Вовлечение фактора некроза опухоли-альфа в повышающей регуляции экспрессии CXCR4 при раке желудка, вызванной Helicobacter Pylori

Вовлечение фактора некроза опухоли-альфа в повышающей регуляции экспрессии CXCR4 при раке желудка, вызванной Helicobacter Pylori
Аннотация
Справочная информация
H. Pylori, чья инфекция увеличивает инвазивность опухоли и метастазирование, как правило, помечены как самый сильный риск фактором для развития рака желудка. По-видимому, чтобы не быть совпадением, что существует также избыточная экспрессия CXCR4 и очевидное участие в желудочном метастазирования рака. Целью данного исследования предпринята попытка изучения и далее, чтобы установить связь между ними. С антихеликобактерную будучи мощным индуктором TNF-alpha, является ли ФНО-α, промотор опухолей, участвует в индукции экспрессии CXCR4 Х. пилори также находился под исследований в данном исследовании.
Методах
Экспрессия из CXCR4, TNF-alpha, IL-6 и мРНК IL-1 определяли с помощью ПЦР в реальном времени. экспрессия белка CXCR4, было обнаружено с помощью Вестерн-блоттинга. Концентрации TNF-alpha, IL-6 и IL-1 в культуре клеток супернатантов измеряли с использованием набора Quantikine ELISA. Расторгнуть TNF-α экспрессию в клетках HGC27 использовали TNF-a RNAi плазмиды для трансфекции их.

Результаты Уровни CXCR4 и ФНО-альфа мРНК были значительно выше у H. Pylori-положительных рака желудка (п = 19) по сравнению с H. Pylori-отрицательных (п = 15). тест ранговой корреляции А впоследствии Спирмена показал, наблюдалась положительная корреляция между уровнем мРНК CXCR4 и что ФНО-альфа в 34 первичного рака желудка. Другие результаты следуют: экспрессия CXCR4 и TNF-alpha была усиливается в клетку рака желудка MKN45 и HGC27 после заражения с антихеликобактерную 26695 (CAG PAI +) или Tx30a (CAG PAI -); Индукции экспрессии CXCR4 Х. пилори была значительно ингибировалась нейтрализующего ФНО-α антител, инфликсимаб; выражение CXCR4 было в MKN45 усиливает свою активность клеток после обработки экзогенной TNF-alpha или совместного культивирования с макрофагами, и подавляются в HGC27 клетках после трансфекции с TNF-alpha RNAi плазмиды. Существовал значительный рост миграции клеток, обработанных MKN45 хеликобактерной 26695, и сильное торможение, когда AMD 3100, антагонист CXCR4, или инфликсимаб, был добавлен.
Выводы
Полученные нами данные показали, что H. пилори CXCR4 выражение активирует при раке желудка через TNF-alpha.
Предпосылки
хорошо принято считать, что хеликобактер пилори (H.) является сильным фактором риска для развития различных заболеваний желудка, а именно хронический гастрит, пептические язвы, слизистой оболочки желудка-ассоциированной лимфоидной ткани лимфома и рак желудка, и признается, что взаимодействие между H. пилори и эпителиальных клеток, способствует такому развитию. На самом деле, инфекции H.pylori вызывает воспаление в микросреде желудка, связанного с индукцией провоспалительных цитокинов, таких как фактор некроза опухоли альфа (TNF-alpha), интерлейкин-1 β (ИЛ-1 β) и ​​ИЛ-6 [1-3 ], что делает желудочного канцерогенеза способствует.
H. инфекция пилори также увеличивает инвазивность опухоли и метастазирование [4-6], хотя механизм до сих пор не очень хорошо понял. Процесс метастазирования рака не является случайным, а также различные виды рака имеют свои предпочтительные сайты самонаведения. Так же, как торговля лейкоцитарной, миграция клеток опухоли критически регулируется системой хемокиновых рецепторов /хемокинов. Другим объектом нашего внимания проливается на CXCR4, наиболее распространенным рецептора хемокинов сверхэкспрессируется в ряде видов рака (рак желудка включен) на сегодняшний день [7, 8]. Исследования показали, ось CXCL12 /CXCR4 участвует в желудочном ракового метастазирования [9]. Поэтому она вызывает большой интерес, чтобы найти связь между инфекцией H. пилори и CXCR4 избыточной экспрессии при раке желудка.
Одним из ключевых химических медиаторов, замешанных в ассоциированных с воспалением злокачественных опухолей является TNF-α, и в настоящее время имеются существенные доказательства в его причастности в продвижении и развитии экспериментальных и злокачественных опухолей человека [10, 11]. Верный своему имени, высокие дозы регионального ФНО-альфа может привести к геморрагическим некрозом с помощью селективного разрушения опухоли кровеносных сосудов. Тем не менее, он может неожиданно выступать в качестве эндогенного промотора опухоли при продуцировании в опухоли микроокружения. Наш интерес, следовательно, обращается к его участие в индукции экспрессии CXCR4 Х. пилори, мощным индуктором ФНО-альфа, который, как известно апрегулируются ряд цитокинов, хемокинов, молекул адгезии и факторов роста в раковых образований.
Методы
желудочной клеточных линий рака и образцы ткани
человеческий клетку рака желудка MKN45 и HGC27 были получены из Keygen Biotech. Ко (Нанкин, Китай), и культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, при 37 ° C в увлажненной инкубаторе с 5% CO <югу> 2. 34 первичных образцов рака желудка были приобретены у пациентов при работе со всеми их информированного согласия на Shengjing больнице китайского медицинского университета, и были заморожены в жидком азоте немедленно после хирургического удаления. Haematoxylin- и эозином окрашивания срезы готовили для оценки процентного содержания опухолевых клеток, а только образцы с > 70% опухолевых клеток, были отобраны для анализа. Это исследование было проведено с одобрения этического комитета Китайского медицинского университета. Все эксперименты были проведены по крайней мере, три раза.
Макрофагальной клеточной линии RAW264.7
Результаты Макрофаг клеток RAW 264.7 была предоставлена ​​Американской коллекции типовых культур (Rockville, MD, США), и поддерживали в модифицированной среде Игла Дульбекко , с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка, при 37 ° C в увлажненной инкубаторе с 5% CO <суб> 2.
антихеликобактерную штаммы
H.pylori, штамм 26695 (ATCC 700392, CAG ИАП +) и Tx30a (ATCC 51932, CAG PAI -) были предложены АТСС (Rockville, MD, США). Они выращивали на чашках с агаром овечьей крови при 37 ° С в условиях микроаэрофилии. Бактерии были переданы через 48 Н в Brucella бульона, содержащего 5% фетальной бычьей сыворотки в течение 24 ч. Множественности заражения 100 использовали во всех исследованиях.
В режиме реального времени обратной транскрипции PCR
Общую РНК выделяли из тканей и клеточных линий с помощью Trizol (Takara, Далянь, Китай) в соответствии с протоколом, поставляемого производителей. кДНК синтезировали с использованием РНК-ПЦР с Takara 3.0 Kit (Takara, Dalian, Китай) в общем объеме 10 мкл, содержащий AMV обратной транскриптазы, 0,5 мкл; случайное 9 праймера, 0,5 мкл; 25 мМ MgCl <суб> 2, 2 мкл; 10 × RT буфера, 1 мкл; дНТФ смесь (10 мМ каждый), 1 мкл; ингибитор РНКазы, 0,25 мкл; РНК 1 мкл; дН <суб> 2O, 3,75 мкл. Условия RT были следующими: 30 ° С в течение 10 мин, 42 ° С в течение 25 минут, 99 ° C в течение 5 минут, и 5 ° C в течение 5 минут. ПЦР в реальном времени проводили с использованием системы LightCycler вместе с LightCycler ДНК Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Общий объем составляет 20 мкл, содержащей 25 мМ MgCl <суб> 2, 3 мкл; 10 × буфера, 5 мкл; 10 мкМ прямого праймера, 1 мкл; 10 мкМ обратного праймера, 1 мкл; LightCycler ДНК Master SYBR Green I, 2 мкл; кДНК, 2 мкл; дН <суб> 2O, 6 мкл. Условия для ПЦР были следующими: 50 ° С в течение 2 минут, 95 ° C в течение 10 минут, а затем 40 циклов 5 секунд при 95 ° C и 20 секунд при 60 ° С. Ген домашнего хозяйства глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH
) использовали в качестве внутреннего контроля. экспрессии генов определяли количественно сравнительным методом КТ, нормализации значения CT для GAPDH
и вычисления относительных значений выражений. Последовательности праймеров были предоставлены Такала (Dalian, Китай) следующим образом: CXCR4
вперед, 5'-GAGGAAATGGGCTCAGGG-3 ', обратный, 5'-AGTCAGCAGGAGGGCAGGGA-3'; ФНО-α
вперед, 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 ', обратный 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3'; ИЛ-1β
вперед, 5'-CCACCACTACAGCAAGGG-3 ', обратный 5'-GAACTGGGCAGACTCAAA-3'; ИЛ-6
вперед, 5'-CCTTCGGTCCAGTTGCCTTCT-3 ', обратный 5'-GCATTTGTGGTTGGGTCA-3'; GAPDH
вперед, 5'-GGGAAACTGTGGCGTGAT-3 ', обратный 5'-AAAGGTGGAGGAGTGGGT-3'.
Вестерн-блоттинга
Клеточные лизаты получали с образца буфера [50 ммоль /л Трис-HCl (рН 6,8 ), 100 ммоль /л ДТТ, 2% ДСН, 0,1% бромфенолового синего, и 10% глицерина], и подвергали 12% сульфата додецильная натрия (SDS) /акриламид геле. Белки на акриламид гель переносили на нейлоновую мембрану, которая была блокирована в течение ночи (4 ° С в PBS с 0,1% твина и 10% сухого молока). Поликлональные антитела для CXCR4 (Santa Cruz, CA, Америка), и соответствующие вторичные антитела (Santa Cruz, CA, Америка) применялись ранее иммуноблоттинга. Человеческого гена β-актина
(Santa Cruz, CA, Америка) использовали в качестве внутреннего контроля. Пятна визуализируют с помощью FX Pro Plus системы (Bio-Rad) и количественно оценивали с использованием Scion Image 4.03 программного обеспечения. Интерференции РНК

ФНО- RNAi плазмиды и nonsilencing управления RNAi плазмиду, были приобретены у Такала (Dalian, China). Клетки высевали в 24-луночный планшет при плотности 2 × 10 5. На следующий день, клетки трансфицировали TNF-альфа или миРНК управления миРНК с использованием Липофектамина 2000 (Invitrogen, Соединенное Королевство) в соответствии с инструкциями изготовителя.
Elisa для цитокинов в клеточных супернатантах культуры
концентрации TNF-alpha, IL-1β и IL-6 в супернатантах клеточных культур измеряли с использованием Quantikine Elisa набора (Boster, Ухань, Китай) в соответствии с инструкциями изготовителя. Чувствительность анализа составляла 2 пг /мл для TNF-alpha, 4 пг /мл для IL-1 и 4 пг /мл для ИЛ-6.
Миграции анализы
миграции культивируемых клеток анализировали с использованием Матригель вторжение камеры (формат 24-хорошо, мкм пор 8; BD Pharmingen). Клетки (5 × 10 5) добавляли в верхнюю камеру и среды с добавлением CXCL12 (100 нг /мл, Sigma) добавляли в нижнюю камеру. Анализы миграции инкубировали в течение 18 ч при температуре 37 ° С и 5% СО <суб> 2. Мигрировавших клеток на нижней поверхности окрашивали 1% толуидиновым синим после фиксации с 100% -ным метанолом. Для каждого Transwell, количество мигрировавших клеток, в 10 средних силовых полей (× 20) подсчитывали.
Статистический анализ
Манна-Уитни U
-test использовали для сравнения экспрессии мРНК между H. пилори-положительным и H. Pylori-отрицательных опухолей. Корреляция между экспрессией CXCR4 и экспрессии TNF-alpha в желудочном образцов рака были проанализированы с использованием тест ранговой корреляции Спирмена. Экспрессия мРНК в желудочном клеточных линий сравнивали с использованием т Стьюдента
-test или один из способов ANOVA. Статистический анализ проводили с использованием программы SPSS версия 11.0 (SPSS, Чикаго, Иллинойс, США). Разница считается значительным, когда P
-value была &л; 0.05.

Результаты Экспрессия CXCR4 и TNF-α мРНК в первичных рака желудка
CXCR4 мРНК определяли в режиме реального времени обратной транскрипции ПЦР в 34 рака желудка, и его экспрессия в каждом образце было стандартизировать GAPDH
выражение. Результаты показали ее уровень значительно выше у H. Pylori-инфицированных рака желудка (n = 19) по сравнению с H. Pylori-отрицательных (п = 15) (7.2 раза, P &
ЛТ; 0,01, 1А). В той же группе опухолей, экспрессия мРНК ФНО-α был также обнаружен в режиме реального времени обратной транскрипции PCR, и было обнаружено, сильнее в H. пилори-положительных рака желудка по сравнению с H. Pylori-отрицательных (в 4,3 раза, P
&л; 0,01, Фигура 1В). тест ранговой корреляции Спирмена дополнительно проверяется положительную корреляцию экспрессии CXCR4 с TNF-alpha в этих 34 рака желудка (P
&л; 0,01, рис 1C). Рисунок 1 Выражение CXCR4 и TNF-альфа мРНК в первичных рака желудка с помощью ПЦР в реальном времени. (А) и (В) антихеликобактерную-положительный рак желудка (серые столбцы, n = 19), выраженные более высокий уровень CXCR4 (А) и TNF-alpha (В) мРНК по сравнению с H. Pylori-отрицательных видов рака желудка (черные столбцы , п = 15), * Р &
л; 0.01. Горизонтальные линии: средство уровня мРНК. (C) Уровень мРНК CXCR4 был положительно коррелирует с этим мРНК TNF-alpha в 34 рака желудка, P &
ЛТ; 0.01. Черный ромб: H. Pylori-отрицательных рака желудка; серый ромб:. ​​H. пилори-положительных рака желудка
Индукция CXCR4 и TNF-α выражение Х. пилори в раковых клетках желудка
в режиме реального времени-ПЦР и Вестерн-блоттинга были использованы для выявления экспрессии CXCR4 в MKN45 и HGC27 клетки (Фигура 2А, В); и показывают, что существенно усиливает свою активность в них после заражения антихеликобактерную 26695 в течение 24 часов (P &
л; 0,01, соответственно, 2А, В). Впоследствии они были обработаны с CAG PAI-отрицательных H. Pylori, Tx30a, чтобы определить его причастность к повышающей регуляции, и это также индуцируют экспрессию CXCR4 в MKN45 и HGC27 клеток (P &
л; 0,01, соответственно, рис 2А , В). Рисунок 2. Экспрессия CXCR4 и TNF-α в MKN45 и HGC27 клетках после инфицирования H.pylori. (А) и выражение CXCR4 (В) повышающей регуляции в MKN45 и HGC27 клетки после инфицирования H.pylori, 26695 (* Р &
л; 0,01, соответственно, по сравнению
H. pylori-) или Tx30a (* р
&л; 0,01, соответственно, против
H. pylori-). (С) и TNF-α выражение (D), было увеличено в MKN45 и HGC27 клеток после инфицирования H.pylori, 26695 (* Р &
л; 0,01, соответственно, по сравнению
H. pylori-) или Tx30a (* P
&л; 0,01, соответственно, против
H. pylori-). Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, n = 3.
Эффект инфекции H.pylori на TNF-alpha экспрессии был исследован с помощью ПЦР в реальном времени и Elisa, и обнаружение показали, что инфицирование 26695 или Tx30a для 12 часов, возможно, привело как к дополнительной экспрессии мРНК TNF-alpha (P &
л; 0,01, соответственно) и более секрецию TNF-alpha белка в супернатант культуры (P &
л; 0,01, соответственно) в MKN45 и HGC27 клетки (рис 2C, D).
Влияние инфликсимаба, нейтрализующего антитела к ФНО-альфа, по индукции экспрессии CXCR4 по H. Pylori
нахождение повышающей регуляции TNF-α выражение в данном случае привел нам для дальнейших исследований на его участие в индукции экспрессии CXCR4 Х. пилори. Нейтрализующего ФНО-α антител, инфликсимаб (4 мкг /мл, Sigma), а затем был использован для лечения MKN45 и HGC27 клетки после заражения 26695, и индукция CXCR4 была значительно ингибирует (Р
≪ 0,01, соответственно , Фигура 3А, Б). Аналогичные результаты наблюдались, когда эти клетки были обработаны инфликсимаб после заражения Tx30a (Р
≪ 0,01, соответственно, Figure3C, D). Рисунок 3 Влияние инфликсимаба на индукции экспрессии CXCR4 по H.pylori. (А) и (В) CXCR4, повышающей регуляцией, индуцированное H.pylori, 26695 ингибируется в MKN45 и HGC27 клеток после лечения с помощью инфликсимаба, * Р &
л; 0,01, соответственно, против
26695 + инф. (С) и (D), CXCR4, повышающей регуляцией индуцируется хеликобактерной Tx30a также ингибируется в MKN45 и HGC27 клеток после лечения с помощью инфликсимаба, * Р &
л; 0,01, соответственно, против
Tx30a + инф. Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, n = 3. инф:. Инфликсимаб
Положительная регуляция экспрессии CXCR4 в желудочном раковых клеток с помощью TNF-alpha
клеток MKN45, что секрет более низкий уровень TNF-α белка, обрабатывали 1, 10, или 50 нг /мл TNF-α (Sigma) в течение 6 часов в попытке дальнейшего изучения роли TNF-alpha в повышающей регуляции экспрессии CXCR4, а также в режиме реального времени ПЦР и Вестерн-блоттинга обнаружения показал, что значительно усиливает свою активность в зависимости от дозы (Р &
л; 0,01, 4А, в), и даже 15.8 складок с 50 нг /мл лечения TNF-alpha. Рисунок 4 Положительная регуляция экспрессии CXCR4 в желудочном раковых клеток с помощью TNF-alpha. (А) и выражение CXCR4 (В) повышающей регуляции в клетках MKN45 экзогенными TNF-alpha в зависимости от дозы, * Р &
л; 0.01. (C) и (D) Совместное культивирование система MKN45 и RAW264.7 клеток выражены более CXCR4, * P
&л; 0,001, против
M; ** P
&л; 0,001, против
Р. повышающая регуляция экспрессии CXCR4 подавлялось после лечения инфликсимабом, *** P &
л; 0,001, против
M + R + инф. М: MKN45; R: RAW264.7; инф: инфликсимаб. (Е) Экспрессия TNF-alpha отсутствовал в HGC27 клетках после трансфекции TNF-alpha RNAi плазмид. Выражение (F) CXCR4 мРНК подавляются в HGC27 клетках после трансфекции с TNF-alpha RNAi plamid, * P
&л; 0,001, против
Нет RNAi; ** P
&л; 0,001, против
управления RNAi. Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, n = 3.
Далее, выражение CXCR4 в системе сокультуры исследовали, так как ассоциированные с опухолью макрофаги также служить в качестве источника TNF-alpha в желудочном микросреды рака. Долевой культивирование MKN45 клеток с RAW264.7 клетками в течение 24 часов, указанных она значительно более выраженной мРНК CXCR4 и белок (P
&л; 0,001, рис 4C, D); это увеличение, однако, была значительно тормозится инфликсимаба (P &
л; 0,001, рис 4C, D)
Наконец, эндогенная TNF-α был предназначен для оценки его регулирования на экспрессию CXCR4 в HGC27 клетках, секреты которой выше. уровень TNF-alpha белка. ФНО-альфа RNAi плазмиды использовали для трансфекции клеток HGC27, и соответственно nonsilencing RNAi плазмиду использовали в качестве контроля аналога. Было обнаружено, что экспрессия TNF-alpha отсутствовал в HGC27 клетках после трансфекции TNF-alpha RNAi плазмид (рис 4д). Тогда выражение CXCR4 был обнаружен ПЦР в реальном времени, и это было отмечено в обнаружении, что, после трансфекции с TNF-a RNAi плазмид, экспрессия CXCR4 мРНК значительно подавлена ​​в клетках HGC27, по сравнению с клетками с контрольной РНК-интерференции или клеток без RNAi (P &
л; 0,001, соответственно, рис 4F).
индукции цитокинов в макрофагах H. Pylori
ПЦР в реальном времени и Elisa были использованы для оценки влияния хеликобактерной 26695 на экспрессию цитокинов в RAW264.7 клетках, так как оно, как правило, признано, что цитокины участвуют в хронических воспалительных процессов, вызванных H. Pylori. В режиме реального времени обнаружения ПЦР показал экспрессию TNF-alpha, IL-1 и IL-6 мРНК в активируемых 26695-обработанных клеток по сравнению с 26695-необработанными клетками (TNF-alpha, P &
ЛТ; 0,001; IL-1β , Р
&л; 0,001 и ИЛ-6, Р
&л; 0,001, фиг.5А). И результаты иммуноферментного анализа показали более белков ФНО-альфа, IL-1 и IL-6 были секретируется в культуральный супернатант в 26695-обработанных клетках по сравнению с 26695-необработанными клетками (TNF-a, P
&ЛТ; 0,001; ИЛ-1β , Р
&л; 0,001 и ИЛ-6, Р
&л; 0,001, фиг.5В). Рисунок 5 индукции цитокинов в макрофагах H. Pylori. (А) и (В) Экспрессия TNF-alpha, IL-1 и IL-6 в повышающей регуляции 26695-обработанных клетках RAW264.7, * Р &
л; 0,001, против
необработанных клеток. (С) и (D) Ни один ИЛ-1β, ни IL-6 могут повышать экспрессию CXCR4 в MKN45 клетках. Данные выражены в виде среднего значения ± SD, п = 3.
Наконец MKN45 клетки обрабатывали экзогенного IL-1 (50 нг /мл) и IL-6 (50 нг /мл), соответственно, чтобы исключить возможность того, что IL -1β и ИЛ-6 может повышать экспрессию CXCR4 как TNF-alpha. Ни один ИЛ-1β, ни IL-6, было обнаружено, что повышать экспрессию CXCR4 значимо (5С, D). Анализ
миграции
анализ Электрофорез проводили с использованием вторжении камеры Matrigel в попытке исследовать, был ли повышающей регуляции CXCR4, функциональная , На начальном этапе эксперимента с 100 нг /мл CXCL12 в нижней палате, наблюдалось значительное увеличение (до 4,5 складок) в миграции клеток MKN45 с 26695 лечения в верхней камере, по сравнению с контрольными клетками без 26695 лечение (P
&л; 0,001, 6А). В дальнейшем, однако, увеличение подавлялось удивительно, когда AMD 3100 (1 мкг /мл, Sigma), антагонист CXCR4, или инфликсимаб, был добавлен (P &
Лт; 0,01 соответственно, на фиг.6А). Рисунок 6 изучения миграции. (А) MKN45 клетки показали значительное увеличение их миграции после обработки 26695, * Р &
л; 0,001, против
управления. Увеличение миграции клеток MKN45 индуцированных 26695 тормозилось, когда AMD 3100 (** P &
л; 0,01, по сравнению
26695 + AMD) или инфликсимаба (*** P &
л; 0,01, против
26695 + инф) был добавлен. AMD: AMD3100; инф: инфликсимаб. (В) TNF-α возросла миграция MKN45 клеток, * P
&л; 0,001, против
управления. Ни IL-1β, ни IL-6 может увеличить миграцию MKN45 клеток значительно. Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, n = 3.
Кроме того, было также исследовано влияние цитокинов на миграцию MKN45 клеток, и ФНО-α был найден (50 нг /мл), чтобы значительно увеличить миграцию MKN45 клеток (Р
&л; 0,001, 6Б). Тем не менее, ни IL-1β (50 нг /мл), ни IL-6 (50 нг /мл), было доказано, чтобы способствовать клеточной миграции MKN45 значительно (Рисунок 6B).
Обсуждение
H. пилори обвиняют заразить около 50% населения мира в качестве окончательного желудка канцероген для человека [12]. Патогенез его инфекции часто включает в себя воспаление, повреждение слизистой оболочки или атрофия желудка, и требует тесное взаимодействие между бактериями и желудочных эпителиальных клеток, активируя сигнальные пути, модификации хост-клеточные функции и приводит к хроническим эпителиальных реакций [13.14]. Есть в настоящее время значительные доказательства, связывающие хроническое воспаление в злокачественных опухолях человека [15-17], и, в частности, H. Pylori-индуцированной хроническим воспалением и цитокины в местной микросреды желудка служат в качестве наиболее распространенных авторов [18-20]. В этом исследовании подчеркивается, что результат через слизистую оболочку уровень TNF-альфа мРНК была значительно выше у H. Pylori позитивных пациентов, чем у пациентов с отрицательным с помощью количественной ПЦР в реальном времени, а также два рака желудка клетки также секретируется TNF-альфа белок в пробирке. Кроме того, он указывает на предположении, что TNF-α могут быть вовлечены в хеликобактерной положительный канцерогенез желудка в качестве непременного и сильного линкера между воспалением и раком [21]. Хотя
механизм индукции TNF-alpha Х. пилори остается относительно неясным, семейство белок, был раскрыт в последнее десятилетие, в том числе хеликобактерной-мембранный белок-1 (HP-MP1) и TNF-alpha, индуцирующего белка (Tipα) [22-24]. Tipα ген, идентифицировали с H.pylori, штамм 26695, гомологичен гену НР-MP1 с 94.3% гомологии, и оба из них демонстрируют сильную способность индуцировать экспрессию гена ФНО-альфа. В исследовании, антихеликобактерную 26695 было обнаружено, что апрегулируются TNF-α выражение значительно в MKN45 и HGC27 клеток, и CAG ИАП отрицательный штамм Tx30a также был замечен, чтобы вызвать его, очевидно, что может быть в частично из-за того, что НР-MP1 /семья Tipα не в CAG PAI регионе. Тем не менее, было также отмечено, что эффект Tx30a на TNF-α индукции был слабее, чем у 26695 (2,3 складок против
3.1 складками в клетках MKN45), которая предложила Pylori продукты H. в CAG PAI могут быть также вовлечены в индукция. На самом деле, это было сообщено, что CagA антихеликобактерной может индуцировать TNF-a в образцах биопсии рака желудка [25]. Кроме того, очищенный уреазы H.pylori был также найден, чтобы побудить MKN45 клетки выразить TNF-a [26].
ФНО-α, ключевого цитокина во многих хронических воспалительных заболеваний, первоначально был маркирован как сывороточный фактор для индукции геморрагического некроза трансплантированных твердых опухолей у мышей. Тем не менее, в настоящее время он обычно идентифицируется в качестве промотора опухоли в микроокружения опухоли и, следовательно, удаления или ингибирования, предполагается, чтобы уменьшить частоту экспериментальных видов рака. TNF-альфа /TNF-R1 сбить мышей устойчивы к химическим канцерогенез [27, 28]. Он часто обнаруживается в биоптатах из различных злокачественных опухолей человека, производят либо эпителиальных опухолевых клеток или клеток стромы. Кроме того, он также содержится, хотя и в малом количестве, в секреции многих линий рака в пробирке без воспалительных раздражений, хотя механизм до сих пор не совсем понятно.
ФНО-α был обнаружен не только участвует в трансформации и пролиферации клеток , но и в метастазировании опухолей. Такой вывод был первоначально основан на животной модели с раком толстой кишки, в которых инъекции LPS усиленного развития метастазов в легких зависит от производства TNF-alpha клетками-хозяевами, [29]. Последующие результаты показали повышенную метастазирование опухоли ингибируется нейтрализующих ФНО-альфа антитела [30]. Это привело к нашему предположению, что одним из основных механизмов TNF-alpha в метастазировании опухолей может быть связано с повышающей регуляции хемокинов /рецепторов хемокинов. Во-первых, существует значительная повышающая регуляция CXCR4 в желудочном раковых клеток после того, как они были обработаны экзогенной TNF-alpha. Был еще очевидна повышающая регуляция экспрессии CXCR4 в раковых клетках, после того, как они культивировали совместно с макрофагами, альтернативный источник TNF-alpha в желудочном микросреды рака. Как и следовало ожидать, это усиление активности можно ингибировать TNF-alpha инфликсимабом нейтрализующее антитело. Был, следовательно, на значительное снижение экспрессии CXCR4 в HGC27 клеток после того, как РНК-интерференция использовали для отменяют экспрессию ФНО- в этих клетках, что указывало на эндогенную TNF-a может также повышать экспрессию CXCR4. Общие выводы привели к нашему заключению, что TNF-α, с втянутым в метастазирование рака желудка, активирует экспрессию CXCR4.
Сверхэкспрессия CXCR4, чье участие в различных опухолей человека хорошо известно, часто наблюдалась в опухолевых тканях желудка увеличение желудка метастазирования рака. Некоторые желудочные клетки карциномы человека также выражают мРНК CXCR4 и белок на высоких уровнях [7, 8]. Наше исследование показало, хеликобактерной инфекции увеличилась миграция MKN45 клеток через повышающую регуляцию экспрессии CXCR4. Лечение с антагонистом AMD3100 CXCR4 привело к значительному подавлению миграции MKN45 клеток в пробирке. Другое исследование показало, AMD3100 значительно подавлено развитие перитонеального карциноматоза в мышиной модели рака желудка, который свидетельствует снижение роста опухоли и образованию асцитической жидкости [9]. Предыдущие исследования привели к выводу, что наш CXCR4 избыточная экспрессия в биопсии первичного рака желудка может служить в качестве предоперационной оценки рисков для возникновения перитонеального карциноматозом.
Участие макрофаги "в канцерогенеза и опухолевой инвазии и метастазированию [31, 32 ] как правило, обвиняют мотивировать тамс (ассоциированный с опухолью макрофаги), главный источник TNF-alpha в опухоли микроокружения, чтобы выпустить целый ряд факторов роста, цитокинов и медиаторов воспаления. Исследование показало, было значительное выражение TNF-alpha, индуцированный H. Pylori, и одновременно повышающая регуляция IL-1бета и IL-6 в клетках RAW264.7, однако, последнее изменение не способны индуцировать экспрессию CXCR4 в клетках MKN45.
Исследования в конечном счете, приписывали аномальную активацию NF-kB в клетках рака к избыточной секреции TNF-a, роль которого в CXCR4 повышающей регуляцией впоследствии предполагается, связаны с путями, опосредованных NF-kB. Другие результаты показали антагонисты TNF-α могут ингибировать активацию экспрессии CXCR4 Х. пилори, и оба это и антагонисты CXCR4 могут подавлять повышенную миграцию клеток рака желудка в пробирке. Эти результаты свидетельствуют о том, что только эти антагонисты, или в сочетании с другими видами терапии, могут служить в качестве эффективных способов лечения больных раком желудка.
Выводы
ФНО-α участвует в повышающей регуляции экспрессии CXCR4 при раке желудка, индуцированного H. Pylori.
декларациях
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом от Отдела образования провинции Ляонин, Китай (2009A751). оригинальные представленные файлы для авторов для изображений
Ниже приведены ссылки оригинальным представленных файлов авторов для изображений. 'Исходный файл для Рисунок 1 12885_2009_2218_MOESM2_ESM.tiff Авторского 12885_2009_2218_MOESM1_ESM.tiff авторов исходного файла для "исходного файла для фигурного 3 12885_2009_2218_MOESM4_ESM.tiff Авторского Рисунок 2 12885_2009_2218_MOESM3_ESM.tiff Авторского исходного файла для фигурного 4 исходного файла 12885_2009_2218_MOESM5_ESM.tiff Авторского на рисунке 5 Исходный файл 12885_2009_2218_MOESM6_ESM.tiff авторов для фигурного 6 конкурирующими интересами
авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

• Интерлейкин-23A связано с ростом опухоли в хеликобактер-пилори, связанной с желудка человека cancer
• Наиболее распространенные роботизированные бариатрической процедуры: обзор и технические aspects