Plasma mRNA expressie niveaus van BRCA1 en TS als potentieel predictieve biomarkers voor chemotherapie bij maagkanker

Plasma mRNA expressie niveaus van BRCA1 en TS als potentieel predictieve biomarkers voor chemotherapie bij maagkanker
De abstracte Doelstelling
Gepersonaliseerde chemotherapie op basis van voorspellende biomarkers kunnen werkzaamheid maximaliseren. Echter tumorweefsel verkregen op het ogenblik van de initiële diagnose niet overeen genetische veranderingen waargenomen op het tijdstip van ziekteprogressie. We hebben onderzocht of plasma mRNA niveaus een surrogaat voor tumor niveaus in het voorspellen van chemosensitivity kan zijn.
Methods
In 150 maagkankerpatiënten, werden mRNA niveaus van BRCA1 en TS geëvalueerd in plasma en gepaarde tumorweefsel. De Mann-Whitney U-test werd gebruikt om mRNA-expressieniveaus vergelijken tussen tumormonsters vertonen in vitro
gevoeligheid of resistentie tegen docetaxel en pemetrexed. Alle statistische toetsen waren tweezijdig
Resultaten
Er waren significante correlaties tussen plasma en tumor mRNA niveaus van BRCA1 (rho = 0,696, P < 0,001). En TS (rho = 0.620, P < 0,001). BRCA1 niveaus in plasma (docetaxel-gevoelig: 1,25; docetaxel-resistente: 0.50, P Restaurant < 0,001) en tumor (docetaxel-gevoelig: 8,81; docetaxel-resistente: 4,88, P Restaurant < 0,001) waren positief geassocieerd met docetaxel gevoeligheid. TS niveaus in plasma (pemetrexed-gevoelig: 0.90; pemetrexed-bestendig: 1,82, P Restaurant < 0,001) en tumor (pemetrexed-gevoelig: 6.56; pemetrexed-bestendig: 16.69, P Restaurant < 0,001) waren negatief in verband met pemetrexed gevoeligheid.
Conclusies
Plasma mRNA expressie weerspiegelen die in de tumor en kan een veelbelovende rol als potentieel predictieve biomarkers voor chemotherapie.
Sleutelwoorden
Plasma mRNA Maagkanker chemosensitivity Predictive biomarker HDRA Introductie Ondernemingen De standaard eerstelijns chemotherapie regime voor lokaal gevorderde of gemetastaseerde maagkanker wordt cisplatine of oxaliplatine in combinatie met andere drugs, met inbegrip van docetaxel en pemetrexed [1], [2]. Echter, mediane overleving blijft mager - ongeveer een jaar. Geen standaard aanpak voor de tweede lijn therapie bestaat, hoewel docetaxel enige activiteit heeft aangetoond [3]. Gepersonaliseerde chemotherapie op basis van de mRNA expressie van predictieve biomarkers zou kunnen helpen om effectiviteit van de behandeling te maximaliseren en het verlengen van de overleving van deze patiënten [3] - [8].
Borstkanker gevoeligheid gen 1 (BRCA1), een essentiële component in meerdere DNA-schade herstel paden en routes betrokken bij cellulaire reacties op microtubule schade, wordt beschouwd als een differentiële modulator overleven met cisplatine en taxanen zijn. Preklinische en klinische studies hebben gemeld dat BRCA1 niveau van tumor geassocieerd met cisplatine en taxanen chemosensitivity. Tumor met hoge expressie van BRCA1 is 800 tot meer dan 1000-voudig gevoeliger voor docetaxel, maar 10-1000-voudig resistent tegen cisplatine [4]. We hebben eerder opgemerkt dat BRCA1 mRNA niveaus in effusies negatief werden geassocieerd met gevoeligheid voor platina, maar positief geassocieerd met docetaxel gevoeligheid bij maagkanker patiënten [5]. Deze bevindingen werden gevalideerd in de maag patiënten die tweede lijn docetaxel: mediane overleving was 9,5 maanden bij degenen met een lage BRCA1 niveaus in primaire tumor, 19.1 in die met tussenliggende niveaus, en 25,8 maanden bij degenen met een hoog niveau (P = 0,006
) [3]. Pemetrexed is een nieuw soort van in water oplosbare chinazoline folaat analoog, werkt als een directe en specifieke thymidylaatsynthase (TS) remmer. Lage expressie van thymidylaatsynthase (TS) is in verband gebracht met de respons op pemetrexed gebaseerde therapie bij longkanker [7], [8].
Tumorweefsel is de belangrijkste bron voor biomarker onderzoek op dit moment. Evenwel tumorweefsel soms ontoereikend zijn voor genexpressie analyse. Bovendien kan tumorweefsel verkregen op het ogenblik van de initiële diagnose niet overeen genetische veranderingen waargenomen op het tijdstip van ziekteprogressie [9], aangezien metastatische en primaire tumoren van dezelfde patiënt kunnen variëren op genomisch, epigenetische en transcriptoom niveaus [9] - [ ,,,0],13]. Bovendien initiële chemotherapie kan zelf veranderen genexpressie [14], [15]. Circulerende tumorcellen celvrije nucleïnezuren kunnen dus een bruikbare, niet-invasief middel voor het bijhouden veranderingen in de loop van de behandeling [10], het wegnemen van de noodzaak van een re-biopsie bij de bepaling van de beste behandeling. Bovendien kan het nuttig surrogaat wanneer slechts een kleine hoeveelheid tumorweefsel beschikbaar. Onze ervaring bij longkanker aangetoond dat epidermale groeifactorreceptor (EGFR) mutaties in serum een ​​goede voorspellende marker voor patiënten met longkanker die EGFR-tyrosinekinaseremmers kunnen zijn [16]. Bovendien kan plasma TS mRNA niet-invasieve wijze bloed worden gedetecteerd vóór de operatie en het expressieniveau van plasma TS had groot potentieel als predictieve biomarkers voor raltitrexed gevoeligheid bij maagkanker [17]. Tot op heden is echter weinig bekend over het mogelijke gebruik van plasma-mRNA voor het voorspellen van chemische gevoeligheid van docetaxel en pemetrexed. Ofschoon RNA dat werd vrijgemaakt in omloop stabiel [10], [18], met de huidige beschikbare werkwijzen slechts een kleine hoeveelheid mRNA kan worden verkregen uit plasma of serum, die zowel de efficiëntie van mRNA extractie en de samenhang van mRNA assays beperkt [10].
In de onderhavige studie hebben we vastgesteld een praktische en geschikte methode voor plasma mRNA detectie op basis van RNA zuivering en kwantitatieve RT-PCR (qRT-PCR), en deze methode te onderzoeken of plasma mRNA niveaus zijn een surrogaat voor tumor niveaus in het voorspellen van chemosensitivity -. voor het eerst in een pilot-studie van 40 patiënten en vervolgens in een totaal cohort van 150 patiënten
Materialen en methoden
patiënten
van oktober 2010 tot juli 2011, 150 vers -removed maag tumoren en gepaarde bloedmonsters van dezelfde patiënten werden verkregen van de afdeling Oncologie en General Surgery, Drum Tower Ziekenhuis, Nanjing, China. Alle patiënten hebben geen chemotherapie voor de operatie. De frisse maag tumoren en bloedmonsters werden bij 4 ° C bewaard en binnen 15 minuten van de collectie naar het laboratorium gestuurd. Ondernemingen De studie werd goedgekeurd door de Institutional Ethics Review Board van Drum Tower Ziekenhuis verbonden aan de Medical School van Nanjing University, en schriftelijke geïnformeerde toestemming werd verleend door alle patiënten. Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de Chinese Coordinating Committee on Cancer Research Reglement voor het welzijn van dieren en de Wet Dierenbescherming. Alle analyses, met inbegrip van drug gevoeligheid testen, analyse van genexpressie en dierlijke experimenten werden uitgevoerd door verschillende onderzoekers individueel handelen zonder kennis van de resultaten van de andere analyses uitgevoerd.
Studieopzet
We hebben eerst een pilot-studie in 40 uitgevoerd patiënten (Figuur 1A). Voor elke tumor monster, werd de gevoeligheid voor docetaxel en pemetrexed in vitro
onderzocht door histologische drug respons assay (HDRA) [19] en in vivo
door xenotransplantaten in immunodeficiënte muizenmodellen [20] (Extra file 1: Figuur S1 , AB online beschikbaar). Bovendien zijn zowel de muis xenotransplantaten en de oorspronkelijke verse tumormonsters werden in formaline gefixeerde en in paraffine ingebedde (FFPE) voor de analyse van BRCA1 en TS mRNA expressie. BRCA1 en TS expressie werd geanalyseerd in de gepaarde bloedmonsters. Figuur 1 Schema van de patiënt dispositie en experimenten uitgevoerd. Pilot-studie bij 40 patiënten (A) en de totale cohort van 150 patiënten met maagkanker (B).
Basis van de bevindingen van de pilot-studie, ondernamen we onze bevindingen te valideren in de totale cohort van 150 patiënten met maagkanker (Figuur 1B ). In dit cohort werden dezelfde procedures uitgevoerd, met uitzondering van het in vivo testen van
chemosensitivity. De mRNA-niveaus in plasma en FFPE tumor weefsel van BRCA1 en TS werden beoordeeld en de Mann-Whitney U-test werd gebruikt om mRNA expressie niveaus tussen tumormonsters exposeren in vitro
gevoeligheid of weerstand tegen docetaxel en pemetrexed te vergelijken.
voor volledige details van alle methodologie, zie Extra file 1, online beschikbaar.
in vitro
chemosensitivity in de pilot en de totale cohort
Fresh tumor weefsel naar het laboratorium gestuurd in 4 ° C Hanks 'gebalanceerde zoutoplossing met 1% penicilline /streptomycine. Monsters werden gewassen met Hanks 'gebalanceerde zoutoplossing tweemaal en gehakt in kleine stukjes van ongeveer 10 mg, die vervolgens bereid collageen oppervlakken werden in 24-well microtiterplaten. Platen werden gedurende 7 dagen bij 37 ° C in de aanwezigheid van drugs opgelost in RPMI 1640 medium dat 20% foetaal kalfsserum en bewaard in een vochtige atmosfeer die 95% lucht-5% CO 2. Verhogen van medicijnen waren 100 ug /ml voor docetaxel [21] en 400 ug /ml voor pemetrexed [7]. HDRA procedures werden uitgevoerd zoals beschreven door Furukawa en collega's [19] met geringe modificaties. De remming werd berekend met de volgende formule: inhibitieverhouding (%) = (1-T /C) x 100, waarin T de gemiddelde absorptie van behandelde tumor /gewicht en C is de gemiddelde absorptie van de controle tumor /gewicht. Alle monsters werden ingedeeld in gevoelige en resistente groepen met behulp van de minimale P
waarde methode, zoals gewijzigd door Lausen en Schumacher [22].
In vivo
chemosensitivity in de pilot
Elk vers verwijderde tumor chirurgisch weefsel werd gesneden in stukken van 3 x 3 x 3 mm 3, die binnen 30 minuten werden getransplanteerd naar 9-18 athymische immunodeficiënte muizen, aangeduid als een "panel". In elk paneel, wanneer de tumor groeide tot een grootte van 50-100 mm 3, muizen met xenotransplantaten werden gerandomiseerd voor behandeling met docetaxel 15 mg /kg /d, ip of pemetrexed 20 mg /kg /d, ip of geen behandeling (controle). Individuele tumor volumes (V) werden berekend door de formule "V = (lengte x breedte x breedte) /2" en vergeleken met de waarden aan het begin van de behandeling om de relatieve tumorvolume verkrijgen. Mediane behandeld naar controlewaarden van relatieve tumorvolume werden aangeduid als "mate van remming in vivo
" en werden gebruikt om gevoeligheid voor docetaxel of pemetrexed beoordelen.
MRNA expressie in de pilot en de totale cohort
Twee milliliter bloed werd verzameld in EDTA-buisjes voor de operatie, bewaard bij 4 ° C en binnen 15 minuten naar het laboratorium gestuurd. Totaal RNA uit plasma werd geëxtraheerd met TRIzol LS en chloroform, en gezuiverd met PureLink RNA Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, USA). Totaal RNA uit FFPE-tumorweefsels werd geëxtraheerd volgens een eigen procedure (Europees patentnummer EP1945764 B1). Na RNA-extractie en zuivering, M-MLV reverse transcriptase kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) werd gebruikt om cDNA te genereren van Q-PCR de expressie van β-actine detecteren (ACTB - als endogene controle) en de genen onderzocht . Elke batch reactie omvatte een positieve controle van commerciële menselijke long en lever RNA (Stratagene, La Jolla, CA, USA) als ijk- en negatieve controles zonder RNA en reverse transcriptase. Matrijs cDNA werd geamplificeerd met specifieke primers en probes gebruikt Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Relatieve genexpressie kwantificering werden berekend volgens de vergelijkende Ct methode. De eindresultaten werden bepaald door de formule mRNA-expressieniveau = 2 - △△ Ct [6], [23] en werden geanalyseerd met de Stratagene software
reproduceerbaarheid en stabiliteit van de genexpressie analyse in plasma
. de reproduceerbaarheid van de genexpressie test werd tegelijkertijd getest met twee methoden. Voor de eerste werkwijze werden bloedmonsters uit vijf patiënten verzameld uit de eerste dag tot de vijfde dag voor de operatie op hetzelfde tijdstip van de dag. Tijdens deze periode kregen de patiënten geen chemotherapie of een speciale behandeling. Genexpressie (hoge /lage tussenproduct vs) werden voor elk monster en het percentage identieke resultaten werd voor elke patiënt berekend. Voor de tweede methode werd bloed van eenmaal per nogmaals tien patiënten opgestelde, en elk monster werd verdeeld in vijf porties. Genexpressie (hoge /lage tussenproduct vs) werden bepaald voor elk monster en het percentage identieke resultaten werd voor elke patiënt berekend. De reproduceerbaarheid percentage werd gedefinieerd als het gemiddelde van alle 15 percentages (5 patiënten werkwijze een en 10 patiënten uit twee methode).
Om de stabiliteit van de bloedmonsters te testen, werden verschillende plasma aliquots van hetzelfde monster bereid onder verschillende voorwaarden. Porties werden geïncubeerd bij kamertemperatuur of op ijs gedurende 30 min, 1 uur, 1,5 uur of 2 uur. qRT-PCR werd vervolgens uitgevoerd, en ruwe ACt-waarden van de verschillende genen werden vergeleken met het standaard protocol (ACt = Ct gen-Ct ACTB).
Statistische analyses
De Mann-Whitney U- test en de Kruskal-Wallis-test werd gebruikt om te testen associaties tussen mRNA en klinische kenmerken en tussen gevoeligheid voor elk chemotherapeuticum en klinische kenmerken. De Spearman rangcorrelatietoets werd gebruikt om de correlatie tussen de in vivo Kopen en in vitro
remming tarieven en tussen plasma en tumor mRNA expressie te beoordelen. De Mann-Whitney U-test werd gebruikt om mRNA-expressieniveaus vergelijken tussen tumormonsters vertonen in vitro
gevoeligheid of resistentie tegen docetaxel en pemetrexed. Ontvanger functionele eigenschappen (ROC) krommen werden geconstrueerd om de gevoeligheid, specificiteit en respectieve onder curves (AUC's) ervan met hun 95% betrouwbaarheidsintervallen (CI). We onderzochten de geoptimaliseerde cut-off waarde voor het voorspellen door het maximaliseren van de som van de sensitiviteit en specificiteit en het minimaliseren van de totale fout (vierkantswortel van de som [1-gevoeligheid] 2 + [1-specifi stad] 2) , en door het minimaliseren van de afstand van de cut-off waarde aan de linker bovenhoek van de ROC-curve [24]. Alle statistische toetsen waren tweezijdig en significantie werd vastgesteld op P Restaurant < 0,05 (tweezijdig). Alle analyses werden uitgevoerd met SPSS, versie 16.0.
Resultaten
Kenmerken van de patiënten worden weergegeven in tabel 1. De meeste patiënten waren mannen (73,3%) en de overheersende histologie was adenocarcinoom. Negentig-vier (62,7%) patiënten hadden stadium III. Lymfekliermetastasen waren aanwezig in 115 (76,7%) patients.Table 1 Patient kenmerken
Kenmerk
Pilotstudie
Totaal cohort *
N = 40

N = 150
N (%)
N (%)
Age, jr, mediaan (bereik)
63 (40-83)
64 (29-84)
Sex
Man
31 (77,5)
110 (73,3)
Vrouw
9 (22,5)
40 (26,7)
Tumor website
distale maag
12 (30,0)
57 (34,0)
proximale maag
19 (47,5)
62 (41,3)
Whole maag
9 (22.5)
37 (24.7)
Stage
I
4 (10,0)
17 (11,3)
II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5)
94 (62,7)
IV
2 (5.0)
5 (3.3)
histologische graad 1
0
3 (2.0) 2
8 (20,0)
31 (20,7)
3
22 (55,0)
71 (47,3)
Mixed 1-2
0 Pagina 2 (1.3)
Mixed 2-3
10 (25,0)
43 (28,7)
lymfekliermetastasen verhuur No
9 (22,5)
35 (23,3)
Ja
31 (77,5)
115 (76,7)
* de totale cohort bestond uit de oorspronkelijke 40 patiënten opgenomen in de pilot-studie plus een extra 110 patiënten.
de reproduceerbaarheid van de plasma mRNA detectie was 92% voor BRCA1 en 89% voor TS. De mRNA expressie niveaus waren stabiel na kamertemperatuur of ijs incubatie gedurende 30 min, 1 uur, 1,5 uur en 2 uur (Extra file 1: Figuur S2, online beschikbaar).
Pilotstudie
Gevoeligheid voor docetaxel en pemetrexed was succesvol geëvalueerd in het 40 verse tumor samples door HDRA. Elf panels van immunodeficiënte muizen (9-18 muizen per paneel, 148 muizen in totaal) met menselijk-afgeleide xenotransplantaten werden met succes vastgesteld op basis van alle 40 chirurgische exemplaren voor in vivo
analyse van de gevoeligheid. De Spearman rangcorrelatietoets toonde een significante correlatie tussen de in vitro en in vivo

remming tarieven voor docetaxel (rho = 0,900, P Restaurant < 0,001) en pemetrexed (rho = 0,836, P
<0,001) (Extra file 1: Figuur S3, AB, online beschikbaar)
BRCA1 mRNA-niveaus werden met succes onderzocht in alle 40 tumormonsters, in 32 gepaarde bloedmonsters, en in 10 panelen van muismodellen, terwijl TS mRNA-niveaus. succesvol beoordeeld voor alle 40 tumormonsters, alle 40 bloedmonsters, en met 9 panels muismodellen. De Spearman rangcorrelatietoets toonde een correlatie tussen plasma en tumor mRNA niveaus van BRCA1 (rho = 0,647, P Restaurant < 0,001) en tussen plasma en tumor niveaus van TS (rho = 0,615, P Restaurant < 0,001) (Extra file 1: Figuur S4, AB, online beschikbaar). Zowel plasma en tumor BRCA1 niveaus werden gecorreleerd met docetaxel gevoeligheid (rho = 0,492, p = 0,004
en rho = 0,527, P Restaurant < 0,001, respectievelijk), en zowel plasma en tumor TS niveaus gecorreleerd met pemetrexed weerstand ( rho = -0,627, P Restaurant < 0,001 en rho = -0,443, P
= 0,004 respectievelijk Spearman rangcorrelatietoets) (Extra file 1: Figuur S5, AD, online beschikbaar). BRCA1 mRNA niveaus waren hoger in de docetaxel-gevoelig dan in de docetaxel-resistente muismodellen (11,26 vs 2,63; P
< 0,001), terwijl TS niveaus waren hoger in de pemetrexed-resistente dan in de pemetrexed-gevoelige muizen ( 3,34 versus 7,27; P
= 0,013, Mann-Whitney U-test) (Extra file 1: Figuur S6, AB, online beschikbaar)
Totaal cohort
BRCA1 en TS mRNA expressie werd met succes onderzocht in tumor. weefsels van alle 150 patiënten. De detectie in plasma waren 82,00% voor BRCA1 en 90,67% voor de TS. De gemiddelde mRNA-niveaus in plasma en tumor worden getoond in Extra file 1: Table S1, online beschikbaar. Er was geen significant verband tussen klinische kenmerken en de mRNA expressie van BRCA1 of TS (P > 0,05).
Er was een positieve correlatie tussen plasma en tumor mRNA niveaus van BRCA1 (rho = 0,696, P
<0,001) en TS (rho = 0.620, P Restaurant < 0,001, Spearman rangcorrelatietoets) (Figuur 2A-B). Geen verschillen in de baseline kenmerken werden waargenomen op basis van plasma mRNA niveaus, tumor mRNA-niveaus, of in vitro
chemosensitivity. Figuur 2 Correlaties tussen plasma en tumor mRNA expressieniveaus van (A) BRCA1 en (B) in TS 150 maagkankerpatiënten. Er was een significante correlatie tussen plasma en tumor mRNA expressie van beide genen (P
< 0,001, respectievelijk)
BRCA1 niveaus in plasma (docetaxel-gevoelig. 1,25, docetaxel-resistente: 0,50, P
< 0,001) en tumor (docetaxel-gevoelig: 8,81; docetaxel-resistente: 4,88, P Restaurant < 0,001) waren positief geassocieerd met docetaxel gevoeligheid. BRCA1 niveaus in plasma en tumor waren hoger in de docetaxel-gevoelig dan in de docetaxel-resistente groep. TS niveaus in plasma (pemetrexed-gevoelig: 0.90; pemetrexed-bestendig: 1,82, P Restaurant < 0,001) en tumor (pemetrexed-gevoelig: 6.56; pemetrexed-bestendig: 16.69, P Restaurant < 0,001) waren negatief geassocieerd met pemetrexed gevoeligheid. TS niveaus in plasma en tumor aanzienlijk lager in de pemetrexed-gevoelig dan de pemetrexed-resistente groep. (Figuur 3A-D, Mann-Whitney U-test). Figuur 3 In vitro chemosensitivity geassocieerd met plasma en tumor expressie van BRCA1and TS in 150 maagkankerpatiënten. BRCA1 niveaus in plasma (A) en tumor (B) hoger in de docetaxel-gevoelig dan in de docetaxel-resistente groep. TS niveaus in plasma (C) en tumor (D) waren lager in de pemetrexed-gevoelig dan de pemetrexed-resistente groep. De lijnen in de vakken aangeduid medianen. De snorharen van staafdiagrammen. SE, 95% CI
Gevoeligheid voorspellen chemosensitivity varieerde van 63% tot 71% voor plasma en van 70% tot 78% voor tumor mRNA. Specificiteit varieerde van 78% tot 90% voor plasma en 79% voor tumor mRNA (tabel 2, figuur 4) .table 2 Gevoeligheid en specificiteit van plasma en tumor genexpressie niveaus voor het voorspellen van chemosensitivity
Genexpressie

Chemotherapeutische middelen
N
Optimale cut-off
Gevoeligheid
specificiteit
AUC (95% CI)

P
Plasma
BRCA1
Docetaxel
123
0.76
63%
90%
0,77 (0,67-0,87)
<0,001
TS
Pemetrexed
136
1,01
71%
78%
0,78 (0,69-0,87) Restaurant < 0,001
Tumor
BRCA1
Docetaxel
123
6,09
70%
79%
0,75 (0,66-0,84) Restaurant < 0,001
TS
Pemetrexed
136
8,08
78%
79%
0,83 (0,76-0,90) Restaurant < 0,001
Figuur 4 ROC curves tonen van de gevoeligheid en specificiteit van plasma en tumor genexpressie in het voorspellen van chemosensitivity . (A) BRCA1 en docetaxel (n = 123); (B) TS en pemetrexed (n = 136).
Discussie
In de huidige studie, BRCA1 en TS mRNA-niveaus in plasma werden gecorreleerd met niveaus in gepaarde FFPE tumorweefsel. BRCA1 en TS mRNA niveaus in zowel plasma en tumor werden geassocieerd met in vitro
chemogevoeligheid vers geëxplanteerde maagkanker. Bovendien plasma mRNA niveaus vertoonde aanzienlijke gevoeligheid en specificiteit voorspellen chemosensitivity. Tezamen bieden deze bevindingen wijzen erop dat plasma mRNA spiegels tumor mRNA en kunnen een nuttig instrument blijken te zijn voor het voorspellen van chemische gevoeligheid. Ondernemingen De methode die we opgericht om plasma mRNA te detecteren, gebaseerd op RNA verrijking door zuivering kolom, maakt meer accurate, gevoelige en reproduceerbare detectie , gemakkelijker te hanteren en snellere resultaten [10], [25], waardoor het haalbaar voor routinematige genexpressieanalyse in de dagelijkse klinische praktijk [25]. De verontreiniging van mRNA van niet-tumor bronnen, zoals geactiveerde lymfocyten, stromale cellen of circulerende tumorcellen kan niet worden uitgesloten [10], [26], [27] en kan gedeeltelijk verklaren waarom de correlatie tussen plasma en tumor expressie was minder dan perfect.
Bovendien tumor heterogeniteit kan verantwoordelijk zijn voor enige variatie ook. Specificiteit varieerde van 78% tot 90% voor plasma, terwijl 79% voor tumor. Hoe minder perfecte specificiteit in tumor wel vanwege de heterogeniteit van het tumorweefsel zelf, die verdere steun aan het gebruik van plasma mRNA voor het voorspellen van gevoeligheid geeft.
Recente studies de celvrije mRNA expressie van verscheidene genen onderzocht waaronder TS [28], β-catenine [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], Bmi-1 [35 ], Her-2 [36] en DKK1 [24] deze studies hebben zich geconcentreerd op het gebruik van celvrij mRNA voor vroegtijdige diagnose, stagering en monitoring ziekte. In tegenstelling tot ons beste weten is deze studie is de eerste om de mogelijke rol van plasma mRNA voor het voorspellen van docetaxel en pemetrexed chemische gevoeligheid van vaste tumoren te onderzoeken. Onze bevindingen suggereren een veelbelovende rol voor plasma mRNA expressie als predictieve biomarker bij maagkanker en leveren het bewijs voor het gebruik van plasma mRNA in chemotherapie voor patiënten selecteren zonder dat opnieuw biopsie ten tijde van ziekteprogressie. Daarnaast kan plasma mRNA ook nuttig om patiënten in de neoadjuvante of adjuvante behandeld bewijzen. De behandelplan voor deze patiënten kunnen worden gegenereerd op basis van hun mRNA chemosensitivity profiel. Zo kan maagkanker patiënten met lage plasma TS mRNA behandeld met pemetrexed gebaseerde chemotherapie, terwijl die met hoge niveaus van plasma BRCA1 kunnen profiteren van behandeling met docetaxel.
Toch moeten we opmerken dat onze studie kan hebben een aantal beperkingen. De huidige studie is gebaseerd op patiënten die behandeling-naïeve. Door het verzamelen van hun plasma voor de operatie en tumoren direct na de operatie, konden we aangetoond dat de plasma mRNA waarde voor het bewaken van patiënten in de neoadjuvante of adjuvante behandeling wordt behandeld. Vervolgens wordt de detectiegevoeligheid en de waarde van het oppakken van circulerende mRNA van vroege metastasen name bij patiënten reserveren tweede chemotherapie is nog onduidelijk. Nu zijn we ook bezig met verder onderzoek bij patiënten met uitzaaiingen en kan niet ontvangen van een operatie of tweede lijn chemotherapie. We zullen de laatste resultaten in de nabije toekomst, die de bovengenoemde inhoud bevat.

Conclusie Concluderend plasma mRNA expressie van BRCA1 en TS kan weerspiegelen die in de tumor en kan een veelbelovende rol potentieel predictieve biomarkers voor docetaxel en peretrexed bij maagkanker. Deze bevindingen zijn voorlopig en slechts suggestief op dit punt, en elk van deze gepaarde biomarker chemotherapie hypothesen moet worden bevestigd voordat zij aan routinematige dagelijkse klinische praktijk. Een klinische studie wordt momenteel ontwikkeld met het oog op de rol van het aanpassen van de behandeling op basis van de plasma mRNA expressie van BRCA1 en TS.
Aanvullende bestandsinformatie
Notes
Jie Shen valideren, Jia Wei eveneens bijgedragen aan dit werk.
verklaringen
Dankwoord
Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (Grants No. 81401969, 81300339), de belangrijkste internationale (Regional) Joint Project Onderzoek van China (Grant No. 81220108023 ), en de Top Zes talents-project van de provincie Jiangsu (Grant No. 2011ws005). Het werk in het laboratorium van Dr Rosell wordt deels gefinancierd door een subsidie ​​van La Caixa Foundation.
Rol van de financieringsbronnen
financieringsbronnen had geen rol in de onderzoeksopzet, dataverzameling, data-analyse, data interpretatie, of schrijven van het rapport
Electronic aanvullend materiaal
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Extra file. 1: aanvullende methoden. Tabel S1. Betekent mRNA niveaus in plasma en tumor. Figuur S1. Oorspronkelijke tumor en gepaarde muis xenotransplantaten. (A) De morfologie van de oorspronkelijke tumor diagnose adenocarcinoom met gedeeltelijke slijm celcarcinoom. (B) Gepaarde xenotransplantaten in immunodeficiënte muizen, bevestigd door hematoxyline-eosine kleuring. Er waren geen significante morfologische verschillen tussen de oorspronkelijke tumor monster en de gepaarde xenotransplantaten in muismodellen. Figuur S2. Validatie van de stabiliteit van mRNA plasma. Plasma mRNA niveaus van alle genen waren stabiel na te zijn onderworpen aan verschillende omstandigheden. Figuur S3. Correlaties tussen in vitro en in vivo

remming tarieven voor (A) en docetaxel (B) pemetrexed in de pilot. Figuur S4. Correlatie tussen plasma en tumor mRNA expressie van (A) BRCA1 (n = 32) en (B) TS (n = 40) aan de pilot. Figuur S5. Correlaties tussen mRNA expressie niveaus en in vitro
chemosensitivity in de pilot. (A) Tumor BRCA1 en docetaxel gevoeligheid; (B) plasma BRCA1 en docetaxel gevoeligheid; (C) tumor TS en pemetrexed gevoeligheid; en (D) plasma TS en pemetrexed gevoeligheid. Figuur S6. mRNA expressie niveaus en in vivo
chemosensitivity. Met een tumorremming cut-off van 50%, werden verdeeld in muismodellen (A) docetaxel-gevoelige en docetaxel-resistente subgroepen en (B) pemetrexed-gevoelige en resistente pemetrexed subgroepen. BRCA1 mRNA-niveaus (dots) waren hoger in de docetaxel-gevoelige groep dan in de docetaxel-resistente groep (P
< 0,001) en TS niveaus (dots) waren hoger in de pemetrexed-resistente groep dan in de pemetrexed- gevoelige groep (P
= 0,013). (DOC 666 KB) Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Authors' 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif Auteurs originele bestand voor 'originele bestand voor figuur 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Authors' figuur 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Auteurs originele bestand voor figuur 4 Concurreren interesse
De auteurs verklaren dat zij hebben geen concurrerende rente. bijdragen
Authors '
JS, JW, WXG en BRL ontwierp het onderzoek en schreef de krant. JS, HW, LXY, ZZZ, LX en CC verricht het onderzoek. YTD, XPQ en JW geanalyseerde gegevens. TB en RR bewerkt papier. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• De rol van de CCL22-CCR4 as in de metastase van maagkanker cellen in omental melkachtige spots
• Prognostische effecten van 25-hydroxyvitamine D in de maag cancer