CXCR4 pozitivni vpliv H. pylori povzroča 26.695 je zaviral MKN45 in HGC27 celicah po obdelavi z infliksimaba, * P
< 0,01, oziroma, vs
26.695 + inf. (C) in (D) CXCR4 Povecanje s H. pylori Tx30a povzroča je zaviral tudi MKN45 in HGC27 celic po zdravljenju infliksimaba, * P
< 0,01, oziroma, vs
Tx30a + inf. Podatki so izraženi kot povprečje ± SD, n = 3. inf. Infliksimab
uravnavanjem CXCR4 v želodcu rakavih celic z TNF-a
MKN45 celic, ki tajni nižjo stopnjo TNF-α proteina, smo obdelali z 1, 10, ali 50 ng /ml TNF-α (Sigma) za 6 ur v poskusu, da bi nadalje preučila vloge TNF-a v uravnavanjem CXCR4, in v realnem času PCR in odkrivanje Western blotting pokazala, da je bistveno molekul na način, odvisen od doze (P
< 0,01 Slika 4A, B) in tudi z 15,8 gub z 50 ng /ml zdravljenje TNF-alfa. Slika 4 uravnavanjem CXCR4 v želodčnih rakave celice, ki TNF-a. (A) in (B) CXCR4 izražanja je bila povečana pri MKN45 celic z eksogeno TNF-a na način, odvisen od odmerka, * P
< 0.01. (C) in (d) coculture sistem MKN45 in RAW264.7 celic, izražena bolj CXCR4, * P
< 0,001, vs
M; ** P
< 0,001, vs
R. Povecanje CXCR4 je zaviral po zdravljenju infliksimaba, *** P
< 0,001, vs
M + R + inf. M: MKN45; R: RAW264.7; inf: infliksimab. (E) Izražanje TNF-a je bil odsoten v HGC27 celicah po transfekciji s TNF-a sklepati RNAi plazmida. (F) CXCR4 mRNA izraz je navzdol reguliranih v HGC27 celicah po transfekciji s TNF-a sklepati RNAi plamid, * P
< 0,001, vs
št RNAi; ** P
< 0,001, vs
nadzor RNAi. Podatki so izraženi kot povprečje ± SD, n = bila preučena 3.
Nato izraz CXCR4 znotraj sistema co-kulture, saj je s tumorjem povezan makrofagov služi tudi kot vir TNF-a v želodčnem mikrookolju raka. Pomožna kultura MKN45 celic z RAW264.7 celicami za 24 ur indicirana bistveno bolj izražena CXCR4 mRNA in beljakovin (P
< 0,001, slika 4C, D); to povečanje pa je bistveno inhibira infliksimab (P
< 0,001, slika 4C, D)
Nazadnje je bil endogeni TNF-α usmerjena, da ovrednoti svojo uredbo o CXCR4 v HGC27 celicah, ki pospešuje izločanje višje. stopnja TNF-alfa proteina. TNF-a RNAi plazmida je bil uporabljen za transfekcijo HGC27 celice in ustrezno nonsilencing RNAi plazmida je bil zaposlen v kolegom kot kontrolo. Ugotovljeno je bilo, da je izražanje TNF-a ni v HGC27 celic po transfekciji s TNF-a sklepati RNAi plazmida (slika 4E). Nato je bila ekspresija CXCR4 zazna PCR v realnem času, je bilo ugotovljeno pri odkrivanju, da po transfekciji s TNF-a sklepati RNAi plazmida, CXCR4 mRNA izraz je znatno HGC27 celicah navzdol reguliranih, v primerjavi s celicami, s kontrolno RNAi ali celic brez RNAi (P
< 0,001, oziroma, Slika 4F). so
Indukcija citokinov v makrofagih s H. pylori
PCR v realnem času in Elisa zaposleni oceniti učinek H. pylori 26695 na izražanje citokinov v RAW264.7 celicah, saj je splošno priznano, da so citokini vpleteni pri kroničnih vnetnih procesih H. pylori. detekcija v realnem času PCR pokazala ekspresijo TNF-a, IL-1β in IL-6 mRNA bila povečana pri 26695-obdelanih celic v primerjavi z 26.695-nezdravljenimi celicami (TNF-a, P
< 0,001 IL-1β P
< 0,001 in IL-6, P
< 0,001, slika 5A). In rezultati Elisa navedeno več proteinov TNF-a, IL-1β in IL-6 smo izloča v supernatanta kulture pri 26695-obdelanih celic v primerjavi z 26695-nezdravljenimi celicami (TNF-a, P
< 0,001 IL-1β P
< 0,001 in IL-6, P
< 0,001, slika 5B). Slika 5 Indukcija citokinov v makrofagih s H. pylori. (A) in (B) Izražanje TNF-a, IL-1β in IL-6 smo povečana pri 26695 zdravljenih RAW264.7 celic * P
< 0,001, vs
neobdelanih celic. (C) in (D) Niti IL-1β ali IL-6 lahko upregulate CXCR4 v MKN45 celicah. Podatki so izraženi kot povprečje ± SD, n = 3.
Nazadnje MKN45 celice so bili zdravljeni z eksogeno IL-1β (50 ng /ml) in IL-6 (50 ng /ml), oziroma, da se izključi možnost, da IL -1β in IL-6 lahko upregulate CXCR4 kot TNF-a. Niti IL-1β ali IL-6 je bilo ugotovljeno, da upregulate CXCR4 občutno (slika 5C, D). Analiza
migracije
bila analiza Migracije narejena z invazijo komore Matrigel v poskusu, da razišče, ali je bilo molekul CXCR4 funkcionalno . V začetni fazi poskusa s 100 ng /ml CXCL12 v spodnjem domu, je bilo znatno povečanje (do 4,5 gube) v migracijo MKN45 celic z 26695 obravnavo v zgornji komori, v primerjavi s kontrolnimi celicami brez 26.695 zdravljenje (P
< 0,001, slika 6A). Kasneje pa je bilo povečanje inhibiran izredno ko AMD 3100 (1 ug /ml, Sigma), antagonist CXCR4, ali infliksimab, dodamo (P
< 0,01, oziroma, slika 6A). Slika 6 migracije študije. (A) MKN45 celice pokazala znatno povečanje njihove migracije po zdravljenju z 26695, * P
< 0,001, vs
nadzora. Povečanje migracije MKN45 celic, 26695 induciranih je zaviral, ko AMD 3100 (** P
< 0,01, vs
26.695 + AMD), ali infliksimaba (*** P
< 0,01, vs dodamo
26.695 + inf). AMD: AMD3100; inf: infliksimab. (B), TNF-α v povečanem priseljevanju MKN45 celic, * P
< 0,001, vs
nadzora. Niti IL-1β ali IL-6 lahko povečajo migracije MKN45 celic bistveno. Podatki so izraženi kot povprečje ± SD, n = 3.
Poleg tega je bilo preverjeno, tudi vpliv citokinov o migraciji MKN45 celic in TNF-α je bilo ugotovljeno (50 ng /ml), da znatno poveča migracijo MKN45 celic (P
< 0,001, slika 6B). Vendar je ne IL-1β (50 ng /ml) ali IL-6 (50 ng /ml) izkazal za pospeševanje celične migracije MKN45 znatno (slika 6B).
Razprava
H. pylori je kriv, da lahko okuži približno 50% svetovnega prebivalstva kot dokončno želodčne rakotvorna snov za ljudi [12]. Patogeneza svoje okužbe pogosto vključuje vnetje, poškodbe sluznice ali želodčne atrofija, in zahteva tesne interakcije med bakterijami in želodca epitelijskih celic, aktivacijo signalne poti, ki spreminja celičnih funkcij gostitelja, in vodi do kroničnih epitelijskih odgovorov [13.14]. Trenutno je precejšnje dokazi, ki povezujejo kronična vnetja človekovim raka [15-17], in zlasti, H. pylori, povzroča kronično vnetje in citokini v lokalnem želodcu mikrookolja služijo kot najpogostejše sodelavci [18-20]. Ta študija kaže rezultat, ki je bil sluznice raven TNF-alfa mRNA bistveno višja v H. pylori pozitivnih bolnikov, kot da je v negativnih bolnikih z uporabo kvantitativnega PCR v realnem času, in dva želodca rakave celice izločajo tudi TNF-alfa beljakovine in vitro. Nadalje opozarja na predpostavki, da TNF-α, lahko sodeluje v H. pylori pozitivno želodčne rakotvornost kot nepogrešljiv in močno povezovalnik med vnetja in raka [21].
Čeprav mehanizem indukcije TNF-a H. pylori ostaja relativno nejasna, je bila družina protein razkriti v zadnjem desetletju, vključno s Helicobacter pylori-membrane protein-1 (HP-MP1) in TNF-a indukcijskega beljakovin (Tipα) [22-24]. Tipα gen, označene s H. pylori sev 26695, je homologna s HP-MP1 gena z 94,3% homologijo, in oba pokazati veliko sposobnost, da izzove TNF-alfa izražanje genov. V študiji, H. pylori 26.695 je bilo ugotovljeno, da upregulate TNF-α izraz znatno MKN45 in HGC27 celic in CAG PAI negativnega seva Tx30a smo tudi opazili, da se inducira očitno, ki so lahko deloma posledica dejstva, da je HP-MP1 /Tipα družina ni v OAS PAI regiji. Vendar je bilo ugotovljeno tudi, da je bil učinek Tx30a na indukcije TNF-α šibkejši od 26695 (2.3 gub vs
3.1 gube v MKN45 celic), ki je predlagal H. pylori izdelkov v OAS se PAI lahko sodelujejo tudi v indukcija. Dejstvo je, da so poročali, da bi cagA H. pylori inducira TNF-a v želodcu raka biopsijo [25]. Poleg tega očistimo H. pylori ureazno Ugotovljeno je bilo tudi, da inducira MKN45 celic za izražanje TNF-a [26].
Je TNF-α, ključni citokinov pri številnih kroničnih vnetnih bolezni, prvotno označeni kot serumski faktor za indukcijo od hemoragične nekroze presajenih čvrstih tumorjev pri miših. Vendar trenutno je pogosto opredeljena kot promotor tumorjev v lokalni tumorja mikrookolja, in s tem izbrisa ali inhibicijo se predpostavlja, da se zmanjša pojavnost eksperimentalnih raka. TNF-alfa /TNF-R1 knock navzdol miši so odporni na-kemijsko inducirane rakotvornosti [27, 28]. Je pogosto zazna biopsijah iz različnih človeških rakih, izdelan bodisi s epitelnih tumorskih celicah ali stromalnih celic. Poleg tega je bilo tudi ugotovljeno, čeprav v nizki količini, pri izločanju številnih linij raka vitro brez vnetnih dražljaji, čeprav mehanizem še ni povsem jasno.
TNF-α je bilo ugotovljeno, da niso le vključeni v transformaciji celic in proliferacijo , ampak tudi v tumorske metastaze. Takšna ugotovitev je bila prvotno temeljil na živalskem modelu z rakom debelega črevesa, pri katerih injekcija LPS okrepljenega razvoja pljučnega metastaz odvisna od proizvodnje TNF-alfa, ki ga gostiteljskih celic [29]. Naknadni rezultati so pokazali povečano tumorskih metastaz z nevtralizacijo TNF-alfa protitelesa [30] zavrla. To je privedlo do naše špekulacije, da bo eden od osnovnih mehanizmov TNF-a v tumorske metastaze je lahko povezano z uravnavanjem Kemokini /kemokinskih receptorjev. Najprej je bil pomemben Povecanje od CXCR4 v želodčnih rakavih celic, potem ko so bili zdravljeni z eksogeno TNF-a. Tam je bil še en očiten Povecanje CXCR4 v rakavih celicah, ko so co-gojili z makrofaga, alternativni vir TNF-a v želodcu mikrookolja raka. Kot je bilo pričakovati, bi to Povecanje se zavira TNF-alfa infliksimab nevtralizirajočih protiteles. Prišlo je zato izjemno zmanjšanje izražanja CXCR4 v HGC27 celic, potem ko je bil RNAi zaposleni razveljaviti ekspresijo na TNF-alfa v teh celicah, ki so pokazali endogenega TNF-a lahko upregulate tudi CXCR4. Splošne ugotovitve privedle do našega zaključka, da TNF-α, pri čemer sama vpletena v metastaz raka želodca, upregulates CXCR4.
Čezmerno CXCR4, čigar sodelovanje v različnih človeških tumorjev je znano, so pogosto opazili v želodčnih tkivih raka za povečanje želodčne metastaze raka. Nekatere človeške želodčne karcinoma celice tudi izražajo CXCR4 mRNA in proteina na visoki ravni [7, 8]. Naša raziskava je pokazala, H. pylori okužbe v povečanem priseljevanju MKN45 celic z uravnavanjem CXCR4. Zdravljenje z antagonistom AMD3100 CXCR4 povzročilo znatno omejevanje migracij MKN45 celic in vitro. Druga študija je pokazala, AMD3100 bistveno zatreti razvoj peritonealno karcinomatozo v mišjem modelu raka želodca, kar je razvidno iz zmanjšanja rasti tumorja in ascitic postavitev tekočine [9]. Prejšnje raziskave so privedle do našega zaključka, da CXCR4 overexpression v biopsijo vzorcu primarnega raka želodca služijo kot predoperativno ocenjevanje tveganj za nastanek peritonealno karcinomatozo. Vključevanje
makrofagov "v kancerogenosti in tumorske invazije in metastaz [31, 32 ] na splošno kriviti motivirati TAMs (tumor povezan makrofagov), glavni vir TNF-a v tumorskega mikrookolja, da se sprosti različnih rastnih faktorjev, citokinov in vnetnih mediatorjev. Študija je pokazala, da je pomemben izraz TNF-a, ki ga povzroča H. pylori, in hkrati Povecanje IL-1beta in IL-6 v RAW264.7 celicah, pa ta sprememba ni inducira CXCR4 v MKN45 celicah.
Študije so na koncu pripisana nenormalno aktivacije NF-κB na rakave celice na prekomerno izločanje TNF-a, katere vloga v CXCR4 uravnavanjem se nato domneva, da so povezane s potmi, ki jih povzroča NF-κB. Ugotovitve drugi so pokazali, TNF-α antagonisti lahko zavirajo uravnavanjem CXCR4 H. pylori, in tako je in CXCR4 antagonisti lahko zavre povečano migracijo želodčnih rakavih celic in vitro. Ti rezultati kažejo, da samo ti antagonisti, ali v kombinaciji z drugimi zdravili, lahko služijo kot učinkovite terapije za bolnike z rakom želodca.
Sklepi
TNF-α se ukvarja z uravnavanjem CXCR4 raka želodca s H. inducirane pylori.
deklaracij
Zahvala
to delo je bilo podprto z nepovratnimi sredstvi iz oddelka za izobraževanje, Liaoning province, Kitajska (2009A751). originalne predložene datoteke
avtorjev za slike
Spodaj so povezave originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12885_2009_2218_MOESM2_ESM.tiff avtorjev 12885_2009_2218_MOESM1_ESM.tiff avtorjev prvotne datoteke za prvotno datoteke za sliko 3 12885_2009_2218_MOESM4_ESM.tiff avtorjev Slika 2 12885_2009_2218_MOESM3_ESM.tiff avtorjev prvotne datoteke za sliko 4 prvotne datoteke 12885_2009_2218_MOESM5_ESM.tiff avtorjev za sliki 5 izvirna datoteka 12885_2009_2218_MOESM6_ESM.tiff avtorjev na sliki 6 nasprotujočimi si interesi
avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Interlevkin-23A je povezana z rastjo tumorja pri raku s Helicobacter-povezanih pylori humane želodčne
• Najpogostejši robotski postopki bariatrično: pregled in tehnični vidiki