Bevonása tumor nekrózis faktor-α az fokozza a CXCR4 expresszió gyomorrák által kiváltott Helicobacter pylori

Bevonása tumor nekrózis faktor-α az fokozza a CXCR4 expresszió gyomorrák által kiváltott Helicobacter pylori
Abstract
alapon
a H. pylori, akinek fertőzés növeli a tumor invazív és metasztázis, általában címkézett, mint a legerősebb kockázati tényező a gyomorrák kialakulásával. Úgy tűnik, hogy nem lehet véletlen, hogy van még egy túltermelése CXCR4 és nyilvánvaló részvétel gyomorrák áttét. A cél ennek a tanulmány megkísérli, hogy vizsgálja meg, és további létrehozni a kapcsolatot közöttük. H. pylori, hogy egy hatásos induktora a TNF-α, akár a TNF-α, a tumor promoter, amely részt vesz a indukciójában CXCR4 kifejezés a H. pylori által volt alatt is a kutatás ebben a vizsgálatban.
Módszerek
Expression CXCR4, a TNF-α, IL-6 és IL-1β mRNS-t határoztuk meg real-time PCR. CXCR4 fehérje expresszióját detektáltuk Western-blottal. A koncentrációkat a TNF-α, IL-6 és IL-1β a sejttenyészet felülúszójában mértük a Quantikine ELISA kit. Megszüntetéséről a TNF-α expresszió HGC27 sejtekben a TNF-a RNSi plazmidot használjuk transzfektálására őket.
Eredménye
szintje CXCR4 és a TNF-α mRNS szignifikánsan magasabb volt a H. pylori pozitív gyomor rákos megbetegedések (n = 19), mint a H. pylori negatív is (n = 15). A későbbiekben Spearman korrelációs tesztet azt mutatta, pozitív korreláció szintje CXCR4 mRNS és a TNF-α 34 primer gyomor rák. További találatok a következő: expressziója CXCR4 és a TNF-α-t fokozódik gyomorrák sejt MKN45 és HGC27 fertőzés után a H. pylori 26695 (CAG PAI +) vagy Tx30a (CAG PAI -); Az indukció CXCR4 kifejezés a H. pylori által gátolta jelentősen semlegesítő a TNF-α antitest infliximab; CXCR4 expresszióját felülszabályozott MKN45 sejtek kezelés utáni exogén a TNF-α vagy ko-kultúra makrofág volt, és downregulált a HGC27 sejtekben a transzfekció után a TNF-alfa RNSi plazmid. Volt egy jelentős növekedése a migráció a MKN45 kezelt sejtek H. pylori 26695, és egy erős gátlást, amikor az AMD 3100, egy CXCR4 antagonista vagy infliximab, adunk hozzá.
Következtetések
Eredményeink igazolták, hogy a H. pylori upregulálja CXCR4 expresszióra gyomorrák keresztül a TNF-α.
alapon
Általánosan elfogadott, hogy a Helicobacter pylori (H. pylori) egy erős kockázati tényezője a fejlesztés különböző gyomor betegség, nevezetesen a krónikus gyomorhurut, gyomorfekély, gyomornyálkahártya-asszociált lymphoid szövet limfóma és gyomorrák, és el kell ismerni, hogy a kölcsönhatás a H. pylori és a hámsejtek hozzájárul az ilyen fejlesztés. Tény, hogy a H. pylori fertőzés indukál gyulladás mikrokörnyezetében a gyomor társított indukciós proinflammatorikus citokinek, mint például a tumor nekrózis faktor-α (TNF-α), az interleukin-1β (IL-1β) és IL-6 [1-3 ], ami a gyomor carcinogenesis segíti.
H. pylori fertőzés is növeli a tumor invazív és metasztázis [4-6], bár a mechanizmusa még nem tisztázott. A folyamat a rák áttétek nem véletlenszerű, és a különböző ráktípusok általuk preferált irányítóhelyek. Akárcsak leukocitavándorlás, a tumorsejtek migrációját kritikusan szabályozzák kemokin /kemokin receptor rendszer. Egy másik figyelmünk középpontjában derül CXCR4, a leggyakoribb kemokinreceptor expresszálódik egy sor rák (gyomorrák tartalmazza) messze [7, 8]. Tanulmányok azt mutatták, CXCL12 /CXCR4 tengely részt vesz gyomorrák metasztázis [9]. Ezért kelt nagy érdeke, hogy megtalálja a kapcsolatot a H. pylori fertőzés és a CXCR4 túltermelése gyomorrákban.
Az egyik legfontosabb kémiai mediátorok játszanak a gyulladás okozta rákos megbetegedések TNF-α, és ma már jelentős bizonyítékok való részvételét promóciós és progresszió a kísérleti és az emberi rákok [10, 11]. Igaz, hogy a nevét, a nagy dózisú regionális TNF-α vezethet vérzéses elhalás keresztül szelektív elpusztítása tumor ereket. Azonban ez váratlanul jár, mint egy endogén tumor promoter amikor termelt tumor mikrokörnyezetében. Érdekünk, következésképpen húzott való részvételének az indukciós CXCR4 kifejezés a H. pylori által, egy potens indukálószer TNF-α, amelyről ismert, hogy upregulate egy sor citokinek, kemokinek, az adhéziós molekulák és a növekedési faktorok a rák.
módszerek
gyomorrák sejtvonalakat és szövetmintákban
A humán gyomorrák sejt MKN45 és HGC27 kaptuk Keygen Biotech. Co. (Nanjing, Kína), és RPMI 1640, kiegészítve 10% magzati borjú szérumot, 37 ° C hőmérsékleten nedves inkubátorban, 5% CO 2. 34 primer gyomorrák példányok beszerzése betegek működése azok minden tájékozott beleegyezését Shengjing kórházban, Kínai Orvosi Egyetem és befagyasztása folyékony nitrogénben azonnal műtéti eltávolítás után. Haematoxylin- és eozin-festéssel metszeteket készítettünk értékelését a százalékos tumorsejtek, és csak példányok > 70% tumorsejteket kiválasztott elemzésre. Ezt a vizsgálatot elvégezni jóváhagyásával etikai bizottság a Kínai Orvostudományi Egyetem. Minden kísérletet végeztünk legalább háromszor.
Makrofág sejtvonal RAW264.7
A makrofág sejt RAW 264.7 biztosította az American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA) volt, és Dulbecco-féle módosított Eagle-féle tápközegben , kiegészítve 10% magzati borjú szérumot, 37 ° C hőmérsékleten nedves inkubátorban, 5% CO 2.
H. pylori törzsek
H. pylori törzs 26695 (ATCC 700.392, CAG PAI +) és Tx30a (ATCC 51.932, CAG PAI -) által kínált ATCC-től (Rockville, MD, USA). Ezek növesztjük Sheep Blood agar lemezeket 37 ° C-on mikroaerofil körülmények között. A baktériumokat át 48 óra után a Brucella táplevesben, amely 5% magzati borjúszérumot 24 órán át. Fertőzési multiplicitással 100 használtunk minden vizsgálatban.
Valós idejű reverz transzkripciós PCR
Az összes RNS-t izoláltunk a szövetek és sejtvonalak által Trizol (Takara, Dalian, Kína) protokoll szerint által szolgáltatott gyártók. cDNS-t szintetizálunk, Takara RNA PCR 3.0 Kit (Takara, Dalian, Kína) összesen 10 pl térfogatban, amely AMV reverz transzkriptáz, 0,5 ul; random 9 primer, 0,5 pl; 25 mM magnézium- 2, 2 pl; 10 × RT-puffert, 1

• Az interleukin-23A társul tumornövekedést Helicobacter pylori összefüggő emberi gyomor- cancer
• A leggyakoribb robot bariatric eljárások: felülvizsgálat és a műszaki aspects