Plazma mRNS expressziós a BRCA1 és a TS potenciális prediktív biomarkerek kemoterápia gyomor cancer

plazma mRNS expressziós a BRCA1 és a TS potenciális prediktív biomarkerek kemoterápia gyomorrák katalógusa Abstract katalógusa Célkitűzés katalógusa Egyedi kemoterápia alapuló prediktív biomarkerek maximalizálni a hatékonyságot. Azonban tumorszövet kapott idején a kezdeti diagnózis nem tükrözik a genetikai változások megfigyelhető idején a betegség progresszióját. Megvizsgáltuk, hogy a plazma-mRNS-szintek lehet egy helyettesítője tumor szintek előrejelzésében kemoszenzitivitás.
Módszerek
150 gyomorrákos betegek, mRNS-szintek a BRCA1 és a TS értékelték a plazmában és a párosított tumorszövetben. A Mann-Whitney U-tesztet alkalmaztuk összeh mRNS expressziós szintek között tumorminták mutatnak in vitro
érzékenység vagy rezisztencia docetaxel és a pemetrexed. Minden statisztikai tesztek kétoldalas. Katalógusa Eredmények
szignifikáns korreláció a plazma és a tumor mRNS szinteket a BRCA1 (rho = 0,696, P < 0,001) és a TS (rho = 0.620, P < 0,001). BRCA1 koncentrációja a plazmában (docetaxel-érzékeny: 1,25; docetaxel-rezisztens: 0,50, P katalógusa < 0,001) és a tumor (docetaxel-érzékeny: 8,81; docetaxel-rezisztens: 4,88, P katalógusa < 0,001) volt pozitív kapcsolódó docetaxel érzékenység. TS koncentrációja a plazmában (pemetrexed-érzékeny: 0,90; pemetrexed-rezisztens: 1,82, P katalógusa < 0,001) és a tumor (pemetrexed-érzékeny: 6,56; pemetrexed-rezisztens: 16,69, P katalógusa < 0,001) volt negatív kapcsolódó pemetrexeddel érzékenység.
Következtetések katalógusa plazma mRNS expressziós megegyeznek a tumor, és lehet egy ígéretes szerepet lehetséges prediktív biomarkerek kemoterápia. katalógusa Kulcsszavak katalógusa plazma mRNS Gyomorrák kemoszenzitivitás prediktív biomarker HDRA Bevezetés
standard első vonalbeli kemoterápiás kezelés a lokálisan előrehaladott vagy áttétes gyomorrák ciszplatinnal vagy oxaliplatin kombinálható más gyógyszerekkel, beleértve a docetaxel és pemetrexed [1], [2]. Azonban medián túlélés marad szerény - mintegy egy év. Nincs egységes megközelítés a második vonalbeli terápia létezik, bár docetaxel mutatott némi tevékenység [3]. Személyre kemoterápia alapján mRNS expressziója prediktív biomarkerek segíthetnek maximalizálni a kezelés hatékonyságát és meghosszabbítja a túlélést ezeknél a betegeknél [3] - [8].
Emlőrák hajlamosító gén 1 (BRCA1), nélkülözhetetlen része több DNS sérülés javítására utak és utak részt vevő celluláris válaszok mikrotubulus kárt, akkor tekinthető egy differenciális modulátor túlélési ciszplatinnal és taxánok. Preklinikai és klinikai vizsgálatok szerint a BRCA1 szintű tumor társul ciszplatinnal és taxánok kemoszenzitivitás. A tumor nagy expressziós BRCA1 800-to-több, mint 1000-szer érzékeny a docetaxel, de 10-1000-szeres ellenálló ciszplatin [4]. Korábban már megfigyelték, hogy a BRCA1 mRNS szintek folyadékgyülem negatívan kapcsolódó platinaérzékenység de pozitív összefüggésben áll a docetaxel érzékenységgel gyomorrákos betegek [5]. Ezeket a megállapításokat érvényesített gyomor részesülő betegek második vonalbeli docetaxel: átlagos túlélés 9,5 hónap volt az az alacsony BRCA1 szint primer tumor, 19,1 azokban a köztes szintek, illetve 25,8 hónap azoknál, akik magas szintű (P = 0,006 katalógusa ) [3]. Pemetrexed egy újfajta vízoldékony kinazolin folát analóg, működik, mint egy közvetlen és konkrét timidilátszintáz (TS) gátló. Alacsony expressziója timidilát szintáz (TS) leírták, hogy társítható válaszként pemetrexed-alapú terápia tüdőrák [7], [8].
Tumorszövetet a fő forrása a biomarker vizsgálat jelenleg. Azonban tumorszövet időnként nem elegendő a génexpresszió elemzését. Sőt, tumorszövet kapott idején a kezdeti diagnózis nem tükrözik a genetikai változások megfigyelhető idején a betegség progressziója [9], mivel a metasztatikus és a primer tumorok ugyanabból a beteg változhat a genomiális, epigenetikai és transzkriptomikai szinten [9] - [ ,,,0],13]. Továbbá, a kezdeti kemoterápia önmagában megváltoztathatja gén expressziós szinteket [14], [15]. A keringő tumor sejtmentes nukleinsavak Ily módon ki lehetne hasznos, nem-invazív eszköz változások követése során a kezelés [10], szükségtelenné téve egy re-biopszia idején meghatározó a legjobb kezelés. Ezen túlmenően, ez lehet egy hasznos helyettesítő, amikor csak egy kis mennyiségű tumorszövetben rendelkezésre áll. A mi korábbi tapasztalatok tüdőrák igazolták, hogy az epidermális növekedési faktor receptor (EGFR) mutációk a szérumban lehet egy jó prediktív marker a tüdőrák részesülő betegek EGFR tirozin-kináz-inhibitorok [16]. Ezen túlmenően, a plazma TS mRNS kimutatható a nem-invazív vérben műtét előtt és expressziós szintjének plazma TS nagy volt a potenciális prediktív biomarkerek raltitrexed érzékenység gyomorrákban [17]. Eddig azonban nagyon keveset tudunk a lehetséges felhasználása a plazma mRNS előrejelzésére kemoszenzitivitás docetaxel és pemetrexed. Továbbá, bár az RNS forgalomba bocsáthatók stabil [10], [18], a jelenleg rendelkezésre álló módszerekkel, csak egy kis mennyiségű mRNS lehet beszerezni plazmában vagy szérumban, ami korlátozza mind a hatásosságát mRNS extrakció és az összhang a mRNS esszék [10].
a jelen tanulmányban azt elfogadta praktikus és kényelmes módszer a plazma mRNS kimutatására alapján RNS tisztítás és kvantitatív RT-PCR (qRT-PCR), és ezt a módszert kell vizsgálni, hogy a plazma mRNS-szintek egy helyettesítő tumor szintet előrejelzésében kemoszenzitivitás - először kísérleti tanulmány 40 beteg, majd egy csoport teljes 150 beteg. katalógusa anyagok és módszerek katalógusa betegek katalógusa 2010 októberétől 2011 júliusáig, 150 frissen -removed gyomor tumorok és párosított vérminták ugyanazon beteg kapott Onkológiai Tanszék és általános sebészet, Drum Tower Kórház, Nanjing, Kína. Valamennyi beteg nem kapott kemoterápia a műtét előtt. A friss gyomor tumorok és vérmintákat 4 ° C-on, és a laboratóriumba küldött 15 percen belül a gyűjtés.
A tanulmány által jóváhagyott intézményi etikai bizottsága a Drum Tower kórház csatlakozott a Medical School of Nanjing Egyetem, és írásos beleegyezésüket adták az összes betegnél. A kísérleteket végeztünk szerint a kínai Koordinációs Bizottságának Cancer Research szabályzat az állatok jóléte és az Állatvédelmi Törvény. Minden elemzés, beleértve a hatóanyag-érzékenység vizsgálata, génexpressziós elemzését és állatkísérleteket hajtottak végre különböző vizsgálók egyénileg eljáró ismerete nélkül az eredmények a többi elemzések. Katalógusa vizsgálat tervezésében katalógusa Először végzett kísérleti tanulmány 40 betegeknél (1a ábra). Minden egyes tumor minta, érzékenység a docetaxel és a pemetrexed vizsgáltuk in vitro
által histoculture kábítószer válasz vizsgálattal (HDRA) [19] és az in vivo
által xenograftok immunhiányos egér modellek [20] (Plusz fájl 1: ábra S1 AB online elérhető). Ezen túlmenően, mind az egér xenograftok és az eredeti friss tumormintákat formalinnal fixált és paraffinba ágyazott (FFPE) az elemzéshez a BRCA1 és a TS mRNS expressziót. BRCA1 és TS kifejezés is elemeztük a párosított vérmintát. 1. ábra Folyamatábra, amely a betegre hajlam és a kísérleteket végezni. Kísérleti tanulmány 40 beteg (A) és a teljes kohorsz 150 gyomorrákos betegek (B).
Megállapításai alapján a kísérleti tanulmány azt vállalta, hogy eredmények validálása a csoport teljes 150 gyomorrákos betegek (1B ). Ebben a csoportban, hogy ugyanazokat az eljárásokat végeztünk, kivéve az in vivo
tesztelése kemoszenzitivitás. A mRNS-szintje a plazmában és FFPE tumorszövetekben a BRCA1 és a TS értékelték, és a Mann-Whitney U-tesztet alkalmaztuk összeh mRNS expressziós szintek között tumorminták mutatnak in vitro
érzékenység vagy rezisztencia docetaxel és pemetrexed.
További részleteket az összes módszert, lásd Kiegészítő fájl 1, elérhető az interneten.
in vitro katalógusa kemoszenzitivitás a kísérleti tanulmány, valamint a csoport teljes katalógusa állapotú daganatos szöveteket elküldjük a laboratóriumba 4 ° C Hanks-féle kiegyensúlyozott sóoldatban 1% penicillin /sztreptomicint. A mintákat mostuk Hanks-féle kiegyensúlyozott só-oldattal kétszer, és kis darabokra vágunk, körülbelül 10 mg-os, amelyeket azután helyezzük előkészített kollagén felületeken 24-lyukú mikrotiter. A lemezeket 7 napig inkubáltuk 37 ° C-jelenlétében gyógyszerek oldott RPMI 1640 közegben, amely 20% magzati borjú szérumot és tartott tartalmazó nedvesített légtérben 95% levegő-5% CO 2. A koncentrációk a gyógyszerek voltak 100 ng /ml docetaxel [21], és 400 ng /ml pemetrexed [7]. HDRA eljárások végrehajtása által jelentett Furukawa és mtsai [19], kisebb módosításokkal. A gátlási arányt úgy számítjuk ki, az alábbi képlet segítségével: gátlás mértéke (%) = (1-T /C) x 100, ahol T az átlagos abszorbancia a kezelt tumor /súly és C a jelent abszorbancia kontroll tumor /súly. Minden mintát soroltuk érzékeny és rezisztens csoportokat a minimum P katalógusa érték módszer módosított Lausen és Schumacher. [22] katalógusa In vivo katalógusa kemoszenzitivitás a kísérleti tanulmány katalógusa Minden frissen eltávolított tumor sebészi szövetet darabokra vágjuk 3 × 3 × 3 mm 3, amely transzplantáltunk 30 percen belül, hogy 9-18 csecsemőmirigy nélküli immunhiányos egerekben, nevezzük "panel". Minden panel, amikor a daganat nőtt a mérete 50-100 mm 3, egerek xenograftjait random módon a docetaxel 15 mg /kg /nap, ip vagy pemetrexed 20 mg /kg /nap, ip, vagy egyáltalán nem kezelés (kontroll). Egyedi tumor térfogat (V) kiszámítjuk a képlet "V = (hossz x szélesség x szélesség) /2", és összehasonlítva az értékek a kezelés kezdetekor, hogy megkapjuk a relatív tumortérfogat. Medián kezelt kontrollálható értékek relatív tumortérfogat ezeket "gátlás mértékét az in vivo
", és használták, hogy értékelje érzékenység docetaxel vagy pemetrexed.
MRNS expresszió a kísérleti tanulmány és a teljes kohorsz
Két milliliter vért vettünk EDTA csövekbe műtét előtt, 4 ° C-on, és a laboratóriumba küldött 15 percen belül. A teljes RNS-plazmából extraháltuk TRIzol LS és kloroform, és megtisztítottuk a PureLink RNS Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, USA). A teljes RNS-re FFPE daganatos szövetek extraháljuk összhangban egy szabadalmazott eljárás (európai szabadalom száma EP1945764-B1). Miután RNS kivonása és tisztítása, az M-MLV reverz transzkriptáz Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) használtuk, hogy cDNS Q-PCR-rel, hogy észleli a expresszióját β-aktin (ACTB - használt endogén kontroll), és a gének vizsgált . Minden egyes tétel reakció tartalmazott egy pozitív kontroll a kereskedelmi humán tüdő és a máj RNS-t (Stratagene, La Jolla, CA, USA), az kalibráló és negatív kontrollok nélkül RNS-t és reverz transzkriptázt. Sablon cDNS-t amplifikáltunk specifikus primerek és próbák Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Relatív génexpresszió számszerűsítésüket szerint számolva az összehasonlító Ct módszer. A végleges eredmények úgy határoztuk meg, a következő képlet mRNS expressziós szint = 2 - △△ Ct [6], [23], és elemeztük a Stratagene szoftver.
Reprodukálhatóságát és stabilitást a génexpresszió assay plazmában katalógusa reprodukálhatósága génexpressziós assay-t egyszerre teszteltük két módszerrel. Az első módszer, vérmintát öt beteget gyűjtöttünk az első napon az ötödik nap a műtét előtt ugyanabban az időben minden nap. Ebben az időszakban, a betegek sem kemoterápiás, sem különleges bánásmódot. Génexpresszió szintet (magas /közbenső vs alacsony) adtunk minden mintához meghatározzuk és a százalékos azonos eredményeket számoltuk minden egyes beteg számára. A második módszer, vért vettünk egyszer egy további tíz beteg, és minden egyes mintát osztva öt aliquot. Génexpresszió szintet (magas /közbenső vs alacsony) meghatároztuk az egyes aliquot, és a százalékos azonos eredményeket számoltuk minden egyes beteg számára. A reprodukálhatóság mértéke úgy definiáljuk, mint az átlagos összes 15 százalékos (5 betegek módszer ont és 10 beteget az eljárás két).
Annak érdekében, hogy teszteljék a stabilitását a vérminták, a különböző plazma aliquot részeit ugyanazon a mintán készítettünk alatt különböző körülmények között. Aliquotjait inkubáltuk szobahőmérsékleten vagy jégen 30 perc, 1 óra, 1,5 óra, vagy 2 órán át. qRT-PCR-t, majd végre, és a nyers ΔCt értékei különböző gén, mint a standard protokoll (ΔCt = Ct gén-Ct ACTB). katalógusa Statisztikai elemzések katalógusa A Mann-Whitney U- teszt és Kruskal-Wallis tesztet alkalmaztuk a vizsgált szervezetek között mRNS szintek és a klinikai jellemzők között érzékenység minden kemoterápiás szer és klinikai jellemzői. A Spearman rank korrelációs tesztet használtuk, hogy értékelje az összefüggést az in vivo és in vitro katalógusa katalógusa gátlás mértékét és a plazma és a tumor mRNS expressziós szintek. A Mann-Whitney U-tesztet alkalmaztuk összeh mRNS expressziós szintek között tumorminták mutatnak in vitro
érzékenység vagy rezisztencia docetaxel és a pemetrexed. Vevő működési jellemzők (ROC) görbéket vettünk fel, hogy értékelje az érzékenység, specificitás, és a megfelelő görbe alatti területeket (AUC-k) a 95% -os megbízhatósági intervallumok (CI). Megvizsgáltuk az optimalizált vágási érték becslés maximalizálásával összege érzékenysége és specificitása és minimálisra csökkentve a hiba (négyzetgyöke összege [1-érzékenység] 2 + [1-specifikációknak város] 2) , és minimálisra csökkentik a távolságot a cut-off érték bal felső sarokban a ROC görbe [24]. Minden statisztikai tesztek kétoldalas, és szignifikancia P katalógusa < 0,05 (kétoldalas). Az összes elemzést végeztünk SPSS, version 16.0.
Eredménye
Jellemzői valamennyi beteg 1. táblázatban mutatjuk be A betegek többsége férfi volt (73,3%), és az uralkodó szövettani volt adenocarcinoma. Kilencvennégy (62,7%) betegnél stádiumú betegségben. A nyirokcsomó-metasztázisok volt jelen 115 (76,7%) patients.Table 1 Betegjellemzők
Jellemző Matton Kísérleti tanulmány Matton csoport teljes * Matton N = 40 katalógusa
N = 150
N (%) Matton N (%) Matton Age, év, medián (tartomány) hotelben 63 (40-83)
64 (29-84) hotelben szex katalógusa Férfi katalógusa 31 (77,5) hotelben 110 (73,3) fiatal női katalógusa 9 (22.5) hotelben 40 (26,7)
tumor helyén
gyomor distalis katalógusa 12 (30,0) hotelben 57 (34,0) hotelben proximális gyomor katalógusa 19 (47,5) hotelben 62 (41,3) hotelben egész gyomor katalógusa 9 (22.5) hotelben 37 (24,7) hotelben Stage katalógusa I
4 (10.0) hotelben 17 (11,3) hotelben II katalógusa 9 (22.5) hotelben 34 (22,7) katalógusa III
25 (62,5) hotelben 94 (62,7) hotelben IV
2 (5.0) hotelben 5 (3,3) hotelben szövettani grade katalógusa 1 katalógusa 0
3 (2,0) hotelben 2 | 8 (20,0) hotelben 31 (20,7) hotelben 3 katalógusa 22 (55,0) hotelben 71 (47,3) hotelben Vegyes 1-2
0 katalógusa 2 (1.3) hotelben Vegyes 2-3 katalógusa 10 (25,0) hotelben 43 (28,7) hotelben nyirokcsomó áttét katalógusa No katalógusa 9 (22.5)
35 (23,3) hotelben Igen katalógusa 31 (77,5) hotelben 115 (76,7) hotelben * a teljes kohort az eredeti 40 beteget vontak be a kísérleti tanulmány, valamint egy további 110 beteg. katalógusa a reprodukálhatóság a plazma mRNS kimutatására 92% volt a BRCA1 és 89% a TS. Az mRNS expressziós szintek stabilak voltak után szobahőmérsékleten vagy jeges inkubálás 30 percig, 1H, 1,5 óráig és 2 óráig (Plusz fájl 1: ábra S2, online elérhető).
Kísérleti tanulmány
érzékenység a docetaxel és a pemetrexed volt sikeresen értékelendő 40 friss tumor mintákban HDRA. Tizenegy panelek immundeficiens egerek (9-18 egér panel, 148 egerek összesen) humán eredetű xenograftok sikeresen létre mind a 40 sebészeti mintákban in vivo
elemzés érzékenységét. A Spearman rank korrelációs tesztet szignifikáns összefüggést mutatott az in vitro és in vivo katalógusa katalógusa gátlás árak docetaxel (rho = 0.900, P katalógusa < 0,001) és pemetrexed (rho = 0,836, P <katalógusa 0,001) (Plusz fájl 1: ábra S3, AB, online elérhető).
BRCA1 mRNS-szinteket sikeresen értékelték mind a 40 tumorminták 32 párosított vérmintákban, és 10 panelek egér modellek, míg a TS mRNS szinteket sikeresen értékelték mind a 40 tumorminták mind a 40 vérmintát, és 9 panelek egér modellek. A Spearman rank korrelációs tesztet mutattak összefüggést a plazma és a tumor mRNS szinteket a BRCA1 (rho = 0,647, P katalógusa < 0,001), valamint a plazma és a tumor szintjének TS (rho = 0.615, P katalógusa < 0,001) (Plusz fájl 1: ábra S4, AB, online elérhető). Mind a plazma és a tumor BRCA1 szint korrelált a docetaxel érzékenység (rho = 0,492, P = 0,004 katalógusa és a Rho = 0,527, P katalógusa < 0,001), és mind a plazma és a tumor TS mutatott összefüggést a pemetrexed ellenállás ( rho = -0,627, P katalógusa < 0,001 és rho = -0,443, P = 0,004 katalógusa, illetve Spearman rank korreláció vizsgálat) (Kiegészítő fájl 1: ábra S5, AD, online elérhető). BRCA1 mRNS-szint magasabb volt a docetaxel-érzékeny, mint a docetaxel-rezisztens egér modellek (11,26 vs 2,63; p
< 0,001), míg a TS szintek magasabbak voltak a pemetrexed-rezisztens, mint a pemetrexed-érzékeny egereket ( 3,34 vs 7,27; P = 0,013 katalógusa, Mann-Whitney U-teszt) (Plusz fájl 1: ábra S6, AB, online elérhető). katalógusa csoport teljes
BRCA1 és a TS mRNS expressziója sikeresen értékelték tumor szöveteket mind a 150 beteg. A felderítési arány a plazmában 82,00% BRCA1 és 90,67% a TS. Az átlag mRNS szinteket a plazmában és a tumor láthatók Kiegészítő fájl 1: Táblázat S1, online elérhető. Nem volt szignifikáns összefüggés a klinikai jellemzők és az mRNS-szinteket a BRCA1 vagy TS (P > 0,05).
Volt pozitív korreláció a plazma és a tumor mRNS szinteket a BRCA1 (rho = 0,696, P <katalógusa 0,001) és a TS (rho = 0.620, P katalógusa < 0,001, Spearman rank korreláció vizsgálat) (2A-B). Nincs különbség a kiindulási jellemzők észleltek szerint a plazma mRNS szinteket, a tumor mRNS-szintje, vagy in vitro
kemoszenzitivitás. 2. ábra közötti korrelációk a plazma és a tumor mRNS expressziós szintek (A) BRCA1 és (B) TS 150 gyomor rákos betegeknél. Szignifikáns összefüggést a plazma és a tumor mRNS expressziós szintjét mindkét gén (P katalógusa < 0,001). Katalógusa BRCA1 koncentrációja a plazmában (docetaxel-érzékeny: 1,25; docetaxel-rezisztens: 0,50, P
< 0,001) és a tumor (docetaxel-érzékeny: 8,81; docetaxel-rezisztens: 4,88, P katalógusa < 0,001) pozitív kapcsolatba hozható docetaxel érzékenység. BRCA1 szintek a plazmában és a tumor magasabb volt a docetaxel-érzékeny, mint a docetaxel -rezisztens csoport. TS koncentrációja a plazmában (pemetrexed-érzékeny: 0,90; pemetrexed-rezisztens: 1,82, P katalógusa < 0,001) és a tumor (pemetrexed-érzékeny: 6,56; pemetrexed-rezisztens: 16,69, P katalógusa < 0,001) volt negatív kapcsolódó pemetrexeddel érzékenység. TS szintjét a plazmában és a tumor alacsonyabbak voltak a pemetrexed-érzékeny, mint a pemetrexed-rezisztens csoport. (3A-D, Mann-Whitney U-teszt). 3. ábra in vitro kemoszenzitivitás társított plazma és tumor expressziós szintje BRCA1and TS 150 gyomor rákos betegeknél. BRCA1 szintek a plazmában az (A) és a tumor (B) magasabb volt a docetaxel-érzékeny, mint a docetaxel -rezisztens csoport. TS szintjét a plazmában (C) és a tumor (D) alacsonyabb volt a pemetrexed-érzékeny, mint a pemetrexed-rezisztens csoport. A vonalak belsejében a dobozok jelöljük felező. A bajusz az sodrófagrafikonok: SE, 95% CI. Katalógusa érzékenység előrejelzésében kemoszenzitivitás mozgott 63% -ról 71% -ra, és a plazma 70% -ról 78% -ra tumor mRNS. Specificitás között mozgott 78% -ról 90% -ra a plazma és 79% tumor-mRNS (2. táblázat, 4. ábra) .table 2 érzékenység és a specifitás a plazma és a tumor gén expressziós szintek előrejelzésére kemoszenzitivitás
Génexpresszió

A kemoterápiás szerek
N Matton optimális cut-off Matton Érzékenység Matton sajátosságai Matton AUC (95% CI) hotelben
P Matton plazma katalógusa BRCA1 katalógusa Docetaxel katalógusa 123 katalógusa 0,76 katalógusa 63% katalógusa 90% katalógusa 0,77 (0,67-0,87) hotelben <0,001 katalógusa TS katalógusa pemetrexed katalógusa 136 katalógusa 1,01 katalógusa 71% katalógusa 78% katalógusa 0,78 (0,69-0,87) hotelben < 0,001 katalógusa tumor katalógusa BRCA1 katalógusa Docetaxel katalógusa 123 katalógusa 6,09 katalógusa 70% katalógusa 79% katalógusa 0,75 (0,66-0,84) hotelben < 0,001 katalógusa TS katalógusa pemetrexed katalógusa 136
8,08 katalógusa 78% katalógusa 79% katalógusa 0,83 (0,76-0,90) hotelben < 0,001 katalógusa 4. ábra ROC görbéi érzékenysége és specificitása a plazma és a tumor génexpresszió előrejelzésében kemoszenzitivitás . (A) BRCA1 és docetaxel (n = 123); (B) TS és a pemetrexed (n = 136).
Megbeszélés
A jelen vizsgálatban, a BRCA1 és a TS mRNS szintek a plazmában korreláltak szintek párosított FFPE tumorszövetben. BRCA1 és a TS mRNS szinteket a plazma és a tumor jártak in vitro katalógusa kemoszenzitivitás frissen beültetett gyomorrák. Sőt, a plazma mRNS szintek jelentős mértékű alkalmazkodást érzékenysége és specificitása előrejelzésében kemoszenzitivitás. Mindent összevetve, ezek a megállapítások jelzik, hogy a plazma-mRNS tükrök tumor mRNS és bizonyulhat hasznos eszköz előrejelzésére kemoszenzitivitás.
A módszerrel létrehozott kimutatására plazma mRNS alapján, az RNS feldúsulása tisztítási oszlop, lehetővé teszi a pontosabb, érzékeny és reprodukálható kimutatását , könnyebb kezelhetőséget és gyorsabb eredményeket [10], [25], így megvalósítható a rutin génexpresszió analízis a mindennapi klinikai gyakorlat [25]. Mindazonáltal a szennyeződés az mRNS nem-tumor források, mint például aktivált limfociták, kötőszöveti sejtek vagy keringő tumorsejtek, nem zárható ki, [10], [26], [27], és részben megmagyarázza, hogy miért a szoros összefüggés a plazma és a tumor kifejezés volt kevesebb, mint tökéletes.
továbbá tumor heterogenitás lehet venni bizonyos változatosságot is. Specificitás között mozgott 78% -ról 90% -ra a plazma, míg 79% a daganat. A kevésbé tökéletes specifitás a tumor lehet, mivel a heterogenitás a daganat szövet is, amely kölcsönöz további támogatást a használatát plazma mRNS előrejelzésére érzékenység.
Újabb tanulmány vizsgálta a sejtmentes mRNS expressziója számos gén, beleértve TS [28], β-catenin [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], a MUC1 [34], CXCR4 [35], a BMI-1 [35 ], Her-2 [36] és DKK1 [24], ezek a tanulmányok középpontjában a használata sejtmentes mRNS a korai diagnózis, stádium és a betegség nyomon követése. Ezzel ellentétben, a legjobb tudásunk szerint a jelen tanulmány az első, hogy vizsgálja meg a lehetséges szerepét a plazma mRNS előrejelzésére docetaxel és a pemetrexed kemoszenzitivitás szilárd tumorok. Eredményeink azt sugallják, egy ígéretes szerepet plazma mRNS-expresszió, mint egy prediktív biomarker a gyomorrák és bizonyítják a használatát plazma mRNS kiválasztásában kemoterápia a betegek számára, anélkül, hogy szükség van az újra-biopszia időpontjában a betegség progressziója. Ezen túlmenően, a plazma mRNS is hasznos lehet nyomon követésére is kezelt betegeknél a neoadjuváns vagy adjuváns. A kezelési terv az ilyen betegek hozható létre aszerint, hogy azok mRNS kemoszenzitivitás profilt. Például gyomorrákos betegek alacsony plazma-TS mRNS lehet kezelni Pemetrexeddel alapú kemoterápia, míg a magas plazma BRCA1 hasznot húzhat a docetaxel-kezelést.
Mindazonáltal meg kell jegyezni, hogy a vizsgálat esetleg bizonyos korlátozások. A jelenlegi tanulmány alapján a betegek, akik a terápia-naiv. Gyűjti a plazma műtét előtt és a daganatok jobb a műtét után, tudtuk igazolni a plazma mRNS-érték ellenőrzésére is kezelt betegeknél a neoadjuváns vagy adjuváns. Ezután az érzékenységet és értékét felvette keringő mRNS elejétől áttétek különösen a betegek fenntartó második vonalbeli kemoterápia még nem tisztázott. Most mi is végzett további vizsgálatot betegek áttétek, és nem kapó műtét vagy fogadni második vonalbeli kemoterápia. Mi lesz a legújabb eredményeket a közeljövőben, amely tartalmazza a tartalom a fent említett. Katalógusa Következtetés
Összefoglalva, a plazma mRNS expressziós a BRCA1 és a TS is megegyeznek a tumor, és lehet egy ígéretes szerepet, mint potenciális prediktív biomarkerek docetaxel és peretrexed gyomorrákban. Ezek az eredmények az előzetes, és csak utaló ezen a ponton, és minden egyes ilyen párosított biomarker-kemoterápia hipotézisek kell érvényesíteni való felhasználásuk előtt rutin napi klinikai gyakorlatban. A klinikai vizsgálat tervezése folyik, annak érdekében, hogy érvényesítse a szerepe testre alapuló kezelés a plazma mRNS expressziója a BRCA1 és a TS.
További fájlt katalógusa megjegyzi katalógusa Jie Shen, Jia Wei hozzájárult egyaránt ezt a munkát.
nyilatkozatok
Köszönetnyilvánítás katalógusa Ezt a munkát támogatták a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (Grants No. 81401969, 81300339), a nagy nemzetközi (regionális) közös kutatási projekt Kínában (Grant No. 81220108023 ), és a Top Hat Talents Project Jiangsu tartomány (Grant No. 2011ws005). Munkavégzés Dr. Rosell laboratóriumában részben által finanszírozott támogatás a La Caixa Foundation. Katalógusa szerepe a finanszírozási forrás katalógusa A finanszírozási források nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés, adatelemzés, adatok értelmezése, vagy írásban a jelentést. | elektronikai kiegészítő anyag katalógusa 12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc kiegészítő fájl 1: kiegészítő módszerek. Táblázat S1. Mean mRNS-szintje a plazmában és a tumor. Ábra S1. Eredeti tumor és páros egér vizsgálatára. (A) A morfológiája az eredeti tumor diagnosztizált adenocarcinoma részleges nyálkahártya sejt karcinóma. (B) Páros xenograftokkal immunhiányos egerekben, megerősítette hematoxilin-eozin festéssel. Nem volt szignifikáns morfológiai különbség az eredeti tumor minta és a párosított xenograftok az egér modellek. Ábra S2. Érvényesítése stabilitásának plazma mRNS. Plazma mRNS-szinteket az összes gén stabil volt, miután alá különböző körülmények között. Ábra S3. Összefüggések az in vitro és in vivo katalógusa katalógusa gátlás aránya (A) a docetaxel és a (B) pemetrexed a kísérleti tanulmány. Ábra S4. Szoros összefüggés a plazma és a tumor mRNS expressziója (A) BRCA1 (n = 32), és a (B) TS (n = 40) a kísérleti tanulmány. Ábra S5. Összefüggések a mRNS expressziós szinteket, és in vitro katalógusa kemoszenzitivitás a kísérleti tanulmány. (A) A tumor BRCA1 és docetaxel érzékenység; (B) a plazma BRCA1 és docetaxel érzékenység; (C) tumor TS és pemetrexed érzékenység; és (D) a plazma TS és pemetrexed érzékenység. Ábra S6. mRNS expressziós szinteket, és in vivo katalógusa kemoszenzitivitás. Egy daganatgátlásban cut-off 50%, egérmodellben osztottuk (A) docetaxel-érzékeny és docetaxel-rezisztens alcsoportok és (B) pemetrexed-érzékeny és pemetrexed-rezisztens alcsoportok. BRCA1 mRNS szintek (pontok) magasabb volt a docetaxel-érzékeny csoportban, mint a docetaxel-rezisztens (P katalógusa < 0,001), és a TS szint (pontok) magasabbak voltak a pemetrexed-rezisztens csoportban, mint a pemetrexed- érzékeny (P = 0,013 katalógusa). (DOC 666 KB) A szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 4. ábra versengő érdek katalógusa A szerzők kijelentik, hogy nem versengő érdek. katalógusa szerzôk hozzájárulása katalógusa JS, JW, WXG és BRL tervezett kutatási és írta a papírt. JS, HW, LXY, ZZZ, LX és CC végzett kutatás. Kumulált, XPQ és JW adatait elemezte. TB és RR szerkesztett papírt. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• A szerepe a CCL22-CCR4 tengelyt a metasztázis gyomorrák sejtek cseplesz tejes foltok
• Prognosztikai hatását 25-hidroxi-D-vitamin szintek gyomorkarcinómában