уровни экспрессии мРНК в плазме BRCA1 и TS в качестве потенциальных прогностических биомаркеров для химиотерапии в желудочном cancer

уровней экспрессии мРНК в плазме BRCA1 и TS в качестве потенциальных прогностических биомаркеров для химиотерапии при раке желудка
Objective
Аннотация
персонализированного химиотерапии на основе предиктивного биомаркеры могут максимизировать эффективность. Тем не менее, опухоль тканей, полученные в момент первоначального диагноза не будет отражать генетические изменения, наблюдаемые во время прогрессирования заболевания. Мы исследовали, могут ли уровни мРНК плазмы суррогатным для уровней опухоли при прогнозировании химиочувствительность.
Методы
В 150 больных раком желудка, уровни мРНК BRCA1 и TS были оценены в плазме крови и парные опухолевой ткани. Манна-Уитни U-тест был использован для сравнения уровней экспрессии мРНК между образцов опухолей, проявляющих экстракорпорального
чувствительность или устойчивость к доцетаксела и пеметрекседа. Все статистические тесты были двусторонними

Результаты Были значимые корреляции между плазменными и мРНК опухоли уровнями BRCA1 (Rho = 0,696, P &Лт; 0,001). И TS (Rho = 0,620, P &лт; 0,001). Уровни BRCA1 в плазме (доцетаксел-чувствительный: 1,25; доцетаксел устойчивостью: 0,50, P &
л; 0,001) и опухоли (доцетаксел чувствительных: 8,81; доцетаксел устойчивостью: 4,88, P &
л; 0,001) были положительно связанный с чувствительностью доцетаксела. уровни TS в плазме (пеметрексед-чувствительный: 0,90; пеметрексед устойчивостью: 1,82, P
&л; 0,001) и опухоли (пеметрексед чувствительных: 6,56; пеметрексед устойчивостью: 16,69, P
&л; 0,001) были отрицательно связанная с пеметрекседа чувствительностью.
выводы
уровни экспрессии мРНК Плазменный зеркало тех, в опухоли и может иметь перспективную роль в качестве потенциальных прогностических биомаркеров для химиотерапии.
Ключевые слова
Плазменный мРНК Желудочный рак химиочувствительность Predictive биомаркером HDRA Введение
стандартная первой линии схему химиотерапии для местно-распространенным или метастатическим раком желудка является цисплатин или оксалиплатин в сочетании с другими лекарственными средствами, в том числе доцетаксела и пеметрекседа [1], [2]. Тем не менее, средняя продолжительность жизни остается скудным - около одного года. Ни один стандартный подход к терапии второй линии не существует, хотя доцетаксел проявляет некоторую активность [3]. Персонализированные химиотерапии на основе экспрессии мРНК прогностических биомаркеров может помочь увеличить эффективность лечения и продлить выживаемость у этих пациентов [3] - [8].
Ген восприимчивости рака молочной железы 1 (BRCA1), важнейшим компонентом многократного ремонта повреждений ДНК путей и путей, участвующих в клеточных реакций на повреждение микротрубочек, считается дифференциальный модулятор выживания с цисплатином и таксанов. Доклинические и клинические исследования показали, что уровень BRCA1 опухоли связан с цисплатин и таксанов химиочувствительность. Опухоль с высокой экспрессии BRCA1 составляет 800 к более чем 1000 раз чувствительны к доцетакселом, но 10-1000-кратный устойчивостью к цисплатину [4]. Ранее мы наблюдали, что уровни мРНК гена BRCA1 в выпотов отрицательно связаны с чувствительностью платины, но положительно связана с чувствительностью доцетаксела в больных раком желудка [5]. Эти результаты были подтверждены у пациентов, получающих желудочных второй линии доцетаксел: медиана выживаемости составила 9,5 мес у пациентов с низким уровнем BRCA1 в первичной опухоли, 19,1 в тех, с промежуточными уровнями и 25,8 месяцев у пациентов с высоким уровнем (P = 0,006
) [3]. Пеметрексед новый вид растворимого в воде хиназолин фолата аналога, действует как прямая и конкретная тимидилатсинтазы (TS) ингибитора. Низкая экспрессия тимидилатсинтазы (TS) сообщается, связан с ответом на пеметрексед основе терапии рака легких [7], [8].
Опухолевая ткань является основным источником для биомаркеров экспертизы в настоящее время. Тем не менее, опухолевая ткань может иногда быть недостаточным для анализа экспрессии генов. Кроме того, опухолевой ткани, полученный в момент первоначального диагноза не может отражать генетические изменения, наблюдаемые во время прогрессирования заболевания [9], так как метастатические и первичных опухолей от того же самого пациента, может изменяться в геномных, эпигенетическими и транскриптомных уровней [9] - [ ,,,0],13]. Кроме того, первоначальная химиотерапия может сама по себе изменять уровни экспрессии генов [14], [15]. Таким образом, циркулирующие опухолевых клеток, свободных нуклеиновых кислот может быть полезным, неинвазивным инструментом для отслеживания изменений в течение курса лечения [10], что исключает необходимость в повторной биопсии в момент определения наилучшего лечения. Кроме того, это может быть полезным, когда суррогатный только небольшое количество опухолевой ткани доступно. Наш предыдущий опыт в области рака легких показали, что рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) мутации в сыворотке крови может быть хорошим прогностическим маркером для больных раком легкого, получающих ингибиторы EGFR тирозинкиназы [16]. Кроме того, плазма TS мРНК может быть обнаружен неинвазивно в крови до операции и уровень экспрессии плазмы TS имел большой потенциал в качестве прогностических биомаркеров для ралтитрекседа чувствительности при раке желудка [17]. На сегодняшний день, однако, мало что известно о потенциальном использовании мРНК плазмы для прогнозирования химиочувствительность доцетаксела и пеметрекседа. Более того, несмотря на то РНК выпущена в обращение стабильна [10], [18], с современными методами, лишь небольшое количество мРНК может быть получена из плазмы или сыворотки крови, которая ограничивает как эффективность экстракции мРНК и последовательность анализов мРНК [10].
в настоящем исследовании мы приняли практический и удобный метод для обнаружения мРНК плазмы, на основе очистки РНК и количественного оТ-ПЦР (QRT-PCR), и использовали этот метод для изучения ли уровни мРНК в плазме может быть суррогатом уровней опухоли в прогнозировании химиочувствительность -. сначала в экспериментальном исследовании 40 пациентов, а затем в общей группе из 150 пациентов
материалы и методы
Пациенты
с октября 2010 года по июль 2011 года, 150 свеже -Удалена опухоли желудка и парные образцы крови из одних и тех же пациентов были получены из отделения онкологии и общей хирургии, Башня барабана больницы, Нанкин, Китай. Все больные не получали химиотерапии до операции. Свежей опухоли желудка и образцы крови хранили при 4 ° С и направляется в лабораторию в течение 15 минут после сбора.
Исследование было одобрено Советом по рассмотрению институциональной этики Башни барабана больницы, входящие в состав Медицинской школе университета Нанкина, и письменное информированное согласие было предоставлено всем пациентам. Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с китайским Координационным комитетом по Cancer Research Положения о благополучии животных и Закон о защите животных. Все анализы, включая тестирование чувствительности к лекарственным препаратам, эксперименты на животных и анализа экспрессии генов, были проведены различными исследователями, действующими индивидуально, не зная результатов других анализов.
Дизайн исследования
Сначала мы провели пилотное исследование в 40 пациентов (рис 1А). Для каждого образца опухоли, чувствительность к доцетаксела и пеметрекседа исследовали в пробирке
с помощью анализа histoculture реакции лекарственного средства (HDRA) [19] и в естественных условиях Ру по ксенотрансплантации в моделях иммунодефицитных мышей [20] (Дополнительный файл 1: Рисунок S1 , AB доступны в Интернете). Кроме того, оба ксенографты мыши и оригинальные свежие образцы опухоли были формалином фиксированной и парафин (FFPE) для анализа BRCA1 и экспрессии мРНК TS. BRCA1 и экспрессия ТС также анализировали в парных образцах крови. Рисунок 1 Блок-схема, показывающая расположение и эксперименты пациента выполняется. Пилотное исследование у 40 больных (А) и общей когорты из 150 больных раком желудка (B).
Основываясь на результатах экспериментального исследования, мы взяли на себя, чтобы проверить наши выводы в общей когорте 150 больных раком желудка (Фигура 1В ). В этой когорте, одни и те же процедуры проводились, за исключением испытания в естественных условиях
из химиочувствительность. Уровни мРНК в плазме и FFPE опухолевых тканях BRCA1 и TS были оценены и Манна-Уитни U-тест был использован для сравнения уровней экспрессии мРНК между образцов опухоли, проявляющие экстракорпорального
чувствительность или устойчивость к доцетаксела и пеметрекседа.
для получения полной информации о всех методологии см Дополнительный файл 1, доступны в Интернете.
в пробирке
химиочувствительность в экспериментальном исследовании, а общее когорте
Свежие ткани опухоли были отправлены в лабораторию в 4 ° C Хэнкса сбалансирован солевой раствор с 1% пенициллина /стрептомицина. Образцы промывали сбалансированным солевым раствором Хэнкса дважды и измельчали ​​на маленькие кусочки примерно 10 мг, которые затем помещали на подготовленных коллагеновых поверхностях в 24-луночных микропланшетов. Планшеты инкубировали в течение 7 дней при 37 ° С в присутствии растворенных препаратов с RPMI 1640, содержащей 20% фетальной сыворотки теленка и выдерживали в увлажненной атмосфере, содержащей 95% воздуха и 5% CO <суб> 2. Концентрации лекарственных средств составляли 100 мкг /мл для доцетаксела [21], и 400 мкг /мл для пеметрекседом [7]. Процедуры HDRA были выполнены как сообщили Furukawa и коллегами [19] с небольшими изменениями. Степень ингибирования рассчитывали по следующей формуле: скорость ингибирования (%) = (1-T /C) х 100, где Т среднее поглощение обработанной опухоли /вес и С представляет собой среднее поглощение опухоли контроль /вес. Все образцы были разделены на чувствительные и устойчивые группы с использованием минимального P метод
значение в модификации Lausen и Шумахера [22].
В естественных условиях
химиочувствительность в экспериментальном исследовании
Каждый свеже-снятом хирургической опухоли ткань разрезали на куски 3 × 3 × 3 мм 3, которые были пересажены в течение 30 минут до 9-18 бестимусных мышей с иммунодефицитом, называется "панель". В каждой панели, когда опухоль выросла до размера 50-100 мм 3, мышей с ксенотрансплантаты были рандомизированы для лечения с доцетаксела 15 мг /кг /сут, IP или пеметрекседа 20 мг /кг /сут, IP или нет лечение (контроль). Отдельные объемы опухоли (V) рассчитывали по формуле "V = (длина × ширина × ширина) /2" и по сравнению со значениями в начале обработки для получения объема относительной опухоли. Срединные Обработанные-к-контроля значения относительного объема опухоли были названы "степень ингибирования в естественных условиях
" и были использованы для оценки чувствительности к доцетаксела или пеметрекседом.
Экспрессии мРНК в экспериментальном исследовании и общей когорте
Два миллилитров крови собирали в ЭДТА пробирки до операции, выдерживали при 4 ° с и направляют в лабораторию в течение 15 минут. Суммарную РНК из плазмы экстрагировали TRIzol LS и хлороформом и очищают с помощью набора PureLink РНК Mini (Ambion, Carlsbad, CA, США). Суммарную РНК из опухолевых тканей FFPE экстрагировали в соответствии с собственной процедурой (европейский патент номер EP1945764-B1). После экстракции и очистки РНК, М-MLV обратной транскриптазы Комплект (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) использовали для получения кДНК для Q-ПЦР для определения экспрессии бета-актина (ACTB - используется в качестве эндогенного контроля) и исследовали гены , Каждая партия реакции включали положительный контроль от коммерческого легкого человека и РНК печени (Stratagene, La Jolla, CA, США) в качестве калибратора и отрицательного контроля без РНК и обратной транскриптазы. Шаблон кДНК амплифицировали с конкретными праймеров и зондов с использованием Taqman Универсальный Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Относительную экспрессию гена количественными рассчитывались по сравнительному методу Ct. Окончательные результаты были определены выражением мРНК формулы уровень = 2 - △△ Ct [6], [23] и были проанализированы с помощью программного обеспечения Stratagene
воспроизводимости и стабильности анализа экспрессии генов в плазме
. воспроизводимость анализа экспрессии генов тестировали одновременно с двумя способами. Для первого способа, образцы крови от пяти пациентов были собраны с первого дня на пятый день до операции, в то же время каждый день. В течение этого периода пациенты получали ни химиотерапия, ни специального лечения. Уровни экспрессии генов (высокий /промежуточные против низкого уровня) определяли для каждого образца, а процент одинаковых результатов рассчитывали для каждого пациента. Для второго метода, отбирают кровь, как только каждый из дополнительных десяти пациентов, и каждый образец был разделен на пять аликвот. Уровни экспрессии генов (высокий /промежуточные против низкого уровня) определяли для каждой аликвоты, а процент одинаковых результатов рассчитывали для каждого пациента. Скорость воспроизводимости была определена как среднее значение всех 15 процентах (5 пациентов от метода одного и 10 пациентов из метода двух).
Для того чтобы проверить стабильность образцов крови, различные плазменные аликвоты того же образца были приготовлены в соответствии с различные условия. Аликвоты инкубировали при комнатной температуре или на льду в течение 30 мин, 1 ч, 1,5 ч или 2 ч. QRT-PCR Затем проводили, и сырые значения Δ CТ различного гена сравнивали со стандартным протоколом (Δ CТ = Ct <югу> генно-Ct <суб> ACTB).
Статистический анализ
Манна-Уитни U- тест и тест Крускала-Уоллиса были использованы для тестирования ассоциаций между уровнями мРНК и клиническими характеристиками и между чувствительностью к каждому химиотерапевтического агента и клиническим характеристикам. Тест ранговой корреляции Спирмена был использован для оценки корреляции между в естественных условиях
и в пробирке
скоростей торможения, а также между плазменными и экспрессии мРНК опухолевых уровней. Манна-Уитни U-тест был использован для сравнения уровней экспрессии мРНК между образцов опухолей, проявляющих экстракорпорального
чувствительность или устойчивость к доцетаксела и пеметрекседа. Приемник эксплуатационных характеристик (ROC) Кривые построены для оценки чувствительности, специфичности и соответствующие площади под кривыми (ППК) с их 95% доверительный интервал (ДИ). Мы исследовали оптимизированный для отсечения значение для прогнозирования путем максимизации суммы чувствительности и специфичности и сводя к минимуму общую погрешность (корень квадратный из суммы [1-чувствительности] 2 + [1-Удельный город] 2) , а также за счет минимизации расстояния от стоимости отсечения в верхнем левом углу кривой ROC [24]. Все статистические тесты были двусторонними, и значение был установлен на уровне P &
ЛТ; 0,05 (двусторонний). Все анализы проводились с использованием программы SPSS, версия 16.0.

Результаты Характеристики всех пациентов приведены в таблице 1. Большинство пациентов были мужчины (73,3%), а преобладающей гистологии был аденокарциномы. Девяносто четыре (62,7%) пациентов имели III стадия заболевания. Метастазов в лимфоузлах присутствовали в 115 (76,7%) patients.Table 1 Характеристики пациентов
Характеристика

пилотное исследование

Total Когорта *

N = 40

N = 150

N (%)

N (%)

Возраст, лет, средний (диапазон)
63 (40-83)
64 (29-84) Любительские секс
Мужской
31 (77,5)
110 (73,3)
Женский
9 (22,5)
40 (26,7) <бр> Опухоль сайт
Дистальная желудка
12 (30,0)
57 (34,0)
проксимального отдела желудка
19 (47,5)
62 (41.3)
Всего желудка
9 (22,5)
37 (24,7)
Stage
I
4 (10,0)
17 (11.3)
II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5) 94 (
62,7)
IV
2 (5.0)
5 (3.3)
гистологического класса

1 0
3 (2,0) страница 2 из 8 (20,0)
31 (20,7) страница 3 из 22 (55,0) 71
(47,3)
Смешанное 1-2
0
2 (1.3)
Смешанное 2-3
10 (25,0) 43 (
28,7)
узла метастаз лимфатических
нет
9 (22,5) <бр> 35 (23,3)
Да
31 (77,5)
115 (76,7)
* Полная когорта состояла из первоначальных 40 пациентов, включенных в экспериментальном исследовании, плюс еще 110 пациентов.
воспроизводимость обнаружения мРНК плазмы составляет 92% для BRCA1, и 89% для TS. Уровни экспрессии мРНК были стабильными после комнатной температуре или ледяной инкубации в течение 30 мин, 1 ч, 1,5 ч и 2 ч (дополнительный файл 1: Рисунок S2, доступны в Интернете).
Пилотное исследование
Чувствительность к доцетаксела и пеметрекседа был успешно оценивается в 40 свежих образцов опухоли по HDRA. Одиннадцать панелей иммунодефицитных мышей (9-18 мышей на панели, 148 мышей в общей сложности) с ксенотрансплантатов человека происхождения были успешно созданы из всех 40 хирургических образцов для анализа в естественных условиях
чувствительности. Тест ранговой корреляции Спирмена показал существенную корреляцию между ин витро
и в естественных условиях
скоростей ингибирования для доцетаксела (ро = 0,900, P
&л; 0,001) и пеметрексед (Rho = 0,836, P &
л; 0,001) (Дополнительный файл 1: Рисунок S3, AB, доступны в Интернете)
уровни BRCA1 мРНК были успешно оценены во всех образцах 40 опухолей, в 32 парных образцах крови, а также в 10 панелях моделей мышей, в то время как уровни мРНК TS. были успешно оценены во всех 40 образцах опухолей, все 40 образцов крови, а также в 9 панелях моделей мыши. Тест ранговой корреляции Спирмена показал корреляцию между плазмой и мРНК опухоли уровнями BRCA1 (ро = 0,647, P
&л; 0,001), а также между плазменными и опухолевой уровнями TS (Rho = 0,615, P
&л; 0,001) (Дополнительный файл 1: Рисунок S4, AB, доступны в Интернете). Обе плазменные и опухоли BRCA1 уровни были соотнесены с чувствительностью доцетаксела (ро = 0,492, P = 0,004
и Rho = 0,527, Р
≪ 0,001, соответственно), и оба в плазме и опухоли уровни TS коррелируется с пеметрекседа сопротивлением ( Rho = -0,627, P
&л; 0,001 и Rho = -0,443, P = 0,004
, соответственно, Спирмен тест ранговой корреляции) (Дополнительный файл 1: Рисунок S5, AD, доступны в Интернете). Уровни мРНК BRCA1 были выше в доцетаксел-чувствительным, чем в мышиных моделях доцетаксела устойчивостью (11,26 против 2,63; P
&л; 0,001), в то время как уровни TS были выше в пеметрексед устойчивостью, чем в пеметрекседа чувствительных мышей ( 3,34 против 7,27; P = 0,013
, Манна-Уитни U-тест) (дополнительный файл 1: Рисунок S6, AB, доступный через Интернет)
Total когорты
BRCA1 и экспрессия мРНК TS была успешно оценена в опухоли. ткани из всех 150 пациентов. Частота выявления в плазме были 82.00% для BRCA1 и 90,67% для TS. Средние уровни мРНК в плазме и опухоли приведены в дополнительном файле 1: Таблица S1, доступны в Интернете. Там не было никакой значимой связи между клиническими характеристиками и уровнями экспрессии мРНК BRCA1 или TS (P > 0,05).
Был положительная корреляция между плазмы и мРНК опухоли уровнями BRCA1 (ро = 0,696, P &
л; 0,001) и TS (Rho = 0.620, P
&л; 0,001, Спирмен тест ранговой корреляции) (рис 2A-B). Никаких различий в исходных характеристиках не наблюдалось в соответствии с уровнями мРНК в плазме, уровни мРНК опухоли, или в пробирке
химиочувствительность. Рисунок 2 Корреляция между уровнями экспрессии мРНК в плазме и опухоли (A) BRCA1 и (В) TS в 150 больных раком желудка. Был значимая корреляция между уровнями экспрессии плазмы и мРНК опухоли обоих генов (P &
л; 0,001, соответственно)
уровни BRCA1 в плазме (доцетаксел-чувствительный:. 1,25; доцетаксел резистентных: 0,50, P <бр> &л; 0,001) и опухоли (доцетаксел чувствительных: 8,81; доцетаксел устойчивостью: 4,88, P
&л; 0,001) были положительно связаны с чувствительностью доцетаксела. Уровни BRCA1 в плазме и опухоли были выше в доцетаксела-чувствительной, чем в доцетаксела резистентные группе. уровни TS в плазме (пеметрексед-чувствительный: 0,90; пеметрексед устойчивостью: 1,82, P
&л; 0,001) и опухоли (пеметрексед чувствительных: 6,56; пеметрексед устойчивостью: 16,69, P
&л; 0,001) были отрицательно связанная с пеметрекседа чувствительностью. уровни TS в плазме и опухоли были в пеметрекседом чувствительных ниже, чем в пеметрекседа резистентных группе. (Рисунок 3A-D, Манна-Уитни U-тест). Рисунок 3 В пробирке химиочувствительность связанной с плазменными и экспрессии опухолевых уровней BRCA1and TS в 150 больных раком желудка. Уровни BRCA1 в плазме (А) и опухоли (Б) были выше в доцетаксела чувствительной, чем в доцетаксела резистентные группе. уровни TS в плазме (С) и опухоли (D) были ниже в пеметрексед-чувствительной, чем в пеметрекседа резистентных группе. Линии внутри коробки обозначены медианы. Усов коробчатых участков:. SE, 95% ДИ
Чувствительность при прогнозировании химиочувствительность колебалась от 63% до 71% для плазмы и от 70% до 78% для мРНК опухоли. Специфичность колебалась от 78% до 90% для плазмы и 79% для мРНК опухоли (таблица 2, рисунок 4) .table 2 Чувствительность и специфичность уровней экспрессии генов в плазме и опухоли для прогнозирования химиочувствительность
Экспрессия генов

химиотерапевтические агенты

N

Оптимальное отсечкой

Чувствительность

Специфичность

АУК (95% ДИ)

P

Plasma
BRCA1
доцетаксела
123
0,76
63%
90%
0.77 (0.67-0.87)
&л; 0,001
TS
Пеметрексед
136
1.01
71%
78%
0.78 (0.69-0.87)
&л; 0,001
Опухоль
BRCA1
доцетаксела
123
6,09
70%
79%
0.75 (0.66-0.84)
&л; 0,001
TS
Пеметрексед
136
8,08
78%
79%
0.83 (0.76-0.90)
&л; 0,001 Рисунок 4
ROC кривые, показывающие чувствительность и специфичность экспрессии гена плазмы и опухоли в прогнозировании химиочувствительность , (A) BRCA1 и доцетаксел (п = 123); (B) TS и пеметрексед (n = 136).
Обсуждение
В настоящем исследовании, BRCA1 и мРНК TS уровни в плазме коррелировали с уровнями в спаренной ткани опухоли FFPE. уровни BRCA1 и мРНК TS в обеих плазме и опухоли были связаны с химиочувствительность в пробирке
свеже эксплантированной рака желудка. Кроме того, уровни мРНК в плазме показали значительную чувствительность и специфичность при прогнозировании химиочувствительность. Взятые вместе, эти результаты показывают, что плазма мРНК отражает мРНК опухоли и может оказаться полезным инструментом для прогнозирования химиочувствительность.
Метод мы установили для обнаружения мРНК плазмы, на основе обогащения РНК по колонне очистки, позволяет более точно, чувствительный и воспроизводимое обнаружение , проще в обращении и более быстрые результаты [10], [25], что делает его возможным для рутинного анализа экспрессии генов в повседневной клинической практике [25]. Тем не менее, загрязнение мРНК источников неопухолевых, таких как активированные лимфоциты, стромальные клетки или циркулирующих опухолевых клеток, не может быть исключена [10], [26], [27] и, возможно, частично объясняет, почему корреляция между плазмой и опухоли выражение было менее совершенным.
более того, опухоль гетерогенность может объяснить некоторой изменчивости, а также. Специфичность колебалась от 78% до 90% для плазмы в то время как 79% для опухоли. Менее совершенной специфичность в опухоли вполне может быть связано с неоднородностью самой опухолевой ткани, что придает дополнительную поддержку использованию мРНК плазмы для прогнозирования чувствительности.
Недавние исследования изучали бесклеточной экспрессии мРНК нескольких генов, включая TS [28], β-катенина [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], BMI-1 [35 ], Her-2 [36] и DKK1 [24], эти исследования были сосредоточены на использовании бесклеточной мРНК для ранней диагностики, стадирования опухоли и мониторинга заболеваний. В отличие от этого, насколько нам известно, данное исследование является первым, чтобы изучить потенциальную роль мРНК плазмы для прогнозирования доцетаксела и пеметрекседа химиочувствительность солидных опухолей. Наши результаты показывают перспективную роль для экспрессии мРНК в плазме в качестве прогностического биомаркера при раке желудка и предоставить доказательства использования мРНК плазмы в выборе химиотерапии у пациентов, без необходимости повторной биопсии в момент прогрессирования заболевания. Кроме того, мРНК плазмы может также оказаться полезным для пациентов мониторинга проходит лечение в условиях неоадъювантной или адъювантной. План лечения для этих пациентов могли быть получены в соответствии с их мРНК химиочувствительность профиль. Например, у больных раком желудка с низким уровнем плазмы TS мРНК можно лечить с помощью пеметрекседа химиотерапии на основе препаратов, в то время как те, с высокими уровнями плазмы BRCA1 может принести пользу от лечения с доцетаксела.
Тем не менее, следует отметить, что наше исследование может иметь некоторые ограничения. Настоящее исследование основано на пациентов, которые ранее не лечившихся терапия. Собрав их плазму до операции и опухолей сразу после операции, мы могли бы продемонстрировали ценность мРНК плазмы для пациентов мониторинга проходит лечение в условиях неоадъювантной или адъювантной. Затем чувствительность обнаружения и значение подбирая циркулирующих мРНК из ранних метастазов, особенно для пациентов резервирующих химиотерапии второй линии до сих пор неясно. Сейчас мы также проведение дальнейших исследований на пациентах с метастазами и не могут получать операцию или получить второй линии химиотерапии. Мы будем иметь самые последние результаты в ближайшем будущем, которое будет содержать содержание упомянутых выше.
Вывод изображения В заключение, уровни экспрессии мРНК в плазме BRCA1 и TS может отражать те, в опухоли и может иметь перспективную роль как потенциал прогностические биомаркеры для доцетаксела и peretrexed при раке желудка. Эти данные являются предварительными и только наводит на мысль в этот момент, и каждый из этих спаренных биомаркеров химиотерапии гипотез должно быть подтверждено перед использованием в рутинной ежедневной клинической практике. Клинические испытания в настоящее время разработан для того, чтобы подтвердить роль настройки лечения, основанного на экспрессии мРНК плазме BRCA1 и TS.
Дополнительный файл
Notes
Jie Шен, Цзя Вэй также внесли вклад в эту работу.
декларациях
Подтверждения
Эта работа была поддержана грантами от Национального фонда естественных наук Китая (гранты № 81401969, 81300339), Крупный международный (региональный) Совместный исследовательский проект Китая (грант № 81220108023 ), и Топ Шесть Таланты Проект провинции Цзянсу (грант № 2011ws005). Работа в лаборатории д-ра Росселя в частично финансируется за счет гранта от La Caixa Foundation.
Роль источника финансирования
источников финансирования не было никакой роли в дизайн исследования, сбор данных, анализ данных, интерпретации данных или написании доклад
Электронный дополнительный материал
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Дополнительный файл 1:. Дополнительные методы. Таблица S1. Средние уровни мРНК в плазме и опухоли. Рисунок S1. Оригинал опухоли и спаренные ксенографты мыши. (А) Морфология исходной опухоли диагностирована как аденокарцинома с частичной карциномой слизистой клеток. (B) Спаренные ксенографты в иммунодефицитных мышей, подтвержденные гематоксилин-эозином. Там не было никаких существенных морфологических различий между исходной пробы опухоли и спаренные ксенотрансплантаты в мышиных моделях. Рисунок S2. Проверка стабильности мРНК плазмы. Уровни мРНК в плазме всех генов были стабильными после воздействия на них различных условиях. Рисунок S3. Корреляция в пробирке
и в естественных условиях
скоростей ингибирования для (A) доцетаксела и (В) пеметрекседом в экспериментальном исследовании. Рисунок S4. Корреляция между экспрессией мРНК и плазмы опухоли (А) BRCA1 (п = 32) и (В) TS (n = 40) в экспериментальном исследовании. Рисунок S5. Корреляция между уровнями экспрессии мРНК и в пробирке
химиочувствительность в экспериментальном исследовании. (A) Опухоль BRCA1 и чувствительность доцетаксел; (B) плазмы BRCA1 и чувствительность доцетаксел; (C) опухоль TS и пеметрексед чувствительность; и (D) в плазме TS и пеметрексед чувствительность. Рисунок S6. экспрессия мРНК уровней и в естественных условиях
химиочувствительность. С помощью ингибирования опухолевого отсечке 50%, мышиные модели были разделены на (А) доцетаксел чувствительные и доцетаксела устойчивые подгруппы и (В) пеметрексед-чувствительные и устойчивые к Pemetrexed подгрупп. Уровни мРНК гена BRCA1 (точки) были в доцетаксела чувствительных к группе выше, чем в доцетаксела устойчивые группы (Р &
л; 0,001), и уровни TS (точки) были в пеметрекседа устойчивые группы выше, чем в pemetrexed- чувствительная группа (P = 0,013
). (DOC 666 KB) авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для Рисунок 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Авторского 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif авторов исходного файла для "исходного файла для фигурного 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Авторского Рисунок 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Авторского исходного файла для фигурного 4 Конкурируя интерес
Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующий интерес.
вклад авторов
JS, JW, WXG и BRL разработанные исследования и написал статью. JS, HW, LXY, ZZZ, LX и CC выполнены исследования. YTD, XPQ и JW проанализировали данные. ТБ и РР отредактированный документ. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Роль оси CCL22-CCR4 в метастазировании клеток рака желудка в сальника белесые пятна
• Прогностические эффекты уровней 25-гидроксивитамина D в раке желудка