plazemske mRNA izraz za BRCA1 in TS kot potencialnih napovednih biomarkerjev za kemoterapijo v želodčni cancer

ravni v plazmi mRNA izraženosti BRCA1 in TS kot potencialnih napovednih biomarkerjev za kemoterapijo raka želodca
Abstract
Cilj
Personalized kemoterapijo na osnovi predvidevanja biomarkerjev lahko povečajo učinkovitost. Vendar tumorsko tkivo, pridobljene ob času začetnega diagnoze ne bo odražala genetskih sprememb, ugotovljenih v času napredovanja bolezni. Pregledali smo, ali se lahko plazemske mRNA biti nadomestek za raven tumorjev pri napovedovanju chemosensitivity.
Metode
Pri 150 bolnikih z rakom želodca, so bile ocenjene ravni mRNA v BRCA1 in TS v plazmi in seznanjen tumorja tkiva. Mann-Whitney U test smo uporabili za primerjavo ravni mRNA izražanja med vzorci tumorskih razstavlja vitro
občutljivost ali odpornost na docetaksel in pemetreksed. Vsi statistični testi so bili dvostranski
Rezultati
ni bilo pomembne korelacije med plazemske koncentracije in tumor mRNA BRCA1 (rho = 0.696, P < 0,001). In TS (rho = 0.620, P < 0,001). Ravni BRCA1 v plazmi (docetaksel občutljiva: 1,25; docetaksel odpornim: 0,50, P
< 0,001) in tumor (docetaksel občutljiva: 8,81; docetaksel odpornim: 4,88, P
< 0,001) sta pozitivno povezana z občutljivostjo docetaksela. Ravni TS v plazmi (pemetreksed občutljiva: 0.90; pemetreksed odporna: 1,82, P
< 0,001) je bilo negativno in tumor (0,001::;; 16,69, P
<pemetreksed občutljiv 6.56 pemetreksed odporna) povezana z pemetrekseda občutljivosti.
sklepe
Plasma mRNA izraz zrcalijo tiste v tumor in ima lahko obetavno vlogo potencialnih napovednih biomarkerjev za kemoterapijo.
Ključne besede
Plasma mRNA rak želodca Chemosensitivity Predvidevanje biomarkerjev HDRA Predstavitev
standardni prve izbire kemoterapija za lokalno napredovalega ali metastatskega raka želodca se cisplatin ali oksaliplatin v kombinaciji z drugimi zdravili, vključno z docetakselom in pemetrekseda [1], [2]. Vendar pa mediano preživetje ostaja skromna - približno eno leto. Nimajo enotnega pristopa pri zdravljenju druge izbire obstaja, čeprav je docetaksel pokazala nekaj aktivnosti [3]. Prilagojene kemoterapijo na osnovi mRNA izražanja napovednih biomarkerjev lahko pomaga povečati učinkovitost zdravljenja in podaljša preživetje teh bolnikov [3] -. [8]
dovzetnost Rak dojk gen 1 (BRCA1), ki je bistveni sestavni del v multiplo popravilo poškodb DNA poti in poti, ki sodelujejo v celične odzive na škodo mikrotubularne, se šteje, da je razlika modulator za preživetje s cisplatinom in taksani. Predklinične in klinične študije so poročali, da je stopnja BRCA1 tumorja povezana s cisplatinom in taksane chemosensitivity. Tumor z visoko ekspresijo BRCA1 je 800 do več kot 1000-krat občutljiv docetaksel, vendar 10-1000-kratno odporni na cisplatin [4]. so že ugotovili smo, da so bile ravni BRCA1 mRNA izlivi negativno povezana z občutljivostjo platino, vendar pozitivno povezana z občutljivostjo docetakselom pri bolnikih z rakom želodca [5]. Te ugotovitve so bile potrjene v želodčnih bolnikih, ki prejemajo druga linija docetaksel: Mediana preživetja je bila 9,5 meseca pri tistih z nizko stopnjo BRCA1 v primarnega tumorja, 19,1 pri tistih z vmesnimi stopnjami, in 25,8 meseca pri tistih z visokimi stopnjami (P
= 0,006 ) [3]. Pemetreksed je nova vrsta vodotopne kinazolin folata analogne, deluje kot zaviralec neposredno in konkretno timidilatne sintaza (TS). Nizko izražanje timidilatne sintaze (TS) je poročal, da je povezana z odgovorom na terapijo temelji pemetrekseda pri pljučnem raku [7], [8].
Tumorski tkivo je glavni vir za pregled biomarkerjev v trenutku. Vendar pa lahko tumorsko tkivo včasih ne zadostujejo za analizo genske ekspresije. Poleg tega tumorsko tkivo pridobljeno ob prvi diagnozi morda ne odražajo genetskih sprememb opaženi v času napredovanja bolezni [9], saj metastaznih in primarnih tumorjev iz istega pacienta, lahko spreminja v genomskih, epigenetske in transcriptomic ravni [9] - [ ,,,0],13]. Poleg tega je začetna kemoterapija lahko sama spremeni raven izražanja genov [14], [15]. Krožijo tumorskih celic brez nukleinske kisline bi tako lahko koristna, neinvazivno orodje za sledenje spremembam med zdravljenjem [10], odpraviti potrebo po ponovnem biopsijo ob določanja najboljše zdravljenje. Poleg tega je lahko koristna nadomestna ko je le majhna količina tkiva tumorja na voljo. Naše predhodne izkušnje v pljučnega raka pokazala, da bi epidermalni rastni dejavnik, receptor (EGFR) mutacije v serumu dober napovedni marker za bolnike s pljučnim rakom, ki so prejemali zaviralce EGFR tirozin kinaz [16]. Poleg tega lahko v plazmi TS mRNA zaznati neinvazivno v krvi pred kirurškim posegom in nivo izražanja v plazmi TS imel velik potencial kot napovedni biomarkerjev za raltitreksed občutljivosti raka želodca [17]. Do danes pa je malo znanega o možni uporabi plazme mRNA za napovedovanje chemosensitivity docetaksela in pemetrekseda. Čeprav je RNA sproščena v obtok stabilen [10], [18] s trenutno razpoložljivimi metodami, le majhno količino mRNA mogoče dobiti iz plazme ali seruma, ki omejuje tako učinkovitost ekstrakcije mRNA in doslednost mRNA testih [10].
v tej študiji smo sprejeli praktičen in priročen način za odkrivanje plazma mRNA, ki temelji na čiščenju RNA in kvantitativno RT-PCR (QRT-PCR), in uporabljajo to metodo, da preveri, ali plazemske mRNA lahko biti nadomestek za raven tumorja pri napovedovanju chemosensitivity. - najprej v pilotni študiji 40 bolnikov in nato v skupni kohorti 150 bolnikov
materiali in metode
Bolniki
od oktobra 2010 do julija 2011, 150 sveže -removed želodca tumorjev in parih vzorcev krvi iz istih bolnikov smo pridobili iz oddelka za onkologijo in splošne kirurgije, Tower bolnišnica boben, Nanjing, Kitajska. Vsi bolniki niso prejeli nobene kemoterapijo pred operacijo. Sveže želodca tumorjev in krvnih vzorcev so hranili pri 4 ° C in pošlje v laboratorij v 15 minutah zbiranja.
Je bil odobren s Institucionalne etične presoje odbora Drum Tower bolnišnici povezana z Medical School of Nanjing University študija, in pisno privolitev je bil zagotovljen z vseh bolnikih. Vsi poskusi na živalih so bile izvedene v skladu s Koordinacijskega odbora kitajskega za boj proti raku predpisov raziskovalnih za dobro počutje živali in zakona o zaščiti živali. Vse analize, vključno s testiranjem občutljivosti drog, izražanja genov analize in živalskih poskusih, so bili izvedeni različni preiskovalci, ki nastopajo individualno, brez poznavanja rezultatov drugih analiz.
Študija oblikovanja
smo najprej izvedla pilotno študijo v 40 bolnikov (slika 1A). Za vsak tumorja vzorec, je bila preučena občutljivost docetaksel in pemetrekseda in vitro
s histoculture odziva droga testom (HDRA) [19] in vivo
jih presadkov pri modelih imunsko pomanjkljivostjo miško [20] (Dodatni datotek 1: Slika S1 , AB na voljo na spletu). Poleg tega so bile tako ksenotransplantati miške in originalne Vzorci svežega tumor formalinu fiksnih in vstavljen v parafin (FFPE) za analizo BRCA1 in TS mRNA izražanja. BRCA1 in TS izraz je bila analizirana tudi v parnih vzorcih krvi. Slika 1 Diagram prikazuje pripravljenost pacientov in poskuse izvedli. Pilotna študija pri 40 bolnikih (A) in celotne kohorte 150 bolnikov želodca z rakom (B).
Na podlagi ugotovitev pilotne študije, smo opravili za potrditev naše ugotovitve v skupni kohorti 150 bolnikov z rakom želodca (slika 1B ). V tej kohorti, smo izvedli isti postopki ven, z izjemo vivo
testiranju chemosensitivity. Ravni mRNA v plazmi in FFPE tumorskih tkivih BRCA1 in TS so bile ocenjene in Mann-Whitney U-testa smo uporabili za primerjavo ravni mRNA izražanja med vzorcih tumorjev razstavlja in vitro
občutljivost ali odpornost na docetakselom in pemetrekseda.
za več podrobnosti o vseh metodologije glej dodatno datoteko 1, ki je na voljo na spletu.
vitro
chemosensitivity v pilotno študijo in celotne kohorte
Sveže tumorskih tkiv so bili poslani v laboratorij pri 4 ° C Hanks "uravnoteženega raztopina soli z 1% penicilina /streptomicina. Osebki speremo z uravnoteženim raztopino soli Hanksovimi dvakrat in sesekljamo na majhne koščke približno 10 mg, ki so se nato postavi na pripravljene kolagenskih površinah v 24-dobro mikroplošče. Plošče smo inkubirali 7 dni pri 37 ° C v prisotnosti drog raztopljenih z RPMI 1640 medija, ki vsebuje 20% fetalnega telečjega seruma in hranijo v navlaženi atmosferi, ki vsebuje 95% zraka, 5% CO 2. Koncentracije drog je bilo 100 mikrogramov /ml za docetakselom [21], in 400 mikrogramov /ml pemetrekseda [7]. Postopki HDRA smo izvedli, kot ga Furukawa in sodelavci [19] z manjšimi spremembami poročali. Stopnja inhibicije smo izračunali z uporabo naslednje formule: stopnja inhibicije (%) = (1-T /C) x 100, kjer je T pomeni absorbanco zdravljene tumorske /teža in C je pomeni absorbanco kontrola tumorske /mas. Vsi vzorci so bili razvrščeni v občutljivih in odpornih skupin z uporabo metode
vrednosti minimalno P kot ga je spremenil Lausen in Schumacher [22].
Vivo
chemosensitivity v pilotni študiji
Vsaka sveže odstranjenim kirurške tumor tkivo narežemo na kose 3 × 3 × 3 mm 3, ki so bili presajeni v 30 minutah 9-18 atimičnih imunsko pomanjkljivostjo miši, imenujemo "plošče". V vsaki plošči, ko je tumor zrasel do velikosti 50-100 mm 3, miši z presadkov so randomizirali na zdravljenje z docetakselom 15 mg /kg /d, IP ali pemetrekseda 20 mg /kg /d, IP ali ni zdravljenje (nadzor). Posamezne volumne tumorjev (V) smo izračunali po formuli "V = (dolžina x širina x širina) /2" in se primerjajo z vrednostmi na začetku zdravljenja da dobimo relativni volumen tumorja. Mediana zdravijo-to-nadzor vrednosti relativnega volumna tumorja so imenovana "stopnja zaviranja in vivo
" in so bili uporabljeni za oceno občutljivosti za docetaksel ali pemetrekseda.
MRNA izražanja v pilotno študijo in celotne kohorte
Two mililitrov krvi so bili zbrani v EDTA cevi pred operacijo, hraniti na 4 ° C in pošlje v laboratorij v 15 minutah. Skupno RNK iz plazme smo ekstrahirali z TRIzola LS in kloroformom in očistili s PureLink RNA Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, ZDA). Skupno RNK iz FFPE tumorskih tkiv smo ekstrahirali v skladu s postopkom zaščitene (evropski patent številka EP1945764-B1). Po ekstrakciji RNK in čiščenje je M-MLV reverzne transkriptaze Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) uporablja za ustvarjanje cDNA za Q-PCR za odkrivanje ekspresije P-aktin (ACTB - uporabljeni kot endogeno kontrolo) in geni preučiti . Vsaka serija reakcije vključeni pozitivno kontrolo s komercialno človeških pljuč in jeter RNA (Stratagene, La Jolla, CA, ZDA) kalibratorjem in negativne kontrole brez RNA in reverzne transkriptaze. cDNA predloga je bila dopolnjena s posebnimi primerji in sond, ki uporabljajo TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA). Relativni gen izraz kvantifikacije so bile izračunane v skladu s primerjalno metodo CT. Končni rezultati so bili določeni s ekspresijo mRNA formulo stopnja = 2 - △△ Ct [6], [23] in smo analizirali s programsko opremo Stratagene
ponovljivost in stabilnost genske ekspresije testu v plazmi
. ponovljivost genske ekspresije testu smo sočasno testirali z dvema metodama. Pri prvem načinu, so bili vzorci krvi iz petih pacientov zbrani od prvega dneva v peti dan pred kirurškim posegom ob istem času vsak dan. V tem času so bolniki prejeli niti kemoterapijo niti posebno obravnavo. ravni izražanja genov (visoke /vmesna vs nizko) smo določili za vsak vzorec, in odstotek enakih rezultatov je bila izračunana za vsakega bolnika. Pri drugem načinu je kri sestavljen enkrat na vsaka od dodatnih deset bolnikov, in vsak vzorec je bil razdeljen v pet alikvotov. ravni izražanja genov (visoke /vmesna vs nizko), so se za vsakega alikvotu in odstotek enakih rezultatov je bila izračunana za vsakega bolnika. Stopnja obnovljivost je bila opredeljena kot povprečje vseh 15 odstotkih (5 bolnikov iz načina enega do 10 bolnikih od načina dveh).
Da bi preverili stabilnost vzorcev krvi, so bili pripravljeni različni plazemske alikvoti istem vzorcu pod različni pogoji. Alikvote inkubiramo pri sobni temperaturi, ali na ledu 30 min, 1 h, 1,5 h ali 2 uri. QRT-PCR smo nato izvedli, in originalne vrednosti ΔCt različnih gena smo primerjali s standardnim protokolom (ΔCt = Ct gen-CT ACTB).
Statistične analize
The Mann-Whitney U- preizkus in test Kruskal-Wallis so bili uporabljeni za preskus združenja med mRNA in klinične značilnosti in med občutljivostjo za vsako kemoterapevtika in kliničnih značilnosti. Test rang korelacija Spearman je bila uporabljena za oceno korelacije med in vivo
in vitro
stopnje inhibicije in med plazemske koncentracije in tumor mRNA izražanja. Mann-Whitney U test smo uporabili za primerjavo ravni mRNA izražanja med vzorci tumorskih razstavlja vitro
občutljivost ali odpornost na docetaksel in pemetreksed. Sprejemnik, ki delujejo značilnosti (ROC) krivulje so izdelane tako, da ocenijo občutljivost, specifičnost in ustreznih površin pod krivuljami (AUC) s svojimi 95% intervali zaupanja (CIS). Preučevali smo optimalno mejno vrednost za napovedovanje s čim večjo vsoto občutljivosti in specifičnosti ter zmanjšanju celotnega napako (kvadratni koren vsote [1 občutljivosti] 2 + [1 specifi mesto] 2) in z zmanjševanjem oddaljenosti od mejne vrednosti v zgornjem levem kotu krivulje ROC [24]. Vsi statistični testi so bili dvostranski in pomen je bil določen na P
< 0.05 (dvostransko). Vse analize so bile izvedene s pomočjo SPSS, različica 16,0.
Rezultati
Značilnosti vseh bolnikih so prikazani v tabeli 1. Večina bolnikov je bilo moškega spola (73,3%), in prevladujoča histologijo bil adenokarcinom. Devetdeset štiri (62,7%) bolnikov je imelo fazi bolezni III. Bezgavkah so bili prisotni v 115 (76,7%) patients.Table 1 Značilnosti bolnikov
Značilen
pilotna študija
Skupaj kohorte *
N = 40

N = 150
N (%)
N (%)
Age, yr, mediana (razpon)
63 (40-83)
64 (29-84)
seks
Moški
31 (77,5)
110 (73,3)
Moški
9 (22,5)
40 (26,7)
Tumor stran
Distalno želodec
12 (30,0)
57 (34,0)
proksimalnem želodec
19 (47,5)
62 (41,3)
Cela želodec
9 (22.5)
37 (24,7)
fazi
I
4 (10,0)
17 (11,3)
II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5)
94 (62,7)
IV
2 (5.0)
5 (3.3)
histološke
1
0
3 (2.0)
2
8 (20.0)
31 (20,7)
3
22 (55,0)
71 (47,3)
Mešani 1-2
0
2 (1.3)
Mešani 2-3
10 (25,0)
43 (28,7)
bezgavko metastaze
št
9 (22,5)
35 (23,3)
Da
31 (77,5)
115 (76,7)
* skupno kohorta sestavljena iz prvotnih 40 bolnikov, vključenih v študijo pilotni plus dodatnih 110 bolnikov.
ponovljivost odkrivanja plazemske mRNA je bilo 92% za BRCA1 in 89% za TS. Ravni mRNA izraz bili stabilni po sobni temperaturi ali ledeno inkubaciji 30 min, 1h, 1,5 h in 2 h (Dodatni datotek 1: Slika S2, na voljo na spletu).
pilotna študija
Občutljivost docetaksel in pemetrekseda bilo uspešno oceni v 40 svežih vzorcev tumorjev, ki jih HDRA. Enajst plošče imunsko pomanjkljivostjo miši (9-18 miši na plošči, 148 miši v celoti) s človeškimi izhaja ksenograftih bilo uspešno vzpostavljena od vseh 40 kirurških vzorcev za in vivo
analizi občutljivosti. Test rang korelacija Spearman je pokazala pomembno povezanost med in vitro
in vivo
stopnje inhibicije za docetaksel (rho = 0,900, P
< 0,001) in pemetreksed (rho = 0,836, P
<0,001) (Dodatni datotek 1: Slika S3, AB, na voljo na spletu)
ravni BRCA1 mRNA so bile uspešno ocenjene v vseh vzorcih 40 tumorjev, v 32 parnih vzorcev krvi, in 10 plošč modelov miško, medtem ko raven TS mRNA. so bile uspešno ocenjene v vseh 40 vzorcih tumorja, vseh 40 vzorcev krvi, in v 9 plošč modelov miši. Test rang korelacija Spearman je pokazala korelacijo med plazemske koncentracije in tumor mRNA BRCA1 (rho = 0,647, P
< 0,001) in med ravnmi v plazmi in tumorskih TS (rho = 0,615, P
< 0,001) (Dodatna datoteka 1: Slika S4, AB, na voljo na spletu). Oba plazemska in tumor BRCA1 so povezana z občutljivostjo docetaksela (rho = 0,492, P
= 0,004 in Rho = 0.527, P
< 0,001, v tem zaporedju), obe v plazmi in tumor ravni TS korelaciji s pemetreksedom odpornosti ( rho = -0,627, P
< 0,001 in rho = -0,443, P
= 0,004, oziroma, Spearman rang test korelacije) (Dodatni datoteka 1: Slika S5, AD, na voljo na spletu). Ravni BRCA1 mRNA so bile višje v docetaksel občutljive kot v modelih miško Docetaxel odporna (11,26 vs 2,63; P
< 0,001), medtem ko so vrednosti TS višje v pemetreksed odporna kot pri miših pemetrekseda občutljiva ( 3.34 vs 7.27; P
= 0,013, Mann-Whitney U-test) (dodatna datotek 1: Slika S6, AB, na voljo na spletu)
Skupaj kohorta
BRCA1 in TS mRNA izraz je bila uspešno ocenjena v tumor. tkiva iz vseh 150 bolnikov. Stopnja odkrivanja v plazmi je bilo 82,00% za BRCA1 in 90.67% za TS. Povprečne koncentracije mRNA v plazmi in tumorja so prikazane v dodatni datoteki 1: Tabela S1, na voljo na spletu. Ni bilo signifikantne povezave med kliničnimi značilnostmi in ravni mRNA izraženosti BRCA1 ali TS (P > 0,05).
Je bila pozitivna korelacija med koncentracijo v plazmi in tumor mRNA BRCA1 (rho = 0.696, P
<0,001) in TS (Rho = 0.620, P
< 0,001, Spearman rang test korelacije) (Slika 2A-B). niso opazili nobenih razlik v osnovnih značilnosti, po mRNA v plazmi, ravni tumor mRNA, ali in vitro
chemosensitivity. Slika 2 Korelacije med plazmi in tumor mRNA izražanjem (A) BRCA1 in (b) TS pri 150 bolnikih z rakom želodca. Tam je bila statistično značilna korelacija med plazmi in tumor mRNA ravni izražanja obeh genov (P
< 0,001, v tem zaporedju)
ravni BRCA1 v plazmi (docetaksel občutljiva. 1.25; docetaksel odporna: 0,50, P
< 0,001) in tumor (docetaksel občutljiva: 8.81; docetaksel odporna: 4,88, P
< 0,001) so pozitivno povezana z občutljivostjo docetaksela. Ravni BRCA1 v plazmi in tumorja so bile višje v docetaksela občutljiva kot v docetaksel -resistant skupine. Ravni TS v plazmi (pemetreksed občutljiva: 0.90; pemetreksed odporna: 1,82, P
< 0,001) je bilo negativno in tumor (0,001::;; 16,69, P
<pemetreksed občutljiv 6.56 pemetreksed odporna) povezana z pemetrekseda občutljivosti. Ravni TS v plazmi in tumorja je bila v pemetrekseda občutljive nižja kot v pemetrekseda odporen proti skupini. (Slika 3A-D, Mann-Whitney U-test). Slika 3 vitro chemosensitivity povezano s plazemske koncentracije in izražanja tumor v BRCA1and TS pri 150 bolnikih z rakom želodca. Ravni BRCA1 v plazmi (A) in tumorja (B) so bile višje v docetaksela občutljiva kot v docetaksel -resistant skupine. Ravni TS v plazmi (C) in tumorjem (D) je bila nižja v pemetrekseda občutljiva kot v pemetrekseda odporen proti skupini. Črte v notranjosti polja označena z mediano. The laske polja parcel. SE, 95% CI
Občutljivost pri napovedovanju chemosensitivity v razponu od 63% do 71% za plazme in od 70% do 78% tumorjev mRNA. Posebnosti v razponu od 78% do 90% za plazme in 79% za tumorsko mRNA (preglednica 2, slika 4) .table 2 občutljivost in specifičnost stopnjah izražanja v plazmi in genskih tumor za napovedovanje chemosensitivity
Izražanje genov

Kemoterapevtiki
N
optimalno svetlo-temno
Občutljivost
Specifičnost
AUC (95% IZ)

P
Plazmin
BRCA1
z docetakselom
123
0,76
63%
90%
0.77 (0,67-0,87)
<0,001
TS
Pemetrekseda
136
1,01
71%
78%
0,78 (0.69-0.87)
< 0,001
Tumor
BRCA1
z docetakselom
123
6.09
70%
79%
0,75 (0,66-0,84)
< 0,001
TS
Pemetrekseda
136
8.08
78%
79%
0,83 (0,76-0,90)
< 0,001
Slika 4 ROC krivulje, ki prikazuje občutljivost in specifičnost izražanja plazme in genski tumor pri napovedovanju chemosensitivity . (A) BRCA1 in docetaksela (n = 123); (B) TS in pemetreksed (n = 136).
Razprava
V tej študiji so BRCA1 in TS mRNA v plazmi povezana z ravnmi v seznanjeno FFPE tumorsko tkivo. BRCA1 in TS mRNA v plazmi in tumorja so bili povezani z in vitro
chemosensitivity sveže implantiranega rakom želodca. Poleg tega je stopnja mRNA v plazmi so pokazali veliko občutljivost in natančnost pri napovedovanju chemosensitivity. Skupaj, te ugotovitve kažejo, da je plazma mRNA ogledala tumorja mRNA in se lahko izkaže za koristno orodje za napovedovanje chemosensitivity.
Način smo s sedežem za odkrivanje plazma mRNA, ki temelji na obogatitvi RNA v koloni čiščenja, omogoča bolj natančen, občutljiv in ponovljivo detekcijo , lažje ravnanje in hitrejše rezultate [10], [25], zaradi česar je mogoče za rutinsko analizo genske ekspresije v vsakdanji klinični praksi [25]. Vendar je kontaminacija mRNA ne-tumorskih virov, kot aktiviranih limfocitov, stromalnih celic ali krožijo tumorskih celicah, ni mogoče izključiti [10], [26], [27] in lahko delno pojasniti, zakaj je korelacija med plazmo in tumor izraz je bil vse prej kot popolne.
Poleg tega tumor heterogenost lahko predstavljale približno variabilnosti kot dobro. Posebnosti v razponu od 78% do 90% za plazme, medtem ko 79% za tumor. Manj kot nalašč posebnosti v tumorju prav lahko zaradi heterogenosti same tumorskega tkiva, ki je primeren nadaljnjo podporo uporabi plazme mRNA za napovedovanje občutljivost.
Nedavne študije so raziskovali celic brez mRNA izraz na več genov, vključno TS [28], β-catenin [29], hTERT [26] [30] [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], bmi-1 [35 ], Her-2 [36] in DKK1 [24], so te študije osredotočila na uporabo mRNA brez celic za zgodnje odkrivanje bolezni, tumorjev načrtovanja in spremljanja bolezni. V nasprotju s tem, da po našem najboljšem znanju, ta študija je prva preučiti morebitno vlogo plazemske mRNA za napovedovanje docetaksel in pemetreksed chemosensitivity trdnih tumorjev. Naše ugotovitve kažejo obetavno vlogo v plazmi ekspresijo mRNA kot napovedni biološki marker raka želodca in predložiti dokaze za uporabo plazme mRNA pri izbiri kemoterapijo za bolnike, brez potrebe po ponovnem biopsije v času napredovanja bolezni. Poleg tega lahko v plazmi mRNA koristen tudi za spremljanje bolnikov, ki se zdravijo v neoadjuvantno ali adjuvantno nastavitve. Načrt zdravljenja pri teh bolnikih se lahko pridobijo v skladu z njihovo mRNA chemosensitivity profilu. Na primer, lahko bolniki želodca z rakom z nizko stopnjo plazme TS mRNA zdraviti s kemoterapijo na osnovi pemetrekseda, medtem ko bi tisti z visokimi stopnjami plazme BRCA1 koristi od zdravljenja z docetakselom.
Vendar pa moramo opozoriti, da lahko v naši raziskavi nekatere omejitve. Sedanja Študija temelji na bolnikih, ki so zdravljenje-naivni. Z zbiranjem svojo plazmo pred operacijo in tumorjev takoj po operaciji, bi lahko dokazali mRNA vrednost plazme za spremljanje bolnikov, ki se zdravijo v neoadjuvantno ali adjuvantno nastavitve. Potem, občutljivost odkrivanja in vrednost pobral obtoku mRNA iz začetnih metastaz, zlasti za bolnike pridržuje drugo postavo kemoterapijo, je še vedno nejasno. Zdaj smo tudi izvedbo nadaljnjega študija na bolnikih z metastazami in ne prejemajo operacijo ali prejemajo kemoterapijo druge izbire. Imeli bomo najnovejše rezultate v bližnji prihodnosti, ki bo vseboval vsebino zgoraj navedene.
Zaključek
na koncu lahko nivoji mRNA izraz plazme v BRCA1 in TS zrcalijo tiste v tumor in ima lahko obetavno vlogo potencial napovedne biomarkerjev za docetaksela in peretrexed raka želodca. Te ugotovitve so predhodni in nakazujejo le na tej točki, in vsak od teh parnih biomarkerjev kemoterapijo hipoteze treba potrjeni pred uporabo v rutinsko vsakodnevno klinično prakso. Klinično preskušanje se trenutno zasnovan, da se potrdi vlogo prilagajanje zdravljenja, ki temelji na plazma mRNA izražanja z dne BRCA1 in TS.
Dodatne datoteke
Opombe
Jie Shen, Jia Wei prav tako prispevali k temu delu.
IZJAVE
Priznanja
to delo je podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (Dotacije št 81401969, 81300339), Major International (regionalni) Skupnega raziskovalnega projekta Kitajske (Grant No. 81220108023 ), in Top Six Talenti Projekt provinci Jiangsu (Grant No. 2011ws005). Delo v laboratoriju dr Rosell je delno financiran z nepovratnimi sredstvi fundacije La Caixa.
Vloga vira financiranja
virov financiranja imela nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje podatkov, analizo podatkov, interpretacijo podatkov, ali pisno poročilo
Electronic dodatnega materiala
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Dodatna datoteka 1:. Dodatne metode. Tabela S1. Pomenijo nivoje mRNA v plazmi in tumor. Slika S1. Original tumor in paru ksenotransplantati miške. (A) morfologija prvotnega tumorja diagnosticiran kot adenokarcinom z delnim karcinomom sluznice celic. (B) Seznanjene presadkov pri imunsko pomanjkljivostjo miših, ki so jih hematoksilin-eozinom barvanjem potrdili. Ni bilo pomembnih morfoloških razlik med prvotnega tumorja vzorca in v parih presadkov pri modelih z miško. Slika S2. Potrditev stabilnosti v plazmi mRNA. plazemske mRNA vseh genov so bili stabilni po podvrženi različnim razmeram. Slika S3. Korelacije med in vitro
in vivo
stopnje inhibicije za (A) docetaksel in (B) pemetrekseda v pilotne študije. Slika S4. Korelacija med plazmo in tumor mRNA ekspresije (A) BRCA1 (n = 32) in (B) TS (n = 40) v pilotne študije. Slika S5. Korelacije med ravnmi izražanja mRNA in vitro
chemosensitivity v pilotne študije. (A) Tumor BRCA1 in občutljivost docetaksela; (B) v plazmi BRCA1 in občutljivost docetaksela; (C) tumor TS in pemetreksed občutljivost; in (D) v plazmi TS in pemetreksed občutljivost. Slika S6. mRNA ravni in vivo
chemosensitivity. S pomočjo inhibicije tumorske cut-off 50%, je bilo modeli mišje razdeljeni v (A) docetaksela občutljiv in docetaksela odpornim podskupin (b) pemetreksed-občutljivih in pemetrekseda odpornim podskupin. Ravni BRCA1 mRNA (pike) so v docetaksel občutljive skupine višja kot v docetaksel odporna na skupino (P
< 0,001) in raven TS (pike) so v pemetrekseda odporen proti skupini višja kot v pemetrexed- občutljiva skupina (P
= 0,013). (DOC 666 KB) avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev izvirnih predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif avtorjev 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za prvotno datoteke za sliko 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif avtorjev Slika 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za sliko 4 Konkurenca interesu
Avtorji izjavljajo, da so nimajo konkurenčne interes. prispevki
avtorjev
JS, JW, WXG in BRL zasnovane raziskave in napisal na papir. JS, HW, LXY, ZZZ, LX in CC izvedli raziskavo. YTD, XPQ in JW analizirali podatke. TB in RR uredili papir. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Vloga osi CCL22 CCR4 na metastaz želodčnih rakavih celic v omental mlečno vložki
• Prognostične učinki ravni 25-hidroksivitamin D pri raku želodca