Plazminiai iRNR raiška lygiai BRCA1 ir TS, kaip potencialių prognozavimo biologinių žymenų chemoterapija skrandžio cancer

Plazminiai iRNR ekspresijos lygio BRCA1 ir TS, kaip potencialių prognozavimo biologinių žymenų chemoterapija skrandžio vėžio pervežimas tezės
tikslo pervežimas asmeninį chemoterapijos remiantis prognozavimo biologiniai žymenys gali padidinti veiksmingumą. Tačiau, auglio audinių gautas pirminio diagnozės nustatymo metu negali atspindėti genetinių pakeitimus stebėta ligos progresavimo metu. Mes išnagrinėjome ar plazminio iRNR lygiai gali būti pakaitalas naviko lygių prognozuojant chemosensitivity.
Metodai
150 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, iRNR lygiai BRCA1 ir TS buvo vertinami plazmoje ir suporuotas naviko audinį. Mann-Whitney U testas buvo naudojamas palyginti iRNR raiškos lygį tarp navikų mėginiuose eksponuoti in vitro
jautrumą arba atsparumą docetakselio ir pemetreksedo. Visi statistiniai testai buvo dvipusis rezultatai
Nemokama Nebuvo reikšmingų koreliacijų tarp plazmos ir naviko mRNR lygių BRCA1 (rho = 0.696, P < 0,001). Ir TS (rho = 0.620, P < 0,001). BRCA1 koncentracija kraujo plazmoje (docetakselis-jautrus: 1,25; docetakselis-atsparus: 0,50, P
< 0,001) ir naviko (docetakselis-jautrus: 8.81; docetakselis-atsparus: 4.88, P
< 0,001) buvo teigiamai susijęs su docetakseliu jautrumo. TS koncentracija kraujo plazmoje (pemetreksedui jautrus: 0,90; permetreksedas atsparus: 1,82, p
< 0,001) ir naviko (pemetreksedui jautrus: 6,56; permetreksedas atsparus: 16,69, p
< 0,001) buvo neigiamai susijęs su Pemetreksedą jautrumo.
išvadas
Plazminiai iRNR raiška lygiai veidrodis tuos naviko ir gali turėti daug žadančią vaidmenį kaip potencialių prognozavimo biologinių žymenų chemoterapija.
Raktiniai žodžiai
Plazminiai iRNR Skrandžio vėžys Chemosensitivity Nuspėjamasis biologinis HDRA Įvadas
standartinį pirmos eilės chemoterapija pagal schemą lokaliai progresavusio arba metastazavusio skrandžio vėžio cisplatina arba oksaliplatina kartu su kitais vaistais, įskaitant docetakselio ir pemetreksedo [1], [2]. Tačiau išgyvenamumo mediana lieka skurdus - maždaug vienerius metus. Ne standartinis požiūris antros eilės gydymo egzistuoja, nors docetakselis parodė tam tikrą veiklą [3]. Asmeninės chemoterapija remiantis iRNR raiška prognozavimo biologinius žymenis galėtų padėti padidinti gydymo efektyvumą ir pratęsti išlikimą šiems pacientams [3] - [8].
Krūties vėžys jautrumo geną 1 (BRCA1), esminė daugelyje DNR žalos atlyginimo keliai ir dalyvauja korinio atsakymų į mikrovamzdelių žalos keliai, yra laikomas skirtumas moduliatorius išgyventi su cisplatina ir taksanų. Ikiklinikinių ir klinikinių tyrimų, pranešė, kad BRCA1 lygis naviko yra susijęs su cisplatina ir taksanų chemosensitivity. Navikas su aukštos raiškos BRCA1 yra 800-to-daugiau nei 1000 kartų jautrūs docetakselio, bet 10-1000-kartus atsparesnis cisplatina [4]. Mes jau anksčiau pastebėta, kad BRCA1 iRNR lygiui ertmėse, buvo neigiamai susijęs su platinos jautrumo bet teigiamai susijęs su docetakselio jautrumo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams [5]. Šios išvados buvo patvirtintos skrandžio pacientams Antraeilio docetakselio: išgyvenamumo mediana buvo 9,5 mėnesio, gaunantiems mažas BRCA1 lygių pirminio naviko, 19,1 asmenims, sergantiems tarpinių lygių, ir 25,8 mėnesiai tiems, su aukšto lygio (p
= 0,006 ) [3]. Permetreksedas yra naujos rūšies vandenyje tirpaus chinazolinas folatų analoginio, veikia kaip tiesioginis ir konkretus timidilato sintezės (TS) inhibitorius. Žemas išraiška timidilato sintezės (TS) buvo pranešta būti susijęs su atsakas į pemetreksedui įsikūrusio terapijos plaučių vėžiu [7], [8].
Navikų audiniuose yra pagrindinis šaltinis žymenų tyrimo šiuo metu. Tačiau naviko audinio kartais gali būti nepakankamas genų ekspresijos analizė. Be to, naviko audinių gautas pirminio diagnozę gali neatspindėti genetinius pakitimus požymių ligos progresavimo [9] metu, nes metastazavusiu ir pirminių navikų iš paties paciento gali skirtis ne genomo, epigenetinių ir transcriptomic lygių [9] - [ ,,,0],13]. Be to, anksčiau taikytą pradinę chemoterapiją gali pati keisti genų ekspresijos lygį [14], [15]. tokiu būdu cirkuliuojančių naviko ląstelių be nukleino rūgštys galėtų būti naudinga, ne-invazinė priemonė stebėjimo pakeitimų įgyvendinimo metu, gydymo [10] žinoma, išvengti jo iš naujo biopsijos metu, siekiant nustatyti geriausią gydymą metu poreikį. Be to, ji gali būti naudinga pakaitalas, kai tik nedidelis kiekis naviko audinio yra prieinama. Mūsų ankstesnė patirtis plaučių vėžio parodė, kad epidermio augimo faktoriaus receptorių (EGFR) mutacijos serume gali būti gera prognozavimo žymeklis plaučių vėžiu sergančių pacientų, vartojusių EGFR tirozino kinazės inhibitorių, [16]. Be to, plazmos TS mRNR galima aptikti neinvaziniu būdu į kraujo prieš operaciją ir raiškos lygis plazmos TS turėjo didelį potencialą kaip prognozavimo biomarkeriai už raltitreksedas jautrumo skrandžio vėžio [17]. Tačiau iki šiol mažai žinoma apie galimą naudoti plazmos mRNR už prognozuoti chemosensitivity docetakselio ir pemetreksedo. Be to, nors RNR išleisti į rinką yra stabilus [10], [18], su šiuo metu turimų metodų, tik nedidelis kiekis mRNR galima gauti iš plazmos arba serumo, kuris apriboja tiek mRNR dalimi, ekstrahuojant veiksmingumą ir mRNR dalimi, tyrimų nuoseklumą [10].
šioje studijoje, mes priėmėme praktišką ir patogų būdą plazmos iRNR aptikimo, remiantis RNR gryninimas ir kiekybinio RT-PCR (KRL-PGR) ir panaudojo šį metodą išnagrinėti, ar plazminis iRNR lygiai gali būti pakaitalas naviko lygių prognozuojant chemosensitivity -. pirmasis bandomasis tyrimas 40 pacientų, o po to visos kohortos 150 pacientų
medžiagos ir metodai
pacientai
nuo 2010 spalio iki 2011 liepos, 150 šviežiai -removed skrandžio navikai ir suporuoti kraujo mėginiai iš tos pačios pacientų buvo gautas iš Onkologijos ir Bendrosios chirurgijos, Būgno bokštas ligoninė, Nanjing, Kinija departamentas. prieš operaciją Visi pacientai negavote chemoterapija. Šviežios skrandžio navikai ir kraujo mėginiai buvo laikomi 4 ° C temperatūroje ir siunčiamas į laboratoriją per 15 minučių nuo surinkimo.
Tyrimą buvo patvirtinta tarnybinės etikos peržiūros valdybos Drum Tower ligoninės susijusi su medicinos mokyklos Nanjing University, ir raštu informuoti sutikimas buvo pateikta visiems pacientams. Visi bandymai su gyvūnais buvo atliekami laikantis Kinijos koordinacinio komiteto vėžio tyrimų nuostatų dėl gyvūnų gerovės ir gyvūnų apsaugos įstatymo. Visi tyrimai, įskaitant narkotikų jautrumo testavimo, genų ekspresijos analizės ir gyvūnų eksperimentų, buvo atliekami įvairūs tyrėjai, veikiančių atskirai, be žinių apie kitų tyrimų rezultatus.
Tyrimo dizainas
Mes pirmą kartą atliko bandomąjį tyrimą 40 pacientai (1A pav.) Už kiekvieną auglio mėginį, jautrumas docetakselio ir pemetreksedo buvo tiriama in vitro
pagal histoculture narkotikų reagavimo tyrimo (HDRA) [19] ir in vivo
pagal audiniuose, turintiems imuninės pelės modeliai [20] (papildomas failo 1: S1 paveiksle AB galima rasti internete). Be to, abu pelės ksenoimplantai ir originalas švieži navikų mėginiuose buvo formalinu fiksuotų ir parafino įterptųjų (FFPE) už BRCA1 ir TS iRNR išraiškos analizę. BRCA1 ir TS sąvoka taip pat buvo analizuojami suporuotas kraujo mėginiai. 1 pav Srauto diagrama rodo paciento nusiteikimą ir eksperimentus atlikti. Bandomasis tyrimas 40 pacientų (A) ir visos kohortos 150 skrandžio vėžiu sergančių pacientų (B).
Remiantis bandomojo tyrimo rezultatais, mes įsipareigojo patvirtinti mūsų išvadas visos kohortos 150 skrandžio vėžiu sergančių pacientų (1b pav ). Šiame kohortos, tie patys procedūros buvo atliktos, su in vivo
bandymų chemosensitivity išskyrus. MRNR koncentracija kraujo plazmoje ir FFPE vėžinių audinių BRCA1 ir TS buvo vertinami ir Mann-Whitney U testas buvo naudojamas palyginti iRNR raiškos lygį tarp navikų mėginiuose, kuriuose matomos in vitro
jautrumą arba atsparumą docetakselio ir pemetreksedo.
dėl išsamesnės informacijos apie visą metodiką žr Papildoma failą 1, galima rasti internete.
in vitro
chemosensitivity bandomajame tyrime ir visos grupės
Fresh navikų audiniuose, buvo išsiųsti į laboratoriją 4 ° C Hanks "subalansuotas druskos tirpalas su 1% penicilinui /streptomicino. Mėginiai buvo plaunami su Hanks subalansuotą druskos tirpalu du kartus ir malta į mažus gabaliukus maždaug 10 mg, kuri vėliau buvo pateikti paruoštų kolageno paviršių 24-gerai mikrolėkštelės. Lėkštelės buvo inkubuojamos 7 dienas, esant 37 ° C temperatūroje nuo narkotikų ištirpusių su RPMI 1640 terpę, turinčią 20% veršiuko embriono buvimui serume ir saugomi temperatūroje drėgnoje atmosferoje, kurio sudėtyje yra 95% oro-5% CO 2. Koncentracijos narkotikų buvo 100 mikrogramų /ml docetakselio [21], ir 400 mikrogramų /ml pemetreksedo [7]. HDRA procedūros buvo atliekamos kaip pranešė Furukawa ir kolegų [19] su nedideliais pakeitimais. Slopinimo koeficientas buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: slopinimo koeficientas (%) = (1-T /C) x 100, kur T reiškia vidutinį absorbcija iš gydomo naviko /masės ir C yra reiškia, absorbcija, kontrolinio naviko /masės. Visi mėginiai buvo suskirstyti į jautrių ir atsparių grupėms, naudojant minimalų P
vertės metodą su pakeitimais, padarytais LAUSEN ir Schumacher [22].
In vivo
chemosensitivity bandomajame tyrime pervežimas Kiekvienas šviežiai pašalinto chirurginio naviko audinių buvo supjaustyti į gabalus 3 × 3 × 3 mm 3, kurie buvo persodinti per 30 minučių 9-18 athymic imuninės pelių, vadinamą "skydas". Kiekvienoje skydelyje, kai navikas išaugo iki 50-100 mm dydžio 3, pelėms su audiniuose, buvo randomizuoti į gydymo docetakselio 15 mg /kg /d, IP ar Pemetreksedą 20 mg /kg /d, IP ar ne gydymas (kontrolė). Individualūs naviko apimtys (V) buvo apskaičiuojamas pagal formulę "V = (ilgis × plotis × plotis) /2" ir, palyginti su gydymo gauti santykinį naviko tūris pradžios verčių. Mediana gydytų-to-kontrolės reikšmės santykinis naviko tūrio buvo vadinami "inhibicijos norma in vivo UAB" ir buvo naudojamas įvertinti jautrumą docetakselio ar pemetreksedo.
IRNR raiška bandomajame tyrime ir visos kohortos pervežimas dviems mililitrų kraujo buvo surinkti EDTA vamzdžių prieš operaciją, laikomas 4 ° C ir siunčiami į laboratoriją per 15 minučių. Iš viso RNR iš plazmos ekstrahuojamas TRIzol LS ir chloroformo ir išgrynintas su PureLink RNR Mini Kit (Ambion, Carlsbad, Kalifornija, JAV). Iš viso RNR iš FFPE navikų audiniuose buvo išgauta pagal patentuotą procedūros (Europos patento numeris EP1945764-B1). Po RNR ekstrakcijai ir valymui, M-MLV atvirkštinės transkriptazės komplektas (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV) buvo naudojamas generuoti kDNR už "Q-PGR aptikti beta-aktino išraišką (ACTB - naudojamas kaip endogeninio valdymas) ir genai išnagrinėjo , Kiekviena reakcija partijos įtrauktas teigiamą kontrolę iš komercinių žmogaus plaučių ir kepenų RNR (Stratageno, La Jolla, CA, JAV) Kalibravimo ir neigiamus kontrolinius mėginius, be RNR ir atvirkštinės transkriptazės. Šablonas kDNR buvo papildyta su konkrečių gruntams ir zondai naudojant TaqMan Universalus meistras Mix (taikoma BIOSYSTEMS Foster City, CA, JAV). Santykiniai genų ekspresijos kiekybinių buvo apskaičiuotos atsižvelgiant į lyginamosios Ct metodu. Galutiniai rezultatai buvo nustatomas pagal formulę iRNR išraiškos lygis = 2 - △△ ct [6], [23] ir buvo analizuojami su Stratagene programinės įrangos
atkuriamumas ir stabilumo genų ekspresijos tyrimo plazmos
. nuo genų ekspresijos tyrimo atkuriamumas buvo bandomos vienu metu su dviejų metodų. Už pirmąjį metodą, kraujo mėginiai iš penkių pacientų buvo surinkti nuo pirmosios dienos iki penktą dieną prieš operaciją tuo pačiu metu kiekvieną dieną. Per šį laikotarpį, pacientai gavo nei chemoterapija, nei specialaus gydymo. Genų ekspresijos, lygiai (High /tarpiniai vs žemas) buvo nustatyti kiekvieno mėginio, ir identiškų rezultatų procentinis dydis buvo apskaičiuojamas kiekvienam pacientui. Dėl antrojo būdo, kraujo buvo parengtas kartą per iš papildomų dešimties pacientų, ir kiekvienas mėginys buvo suskirstyti į penkis mėginius. Genų ekspresijos, lygiai (High /tarpiniai vs žemas) buvo nustatyti kiekviename mėginyje, ir identiškų rezultatų procentinis dydis buvo apskaičiuojamas kiekvienam pacientui. Pasikartojimas lygis buvo apibrėžtas kaip visų 15 procentais (5 pacientus nuo vieno metodo ir 10 pacientų iš dviejų metodas) vidurkį.
Siekiant išbandyti kraujo mėginių stabilumą, įvairių kraujo plazmoje mėginiai to paties mėginio buvo parengtos pagal skirtingos sąlygos. Imami mėginiai inkubuojami kambario temperatūroje arba ant ledo 30 min, 1H, 1,5 h arba 2 h. tada KRL-PGR buvo atliekama ir žaliavos ΔCt vertės skirtingų genų buvo lyginamas su standartiniu protokolu (ΔCt = Ct Gene-CT ACTB).
statistines analizes
Mann-Whitney U bandymas ir Kruskal-Wallis testas buvo naudojamas bandymo asociacijų tarp iRNR lygiui ir klinikines charakteristikas ir tarp jautrumo kiekvienam chemoterapinių agentas ir klinikines charakteristikas. Ietininkas rango koreliacijos testas buvo naudojamas įvertinti tarp in vivo, parsisiųsti ir in vitro pervežimas slopinimo normos ir tarp plazmos ir naviko iRNR ekspresijos lygio koreliaciją. Mann-Whitney U testas buvo naudojamas palyginti iRNR raiškos lygį tarp navikų mėginiuose eksponuoti in vitro
jautrumą arba atsparumą docetakselio ir pemetreksedo. ROC kreivė (ROC) kreivės buvo pastatyti įvertinti jautrumas, specifiškumas, ir atitinkamas sritis pagal kreives (AUC) su savo 95% patikimumo intervaluose (KĮ). Mes ištirti optimizuotą atjungimo vertė prognozuojant maksimaliai jautrumo ir specifiškumo sumą ir sumažinti bendrą klaidą (kvadratinės šaknies sumos [1 jautrumo] 2 + [1-specifi miestą] 2) , bei mažinti į ribinę vertę atstumą iki viršutiniame kairiajame kampe ROC kreive [24]. Visi statistiniai testai buvo dvipusiai, ir reikšmė buvo nustatyta P
< 0,05 (dvipusis). Visi tyrimai buvo atliekami naudojant SPSS, versija 16.0
. Rezultatai
Charakteristikos visiems pacientams yra parodyta 1 lentelėje Dauguma pacientų buvo vyrai (73,3%), o dominuojantis histologija buvo adenokarcinoma. Devyniasdešimt keturi (62,7%) pacientai turėjo III etapas liga. metastazių limfmazgiuose dalyvavo 115 (76,7%) patients.Table 1 pacientui charakteristikos
Charakteristika

bandomasis tyrimas
viso kohortos *
n = 40

n = 150

N (%)
N (%)
Amžius, per metus, mediana (ribos)
63 (40-83) <
Br> 64 (29-84) Lytis
Vyras
31 (77,5)
110 (73,3)
Moteris
9 (22,5)
40 (26,7)
auglio vietą
Distalinė skrandžio
12 (30,0)
57 (34,0)
proksimalinės skrandį
19 (47,5)
62 (41,3)
Visa skrandį
9 (22,5)
37 (24,7)
Stage
Aš
4 (10,0)
17 (11,3)
II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5) 94 (62,7)
IV
(5.0)
2 5 (3.3)
histologinio laipsnio
1
0
3 (2.0)
2
8 (20,0)
31 (20,7)
3
22 (55,0) 71 (47,3)
Mišrūnė 1-2
0
2 (1,3)
Mišrūnė 2-3
10 (25,0)
43 (28,7)
limfmazgių metastazių
Nėra
9 (22,5)
35 (23,3)
Taip
31 (77,5)
115 (76,7)
* bendras kohortos sudarė originalių 40 pacientų įtraukti į bandomojo tyrimo plius dar 110 pacientų.
plazmos iRNR aptikimo atkuriamumas buvo 92% BRCA1 ir 89% už TS. MRNR ekspresijos lygis buvo stabilus po kambario temperatūros ar ledo inkubacijos 30 min, 1h, 1,5 h ir 2 h (Papildoma failų 1: S2 pav, galima rasti internete).
Bandomasis tyrimas
Jautrumas docetakselio ir pemetreksedo buvo sėkmingai įvertintas 40 šviežių navikų mėginiuose pagal HDRA. Vienuolika plokštės imuninės pelėms (9-18 pelių už pulto, 148 pelėmis iš viso) su žmogaus kilmės audiniuose, buvo sėkmingai užmegzti iš visų 40 chirurginių egzempliorių in vivo
analizės jautrumo. Ietininkas rango koreliacijos tyrimas parodė reikšmingą koreliaciją tarp in vitro, parsisiųsti ir in vivo pervežimas slopinimo tarifus docetakselio (rho = 0,900, p
< 0,001) ir permetreksedas (rho = 0,836, p
< 0,001) (papildomas failų 1: S3 pav, AB, galima rasti internete)
BRCA1 iRNR kiekis buvo sėkmingai įvertinta visuose 40 navikų mėginiuose, 32 suporuotų kraujo mėginiai ir 10 panelių pelės modeliai, o TS iRNR lygiai. buvo sėkmingai įvertintas visų 40 navikų mėginiuose, visas 40 kraujo mėginių, o 9 plokščių pelės modeliai. Ietininkas rango koreliacijos tyrimas parodė ryšį tarp plazmos ir naviko mRNR lygių BRCA1 (rho = 0,647, p
< 0,001) ir tarp plazmos ir vėžinių lygių TS (rho = 0,615, p
< 0,001) (Papildoma failą 1: pav S4 ", AB galima rasti internete). Abu plazmoje ir naviko BRCA1 koncentracija koreliuoja su docetakseliu jautrumas (RHO = 0,492, p = 0,004
ir rho = 0.527, p
< 0,001, atitinkamai), ir abi plazmoje ir naviko TS lygiai koreliuoja su Pemetreksedą pasipriešinimo ( Rho = -0,627, p
< 0,001 ir Rho = -0,443, p = 0,004
, atitinkamai, Spearman koreliacijos testas) (Papildoma failą 1: S5 pav AD, galima rasti internete). BRCA1 iRNR lygiui buvo didesnis, docetakselio-jautrus nei docetakselio-atsparus pelės modeliai (11.26 vs 2,63; P
< 0,001), o TS lygiai buvo didesnis pemetreksedo-atsparus nei pemetreksedo-jautrus pelių ( 3.34 vs 7.27; P
= 0,013, Mann-Whitney U testas) (papildomas failą 1: S6 išsiaiškinti, AB, galima rasti internete)
viso kohortos
BRCA1 ir TS iRNR raiška buvo sėkmingai įvertintas naviko. audiniai iš visų 150 pacientų. Aptikimo lygis kraujo plazmoje buvo 82.00% už BRCA1 ir 90.67% už TS. Vidutiniai iRNR koncentracija kraujo plazmoje ir naviko rodomi Papildoma failą 1: Stalas s1, galima rasti internete. Nebuvo reikšmingas ryšys tarp klinikinių charakteristikų ir iRNR ekspresijos lygio BRCA1 ar TS (p > 0,05).
Nebuvo teigiama koreliacija tarp plazmos ir naviko mRNR lygių BRCA1 (rho = 0.696, p
< 0,001) ir TS (RHO = 0.620, p
< 0,001, Spearman koreliacijos testas) (pav 2A-B),. nepastebėta jokių pradinių savybių skirtumai pagal plazmos mRNR lygių, navikas mRNR lygių arba in vitro
chemosensitivity. 2 paveikslas koreliacija tarp koncentracijos plazmoje ir naviko mRNR ekspresijos lygių (A) BRCA1 ir (B) TS 150 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Ten buvo reikšminga koreliacija tarp plazmos ir naviko mRNR ekspresijos lygį abiejų genų (p
< 0,001, atitinkamai)
BRCA1 koncentracija kraujo plazmoje (docetakselis jautrus. 1,25; docetakselis atsparus: 0,50, p
< 0,001) ir naviko (docetakselis-jautrus: 8.81; docetakselis-atsparus:
4.88, P < 0,001) buvo teigiamai susijęs su docetakselio jautrumo. BRCA1 koncentracija kraujo plazmoje ir naviko buvo didesnis docetakselio-jautriai negu docetakselio -resistant grupei. TS koncentracija kraujo plazmoje (pemetreksedui jautrus: 0,90; permetreksedas atsparus: 1,82, p
< 0,001) ir naviko (pemetreksedui jautrus: 6,56; permetreksedas atsparus: 16,69, p
< 0,001) buvo neigiamai susijęs su Pemetreksedą jautrumo. TS koncentracija kraujo plazmoje ir naviko buvo mažesnis pemetreksedo-jautrus nei pemetreksedo-atsparus grupės. (Pav 3A-D, Mann-Whitney U testas). 3 pav In vitro chemosensitivity susijęs su plazmos ir naviko ekspresijos lygio BRCA1and TS 150 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. BRCA1 koncentracija kraujo plazmoje (A) ir naviko (B) buvo didesnės docetakselio-jautrus nei docetakselio ir -resistant grupės. TS koncentracija kraujo plazmoje (C) ir naviko (D) buvo kur kas mažesni pemetreksedo-jautriai nei pemetreksedo-atsparus grupės. Viduje dėžės linijos žymimas vidurkiai. Iš dėžės sklypų ūsai. SE, 95% PI
Jautrumas prognozuojant chemosensitivity svyravo nuo 63% iki 71% plazmos ir nuo 70% iki 78% už naviko mRNR. Specifiškumas svyruoja nuo 78% iki 90% plazmoje ir 79% naviko mRNR (2 lentelė 4 paveikslas) .table 2 jautrumas ir specifiškumas plazmos ir naviko genų ekspresijos lygį už chemosensitivity prognozavimas pervežimas Genų ekspresiją

Chemoterapinės medžiagos

N pervežimas pervežimas Optimal cut-off
jautrumas
specifiškumas
AUC (95% PI) pervežimas
P
Plazminiai
BRCA1
DOCETAXEL
123
0,76
63% pervežimas 90%
0,77 (0,67-0,87)
< 0,001
TS
Pemetreksedas
136%
78
1.01
71%
0,78 (0.69-0.87)
< 0,001
naviko
BRCA1
DOCETAXEL
123
6.09
70% pervežimas 79%
0,75 (0,66-0,84)
< 0,001
TS
Pemetreksedas
136
8.08
78%
79%
0,83 (0,76-0,90)
< 0,001
4 pav ROC kreivės, parodančios jautrumas ir specifiškumas plazmos ir naviko genų ekspresijos prognozuojant chemosensitivity , (A), BRCA1 ir docetakselio (n = 123); (B) TS ir permetreksedas (n = 136).
Diskusijos
Šioje studijoje BRCA1 TP mRNR koncentracija kraujo plazmoje buvo susijęs su lygiais suporuotas FFPE naviko audinyje. BRCA1 ir TS iRNR lygiai tiek plazmos ir naviko buvo susijęs su in vitro
chemosensitivity šviežiai eksplantuoto skrandžio vėžio. Be to, kraujo plazmoje iRNR lygiai parodė didelį jautrumą ir specifiškumą prognozuojant chemosensitivity. Kartu paėmus, šie duomenys rodo, kad plazmoje iRNR veidrodžiai naviko iRNR ir gali būti naudinga priemonė prognozuoti chemosensitivity.
Metodą mes sukūrėme aptikti plazmos iRNR, remiantis RNR praturtėjimo išgryninama skiltyje, leidžia tiksliau, jautrus ir atkuriamas aptikimo , lengviau tvarkymo ir greitesnis rezultatai [10], [25], todėl įmanoma už kasdieninį genų ekspresijos analizės kasdieninėje klinikinėje praktikoje [25]. Tačiau mRNR užterštumas ne vėžinių šaltinių, tokių kaip aktyvuota limfocitų, stromos ląstelėse ar cirkuliuojančių vėžinių ląstelių, negali būti atmesta galimybė, [10], [26], [27], ir gali iš dalies paaiškinti, kodėl tarp plazmos ir naviko koreliacija išraiška buvo mažesnis nei tobula.
Be to, naviko heterogeniškumas gali sudaryti apie kintamumą, taip pat. Specifiškumas svyravo nuo 78% iki 90% plazmoje, tuo tarpu 79% už naviko. Kuo mažiau tobula specifiškumas naviko pat gali būti dėl to, kad pati naviko audinio, kuris skolina tolesnę paramą plazmos mRNR naudojimo prognozuoti jautrumą heterogeniškumo.
Naujausi tyrimai išnagrinėjo mobilųjį be iRNR raiška keletą genų, įskaitant TS [28], β-kateninai [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], KMI-1 [35 ], jos-2 [36] ir DKK1 [24], šie tyrimai sutelktas į mobilųjį be mRNR naudojimo ankstyvą diagnostiką, naviko stadija ir ligų stebėseną. Priešingai, į mūsų žiniomis, šis tyrimas yra pirmasis ištirti galimą vaidmenį plazmos mRNR prognozuoti docetakselio ir pemetreksedo chemosensitivity kietųjų navikų. Mūsų rezultatai rodo, daug žadančią vaidmenį plazmos iRNR išraiška prognozavimo biologinis į skrandžio vėžio ir pateikti įrodymus plazmos mRNR naudoti pasirinkdami chemoterapija pacientams be pakartotinio biopsiją reikia prie ligos progresavimo laiko. Be to, plazma iRNR taip pat gali būti naudinga stebėti pacientams, gydomiems į neoadjuvantas arba pagalbinį nustatymas. Gydymas planas šiems pacientams gali būti generuojamas pagal jų mRNR chemosensitivity profilį. Pavyzdžiui, skrandžio vėžiu sergantys pacientai žemo lygio plazmoje TS mRNR gali būti gydomi Pemetreksedą pagrindu chemoterapijos, o tie, su aukšto lygio plazmoje BRCA1 galėtų pasinaudoti gydymo docetakselio.
Nepaisant to, turėtume atkreipti dėmesį, kad mūsų tyrimas gali turėti tam tikri apribojimai. Dabartinė Tyrimas remiasi pacientų, kurie terapija nevartojo. Rinkdama savo plazma iki operacijos ir navikų iš karto po operacijos, mes galime įrodyti, plazmos iRNR vertę stebėti pacientams, gydomiems į neoadjuvantas arba pagalbinį nustatymas. Tada, aptikimo jautrumas ir vertė įlaipinami cirkuliuojančių iRNR nuo metastazių pradžioje ypač pacientams rezervuoti antrinė chemoterapija vis dar neaišku. Dabar mes taip pat atlikti tolesnį tyrimą pacientams, sergantiems metastazių ir negali gauti operacija arba gauti antrinė chemoterapija. Turėsime naujausius rezultatus artimiausiu metu, kuriame bus nurodytas minėtą turinį.
Išvada
Apibendrinant, plazma iRNR raiška lygiai BRCA1 ir TS gali atspindėti tuos naviko ir gali turėti daug žadančią vaidmenį kaip galimą prognozinės biologiniai žymenys Docetaxel ir peretrexed skrandžio vėžio. Šie duomenys yra preliminarūs ir tik įtaigus šiuo metu, ir kiekvienos iš šių suporuotas biologinis-chemoterapija hipotezių turi būti patvirtinta, prieš jį naudojant kasdieninė klinikinėje praktikoje. Klinikinis tyrimas šiuo metu yra sukurta siekiant įteisinti pritaikyti gydymą remiantis plazmoje iRNR raiška BRCA1 ir TS.
Papildomų failų
pažymi
Jie Shen vaidmenį Jia Wei vienodai prisidėjo prie šio darbo.
deklaracijų
Padėka
šis darbas buvo remiamas dotacijas iš nacionalinio Gamtos mokslo fondo Kinijos (Dotacijos Nr 81.401.969, 81.300.339), pagrindinių tarptautinių (regioninių) Jungtinis tyrimų projektas Kinijoje (dotacijos kodas 81220108023 ), ir iš viršaus šešis talentus projektas Dziangsi provincijos (dotacijos Nr 2011ws005). Darbas dr Rosell laboratorijoje yra iš dalies finansuojamos dotacija iš La Caixa fondas.
Vaidmuo finansavimo šaltinio Viesbutis The finansavimo šaltinių neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo, duomenų analizės, duomenų interpretavimo, arba raštu ataskaitoje
Elektroninės papildoma medžiaga
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Papildoma failą 1:. Papildomi metodai. S1 lentelė. Reiškia iRNR koncentracija plazmoje ir naviko. S1 paveiksle. Pirminio naviko ir suporuoti pelės ksenoimplantai. (A) iš pirminio naviko diagnozuota kaip adenokarcinoma su daline gleivinės ląstelių karcinoma morfologija. (B) Suporinti ksenoimplantai, turintiems imuninės pelių, patvirtintas hematoksilinu-eozino dažymo. Nebuvo jokių reikšmingų morfologiniai skirtumai tarp pirminio naviko mėginio ir suporuoti ksenoimplantai pelių modelių. S2 pav. Patvirtinimas plazmos mRNR stabilumą. Plazmos iRNR lygiui visų genų buvo stabili po to, kai atliekamas įvairiomis sąlygomis. S3 pav. Koreliacija tarp in vitro, parsisiųsti ir in vivo pervežimas slopinimo normų taikymas (A) ir docetakselio (B) pemetreksedo bandomajame tyrime. S4 pav. Koreliacija tarp plazmos ir naviko mRNR ekspresijos (A) BRCA1 (n = 32) ir (B) TS (n = 40) bandomajame tyrime. S5 pav. Koreliacija tarp mRNR ekspresijos lygį ir in vitro
chemosensitivity bandomajame tyrime. (A), naviko BRCA1 ir docetakseliu jautrumas; (B), plazmos BRCA1 ir docetakseliu jautrumas; (C), naviko TS permetreksedas jautrumas; ir (d) plazmos TS permetreksedas jautrumas. S6 pav. iRNR raiška lygiai ir in vivo pervežimas chemosensitivity. Naudojant navikas slopinimas cut-off 50%, pelės modeliai buvo suskirstyti į (A) DOCETAXEL jautrus ir docetakselio atsparus pogrupių ir (B) pemetreksedui jautrių ir pemetereksedo atsparus pogrupius. BRCA1 iRNR lygiai (taškų) buvo didesnis docetakselio jautrus grupėje, nei docetakselio atsparus grupėje (p
< 0,001), ir TS lygiai (taškų) buvo didesnis pemetreksedo atsparus grupėje, nei pemetrexed- jautrus grupėje (p
= 0,013). (DOC 666 KB) Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalių pateiktų failų vaizdų. 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif Autorių originalus failas 1 pav 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Autorių originalaus failo 2 pav 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Autorių originalios 3 pav 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Autorių originalaus failo 4 pav konkuruojančių interesų
Autoriai deklaruoja, kad jie neturi konkuruojančių interesų.
Autorių įmokos
JS, JN, WXG ir BRL skirtos moksliniams tyrimams ir parašė knygą. JS, hw, LXY, ZZZ, LX ir CK atliko tyrimus. Nuo metų pradžios, XPQ ir JN išanalizavo duomenis. TB ir RR redagavo popieriaus. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Iš CCL22-CCR4 ašies vaidmuo skrandžio vėžio ląstelių metastazės į taukinės pieniškas dėmių
• Prognostiniai poveikis 25-hidroksivitaminą D kiekį skrandžio vėžio