Plasma mRNA uttrykk nivåer av BRCA1 og TS som potensielle prediktive biomarkører for kjemoterapi i mage cancer

Plasma mRNA uttrykk nivåer av BRCA1 og TS som potensielle prediktive biomarkører for kjemoterapi i magekreft
Abstract
Mål
Personlig kjemoterapi basert på prediktiv biomarkører kan maksimere effekten. Imidlertid vil tumorvev oppnådd ved tidspunktet for innledende diagnose ikke nødvendigvis den genetiske endringer ble observert ved tidspunktet for sykdomsprogresjon. Vi har undersøkt om plasma mRNA nivåer kan være et surrogat for kreft nivåer i forutsi kjemosensitivitet.
Metoder
I 150 mage kreftpasienter, ble mRNA nivåer av BRCA1 og TS vurderes i plasma og paret svulstvev. Mann-Whitney U-test ble brukt for å sammenligne mRNA uttrykk nivåer mellom tumorprøver stiller in vitro
følsomhet eller resistens mot docetaxel og pemetrexed. Alle statistiske tester var tosidig
Resultater
Det var signifikante sammenhenger mellom plasma og tumor mRNA nivåer av BRCA1 (rho = 0,696, P < 0,001). Og TS (rho = 0,620, P < 0,001). BRCA1-nivåer i plasma (docetaxel-sensitive: 1.25; docetaxel-resistente: 0,50, P
< 0,001) og tumor (docetaxel-sensitive: 8.81; docetaxel-resistente: 4.88, P
< 0,001) var positivt assosiert med docetaxel følsomhet. TS-nivåer i plasma (pemetrexed-sensitive: 0,90; pemetrexed-motstandsdyktig: 1.82, P
< 0,001) og tumor (pemetrexed-sensitive: 6.56; pemetrexed-motstandsdyktig: 16.69, P
< 0,001) var negativt assosiert med pemetrexed følsomhet.
Konklusjoner
Plasma mRNA uttrykk nivåer speile de i svulsten, og kan ha en lovende rolle som potensielle prediktive biomarkører for kjemoterapi.
nøkkelord
Plasma mRNA Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP kjemosensitivitet Predictive biomarkør HDRA Innledning
standard førstelinje kjemoterapi for lokalavansert eller metastatisk ventrikkelkreft er cisplatin eller oksaliplatin kombineres med andre legemidler, inkludert docetaxel og pemetrexed [1], [2]. Men fortsatt median overlevelse magre - rundt ett år. Ingen standard tilnærming for andrelinjebehandling eksisterer, selv om docetaxel har vist noen aktivitet [3]. Personlig kjemoterapi basert på mRNA uttrykk for prediktive biomarkører kan bidra til å maksimere behandling effekt og forlenge overlevelsen hos disse pasientene [3] -. [8] Hotell Brystkreft mottakelighet gen 1 (BRCA1), en essensiell komponent i flere DNA-skade reparasjon stier og veier som er involvert i cellulære responser til microtubule skade, anses å være en differensial modulator for å overleve med cisplatin og taxaner. Prekliniske og kliniske studier har rapportert at BRCA1 grad av tumor er forbundet med cisplatin og taxaner kjemosensitivitet. Tumor med høy ekspresjon av BRCA1 er 800 til mer enn 1000 ganger følsom for docetaxel, men 10-1000 ganger resistent overfor cisplatin, [4]. Vi har tidligere sett at BRCA1 mRNA nivåer i effusjon var negativt assosiert med platina sensitivitet, men positivt assosiert med docetaxel følsomhet i magekreftpasienter [5]. Disse funnene ble validert i mage pasienter som fikk andrelinje docetaxel: median overlevelse var 9,5 måneder i de med lav BRCA1 nivåer i primærtumor, 19,1 i de med middels nivå, og 25,8 måneder i de med høye nivåer (P
= 0,006 ) [3]. Pemetreksed er en ny type vannoppløselig kinazolin folat-analog, virker som en direkte og spesifikt tymidylatsyntase (TS) inhibitor. Lav ekspresjon av tymidylatsyntase (TS) er blitt rapportert å være assosiert med responsen på pemetrexed basert terapi i lungekreft [7], [8].
Tumor vev er hovedkilden for biomarkør undersøkelse i dag. Imidlertid kan tumorvev til tider være utilstrekkelig for genekspresjon analyse. Videre kan tumorvev oppnådd ved tidspunktet for innledende diagnose ikke nødvendigvis den genetiske endringer ble observert ved tidspunktet for sykdomsprogresjon [9], siden metastatiske og primære tumorer fra samme pasient kan variere på genomiske, epigenetiske og transcriptomic nivåer [9] - [ ,,,0],1. 3]. Videre innledende kjemoterapi kan i seg selv endre genekspresjon nivåer [14], [15]. Sirkulerende tumorcellefrie nukleinsyrer kan således være et nyttig, ikke-invasiv verktøy for å spore endringer i løpet av behandlingen [10], unngår behovet for en re-biopsi ved tidspunktet for å bestemme den beste behandling. I tillegg kan det være en nyttig surrogat når bare en liten mengde av tumorvev er tilgjengelig. Vår tidligere erfaring i lungekreft vist at epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) mutasjoner i serum kan være en god prediktiv markør for lungekreftpasienter som får EGFR tyrosinkinasehemmere [16]. I tillegg kan plasma TS mRNA påvises en ikke-invasiv i blodet før kirurgi og ekspresjonsnivået av plasma TS hadde stort potensiale som prediktive markører for raltitrexed følsomhet i magekreft [17]. Til dags dato, men lite er kjent om mulig bruk av plasma mRNA for å forutsi kjemosensitivitet av docetaxel og pemetrexed. Dessuten, selv om RNA frigjort i sirkulasjonen er stabil [10], [18], med for tiden tilgjengelige metoder, bare en liten mengde av mRNA som kan fås fra plasma eller serum, som begrenser både effekten av mRNA-ekstraksjon og konsistensen av mRNA analyser [10].
i denne studien, vedtok vi en praktisk og praktisk metode for plasma mRNA deteksjon, basert på RNA rensing og kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR), og brukte denne metoden for å undersøke om plasma mRNA nivåer kan være et surrogat for kreft nivåer i å forutsi kjemosensitivitet -. første i en pilotstudie av 40 pasienter og deretter i en total kohort av 150 pasienter
Materiale og metode
pasienter
fra oktober 2010 til juli 2011, 150 fersk -removed mage svulster og sammenkoblede blodprøver fra de samme pasientene ble hentet fra Avdeling for kreftbehandling og generell kirurgi, Trommetårnet Hospital, Nanjing, Kina. Alle pasientene har ikke mottatt noen kjemoterapi før operasjonen. Den friske mage svulster og blodprøver ble holdt ved 4 ° C og sendt til laboratoriet innen 15 minutter av samlingen.
Studien ble godkjent av Institutional Etikk Review Board of Drum Tower Hospital tilknyttet Medical School of Nanjing University, og skriftlig informert samtykke ble gitt av alle pasienter. Alle dyreforsøk ble utført i samsvar med den kinesiske Coordinating Committee on Cancer Research Forskrift for dyrenes velferd og dyrevern lov. Alle analyser, inkludert narkotika følsomhet testing, genekspresjonsanalyser og dyreforsøk, ble utført av forskjellige etterforskere som opptrer enkeltvis uten kjennskap til resultatene av de andre analysene.
Studere design
Vi først gjennomført en pilotstudie i 40 pasienter (figur 1A). For hver tumorprøve, ble følsomhet for docetaxel og pemetrexed undersøkt in vitro
av histoculture narkotika respons analyse (HDRA) [19] og in vivo
av transplantater i immunodeficient musemodeller [20] (tilleggsfiler 1: Figur S1 , AB tilgjengelig på nettet). I tillegg har både de muse xenotransplantater og de opprinnelige friske tumorprøver ble formalin-fiksert og parafin-innleiret (FFPE) for analyse av BRCA1 og TS mRNA-ekspresjon. BRCA1 og TS uttrykk ble også analysert i sammenkoblede blodprøver. Figur 1 Flytdiagram som viser pasientens disposisjon og eksperimenter utført. Pilotstudie i 40 pasienter (A) og total kohort av 150 mage kreftpasienter (B).
Basert på resultatene av pilotstudien, foretok vi å validere våre funn i den totale kohort av 150 mage kreftpasienter (figur 1B ). I denne kohort, ble de samme prosedyrene utført, med unntak av in vivo
testing av kjemosensitivitet. De mRNA nivåer i plasma og FFPE- tumorvev av BRCA1 og TS ble vurdert og Mann-Whitney U-test ble brukt for å sammenligne mRNA uttrykk nivåer mellom tumorprøver stiller in vitro
følsomhet eller resistens mot docetaxel og pemetrexed.
for fullstendig informasjon om alle metodikk, se tilleggsfiler 1, som er tilgjengelig på nettet.
in vitro
kjemosensitivitet i pilotstudien og den totale kohort
Ferske tumorvev ble sendt til laboratoriet i 4 ° C Hanks 'balanserte salt løsning med 1% penicillin /streptomycin. Prøvene ble vasket med Hanks 'balanserte saltløsning to ganger, og hakket opp i små biter på omtrent 10 mg, som så ble plassert på preparerte kollagenoverflater i 24-brønners mikrotiterplater. Platene ble inkubert i 7 dager ved 37 ° C i nærvær av medikamenter oppløst med RPMI 1640 medium inneholdende 20% føtalt kalveserum og holdt i en fuktet atmosfære inneholdende 95% luft-5% CO 2. Konsentrasjoner av narkotika var 100 ug /ml for docetaxel [21], og 400 ug /ml for pemetrexed [7]. HDRA prosedyrer ble utført som rapportert av Furukawa og medarbeidere [19] med små modifikasjoner. Hemmingshastigheten ble beregnet ved å bruke følgende formel: inhiberingsgrad (%) = (1-T /C) x 100, hvor T er den midlere absorbans av behandlede tumor /vekt og C er den midlere absorbans av kontrolltumor /vekt. Alle prøver ble klassifisert i følsomme og resistente grupper som bruker minimum P
metoden som modifisert av Lausen og Schumacher [22].
In vivo
kjemosensitivitet i pilotstudien
Hver nylig fjernet kirurgisk svulst vevet ble skåret i stykker på 3 x 3 x 3 mm 3, som ble transplantert i løpet av 30 minutter til 9-18 athymiske mus med immunsvikt, kalt et "panel". I hvert panel, når tumoren vokste til en størrelse på 50-100 mm 3, mus med xenotransplantater ble randomisert til behandling med docetaxel 15 mg /kg /dag, ip eller pemetrexed 20 mg /kg /dag, ip eller ingen behandling (kontroll). Individuelle tumorvolum (V) ble beregnet ved hjelp av formelen "V = (lengde x bredde x bredde) /2", og sammenlignet med verdier ved begynnelsen av behandlingen for å oppnå den relative tumorvolum. Median behandlede-til-kontroll verdier av relativ tumorvolumet ble kalt "inhiberingshastigheten in vivo
" og ble brukt for å vurdere følsomhet for docetaxel eller pemetrexed.
MRNA uttrykk i pilotstudien og den totale kohorten
Two milliliter blod ble oppsamlet i EDTA-rør før kirurgi, ble holdt ved 4 ° C og sendt til laboratoriet i løpet av 15 minutter. Total RNA fra plasma ble ekstrahert med TRIzol LS og kloroform og renses ved PureLink RNA Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, USA). Total RNA fra FFPE-tumorvev ble ekstrahert i samsvar med en proprietær prosedyre (Europeisk patent nummer EP1945764-B1). Etter at RNA-ekstraksjon og rensing, ble M-MLV revers transkriptase Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) anvendt for å danne cDNA for Q-PCR for å påvise ekspresjon av β-aktin (ACTB - anvendt som endogene kontroll), og genene undersøkt . Hver batch av reaksjon inkludert en positiv kontroll fra kommersielle human lunge og lever RNA (Stratagene, La Jolla, CA, USA) som kalibratorer og negative kontroller uten RNA og revers transkriptase. Mal cDNA ble forsterket med spesifikke primere og prober som bruker Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Relative genuttrykk quantifications ble beregnet i henhold til den komparative Ct metoden. Endelige resultater ble bestemt ved formelen mRNA-ekspresjonsnivået = 2 - △△ Ct [6], [23] og ble analysert med Stratagene programvare
reproduserbarhet og stabilitet av genekspresjon analyse i plasma
. reproduserbarheten av genekspresjon-analysen ble testet samtidig med to metoder. For den første metoden, ble blodprøver fra fem pasienter oppsamlet fra den første dag til den femte dagen før kirurgi på samme tid hver dag. I denne perioden fikk pasientene verken får kjemoterapi eller spesialbehandling. Genuttrykk nivåer (høy /middels vs lav) ble bestemt for hver prøve, og andelen av identiske resultater ble beregnet for hver pasient. For den andre metoden ble blodprøver tatt hver gang fra ytterligere ti pasienter, og hver prøve ble delt i fem porsjoner. Genuttrykk nivåer (høy /middels vs lav) ble bestemt for hver prøve, og andelen av identiske resultater ble beregnet for hver pasient. Reproduserbarheten Hastigheten ble definert som gjennomsnittet av alle 15 prosentandeler (5 pasienter fra en fremgangsmåte og 10 pasienter fra to metode).
For å teste stabiliteten av blodprøvene, ble forskjellige plasma alikvoter av den samme prøve fremstilt i henhold forskjellige forhold. Aliquoter ble inkubert ved værelsestemperatur eller på is i 30 minutter, 1 time, 1,5 time eller 2 timer. QRT-PCR ble deretter utført, og rå ΔCt verdier av forskjellig genet ble sammenlignet med standard protokollen (ΔCt = Ct gen-Ct ACTB).
Statistiske analyser
Mann-Whitney U- testen og Kruskal-Wallis-test ble anvendt for å teste assosiasjoner mellom mRNA-nivåer og kliniske karakteristika og mellom følsomhet for hver kjemoterapeutisk middel og kliniske karakteristika. Den Spearman rank korrelasjon test ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom in vivo Hotell og in vitro
hemming priser og mellom plasma og tumor mRNA uttrykk nivåer. Mann-Whitney U-test ble brukt for å sammenligne mRNA uttrykk nivåer mellom tumorprøver stiller in vitro
følsomhet eller resistens mot docetaxel og pemetrexed. Mottaker operasjonelle egenskaper (ROC) kurver ble konstruert for å vurdere sensitivitet, spesifisitet, og respektive områder under kurvene (AUC) med sine 95% konfidensintervall (CIS). Vi undersøkte optimalisert cut-off verdi for prediksjon ved å maksimere summen av sensitivitet og spesifisitet og minimere den totale feilen (kvadratroten av summen [1-følsomhet] 2 + [1-spesifi byen] 2) , og ved å minimere avstanden til cut-off verdi til øverste venstre hjørne av ROC kurve [24]. Alle statistiske tester var tosidig og signifikans ble satt til P
< 0,05 (tosidig). Alle analyser ble utført ved anvendelse av SPSS, versjon 16.0.
Resultater
Karakteristika for alle pasienter er vist i tabell 1. De fleste av pasientene var menn (73,3%), og den dominerende histologi var adenokarsinom. Ninety-fire (62,7%) av pasientene hadde stadium III sykdom. Lymfeknutemetastaser var til stede i 115 (76,7%) patients.Table 1 Pasientkarakteristika
Karakteristisk
Forstudie
Total kohort *
N = 40

N = 150
N (%)
N (%)
Age, yr, median (spredning)
63 (40-83)
64 (29-84)
Sex
Mann fra 31 (77,5)
110 (73,3)
Kvinne
9 (22,5)
40 (26,7)
Tumor nettstedet
Distal magen
12 (30,0)
57 (34,0)
Proximal magen
19 (47,5)
62 (41,3)
Hele magen
9 (22.5)
37 (24,7)
Stage
I
fire (10,0)
17 (11,3)
II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5)
94 (62,7)
IV
2 (5,0)
5 (3,3)
Histologisk klasse
1 0
3 (2,0)
2
8 (20,0)
31 (20,7)
3
22 (55,0)
71 (47,3)
Mixed 1-2
0
2 (1,3)
Blandet 2-3
10 (25,0)
43 (28,7)
lymfeknutemetastaser
Ingen
9 (22,5)
35 (23,3)
Ja
31 (77,5)
115 (76,7) product: * den totale kohorten besto av de opprinnelige 40 pasienter inkludert i pilotstudien pluss ytterligere 110 pasienter.
reproduserbarheten av plasmaet mRNA påvisning var 92% for BRCA1, og 89% for TS. De mRNA uttrykk nivåer var stabil etter romtemperatur eller is inkubasjon i 30 min, 1 time, 1,5 time og 2 h (Tilleggs fil 1: Figur S2, som er tilgjengelig på nettet).
Forstudie
Følsomhet for docetaxel og pemetrexed var vellykket vurderes i de 40 friske tumorprøver av HDRA. Elleve paneler av immunsvikt mus (9-18 mus per panel, 148 mus totalt) med menneske avledet xenografter ble opprettet fra alle 40 kirurgiske prøver for in vivo
analyse av følsomhet. Den Spearman rank korrelasjon testen viste en signifikant korrelasjon mellom in vitro Hotell og in vivo
hemming priser for docetaxel (RHO = 0,900, P
< 0,001) = og pemetrexed (rho 0,836, P
<0,001) (Tilleggs fil 1: Figur S3, AB, som er tilgjengelig på nettet)
BRCA1 mRNA nivåer ble vellykket vurdert i alle 40 tumorprøver, i 32 sammenkoblede blodprøver, og i 10 paneler av musemodeller, mens TS mRNA nivåer. var vellykket vurdert i alle 40 tumorprøver, alle 40 blodprøver, og i 9 paneler av musemodeller. Den Spearman rank korrelasjon testen viste en sammenheng mellom plasma og tumor mRNA nivåer av BRCA1 (RHO = 0,647, P
< 0,001) og mellom plasma og svulst nivåer av TS (rho = 0,615, P
< 0,001) (tilleggsfiler 1: Figur S4, AB, som er tilgjengelig på nettet). Både plasma og tumor BRCA1 nivåer ble korrelert med docetaxel følsomhet (rho = 0,492, P
= 0.004 og rho = 0,527, P
< 0,001, henholdsvis), og begge plasma og svulst TS nivåer korrelert med pemetrexed motstand ( rho = -0,627, P
< 0,001 og rho = -0,443, P
= 0,004, henholdsvis Spearman rank korrelasjon test) (tilleggsfiler 1: Figur S5, AD, tilgjengelig på nettet). BRCA1 mRNA nivåene var høyere i docetaxel-sensitive enn i docetaxel-resistente musemodeller (11,26 vs 2,63; P
< 0,001), mens TS nivåene var høyere i pemetrexed-motstandsdyktig enn i pemetrexed-sensitive mus ( 3,34 vs 7,27; P
= 0,013, Mann-Whitney U-test) (tilleggsfiler 1: Figur S6, AB, som er tilgjengelig på nettet)
Total kohort
BRCA1 og TS mRNA uttrykk ble vellykket vurdert i tumor. vev fra alle 150 pasienter. Oppklaringsprosenten i plasma var 82,00% for BRCA1 og 90,67% for TS. De gjennomsnittlige mRNA nivåer i plasma og tumor er vist i tilleggsfiler 1: Tabell S1, som er tilgjengelig på nettet. Det var ingen signifikant sammenheng mellom kliniske egenskaper og mRNA uttrykk nivåer av BRCA1 eller TS (P > 0,05).
Det var en positiv korrelasjon mellom plasma og tumor mRNA nivåer av BRCA1 (RHO = 0.696, P
<0,001) og TS (RHO = 0.620, P
< 0,001, Spearman rank korrelasjon test) (figur 2A-B). Ingen forskjeller i baseline ble observert i henhold til plasma mRNA nivåer, svulst mRNA nivåer, eller in vitro
kjemosensitivitet. Figur 2 Korrelasjon mellom plasma og tumor-mRNA-ekspresjonsnivåene av (A) BRCA1 og (B) TS i 150 magekreftpasienter. Det var en signifikant korrelasjon mellom plasma og tumor mRNA uttrykk nivåer av både gener (P
< 0,001, henholdsvis)
BRCA1 nivåer i plasma (docetaxel-sensitive. 1,25; docetaxel-resistente: 0,50, P
< 0,001) og tumor (docetaxel-sensitive: 8.81; docetaxel-resistente: 4.88, P
< 0,001) var positivt assosiert med docetaxel følsomhet. BRCA1 nivåer i plasma og tumor var høyere i docetaxel-sensitive enn i docetaxel motstandsdyktig gruppen. TS-nivåer i plasma (pemetrexed-sensitive: 0,90; pemetrexed-motstandsdyktig: 1.82, P
< 0,001) og tumor (pemetrexed-sensitive: 6.56; pemetrexed-motstandsdyktig: 16.69, P
< 0,001) var negativt assosiert med pemetrexed følsomhet. TS-nivåer i plasma og tumor var lavere i pemetrexed-sensitive enn i pemetrexed-resistente gruppe. (Figur 3A-D, Mann-Whitney U-test). Figur 3 In vitro kjemosensitivitet forbundet med plasma-og tumor-ekspresjonsnivåene av BRCA1and TS i 150 magekreftpasienter. BRCA1-nivåer i plasma (A) og tumor (B) var høyere i docetaxel-sensitive enn i docetaxel motstandsdyktig gruppen. TS-nivåer i plasma (C) og tumor (D) var lavere i pemetrexed-sensitive enn i pemetrexed-resistente gruppe. Linjene inne i boksene betegnet medianer. Værhårene av boksplott:. SE, 95% KI
følsomhet i å forutsi kjemosensitivitet varierte fra 63% til 71% for plasma og fra 70% til 78% for svulst mRNA. Spesifisitet varierte fra 78% til 90% for plasma og 79% av tumor-mRNA (tabell 2, figur 4) .table 2 sensitivitet og spesifisitet av plasma og tumor genekspresjon nivåer for prediksjon av kjemosensitivitet
Genekspresjon

Kjemoterapeutika
N
Optimal cut-off
Sensitivitet
spesifisitet
AUC (95% CI)

P
Plasma BRCA1
Docetaxel
123
0,76
63%
90%
0,77 (0,67 til 0,87)
<0,001
TS
Pemetrexed
136
1,01
71%
78%
0,78 (0,69 til 0,87)
< 0,001
Tumor
BRCA1
Docetaxel
123
6.09
70%
79%
0,75 (0,66 til 0,84)
< 0,001
TS
Pemetrexed 136
8,08
78%
79%
0,83 (0,76 til 0,90)
< 0,001
Figur 4 ROC-kurver som viser sensitivitet og spesifisitet av plasma og tumor genuttrykk i forutsi kjemosensitivitet . (A) BRCA1 og docetaxel (n = 123); (B) TS og pemetrexed (n = 136).
Diskusjon
I denne studien ble BRCA1 og TS mRNA nivåer i plasma korrelert med nivåer i paret FFPE svulstvev. BRCA1 og TS mRNA nivåer i både plasma og tumor var assosiert med in vitro
kjemosensitivitet fersk Eksplanterte magekreft. Videre plasma mRNA-nivåer viste betydelig sensitivitet og spesifisitet i å forutsi kjemosensitivitet. Samlet utgjør disse funnene tyder på at plasma mRNA speiler svulst mRNA og kan bevise et nyttig verktøy for å forutsi kjemosensitivitet.
Metoden vi etablert for å oppdage plasma mRNA, basert på RNA berikelse av rensing kolonne, gjør det mer nøyaktige, følsomme og reproduserbar deteksjon , enklere håndtering og raskere resultater [10], [25], noe som gjør det mulig for rutinemessig analyse av genuttrykk i daglig klinisk praksis [25]. Imidlertid forurensning av mRNA ved ikke-tumorkilder, slik som aktiverte lymfocytter, stromale celler eller sirkulerende tumorceller, kan ikke utelukkes [10], [26], [27], og kan delvis forklare hvorfor korrelasjon mellom plasma og tumor uttrykket var mindre enn perfekt.
Videre svulst heterogenitet kan forklare noen ulikheter også. Spesifisitet varierte fra 78% til 90% for plasma, mens 79% av tumor. Jo mindre perfekt spesifisitet i tumor kan også være på grunn av heterogeniteten for tumorvevet i seg selv, noe som gir ytterligere støtte til bruken av plasma mRNA for å forutsi følsomheten.
Nyere studier har undersøkt den cellefrie mRNA ekspresjon av flere gener, inkludert TS [28], β-catenin [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], BMI-1 [35 ], Her-2 [36] og DKK1 [24], har disse studiene fokusert på bruk av cellefrie mRNA for tidlig diagnose, tumor oppsamling og sykdom overvåking. I motsetning til vår beste kunnskap, er denne studien den første til å undersøke den potensielle rolle plasma mRNA for å forutsi docetaxel og pemetrexed kjemosensitivitet av solide svulster. Våre funn tyder på et lovende rolle for plasma-mRNA-ekspresjon som en prediktiv biomarkør i magekreft og gir bevis for anvendelsen av plasma mRNA i valg av kjemoterapi for pasienter uten behov for re-biopsi på tidspunktet for sykdomsprogresjon. I tillegg kan plasma mRNA også vise seg å være nyttig for å overvåke pasienter som behandles i neoadjuvant eller adjuvant. Behandlingen plan for disse pasientene kan genereres i henhold til deres mRNA kjemosensitivitet profil. For eksempel kan magekreftpasienter med lave nivåer av plasma TS mRNA bli behandlet med pemetrexed-basert kjemoterapi, mens de med høye nivåer av plasma BRCA1 kan ha nytte av behandling med docetaxel.
Likevel bør vi merke oss at vår studie kan ha noen begrensninger. Den aktuelle studien er basert på pasienter, som er terapi-naive. Ved å samle sine plasma før operasjonen og svulster rett etter operasjonen, kan vi demonstrert plasma mRNA verdi for overvåking av pasienter som behandles i neoadjuvant eller adjuvant behandling. Deretter er det følsomhet og verdien av å plukke opp sirkulerende mRNA fra tidlig metastaser spesielt for pasienter reservere andre kjemoterapi fortsatt uklart. Nå er vi også å gjennomføre videre studier på pasienter med metastaser, og kan ikke motta kirurgi eller å motta andre kjemoterapi. Vi vil ha de siste resultatene i nær fremtid som vil inneholde innholdet nevnt ovenfor.
Konklusjon
konklusjon, plasma mRNA uttrykk nivåer av BRCA1 og TS kunne speile de i svulsten, og kan ha en lovende rolle som potensiell prediktive biomarkører for docetaxel og peretrexed i magekreft. Disse funnene er foreløpige og bare tankevekkende ved dette punkt, og hver av disse sammenkoblede biomarkør-kjemoterapi hypoteser må valideres før de blir brukt i rutinen daglig klinisk praksis. En klinisk studie er under designet for å validere rolle tilpasse behandling basert på plasma mRNA uttrykk av BRCA1 og TS.
Tilleggsfiler
Merknader
Jie Shen Jia Wei bidratt likt til dette arbeidet.
Erklæringer
Takk
Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Natural Science Foundation of China (Grants nr 81401969, 81300339), Major International (Regional) Joint Research Project of China (Grant nr 81220108023 National ), og Top Seks Talenter Prosjekt i Jiangsu-provinsen (Grant No. 2011ws005). Arbeid i Dr Rosell laboratorium er delvis finansiert av et stipend fra La Caixa-stiftelsen.
Rolle finansieringskilde Bedrifter Den finansieringskilder hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling, dataanalyse, tolking, eller skriftlig rapporten
Electronic supplerende materiale
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc tilleggsfiler. 1: supplerende metoder. Tabell S1. Midlere mRNA-nivåer i plasma og tumor. Figur S1. Opprinnelige svulsten og sammenkoblede muse xenografter. (A) Morfologi av den opprinnelige tumor diagnostisert som adenokarsinom med delvis slimete cell carcinoma. (B) Koblede transplantater i immunsvikt mus, bekreftet av hematoxylin-eosin-farging. Det var ingen signifikante morfologiske forskjeller mellom den opprinnelige svulsten prøven og sammenkoblede xenografter i musemodeller. Figur S2. Validering av stabiliteten av plasma mRNA. Plasma-mRNA-nivåer av alle genene var stabile etter å ha blitt utsatt for forskjellige betingelser. Figur S3. Sammenhenger mellom in vitro Hotell og in vivo
hemming priser for (A) docetaxel og (B) pemetrexed i pilotstudien. Figur S4. Korrelasjon mellom plasma og tumor-mRNA-ekspresjon av (A) BRCA1 (n = 32) og (B) TS (n = 40) i pilotstudie. Figur S5. Sammenhenger mellom mRNA uttrykk nivåer og in vitro
kjemosensitivitet i pilotstudien. (A) Tumor BRCA1 og docetaxel følsomhet; (B) plasma BRCA1 og docetaxel følsomhet; (C) tumor TS og pemetrexed følsomhet; og (D) plasma TS og pemetrexed følsomhet. Figur S6. mRNA uttrykk nivåer og in vivo
kjemosensitivitet. Ved hjelp av en tumorinhibering cut-off på 50%, ble musemodeller inndelt i (A) docetaxel-sensitive og docetaksel-resistente undergrupper og (B) pemetrexed-sensitive og pemetrexed bestandig undergrupper. BRCA1 mRNA nivåer (prikker) var høyere i docetaxel-sensitive gruppen enn i docetaxel-resistente gruppe (P
< 0,001), og TS nivåer (prikker) var høyere i pemetrexed-motstandsdyktig-gruppen enn i pemetrexed- sensitive gruppen (P
= 0,013). (DOC 666 KB) Forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 4 Konkurrerende interesse
Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende interesse.
Forfatternes bidrag
JS, JW, WXG og BRL utformet forskning og skrev avisen. JS, HW, LXY, ZZZ, LX og CC utført forskningen. YTD, XPQ og JW analysert data. TB og RR redigert papir. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Rollen til CCL22-CCR4 akse i den metastasering av magekreftceller i omentfaktorene melkeaktige flekker
• Prognostiske effekten av 25-hydroksyvitamin D-nivåer i magekreft