Plasma mRNA expressionsnivåer av BRCA1 och TS som potentiella prediktiva biomarkörer för kemoterapi i gastric cancer

plasma mRNA expressionsnivåer av BRCA1 och TS som potentiella prediktiva biomarkörer för kemoterapi i magcancer Bild Sammanfattning
mål
Personlig kemoterapi baserat på prediktiv biomarkörer kan maximera effektiviteten. Emellertid kommer tumörvävnad erhållen vid tidpunkten för diagnos inte speglar genetiska förändringar som observerats vid tidpunkten för sjukdomsprogression. Vi har undersökt om plasma-mRNA-nivåer kan vara ett surrogat för tumörnivåer i att förutsäga chemosensitivity.
Metoder
150 gastric cancerpatienter, var mRNA-nivåer av BRCA1 och TS bedömas i plasma och parade tumörvävnad. Mann-Whitney U-test användes för att jämföra mRNA expressionsnivåer mellan tumörprover uppvisar in vitro
känslighet eller resistens mot docetaxel och pemetrexed. Alla statistiska test var tvåsidiga resultat
Det fanns signifikanta korrelationer mellan plasma och tumör mRNA-nivåer av BRCA1 (rho = 0,696, P < 0,001). Och TS (rho = 0,620, P < 0,001). BRCA1 nivåer i plasma (docetaxel-känsliga: 1,25; docetaxel-resistenta: 0,50, P Hotel < 0,001) och tumör (docetaxel-känsliga: 8,81; docetaxel-resistenta: 4,88, P Hotel < 0,001) var positivt i samband med docetaxel känslighet. TS-nivåer i plasma (pemetrexed känslig: 0,90; pemetrexed resistent: 1,82, P Hotel < 0,001) och tumör (pemetrexed känslig: 6,56; pemetrexed resistent: 16,69, P Hotel < 0,001) var negativt associerad med pemetrexed känslighet.
Slutsatser
Plasma mRNA expressionsnivåer spegla de i tumören och kan ha en lovande eventuella roll som prediktiva biomarkörer för kemoterapi.
Nyckelord
Plasma mRNA Magcancer Chemosensitivity Predictive biomarkör HDRA Inledning
standard första linjens kemoterapi för lokalt avancerad eller metastaserad ventrikelcancer är cisplatin eller oxaliplatin i kombination med andra läkemedel, inklusive docetaxel och pemetrexed [1], [2]. Men fortfarande medianöverlevnad magra - cirka ett år. Ingen standardmetod för andra linjens behandling existerar, även om docetaxel har visat viss aktivitet [3]. Personlig kemoterapi baserad på mRNA uttryck för prediktiva biomarkörer kan bidra till att maximera behandlingens effektivitet och förlänga överlevnaden hos dessa patienter [3] - [8].
Bröstcancer känslighet gen 1 (BRCA1), en viktig komponent i flera DNA-skada reparation vägar och vägar som är involverade i cellulära svar på mikrotubuli skada, anses vara en differential modulator för överlevnad med cisplatin och taxaner. Prekliniska och kliniska studier har rapporterat att BRCA1 nivå av tumör förknippas med cisplatin och taxaner chemosensitivity. Tumör med högt uttryck av BRCA1 är 800 till mer än 1000 gånger känslig för docetaxel, men 10-1000-faldigt resistent mot cisplatin [4]. Vi har tidigare observerat att BRCA1 mRNA-nivåer i utgjutningar negativt samband med platinakänslighet men positivt samband med docetaxel känslighet i mag cancerpatienter [5]. Dessa upptäckter har validerats i gastric patienter som får andra linjens docetaxel: medianöverlevnad var 9,5 månader för dem med låga BRCA1 nivåer i primärtumör, 19,1 hos dem med mellanliggande nivåer, och 25,8 månader för dem med höga nivåer (P
= 0,006 ) [3]. Pemetrexed är en ny typ av vattenlösligt kinazolin folat analog, fungerar som en direkt och specifik tymidylatsyntas (TS) hämmare. Lågt uttryck av tymidylatsyntas (TS) har rapporterats vara associerade med svar på pemetrexed-baserad terapi i lungcancer [7], [8].
Tumörvävnad är den viktigaste källan för biomarkör undersökning för närvarande. Emellertid tumörvävnad kan ibland vara otillräcklig för genuttryck analys. Dessutom kan tumörvävnad som erhållits vid tidpunkten för diagnos inte speglar genetiska förändringar som observerats i samband med sjukdomsprogression [9], eftersom metastatiska och primära tumörer från samma patient kan variera på iska, epigenetiska och transcriptomic nivåer [9] - [ ,,,0],13]. Dessutom inledande kemoterapi kan själv ändra genuttryck nivåer [14], [15]. Cirkulerande tumörcellfria nukleinsyror kan därför vara en användbar, icke-invasiv verktyg för att spåra förändringar under behandlingen [10], vilket undanröjer behovet av en ny biopsi vid tidpunkten för fastställandet av bästa behandlingen. Dessutom kan det vara ett användbart surrogat när endast en liten mängd tumörvävnad är tillgänglig. Vår tidigare erfarenhet av lungcancer visade att epidermal tillväxtfaktorreceptor (EGFR) mutationer i serum skulle kunna vara en bra förutsägande markör för lungcancerpatienter som får EGFR tyrosinkinashämmare [16]. Dessutom kan plasma-TS-mRNA detekteras icke-invasivt i blod före operationen och expressionsnivån av plasma TS hade stor potential som prediktiva biomarkörer för raltitrexed känslighet i magcancer [17]. Hittills har dock, lite är känt om den potentiella användningen av plasma-mRNA för att förutsäga chemosensitivity av docetaxel och pemetrexed. Även om RNA släpptes i omlopp är stabil [10], [18], med för närvarande tillgängliga metoder, endast en liten mängd av mRNA kan erhållas från plasma eller serum, vilket begränsar både effektiviteten av mRNA extraktion och konsistensen av mRNA-analyser [10].
i den aktuella studien, antog vi en praktisk och bekväm metod för plasma-mRNA upptäckt, baserad på RNA rening och kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR), och använt denna metod för att undersöka om plasma-mRNA-nivåer kan vara ett surrogat för tumörnivåer förutsäga chemosensitivity -. först i en pilotstudie av 40 patienter och sedan i en total kohort av 150 patienter
Material och metoder
patienter
från oktober 2010 till juli 2011, 150 nyligen -removed gastric tumörer och parade blodprov från samma patienter erhölls från institutionen för onkologi och allmän kirurgi, Trumtornet sjukhus, Nanjing, Kina. Alla patienter har inte fått någon kemoterapi före operationen. Den färska gastric tumörer och blodprover hölls vid 4 ° C och skickas till laboratoriet inom 15 minuter efter provtagningen.
Studien godkändes av Institutional etikprövningsnämnden i Drum Tower Hospital anslutna till Medical School i Nanjing University, och skriftligt informerat samtycke tillhandahölls av alla patienter. Alla djurförsök utfördes i enlighet med den kinesiska Coordinating Committe on Cancer Research föreskrifter för djurens välfärd och djurskyddslagen. Alla analyser, inklusive drogkänslighetstestning, genuttryck analys och djurförsök utfördes av olika utredare som agerar individuellt utan kunskap om resultaten av de andra analyser.
Studiedesign
Vi först genomfört en pilotstudie i 40 patienter (Figur 1A). För varje tumörprov, var känsligheten för docetaxel och pemetrexed undersöktes in vitro Musik av histoculture läkemedelssvar analys (HDRA) [19] och in vivo Musik av xenotransplantat i modeller immundefekta möss [20] (Ytterligare fil 1: Figur S1 AB finns på nätet). Dessutom har både musen xenotransplantat och de ursprungliga färska tumörprover var formalinfixerade och paraffininbäddade (FFPE) för analys av BRCA1 och TS-mRNA-uttryck. BRCA1 och TS uttryck analyserades också i de parade blodprov. Figur 1 Flödesschema som visar patientens disposition och experiment. Pilotstudie på 40 patienter (A) och total kohort av 150 patienter med ventrikelcancer (B).
Baserat på resultaten från pilotstudien åtog vi att validera våra resultat i den totala kohorten 150 gastric cancerpatienter (Figur 1B ). I denna grupp, var samma procedur genomförs, med undantag för testning av chemosensitivity in vivo
. MRNA-nivåer i plasma och FFPE tumörvävnader av BRCA1 och TS bedömdes och Mann-Whitney U-test användes för att jämföra mRNA expressionsnivåer mellan tumörprover uppvisar in vitro
känslighet eller resistens mot docetaxel och pemetrexed.
för fullständig information om alla metodik, se Ytterligare fil 1, tillgänglig på nätet.
in vitro
chemosensitivity i pilotstudien och den totala kohort
Färska tumörvävnader skickades till laboratoriet i 4 ° C Hanks balanserade saltlösning med 1% penicillin /streptomycin. Prover tvättades med Hanks balanserade saltlösning två gånger och hackades till små stycken om cirka 10 mg, som därefter placerades på preparerade kollagenytor i 24-brunnars mikroplattor. Plattor inkuberades under 7 dagar vid 37 ° C i närvaro av droger lösta med RPMI 1640-medium innehållande 20% fetalt kalvserum och hölls i en fuktig atmosfär innehållande 95% luft-5% CO 2. Koncentrationer av läkemedel var 100 ^ g /ml för docetaxel [21], och 400 | ig /ml för pemetrexed [7]. HDRA förfaranden utfördes som rapporterats av Furukawa och medarbetare [19] med smärre ändringar. Hämningsvärdet beräknades genom att använda följande formel: hämningsgrad (%) = (1-T /C) x 100, där T är den genomsnittliga absorbansen för behandlad tumör /vikt och C är den genomsnittliga absorbansen för kontrolltumör /vikt. Samtliga prover klassificeras i känsliga och resistenta grupper som använder den minsta P
value-metoden som modifierats av Lausen och Schumacher [22].
In vivo
chemosensitivity i pilotstudien
Varje nyligen avlägsnad kirurgiskt tumör vävnad skars i bitar av 3 × 3 × 3 mm 3, som transplanterades inom 30 minuter till 9-18 atymiska möss med immunbrist, benämnd en "panel". I varje panel, när tumören växte till en storlek på 50-100 mm 3, möss med xenograft randomiserades till behandling med docetaxel 15 mg /kg /d, ip eller pemetrexed 20 mg /kg /d, ip eller ingen behandling (kontroll). Individuella tumörvolymer (V) beräknades genom formeln "V = (längd x bredd x bredd) /2" och jämfördes med värdena vid början av behandlingen för att erhålla den relativa tumörvolymen. Median behandlade mot kontrollvärden av relativ tumörvolym benämndes "hämningsgrad in vivo Review," och användes för att bedöma känsligheten för docetaxel eller pemetrexed.
MRNA uttryck i pilotstudien och den totala kohorten
Two milliliter blod samlades i EDTA-rör före operationen, hölls vid 4 ° C och skickas till laboratoriet inom 15 minuter. Totalt RNA från plasma extraherades med TRIzol LS och kloroform, och renas med PureLink RNA Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, USA). Totalt RNA från FFPE tumörvävnader extraherades i enlighet med en patentskyddad förfarande (den europeiska patentnummer EP1945764-B1). Efter RNA-extraktion och rening erhölls M-MLV omvänt transkriptas Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) användes för att generera cDNA för Q-PCR för att detektera uttrycket av β-aktin (ACTB - användes som endogen kontroll) och de gener som undersöktes . Varje sats av reaktions inkluderade en positiv kontroll från kommersiella human lunga och lever-RNA (Stratagene, La Jolla, CA, USA) såsom kalibratorer och negativa kontroller utan RNA och omvänt transkriptas. Templat cDNA amplifierades med specifika primrar och prober med användning av Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Relativa genuttryck kvantifieringar beräknades i enlighet med jämförelse Ct metoden. Slutresultat bestämdes av formeln mRNA-uttryck nivå = 2 - △△ Ct [6], [23] och analyserades med Strata programvara reproducerbarhet Mössor och stabiliteten i genuttryck analys i plasma
. reproducerbarheten för genuttryck-analysen testades samtidigt med två metoder. För den första metoden, togs blodprover från fem patienter som samlats in från den första dagen till den femte dagen före operation vid samma tidpunkt varje dag. Under denna period fick patienterna varken kemoterapi eller särskild behandling. Genuttryck nivåer (hög /mellan vs lågt) bestämdes för varje prov, och andelen identiska resultat beräknades för varje patient. För den andra metoden, togs blod en gång var och en från en ytterligare tio patienter, och varje prov uppdelades i fem alikvoter. Genuttryck nivåer (hög /mellan vs lågt) bestämdes för varje prov, och andelen identiska resultat beräknades för varje patient. Reproducerbarheten hastighet definierades som medelvärdet av alla 15 procentsatser (5 patienter från metod ett och 10 patienter från metod två).
För att testa stabiliteten av blodproverna, var olika plasma alikvoter av samma prov som framställts under olika villkor. Alikvoter inkuberades vid rumstemperatur eller på is under 30 min, 1 h, 1,5 h eller 2 h. QRT-PCR utfördes sedan, och rå ΔCt-värden av olika gen jämfördes med standardprotokoll (ΔCt = Ct gen-Ct ACTB).
Statistisk analys
Mann-Whitney U- test och Kruskal-Wallis test användes för att testa associationer mellan mRNA-nivåer och kliniska egenskaper och mellan känslighet för varje kemoterapeutiskt medel och kliniska egenskaper. Spearman rank korrelationstest användes för att bedöma korrelationen mellan in vivo Köpa och in vitro
hämningsnivåer och mellan plasma och tumör-mRNA expressionsnivåer. Mann-Whitney U-test användes för att jämföra mRNA expressionsnivåer mellan tumörprover uppvisar in vitro
känslighet eller resistens mot docetaxel och pemetrexed. Mottagare driftsegenskaper (ROC) kurvor konstruerades för att bedöma känslighet, specificitet, och respektive områden under kurvorna (AUC) med deras 95% konfidensintervall (CIS). Vi undersökte den optimerade cut-off-värde för förutsägelse genom att maximera summan av känslighet och specificitet och minimera det totala felet (kvadratroten av summan [1-känslighet] 2 + [1-specifi stad] 2) och genom att minimera avståndet mellan cut-off-värdet till det övre vänstra hörnet av ROC kurvan [24]. Alla statistiska test var tvåsidiga och signifikans sattes vid P Hotel < 0,05 (dubbelsidig). Alla analyser utfördes med användning av SPSS, version 16,0.
Resultat
Kännetecken för alla patienter visas i tabell 1. En majoritet av patienterna var hannar (73,3%), och den dominerande histologi var adenokarcinom. Nittiofyra (62,7%) patienter hade stadium III sjukdom. Lymfkörtelmetastaser var närvarande i 115 (76,7%) patients.Table 1 Patient egenskaper
Karakteristiskt
Förstudie
Total kohort *
N = 40

N = 150
N (%)
N (%)
Ålder, år, median (intervall) Review 63 (40-83)
64 (29-84) Review Sex
Man
31 (77,5) Review 110 (73,3) katalog Kvinna
9 (22,5) Review 40 (26,7)
tumörstället
Distal mage
12 (30,0) Review 57 (34,0) Review proximal mage
19 (47,5) Review 62 (41,3) Review Hela magen
9 (22,5) Review 37 (24,7) Review Steg
jag
4 (10,0) Review 17 (11,3) katalog II
9 (22,5) Review 34 (22,7)
III
25 (62,5) Review 94 (62,7) Review IV
2 (5,0) Review 5 (3,3) Review Histologisk klass 1
0
3 (2,0) 2
8 (20,0) Review 31 (20,7) katalog 3
22 (55,0) Review 71 (47,3) Review Blandat 1-2
0
2 (1,3) Review Blandat 2-3
10 (25,0) Review 43 (28,7) Review Lymfkörtel metastaser
Ingen
9 (22,5)
35 (23,3) Review Ja
31 (77,5) Review 115 (76,7) Review * den totala kohorten bestod av de ursprungliga 40 patienter som ingick i pilotstudien plus ytterligare 110 patienter.
reproducerbarheten av plasma mRNA upptäckt var 92% för BRCA1 och 89% TS. MRNA expressionsnivåer var stabila efter rumstemperatur eller is inkubation under 30 min, 1 h, 1,5 h och 2 h (Ytterligare fil 1: Figur S2, tillgänglig online).
Förstudie
Känslighet för docetaxel och pemetrexed var framgångsrikt bedömas i de 40 nya tumörprover från HDRA. Elva paneler av immundefekta möss (9-18 möss per panel, 148 möss totalt) med humant ursprung xenografter var framgångsrikt etablerat från alla 40 kirurgiska prover för in vivo
analys av känslighet. Spearman rank korrelation test visade en signifikant korrelation mellan och in vivo
hämningshastigheter för docetaxel in vitro
(Rho = 0,900, P Hotel < 0,001) och pemetrexed (rho = 0,836, P Hotel <0,001) (Ytterligare fil 1: Figur S3, AB, finns på nätet) katalog BRCA1 mRNA nivåer framgångsrikt bedömas i alla 40 tumörprover i 32 parade blodprov, och i 10 paneler av musmodeller, medan TS-mRNA-nivåer. framgångsrikt bedömas alla 40 tumörprover, alla 40 blodprover, och i 9 paneler av musmodeller. Spearman rank korrelation test visade en korrelation mellan plasma och tumör mRNA-nivåer av BRCA1 (Rho = 0,647, P Hotel < 0,001) och mellan plasma och tumörnivåer TS (rho = 0,615, P Hotel < 0,001) (Ytterligare fil 1: Figur S4, AB, finns på nätet). Både plasma och tumör BRCA1 nivåer korrelerade med docetaxel känslighet (rho = 0,492, P
= 0,004 och rho = 0,527, P Hotel < 0,001, respektive), och både plasma och tumör TS nivåer korrelerade med pemetrexed motstånd ( rho = -0,627, P Hotel < 0,001 och rho = -0,443, P
= 0,004 respektive Spearman rank korrelation test) (Ytterligare fil 1: Figur S5, AD, tillgänglig online). BRCA1 mRNA-nivåer var högre i docetaxel känsliga än i modellerna docetaxel-resistent mus (11,26 vs 2,63; P Hotel < 0,001), medan TS nivåerna var högre i pemetrexed resistenta än i pemetrexed känsliga möss ( 3,34 vs 7,27; P
= 0,013, Mann-Whitney U-test) (Ytterligare fil 1:
Figur S6, AB, finns på nätet) katalog Total kohort BRCA1 och TS-mRNA-uttryck lyckades bedömas tumör. vävnader från alla 150 patienter. Den upptäckten hastighet i plasma var 82,00% för BRCA1 och 90,67% för TS. De genomsnittliga mRNA-nivåer i plasma och tumör visas i kompletterande fil 1: Tabell S1, tillgänglig på nätet. Det fanns inget signifikant samband mellan kliniska egenskaper och mRNA-expressionsnivåer av BRCA1 eller TS (P > 0,05).
Det fanns en positiv korrelation mellan plasma och tumör mRNA-nivåer av BRCA1 (Rho = 0,696, P Hotel < 0,001) och TS (rho = 0.620, P
< 0,001, Spearman rank korrelationstest) (figur 2A-B). Inga skillnader i baslinjedata observerades enligt plasma-mRNA-nivåer, tumör-mRNA-nivåer, eller in vitro
chemosensitivity. Figur 2 Korrelationer mellan plasma och tumör-mRNA-expressionsnivåer av (A) BRCA1 och (B) TS i 150 gastric cancerpatienter. Det fanns en signifikant korrelation mellan plasma och tumör mRNA expressionsnivåer av båda generna (P Hotel < 0,001, respektive) katalog BRCA1 nivåer i plasma (docetaxel känslig. 1,25; docetaxel-resistenta: 0,50, P
< 0,001) och tumör (docetaxel-känsliga: 8,81; docetaxel-resistenta: 4,88, P Hotel < 0,001) positivt samband med docetaxel känslighet. BRCA1 nivåer i plasma och tumör var högre i docetaxel känsliga än i docetaxel resistenta grupp. TS-nivåer i plasma (pemetrexed känslig: 0,90; pemetrexed resistent: 1,82, P Hotel < 0,001) och tumör (pemetrexed känslig: 6,56; pemetrexed resistent: 16,69, P Hotel < 0,001) var negativt i samband med pemetrexed känslighet. TS-nivåer i plasma och tumör var lägre i pemetrexed känsliga än i pemetrexed resistenta grupp. (Figur 3A-D, Mann-Whitney U-test). Figur 3 In vitro chemosensitivity samband med plasma och tumör uttrycksnivåer av BRCA1and TS i 150 gastric cancerpatienter. BRCA1 nivåer i plasma (A) och tumör (B) var högre i docetaxel känsliga än i docetaxel resistenta grupp. TS-nivåer i plasma (C) och tumör (D) var lägre i pemetrexed-känsliga än i pemetrexed resistenta grupp. Linjerna inuti rutorna betecknade median. Morrhåren av lådagram:. SE, 95% CI
känslighet förutsäga chemosensitivity varierade från 63% till 71% för plasma och från 70% till 78% för tumör mRNA. Specificitet varierade från 78% till 90% för plasma och 79% för tumör mRNA (Tabell 2, Figur 4) .table två känslighet och specificitet av plasma och tumör genuttryck nivåer för att förutse chemosensitivity
Gene expression

Kemoterapeutiska medel
N
Optimal cut-off
Känslighet
specificitet
AUC (95% CI) katalog
P
Plasma
BRCA1
Docetaxel
123
0,76
63%
90%
0,77 (0,67-0,87) Hotel <0,001
TS
Pemetrexed
136
1,01
71%
78%
0,78 (0,69-0,87) Hotel < 0,001
Tumör
BRCA1
Docetaxel
123
6,09
70%
79%
0,75 (0,66 till 0,84) Hotel < 0,001
TS
Pemetrexed
136
8,08
78%
79%
0,83 (0,76-0,90) Review < 0,001
Figur 4 ROC kurvor som visar känsligheten och specificiteten av plasma och tumör-genuttryck i att förutsäga chemosensitivity . (A) BRCA1 och docetaxel (n = 123); (B) TS och pemetrexed (n = 136).
Diskussion
I föreliggande studie var BRCA1 och TS-mRNA-nivåer i plasma korrelerad med nivåer i parade FFPE tumörvävnad. BRCA1 och TS-mRNA-nivåer i både plasma och tumör var förknippade med in vitro
chemosensitivity färsk explanterade magcancer. Dessutom plasma-mRNA-nivåer visade stor känslighet och specificitet i att förutsäga chemosensitivity. Sammantaget visar dessa fynd tyder på att plasma-mRNA speglar tumör-mRNA och kan visa sig vara ett användbart verktyg för att förutsäga chemosensitivity.
Metod vi etablerat att upptäcka plasma-mRNA, baserat på RNA anrikning av reningskolonn, möjliggör mer exakt, känslig och reproducerbar upptäckt , enklare hantering och snabbare resultat [10], [25], vilket gör det möjligt för rutin genexpressionsanalys i daglig klinisk praxis [25]. Emellertid kontaminering av mRNA genom icke-tumörkällor, såsom aktiverade lymfocyter, stromala celler eller cirkulerande tumörceller, kan inte uteslutas [10], [26], [27] och kan delvis förklara varför korrelationen mellan plasma och tumör uttryck var mindre än perfekt.
Dessutom tumör heterogenitet kan stå för vissa variationer också. Specificitet varierade från 78% till 90% för plasma medan 79% för tumör. Den mindre perfekt specificitet i tumör kan mycket väl bero på heterogeniteten i tumörvävnaden i sig, vilket ger ytterligare stöd till användningen av plasma-mRNA för att förutsäga känsligheten.
Nya studier har undersökt den cellfria mRNA-expression av flera gener, inklusive TS [28], β-catenin [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], BMI-1 [35 ], Her-2 [36] och DKK1 [24], har dessa studier fokuserats på användningen av cellfria mRNA för tidig diagnos, tumörstadieindelning och sjukdomsövervakning. I motsats till det bästa av vår kunskap, är denna studie den första att undersöka den potentiella rollen för plasma-mRNA för att förutsäga docetaxel och pemetrexed chemosensitivity av solida tumörer. Våra resultat tyder på en lovande roll för plasma mRNA-uttryck som en prediktiv biomarkör i magcancer och ge bevis för användning av plasma-mRNA i valet kemoterapi för patienter utan behov av re-biopsi vid tidpunkten för sjukdomsprogression. Dessutom kan plasma-mRNA också vara användbar för övervakning av patienter som behandlas i inställnings neoadjuvant eller adjuvant. Behandlingsplanen för dessa patienter kan genereras i enlighet med deras mRNA chemosensitivity profil. Till exempel kan gastric patienter med låga nivåer av plasma TS mRNA cancer behandlas med pemetrexed baserad kemoterapi, medan de med höga nivåer av plasma BRCA1 kan dra nytta av behandling med docetaxel.
Trots det bör vi notera att vår studie kan ha vissa begränsningar. Den aktuella studien är baserad på patienter som är behandlingsnaiva. Genom att samla deras plasma före operationen och tumörer direkt efter operationen, kan vi visade plasma mRNA värde för övervakning av patienter som behandlas i inställnings neoadjuvant eller adjuvant. Då är fortfarande oklart detektionskänsligheten och värdet av att plocka upp cirkulerande mRNA från tidiga metastaser särskilt för patienter reservera andra linjens kemoterapi. Nu är vi också genomföra ytterligare studier på patienter med metastaser och kan inte ta emot operation eller få andra linjens kemoterapi. Vi kommer att ha de senaste resultaten inom en snar framtid, som kommer att innehålla innehållet som nämns ovan.
Slutsats
Sammanfattningsvis plasma mRNA expressionsnivåer av BRCA1 och TS kunde spegla de i tumören och kan ha en lovande roll som potentiella prediktiva biomarkörer för docetaxel och peretrexed i magcancer. Dessa resultat är preliminära och endast suggestiv vid denna tidpunkt, och vart och ett av dessa parade biomarkörer-kemoterapi hypoteser måste valideras innan de används i daglig rutin klinisk praxis. En klinisk prövning för närvarande utformas för att validera betydelsen av att anpassa behandling baserad på plasma mRNA-expression av BRCA1 och TS.
Ytterligare fil
Notes
Jie Shen Jia Wei bidragit lika för detta arbete.
förklaringar
Bekräftelser
Detta arbete har finansierats med bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (Grants nr 81.401.969, 81.300.339), Major International (Regional) gemensamt forskningsprojekt Kina (Grant No. 81220108023 ), och de sex talanger Project i Jiangsu-provinsen (Grant nr 2011ws005). Arbetet i Dr Rosell laboratorium delvis finansieras genom ett bidrag från La Caixa Foundation.
Roll finansieringskällan sälja The finansieringskällor hade ingen roll i studiedesign, datainsamling, dataanalys, tolkning av data, eller skriftligen rapporten
Elektronisk kompletterande material
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Ytterligare fil 1. kompletterande metoder. Tabell S1. Betyder mRNA-nivåer i plasma och tumör. Figur S1. Ursprungliga tumören och parade mus xenograft. (A) Morfologin för den ursprungliga tumören diagnostiserats som adenokarcinom med partiell slemhinnor cellscancer. (B) Kopplade xenotransplantat i möss med immunbrist, vilket bekräftas av hematoxylin-eosin färgning. Det fanns inga signifikanta morfologiska skillnader mellan det ursprungliga tumörprov och de parade xenotransplantat i musmodeller. Figur S2. Validering av stabiliteten hos plasma-mRNA. Plasma mRNA-nivåer av alla gener var stabila efter att ha utsatts för olika förhållanden. Figur S3. Samband mellan och in vivo
inhibitions priserna för (A) docetaxel och (B) pemetrexed i pilotstudien in vitro
. Figur S4. Korrelation mellan plasma och tumör-mRNA-uttryck av (A) BRCA1 (n = 32) och (B) TS (n = 40) i pilotstudien. Figur S5. Korrelationer mellan mRNA-expressionsnivåer och in vitro
chemosensitivity i pilotstudien. (A) Tumör BRCA1 och docetaxel känslighet; (B) plasma BRCA1 och docetaxel känslighet; (C) tumör TS och pemetrexed känslighet; och (D) plasma TS och pemetrexed känslighet. Figur S6. mRNA-expression nivåer och in vivo
chemosensitivity. Med användning av en tumörinhibition cut-off på 50%, var musmodeller uppdelad i (A) docetaxel känslig och docetaxel-resistenta undergrupper och (B) pemetrexed-känsliga och pemetrexed resistenta undergrupper. BRCA1 mRNA-nivåer (prickar) var högre i docetaxel känsliga gruppen än i docetaxel resistenta gruppen (P
< 0,001), och TS-nivåer (prickar) var högre i pemetrexed beständiga gruppen än i pemetrexed- känslig grupp (P
= 0,013). (DOC 666 KB) Författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif Författaroriginalfilen för figur 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Författaroriginalfilen för figur 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Författaroriginalfilen för figur 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Författaroriginalfilen för figur 4 Konkurrerande intresse
Författarna förklarar att de har ingen konkurrerande intresse.
Författarnas bidrag
JS, JW, WXG och BRL utformade forskning och skrev tidningen. JS, HW, LXY, ZZZ, LX och CC utfört forskning. YTD, XPQ och JW analyserade data. TB och RR redigerade papper. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Den roll som CCL22-CCR4 axeln i metastas av gastriska cancerceller i omental mjölkaktiga fläckar
• Prognostiska effekter av 25-hydroxyvitamin D nivåer i gastric cancer