Uključivanje faktora nekroze tumora-a u ranijim koracima ekspresiju u CXCR4 raka želuca inducirane Helicobacter pylori

uključivanju faktora nekroze tumora-a u ranijim koracima ekspresiju u CXCR4 raka želuca inducirane Helicobacter pylori pregled apstraktna pregled Pozadina
H. pylori, čiji je infekcija povećava napade tumora i metastaza, općenito je označen kao najjači faktor rizika za razvoj karcinoma želuca. Čini se da ne bude slučajnost da je i pretjerano izlučivanje CXCR4 i očito sudjelovanje u želučanom metastaza raka. Cilj ove studije pokušava istražiti i dalje uspostaviti vezu između njih. S H. pylori kao snažni induktor TNF-a, da li TNF-α, promotor tumora, sudjeluje u indukciji CXCR4 izražavanja H. pylori je također pod istraživanja u ovoj studiji. Pregled metoda
Expression za CXCR4, TNF-a, IL-6 i IL-1 mRNA određena je u realnom vremenu PCR. CXCR4 ekspresija proteina je otkriven pomoću Western blot-a. Koncentracije TNF-a, IL-6 i IL-1 u supernatantu stanične kulture su mjereni pomoću Quantikine ELISA kompleta. Ukinuti TNF-α izraz u HGC27 stanicama, TNF-a RNAi plazmid je korišten kako bi ih transfckciju. | Rezultati
Razine CXCR4 i TNF-alfa mRNA bila je značajno viša u H. pylori pozitivnih želučanog karcinoma (n = 19) u odnosu na H. pylori negativnih (n = 15). Naknadno Spearmanov rang korelacije test pokazao je postojala pozitivna korelacija između razine CXCR4 mRNA i da TNF-a u 34 osnovnih želučanog karcinoma. Ostali rezultati slijedi: Ekspresija CXCR4 i TNF-a je reguliran u rak želuca stanica MKN45 i HGC27 nakon infekcije s H. pylori 26.695 (cag PAI +) ili Tx30a (cag PAI -); Indukcija CXCR4 ekspresiju H.pylori značajno inhibira neutralizaciju TNF-α antitijela, infliksimab; CXCR4 ekspresija reguliran u MKN45 stanica nakon tretiranja s egzogenim TNF-a ili ko-kulturom sa makrofaga, te je podreguliran za HGC27 stanicama nakon transfekcije s TNF-a RNAi plazmida. Došlo je do značajnog povećanja u migraciji MKN45 stanica tretiranih s H. pylori 26695, a jaka inhibicija kada AMD 3100, A CXCR4 antagonist, ili infliksimab, dodaje se. Pregled Zaključci
Naši rezultati pokazali su da je H. pylori regulira povišenje izraz CXCR4 kod raka želuca kroz TNF-a. pregled Pozadina
dobro je prihvaćeno da Helicobacter pylori (H. pylori) je snažan faktor rizika za razvoj različitih želučanih bolesti, a to su kronični gastritis, peptički ulkus, limfom želučane sluznice povezano limfoidno tkivo i rak želuca, te je potvrdila da interakcija između H. pylori i epitelnih stanica pridonosi takav razvoj. U stvari, H. pylori infekcija uzrokuje upalu u mikrookolini želucu povezane s indukcije proupalnih citokina kao što je faktor nekroze tumora-a (TNF-a), interleukin-1B (IL-1) i IL-6 [1-3 ], što čini želuca karcinogeneze pogoduju.
H. pylori infekcije također povećava napade tumora i metastaza [4-6], iako je mehanizam još uvijek nije dobro shvaćen. Proces metastaza raka nije slučajan, te različite vrste raka imaju svoje željene navođenje mjesta. Baš kao i ljudima leukocita, migracije tumorske stanice kritički se regulira sustav kemokina /kemokina receptora. Drugi fokus naše pažnje je prolio na CXCR4, najčešće kemokin receptora izraženo u nizu raka (rak želuca uključen) daleko [7, 8]. Istraživanja su pokazala CXCL12 /CXCR4 os je uključen u želučanom metastaza raka [9]. Stoga budi veliki interes kako bi pronašli vezu između infekcije H. pylori i CXCR4 prekomjerne ekspresije kod raka želuca.
Jedan od ključnih kemijskih medijatora umiješane u raka povezan s upalom je TNF-α, a sada postoji značajan dokaz u njegovu umiješanost u promociju i progresiju eksperimentalnih i humanih karcinoma [10, 11]. Točno u svoje ime, visoke doze regionalne TNF-a može dovesti do hemoragijskog nekroze putem selektivnog uništavanja tumorskih krvnih žila. Međutim, neočekivano može djelovati kao endogeni promotor tumora kada se proizvodi u mikro tumora. Naš interes prema tome se usmjeruje sudjelujući u indukciji CXCR4 ekspresije H. pylori, moćan induktora TNF-a, što je poznato u povećanju niz citokina, kemokina, adhezijske molekule i faktora rasta u raka. Pregled metode
rak želuca stanične linije i uzorci tkiva
ljudskog želučanog stanicu raka MKN45 i HGC27 dobiveni su od keygen Biotech. Co. (Nanjing, Kina) i uzgajane su u RPMI 1640 oplemenjenom s 10% fetalnog goveđeg seruma na 37 ° C u vlažnoj inkubatoru sa 5% CO 2. 34 osnovnih želučani uzoraka raka nabavljeni od pacijenata u radu, sa svim svojim informiranog pristanka na Shengjing bolnici, kineski Medical University, te su zamrznuti u tekućem dušiku odmah nakon kirurškog uklanjanja. Haematoxylin- i eozinom-bojanja su pripremljeni za procjenu postotka tumorskih stanica, i to samo kod uzoraka > 70% tumorske stanice su odabrane za analizu. Ovo istraživanje je provedeno uz odobrenje etičkog povjerenstva Kine Medicinskom fakultetu Sveučilišta. Svi eksperimenti su učinjeni najmanje tri puta.
Makrofaga stanične linije RAW264.7
makrofaga stanica RAW 264.7 dao je American Type Culture Collection (Rockville, MD, SAD), te je održavana u Dulbecco modificiranom Eagle mediju , uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma, na 37 ° C u vlažnoj inkubatoru s 5% CO 2. pregled H. pylori sojeva pregled H. pylori soj 26695 (ATCC 700392, CAG PAI +) i Tx30a (ATCC 51932, CAG PAI -) su ponuđena ATCC (Rockville, MD, USA). Su rasle na nosačima agara ovčje krvi na 37 ° C u microaerophilic uvjetima. Bakterije se transferira, nakon 48 sati u Brucella buljonu koji je sadržavao 5% fetalnog telećeg seruma tijekom 24 sata. Višestrukost infekcije od 100 korišten je u svim studijama.
Realnom vremenu reverznom transkripcijom PCR pregled Ukupna RNA je izolirana iz tkiva i staničnih linija Trizol (Takara, Dalian, Kina) prema protokolu koji ste dobili od proizvođača. cDNA bila je sintetizirana pomoću Takara RNA PCR kit 3,0 (Takara, Dalian, Kina) u ukupnom volumenu od 10 ul, koji sadrži AMV reverzne transkriptaze, 0.5 ul; slučajna 9 primer, 0.5 ul; 25 mM MgCl 2, 2 ul; 10 × RT Buffer, 1 ul; dNTP smjese (svaki 10 mM), 1 ul; inhibitor RNaze, 0.25 ul; RNA 1 ul; dH 2O, 3,75 ul. Uvjeti za RT bili su: 30 ° C tijekom 10 minuta, 42 ° C tijekom 25 minuta, 99 ° C tijekom 5 minuta i 5 ° C tijekom 5 minuta. Real-time PCR je provedena korištenjem LightCycler sustav zajedno s LightCycler DNA Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Ukupni volumen je 20 ul, koji sadrži 25 mM MgCl 2, 3 ul; 10 T pufer, 5 ul; 10 uM naprijed Primer 1 ul; 10 uM zadnji primer, 1 pl; LightCycler DNA Master SYBR Green I, 2 ul; cDNA, 2 ul; dH 2O, 6 ul. Uvjeti PCR bili su: 50 ° C tijekom 2 minute, 95 ° C tijekom 10 minuta, a zatim 40 ciklusa od 5 sekundi na 95 ° C i 20 sekundi na 60 ° C. Domaćinstva gena gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH pregled) je korišten kao internom kontrolom. Genska ekspresija kvantificira komparativne CT metodom, normalizaciju CT vrijednosti GAPDH Netlogu i izračunavanje relativne vrijednosti ekspresije. Sekvencijama su osigurale Takala (Dalian, Kina) kako slijedi: CXCR4 pregled naprijed, 5'-GAGGAAATGGGCTCAGGG-3 ', obrnuti, 5'-AGTCAGCAGGAGGGCAGGGA-3'; TNF-α
naprijed, 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 ', natrag, 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3'; IL-1β pregled naprijed, 5'-CCACCACTACAGCAAGGG-3 ', obrnuti, 5'-GAACTGGGCAGACTCAAA-3'; IL-6
naprijed, 5'-CCTTCGGTCCAGTTGCCTTCT-3 ', obrnuti, 5'-GCATTTGTGGTTGGGTCA-3'; GAPDH
naprijed, 5'-GGGAAACTGTGGCGTGAT-3 ', obrnuti, 5'-AAAGGTGGAGGAGTGGGT-3'.
Western blot
Stanični lizati pripremljeni su u puferu za uzorke [50 mmol /L Tris-HCl (pH 6.8 ), 100 mmol /L DTT, 2% SDS, 0,1% bromfenol plavo i 10% glicerola] i podvrgnuto je 12% natrij dodecil sulfata (SDS) /akrilamidnom gelu. Proteini na akrilamidnom gelu je prenijeta u najlonsku membranu, koji je blokiran tijekom noći (4 ° C u PBS-u s 0,1% Tween i 10% mlijeka u prahu). Antitijela za za CXCR4 (Santa Cruz, CA, Amerika) i odgovarajućih sekundarnih protutijela (Santa Cruz, CA, Amerika) primijenjeni su prije imuno. Humani gen β-aktin pregled (Santa Cruz, CA, Amerika) je korištena kao interna kontrola. Mrlje su vizualizirani sa FX Pro Plus sustava (Bio-Rad) i kvantificirati pomoću potomak image 4,03 softver. Pregled RNA interferencije
TNF-a RNAi plazmida i nonsilencing kontrola RNAi plazmid su kupljeni od Takala (Dalian, Kina). Stanice su nasađene u 24 jažica gustoćom od 2 × 10 5. Sljedećeg dana, stanice su transfektirane s TNF-a ili siRNA upravljačku siRNA pomoću lipofektamina 2000 (Invitrogen, United Kingdom) u skladu s uputama proizvođača.
EUSA za citokine u staničnim supernatantima kultura
koncentracija TNF-a, IL-1β i IL-6 u supernatantu stanične kulture su mjereni pomoću Quantikine ELISA kit (Boster, Wuhan, Kina) u skladu s uputama proizvođača. Osjetljivost testa bila je 2 pg /ml za TNF-a, 4 pg /ml za IL-1 i 4 pg /ml za IL-6.
Migracije Testovi
migracije uzgojenim stanicama je mjeren koristeći Matrigel invazija komora (24 i format, 8 um pora, BD Pharmingen). Stanice (5 × 10 5) su dodani u gornju komoru i mediju uz CXCL12 (100 ng /ml, Sigma) je dodan u donju komoru. Migracija Analize su inkubirane tijekom 18 sati pri 37 ° C i 5% CO 2. Migrirale stanica na donjoj strani su obojene upotrebom 1% toluidinskim modrilom nakon fiksiranja sa 100% metanolom. Za svaku bunara, broju migrirali stanica u 10 srednjih polja snaga (× 20) se broje. Pregled, Statistička analiza
Mann-Whitney U-test
je korišten za usporedbu ekspresije mRNA između H. pylori pozitivni i H. pylori negativnih tumora. Korelacija između ekspresije CXCR4 i TNF-a ekspresije u želučanim uzoraka raka je analiziran pomoću Spearmanov rank korelacija test. Ekspresija mRNA u staničnim linijama želučanim uspoređen upotrebom Studentovog t-test pregled ili jedan od načina ANOVA. Statistička analiza je provedena pomoću SPSS verzija 11.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Razlika je smatran kao značajan kada P
-vrijednost bila je < 0,05. | Rezultati
Izražavanje CXCR4 i TNF-α mRNA u osnovnoj karcinome želuca
CXCR4 mRNA je određena u realnom vremenu s reverznom transkripcijom PCR u 34 želučanog karcinoma, a njegova ekspresija u svaku vrstu standardiziran na GAPDH pregled izraz. Rezultati su pokazali da njegova razina značajno viša u H. pylori pozitivnih želučanog karcinoma (n = 19) u odnosu na H. pylori negativnih (n = 15) (7,2 puta, P Netlogu < 0.01, Slika 1A). U istoj skupini tumora, TNF-α Ekspresija mRNA također je detektirana u realnom vremenu reverznom transkripcijom PCR, te je ustanovljeno jači u H. pylori pozitivnih želučanog karcinoma u usporedbi s H. pylori negativnih (4,3-struko, P pregled i 0,01, slika 1B). Spearmanov rang korelacije testa dodatno potvrditi pozitivnu korelaciju CXCR4 izražavanja s TNF-a u tim 34 želučanog karcinoma (P izvoznici < 0,01, slika 1C). Slika 1 Ekspresija CXCR4 i TNF-a mRNA u primarnim karcinomima želuca u realnom vremenu PCR. (A) i (B) H. pylori pozitivnim karcinome želuca (sive kolone, n = 19) su izraženi višu razinu CXCR4 (A) i TNF-a (B) u odnosu na mRNA, H. pylori negativnih raka želuca (crni stupci n = 15), * P pregled < 0.01. Vodoravne linije: sredstva razini mRNA. (C) Razina CXCR4 mRNA koreliraju pozitivno sa onom TNF-a mRNA u 34 karcinome želuca, P
< 0.01. Crna romb: H. pylori negativni karcinome želuca; siva romb. H. pylori pozitivni karcinome želuca pregled Indukcija CXCR4 i TNF-α ekspresiju H. pylori u stanicama raka želuca
realnom vremenu PCR i Western blot se koristiti za detektiranje ekspresije CXCR4 u MKN45 i HGC27 stanice (slika 2a, b); i otkriti bitno reguliran u njima nakon infekcije s H. pylori 26695 24 sata (P pregled < 0,01, odnosno, Slika 2A, B). Nakon toga su bili tretirani s CAG PAI-negativnih H. pylori, Tx30a odrediti njegovu sudjelovanje u ranijim koracima, te je također pronađeno da se inducira izražavanje CXCR4 u MKN45 i HGC27 stanica (P pregled < 0.01, respektivno, na slici 2A , B). Slika 2 Ekspresija CXCR4 i TNF-α u MKN45 i HGC27 stanica nakon infekcije H. pylori. (A) i (B) ekspresije CXCR4 je reguliran u MKN45 i HGC27 stanica nakon infekcije s Helicobacter pylori 26695 (* P pregled < 0,01, odnosno vs
H. pylori-) ili Tx30a (* P
< 0,01, odnosno vs
H. pylori-). (C) i (D) TNF-α Ekspresija povećan MKN45 i HGC27 stanica nakon infekcije s Helicobacter pylori 26.695 (* P pregled < 0,01, odnosno vs
H. pylori-) ili Tx30a (* P pregled < 0,01, odnosno vs
H. pylori-). Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD, n = 3 pregled Učinak H. pylori na TNF-a ekspresije daljnja ispitivanja u stvarnom vremenu PCR i ELISA, i otkrivanje pokazuje da je infekcija sa 26695 ili Tx30a za 12 vrijeme može doveli u oba više ekspresiju TNF-a mRNA (P pregled < 0.01, respektivno), i više lučenje TNF-a proteina u supernatantu kulture (P pregled < 0.01, respektivno), u MKN45 i HGC27 stanica (Slika 2C, d).
Utjecaj infliksimab, neutralizaciju antitijela na TNF-a, na indukciji CXCR4 izražavanja H. pylori
nalaz pojačanja djelovanja TNF-α izraza u ovom slučaju donio nas na daljnje istraživanje o njegovoj umiješanosti u indukciji CXCR4 izražavanja H. pylori. Neutralizirajući TNF-α protutijela, infliksimab (4 ug /ml, Sigma), a zatim se koristi za liječenje i MKN45 HGC27 stanica nakon infekcije 26695, i da je indukcija CXCR4 bila značajno inhibirana (P pregled < 0.01, respektivno Slika 3A, B). Slični su rezultati opaženi kada ove stanice su tretirane s infliximab nakon infekcije Tx30a (P pregled < 0,01, odnosno Figure3C, D). Slika 3 Učinak infliximab za induciranje CXCR4 ekspresiju H.Pylori. (A) i (B) CXCR4 regulaciju izazvano Helicobacter pylori 26.695 inhibirane u MKN45 i HGC27 stanica nakon tretiranja s infliksimab, * P pregled < 0,01, odnosno, vs pregled 26.695 + inf. (C) i (D) CXCR4 regulaciju uzrokuje H. pylori Tx30a također inhibirana u MKN45 i HGC27 stanica nakon tretiranja s infliksimab, * P pregled < 0,01, odnosno, vs pregled Tx30a + inf. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD, n = 3 inf. Infliksimab pregled doreguliranje CXCR4 ekspresije u želučanom stanica raka za TNF-a
MKN45 stanica, koje tajni niže razine TNF-α proteina, pomiješa se sa 1, 10, ili 50 ng /ml TNF-α (Sigma) 6 sati u pokušaju da dodatno istražiti ulogu TNF-a u ranijim koracima CXCR4 izražavanja, i real time-PCR i Western blot detekcije otkrila je znatno regulira prema gore na način ovisan o dozi (P pregled < 0.01, Slika 4A, B), pa čak i do 15,8 nabora s 50 ng /ml TNF-a tretmana. Slika 4 doreguliranje CXCR4 ekspresije u želučanim stanica raka za TNF-a. (A) i (B) ekspresije CXCR4 je reguliran u MKN45 stanice egzogenim TNF-a na način ovisan o dozi, * P pregled < 0.01. (C) i (D) sukulture sustav MKN45 i RAW264.7 stanica izrazila je CXCR4, * P izvoznici < 0.001, vs
M; ** P izvoznici < 0.001, vs pregled R. uzlazni CXCR4 izražavanja je inhibirana nakon tretmana s infliksimab, *** P izvoznici < 0.001, vs
M + R + inf. M: MKN45; R: RAW264.7; inf: infliksimab. (E) Ekspresija TNF-a bila je odsutna u HGC27 stanica nakon transfekcije s TNF-a RNAi plazmida. Izraz (F) CXCR4 mRNA regulirani u HGC27 stanicama nakon transfekcije s TNF-a RNAi plamid, * P pregled < 0.001, vs pregled Bez RNAi; ** P izvoznici < 0.001, vs
kontrole RNAi. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD, n = 3 pregled Dalje, CXCR4 ekspresija u sustavu ko-kulture je ispitan, jer tumor-povezani makrofagi također poslužiti i kao izvor TNF-a u želučanom mikrookruženju raka. Ko-kultura MKN45 stanica s RAW264.7 stanica 24 sati pokazao znatno više izraženo CXCR4 mRNA i proteina (P izvoznici < 0,001, Slika 4C, D); to povećanje, međutim, značajno je inhibirana infliksimab (P izvoznici < 0,001, Slika 4C, D)
Konačno, endogenog TNF-α bio je usmjeren na procjenu svoje propis o CXCR4 izražavanja u HGC27 stanica, koje tajne veća. razina TNF-a proteina. TNF-a RNAi plazmida uporabljen za transfekciju HGC27 stanica i prema tome nonsilencing RNAi plazmid korišten kolega kao kontrola. Uočeno je da ekspresija TNF-a bila je odsutna u HGC27 stanica nakon transfekcije s TNF-a RNAi plazmid (Slika 4E). Zatim ekspresija CXCR4 detektira se u realnom vremenu PCR, te je navedeno u otkrivanju da nakon transfekcije s TNF-a RNAi plazmida, CXCR4 mRNA znatno regulirani u HGC27 stanicama, u usporedbi sa stanicama s kontrolnom RNAi ili stanica bez RNAi (P izvoznici < 0,001, Slika 4F). pregled Indukcija citokina u makrofagima H. ​​pylori pregled, u stvarnom vremenu PCR i Elisa su upotrijebljeni za procjenu učinka H. pylori 26695 na ekspresiju citokina u RAW264.7 stanice, budući da je općenito prihvaćeno da su citokini uključeni u kroničnim upalnim procesima uzrokovanih H.Pylori. Real-time PCR detekcije pokazali ekspresiju TNF-a, IL-1 i IL-6 mRNA reguliran u 26695-tretiranih miševa u odnosu na 26.695-netretirane stanice (TNF-a, P-
0,001; IL-1β P pregled < 0.001 i IL-6, P pregled < 0.001, Slika 5A). I ELISA rezultati ukazuju više proteina TNF-a, IL-1 i IL-6 je izlučen u supernatantu kulture u 26695 tretiranih stanica u usporedbi s netretiranim 26695-stanice (TNF-a, P-
0,001; IL-1β P pregled < 0.001 i IL-6, P pregled < 0.001, slika 5B). Slika 5 Indukcija citokina u makrofagima H. ​​pylori. (A) i (B) Ekspresija TNF-a, IL-1 i IL-6 je reguliran u 26695 tretiranih RAW264.7 stanica, * P pregled < 0.001, vs
netretirane stanice. (C) i (D) ni IL-1β, niti IL-6 se može povećati ekspresiju CXCR4 u MKN45 stanicama. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD, n = 3 pregled Konačno MKN45 stanice su tretirane s egzogenim IL-1 (50 ng /ml) i IL-6 (50 ng /ml), respektivno, kako bi se isključila mogućnost da IL -1β i IL-6 može doregulira ekspresiju CXCR4 kao što je TNF-a. Ni IL-1β, niti IL-6 je bilo utvrđeno da je povećati ekspresiju CXCR4 značajno (Slika 5C, D). Analiza pregled migracije pregled Migracija analiza izvršena je Matrigel invazijskoj komori u pokušaju da se istraži da li je upregulated CXCR4 je funkcionalna , U početnoj fazi eksperimenta s 100 ng /ml CXCL12 u donjem domu, postoji značajan porast (do 4,5 nabora) u migraciji MKN45 stanica s 26695 postupanje u gornjoj komori, u usporedbi s kontrolnim stanicama bez 26.695 tretman (P pregled < 0.001, slika 6A). Kasnije je, međutim, rast inhibirana značajno kada AMD 3100 (1 ug /ml, Sigma), A CXCR4 antagonist ili infliksimab, doda se (P
< 0,01, odnosno, slika 6A). Slika 6 Migration studiju. (A) MKN45 stanica su pokazali značajan porast njihove migracije u migracije nakon tretmana s 26695, * P pregled < 0.001, vs pregled kontrole. Povećanje migraciju MKN45 stanica induciranih 26695 inhibirana pri AMD 3100 (** P pregled < 0,01 vs
26.695 + AMD), i infliximab (*** P pregled < 0.01, vs pregled 26.695 + inf) je dodan. AMD: AMD3100; inf: infliksimab. (B) TNF-α povećava migraciju MKN45 stanica, * P pregled < 0.001, vs pregled kontrole. Ni IL-1β, niti IL-6 može povećati migraciju MKN45 stanica značajno. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD, n = 3 pregled Nadalje, učinak citokina migracije MKN45 stanica ispitana je i TNF-α je pronađen (50 ng /ml) da se poveća migraciju MKN45 stanica značajno (P pregled < 0.001, slika 6B). Međutim, ni IL-1β (50 ng /ml), niti IL-6 (50 ng /ml) je pokazala promicanja MKN45 migraciju stanica značajno (slika 6b). Pregled Rasprava pregled H. pylori se krivi da zarazi oko 50% svjetske populacije, kao konačni želučane karcinogene za ljude [12]. Patogeneza svojoj infekcije često uključuje upalu, sluznice štetu ili želuca atrofije, i zahtijeva bliske interakcije između bakterija i želučanih epitelnih stanica, aktiviranje signalnih putova, mijenjanja domaćina stanične funkcije, a što dovodi do kroničnih epitelne odgovori [13.14]. Sada postoje značajni dokazi koji povezuju kronične upale do raka u čovjeka [15-17], a posebno uzrokovane s H. pylori kronične upale i citokina u lokalnoj želucu mikro okolinu poslužiti kao najčešćih suradnika [18-20]. Ova studija ukazuje na rezultat da za sluznicu razina TNF-alfa mRNA je značajno viša u H. pylori pozitivnih bolesnika nego u negativnih pacijenata pomoću kvantitativne real-time PCR, a dvije želučane stanice raka također izlučuju TNF-a proteina in vitro. Nadalje ukazuje na pretpostavku da je TNF-α može biti uključeni u H. pylori pozitivnih želučane karcinogeneze kao neizostavni i jak veznika između upale i raka [21].
Iako mehanizam indukcije TNF-a H. pylori ostaje relativno nejasno, protein obitelj je objavljen u posljednjem desetljeću, uključujući i Helicobacter pylori membranski protein-1 (HP-MP1) i TNF-a za indukciju proteina (Tipα) [22-24]. Tipα gen identificiran s H. pylori soj 26695, homologna HP-MP1 gena s 94,3% homologije, i obojica pokazuju snažnu sposobnost da inducira ekspresiju TNF-a gena. U studiji, H. pylori 26.695 pronađen je u povećanju TNF-α izraz značajno MKN45 i HGC27 stanica, a CAG PAI negativan soj Tx30a također je uočio da ga potakne očito, koji može biti djelomično zbog činjenice da je HP-MP1 /Tipα obitelj nije u CAG PAI regiji. Međutim, također je istaknuo da je učinak Tx30a na indukcije TNF-α je slabiji od onog 26695 (2.3 naborima vs Netlogu 3.1 nabora u MKN45 stanica), koji je predložio H. pylori proizvode u CAG PAI mogu također biti uključeni u indukcija. U stvari, to je izvijestio da CagA H. pylori može izazvati TNF-a u želučanom biopsijom rak primjeraka [25]. Osim toga, pročišćen ureaza H. pylori također je nađeno da inducira MKN45 stanice za ekspresiju TNF-a [26]. Pregled TNF-α, ključni citokin kod mnogih kroničnih upalnih bolesti, izvorno je označen kao serumski faktor indukcije od hemoragičnog nekroze transplatiranih solidnih tumora kod miševa. Međutim, danas se obično identificiran kao promotor tumora u lokalnoj mikro okolinu tumora, a time i brisanje ili inhibicije Pretpostavlja se kako bi se smanjila učestalost eksperimentalnih raka. TNF-ai /TNF-R1 srušiti miševi su otporni na kemijski inducirane karcinogeneze [27, 28]. Često je otkrivena u biopsiji kod različitih ljudskih tumora, proizvesti bilo epitelnih stanica tumora ili stanice strome. Osim toga, također je nađeno, da se u male količine u izlučivanju mnogih karcinoma linije in vitro bez upalnih stimulativnih poticaja, iako je mehanizam još nije u potpunosti jasan. Utvrđeno je pregled TNF-α sudjeluje ne samo u transformaciji stanica i proliferacije ali i tumorskih metastaza. Takav rezultat u početku se temelji na životinjskom modelu s debelog crijeva, u kojima injekcije LPS poboljšane razvoj metastaza pluća, zavisno o proizvodnji TNF-a u stanicama domaćina [29]. Kasniji Rezultati su pokazali povećanu metastaziranje tumora inhibiraju neutraliziranje TNF-a antitijela [30]. To je dovelo do našeg nagađanja da je jedan od osnovnih mehanizama TNF-a u tumorske metastaze mogu biti u vezi s ranijim koracima kemokina /kemokina receptora. Prvo, došlo je do značajnog Doreguliranje CXCR4 u želučanim stanice raka, nakon što su liječi egzogenim TNF-a. Tu je još jedan očigledan uzlazni CXCR4 ekspresiju u stanicama raka, nakon što su bili ko-kultiviran s makrofaga, alternativni izvor TNF-a u želučanom mikrookoliša raka. Kao što se i očekivalo, to regulaciju može se inhibirati s TNF-a infliximab neutralizirajućih antitijela. Bilo je stoga izvanredan smanjenje ekspresije CXCR4 u HGC27 stanica nakon RNAi bio zaposlen ukinuti izraz TNF-a u tim stanicama, što ukazuje na endogeni TNF-a također može povećati ekspresiju CXCR4. Ukupna otkrića dovela su do zaključka da naš TNF-α, a sama uključena u metastazi raka želuca, regulira povišenje ekspresije CXCR4, pregled Prekomjerna CXCR4, čije djelovanje u različitim humanim tumorima je dobro poznato, često je zabilježena u želučanom tkivu raka povećati želučane metastaza raka. Neke ljudske stanice karcinoma želuca također izražavaju CXCR4 mRNA i proteina na visokim razinama [7, 8]. Naše je istraživanje pokazalo H. pylori infekcije povećana migracija MKN45 stanica putem u povećanju CXCR4 izražavanja. Liječenje s antagonistom AMD3100 CXCR4 rezultirala značajnim supresije migracije MKN45 stanica in vitro. Drugo istraživanje je pokazalo AMD3100 značajno suprimira razvoj peritonealnu karcinomatoza u mišjem modelu raka želuca, koji je o čemu svjedoči smanjenja rasta tumora i tvorbu ascites tekućinu [9]. Dosadašnjih istraživanja dovela do zaključka da naš CXCR4 pojačana ekspresija u uzorku dobivenom biopsijom primarnog karcinoma želuca može poslužiti kao preoperativnoj procjeni rizika za pojavu peritonejsku karcinomatoza. Sudjelovanje
makrofaga 'u karcinogeneze i tumorske invazije i metastaziranja [31, 32 ] uglavnom krivi motivirati TAMs (tumor povezan makrofagi), glavni izvor TNF-a u tumora mikro okoliš, da se oslobodi raznih faktora rasta, citokini i upalnih medijatora. Istraživanje je pokazalo bilo je značajna ekspresija TNF-a inducirana H. pylori i istovremeno Doreguliranje IL-1 beta i IL-6 u RAW264.7 stanice, međutim, drugi varijacije nije da se inducira izražavanje CXCR4 u MKN45 stanicama.
Studije na kraju pripisuje abnormalnu aktivaciju NF-kB u stanicama karcinoma u suvišnim izlučivanjem TNF-a, čija je uloga u CXCR4 ranijim koracima se zatim pretpostavlja da su povezane s putovima posredovanih NF-kB. Ostali rezultati su pokazali TNF antagonisti-α može spriječiti reguliranje prema CXCR4 izražavanja H. pylori, a kako je i CXCR4 antagonisti mogu suzbiti povećanu migraciju želučanih stanica raka in vitro. Ovi rezultati sugeriraju da ovi antagonisti sami ili u kombinaciji s drugim terapijama, mogu poslužiti kao učinkovitih terapija za pacijente s rakom želuca.
Zaključci
TNF-α sudjeluje u ranijim koracima ekspresiju u CXCR4 raka želuca inducirane H. pylori. pregled deklaracija
Zahvale pregled ovaj rad je podržan od strane grant od Odjela za obrazovanje, pokrajini Liaoning, Kina (2009A751).
autora originalne dostavljeni datoteke za slike
Ispod su linkovi za autora originalnih dostavljenih datoteka za slike. Izvorna datoteka za Slika 1 12885_2009_2218_MOESM2_ESM.tiff autorskim 12885_2009_2218_MOESM1_ESM.tiff autora izvorne datoteke za sliku 2 12885_2009_2218_MOESM3_ESM.tiff autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12885_2009_2218_MOESM4_ESM.tiff autorskim izvorne datoteke za Slika 4 izvorne datoteke 12885_2009_2218_MOESM5_ESM.tiff pisaca za lik 5 12885_2009_2218_MOESM6_ESM.tiff autora izvorna datoteka za Slika 6 suprotstavljenih interesa
autori izjavljuju da nemaju konkurentne interese. pregled

• Interleukin-23A je povezana s rastom tumora na Helicobacter pylori povezanih humanog karcinoma želuca
• Najčešće robotski postupci bariatric: pregled i tehnički aspekti