Upprättande och karakterisering av en metastas modell av human magcancer i nakna möss

Upprättande och karakterisering av en metastas modell av human magcancer i nakna möss Bild Sammanfattning
Bakgrund Review, en musmodell av metastaser av human magcancer är en av de viktigaste verktygen för att studera de biologiska mekanismerna bakom mänskliga magcancer metastas. I denna uppsats har vi etablerat en musmodell av metastaserande human magcancer i nakna möss som har en högre frekvens av tumörbildning och metastas än befintliga modeller.
Metoder
att generera musmodell av metastaserad human magcancer, färska tumörvävnader från patienter som genomgått kirurgi för magcancer implanterades subkutant i den högra och vänstra ljumskar av nakna möss. När den implanterade vävnaden växte till en kubikcentimeter, dödades mössen och tumörvävnader undersöktes och opererande. Tumörvävnaderna implanterades i nakna möss och utsattes för patologisk undersökning, immunhistokemisk färgning, och realtids-PCR för cytokeratin 18/08 (CK8 /18), E-cadherin, vaskulär celladhesionsmolekyl-1 (VCAM-1) och intercellulär adhesionsmolekyl-1 (ICAM-1). Mössen analyserades också för metastas i deras peritoneum, bukhålan, och inre organ genom histopatologisk undersökning. sökte vävnad som samlats in från dessa organ var för patologi.
Resultat
Efter tio generationer av implantation utvecklade alla möss tumörtillväxt i den implanterade läge, utvecklade 94% av mössen metastaser till retroperitoneum och inälvor. Den implanterade och metastatisk tumör upprätthålls samma histologiska egenskaper i alla generationer, och metastaser observerades i matstrupe, magsäck, mjälte, lever, njure, binjure, tarm och bukspottkörtel. Dessa metastaserande tumörer visade ingen detekterbar expression av CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1, och ICAM-1.
Slutsatser
Denna modell kommer att fungera som värdefullt verktyg för att förstå metastatisk process av mänsklig gastric cancer.
Nyckelord
Characterization Etablering Gastric cancermetastaser musmodeller bakgrund
Gastric cancer är den fjärde vanligaste malignitet och den näst vanligaste orsaken till dödsfall i cancer bara för lungcancer i världen [1]. Även prognosen för patienter med magcancer tidig har förlängts tydligt av nuvarande metoder för diagnos och behandling, är 5-års överlevnad efter diagnos av mag cancerpatienter med alla stadier < 50% [2]. Metastas svarar delvis för den höga dödligheten från magcancer. Andelen patienter med magcancer dör från bukhinnan metastaser är cirka 50% [3]. Därför har metastaser hamnat i fokus för många gastric cancerstudier. Metastas är en mycket komplicerad process, där flera på varandra följande steg [4]. Gener associerade med celladhesion, motilitet, proliferation, överlevnad, metabolism och signaltransduktion spelar en viktig roll vid cancermetastaser [5-8]. Hur dessa proteiner fungerar tillsammans för att främja metastas fortfarande dåligt kända. Review, en musmodell av magsäckscancer är ett mycket värdefullt verktyg för att förstå den metastatiska processen. Den första mänskliga carcinoma modell i nakna möss grundades 1969 av Rygaard och Povlsen genom hypodermical transplantation av mänsklig vävnad tjocktarmscancer [9]. Även den transplanterade tumören behållit sin elakartade egenskaper, förlorade den sin metastatisk potential, och den ursprungliga strukturen och beteendet hos tumören ändras [10]. En metastatisk modell av human koloncancer byggdes av Morikawa 1988 med hjälp av humana koloncancerceller subserously implanterade i blindtarmen [11]. Denna modell visade orthotopic tumörtillväxt och levermetastaser. Furukawa modifieras vidare denna modell 1993 genom att kirurgiskt sy human magcancer vävnad i tunica serosa gastria av nakna möss [12]. Denna modell utvecklades tumörer robust och uppvisade en mycket hög grad av metastaser till levern. Eftersom störning av vidhäftningen av tumörvävnaden förändrar dess biologiska och malignt beteende, de musmodeller beskrivna bibehöll integriteten av tumörerna som möjliggör en "patient-like-modellen" [13, 14]. Härefter har många musmodeller av metastaserande human magcancer genererats av orthotopic transplantation av magcancer vävnad [15-18] sälja The musmodeller av metastaserande human magcancer rapporterats hittills innebära många utmaningar. ortos implantation i nakna möss krävs operation, och tumörvävnader implanterade härrör från human magcancer cellinje i stället för patienterna. Som ett resultat, är det förfarande långa och kan orsaka kraftig blödning och död hos möss. Dessutom, även om hastigheten för orthotopic tumörbildning är nästan 80-100%, graden av metastaser inte är så hög; levertumören metastatiska taxor var vid 45-60% [16, 17], och att med bukhinnan vid en enbart 40% [18]. Således inrättandet av dessa musmodeller kan dra nytta av förbättrade metoder som skulle göra transplantation lättare och resulterar i en mer robust metastas. I denna rapport, beskrev vi en musmodell av metastaserande human magcancer som behandlar frågor från tidigare musmodeller. Vi etablerade vår musmodell av metastaserande human magcancer genom subkutan implantation av tumörvävnad som härrör kirurgiskt direkt från patienter med magcancer. Jämfört med andra musmodeller beskrivits tidigare, bildar denna musmodell tumörer med hög hastighet och ännu viktigare, visar robust metastaser.
Metoder
etik uttalande
alla protokoll omfattar användning av försöksdjur och tumörvävnad från patienter med magsäckscancer i denna studie har godkänts av den etiska kommittén för medicin och Science Research Institute i Gansuprovinsen (försöksdjur vetenskap grupp och klinisk försöksgruppen, referensnummer: P201108150024), ingår de godkända program för insamling, bearbetning och implantation av tumören vävnader från patienter med magcancer, och resektion, lagring och granskning av tumörvävnad från nakna möss. Alla studiedeltagare förutsatt informerat samtycke att delta i studien.
Djur och kliniska tumörvävnader
BALB /C nakna möss vid 4-6 veckors ålder och 16-18 g i vikt, både manliga och kvinnliga, tillhandahölls av Shanghai Tumör Institute och fötts upp i specifik patogenfria (SPF) tillstånd. Tumörvävnad erhölls från patienter med magcancer, som genomgick kirurgi i Gansu Tumör Hospital. De färska tumörvävnader implanterades omedelbart efter resektion. Kliniska data för patienter listas i tabell 1.Table 1 kliniska data
Samplea
Histopatologisk klassificering
klinisk fas
Hastighet lymfkörtel metastas

1: a
dåligt differentierad adenokarcinom
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2nd
måttligt differentierad adenokarcinom
PT4aN0M0 IIb
0/12
3rd
ulcerös skriver måttligt differentierad adenokarcinom
PT4aN0M0 IIb
0/30
4th
dåligt differentierad adenokarcinom
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
a1st och 4 gastric cancervävnad var dåligt differentierade adenokarcinom och ha lymfkörtel metastas. 2: a och 3: e var måttligt differentierade adenokarcinom och har ingen lymfkörtel metastas
subkutan implantation av färsk tumörvävnad i nakna möss
De färska tumörvävnad utskurna från patienter med magcancer skars till 1 kubikmillimeter bitar som späddes med DMEM medium, och sedan subkutant implanteras i höger och vänster armhålor och ljumskar nakna möss med 16-gague nålen under aseptiskt tillstånd. Varje prov implanteras för att fyra möss, 5-6 stycken (0,8 ml) per mus. De nakna möss därefter föds upp i SPF tillstånd, och tumörtillväxt på nakna möss undersöktes dagligen. När tumören på nakna möss har vuxit till en kubikcentimeter, var musen dödades genom cervikal dislokation och tumörvävnader undersöktes och opererande i aseptiskt tillstånd. Tumörvävnaden från varje möss separerades i tre delar - en användes för ytterligare en runda av implantation i nakna möss, den andra fixerades i 10% formaldehyd för patologisk undersökning och immunohistokemisk (IHC) infärgning för CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1, och ICAM-1, den tredje lagrades i flytande kväve och i -80 ° C under realtids-PCR-analys av CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1, och ICAM-1. Mössen dissekerades och undersöktes med avseende tumörmetastas i deras peritoneum, bukhålan, lever, mjälte, mage, tarmar, njurar, lunga och hjärna. Insamlade vävnader fixerades i 10% formaldehyd för patologisk undersökning.
Upprättande och karakterisering av musmodell av metastaserande human magcancer
utskurna tumörvävnaden subkutant implanterades till höger och vänster ljumskar av 5 nakna möss under aseptiska betingelser med hjälp av 5-6 stycken (0,8 ml) per mus. Den skärande och utspädning av tumörvävnad, tillväxt undersökning och resektion av tumören i nakna möss, lagring och granskning av de implanterade tumörvävnader, metastatiska tumörvävnader och mus kroppar bearbetades enligt beskrivning ovan. Implanterade tumörvävnader fick passera i tio generationer.
Undersöka effekten av implantationsstället på hastigheten av metastas
Såsom beskrivits, var den implanterade humana magcancer vävnad från nakna möss subkutant implanteras för att tre grupper av nakna möss vid olika platser under aseptiska betingelser. I genomsnitt 5-6 bitar implanterades i möss, med en grupp som fick vävnaderna på höger och vänster ljumskar, den andra gruppen på höger och vänster armhålor, och den tredje på två platser i ryggen. Såsom nämnts ovan, var tillväxten undersökning och resektion av tumören i nakna möss behandlas. Ytterligare analyser ingår undersökning av tumörtillväxt på olika platser och metastaser i bukhinnan och bukhålan.
Implantation och metastasering av tidigare frysta och passerades human magcancer vävnad i nakna möss sälja The implanterade humana magcancer vävnader passe från fjärde och åttonde generationen genom implantation i nakna möss förvarades i flytande kväve och subkutant implanterades i nakna möss vid de högra och vänstra ljumskar såsom beskrivits ovan. Ytterligare analyser ingår undersökning av tumörtillväxt på olika platser och metastaser i bukhinnan och bukhålan.
Patologisk undersökning av de implanterade och metastaserande mänskliga gastric vävnader från nakna möss sälja The implanterade och metastaserande humana magcancer vävnader från nakna möss fixerades i 10% formaldehyd, inbäddades i paraffin, skars i sektioner färgades i hematoxylin-eosin färgning (HE). Objektglasen utvärderades med användning av ett Olympus BX50 ljusmikroskop, och bildinsamlings utfördes genom Mias patologisk arbetsstation 4,0 systemet.
IHC färgning
de expressionsnivåer av E-cadherin, VCAM-1, ICAM-1, och CK8 /18 undersöktes genom immunhistokemi i implanterade och metastaserande tumörvävnader från nakna möss och de kirurgiska prover som används för implantation. Sektioner som används för färgning erhölls från de kirurgiska prover, de implanterade och metastatiska tumörvävnader och vävnaderna som innehåller metastatiska tumörer. Reagens som används för färgning var SP-9000 Histostain ™ -plus Kits, 3-3'-diaminobensidintetrahydroklorid (DAB) Kits, primär mus monoklonala antikroppar mot E-cadherin (1: 200 spädning), ICAM-1 (1: 500 spädning) och primär kanin polyklonal antikropp mot VCAM-1 (1: 500 utspädning) (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co Ltd, Beijing, Kina). IHC färgningsGlasen oberoende bedömningar av två patologer, och någon skillnad i beslutet resultatet löstes med konsensus. Färgningsintensitet bedömdes som negativa, svagt, måttligt eller starkt. Den ljusmikroskop och bildtagning programvara var samma som ovan.
Total RNA-extraktion och realtids-PCR
Totalt RNA extraherades genom Trizol (Sheng gong Biotechnology, Shanghai, Kina) från de implanterade och metastaserande tumörvävnad som växte i nakna möss och från kirurgiska prover som används för implantation, efter tillverkarens instruktioner. CDNA syntetiserades genom omvänd transkriptas (Sheng gong Biotechnology), i enlighet med tillverkarens rekommendationer. SYBR förblandning Ex TaqTM (Takara Biotechnology, Dalian, Kina) användes för realtids-PCR. 20-il reaktion innehöll 10 pl SYBR förblandning Ex TaqTM, 1 pl DNA-mall, 0,4 pl vardera primer och 8,2 pl dH 20. PCR-cykling tillstånd var: 37 ° C under 5 min, 95 ° C under 30 s, och 40 cykler av 95 ° C under 5 s till 60 ° C under 30 s. Den β-aktin-mRNA användes som intern kontroll, och reaktionsblandningen utan mall-DNA användes som negativ kontroll. Samtliga prover mättes 3 gånger oberoende av varandra, och de kvantitativa PCR-data analyserades med användning av den jämförande CT-metoden. Kortfattat, skillnaden i cykel tröskel, ΔCT, bestämdes som skillnaden mellan den testade genen och human β-aktin. Vi erhöll därefter ΔΔCT genom att finna skillnaden mellan de två grupperna. Vecket förändring beräknades som två -ΔΔCT. Primrarna listas i tabell 2.Table 2 Primrar som användes i realtids-PCR
Gene
Forward primer
Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Resultat
tumörbildning och metastas
Bland de fyra möss implanterade med 1st kirurgiska exemplar, bara en utvecklad tumör på platsen för implantation av 76 dagar (fig. 1a). Tjugofem dagar senare var musen dödades genom cervikal dislokation och analyserades för tumörer. Tumörvävnad på ett genomsnitt av 1 kubikcentimeter i storlek, visas ett intakt hölje och hård konsistens (fig. 1b). Metastas i retroperitoneum hittades av visuell inspektion (Fig. 1c). Ingen metastas detekterades i dess peritoneum, bukhålan, lever, mjälte, mage, tarmar, njurar, lunga och hjärna. Fikon. En metastatisk tumörtillväxt från den implanterade magsäckscancer vävnad erhållen kirurgiskt (X 400). a, b: växte implanterad cancervävnad till ~ 1 kubikcentimeter och visade ett intakt hölje och hård konsistens; c: Tumör metastaser i musen retroperitoneum; d, e: Den implanterade vävnaden och metastatiska tumörer bestod av dåligt differentierade karcinom-celler och ett fåtal mesenchyma celler och blodkärl, med vissa likheter med körtel hålighet. Cancercellerna uppvisade mörk färgade kärnor och knappa cytoplasma och saknade det normala förhållandet mellan kärna och cytoplasma; f: implanterad tumör visar vävnadsinfiltration
Patologisk analys visade att de implanterade och metastaserande tumörvävnad bestod av dåligt differentierade cancerceller, och endast en liten del av mesenchyma och blodkärl. Dessa vävnader visas diffust, saknade struktur, och liknar körtel lumen. Dessutom är de celler uppvisade mörka-färgade kärnor, knappa cytoplasma och misproportioned kärnor och cytoplasma (fig. 1d, e, f). Liknande resultat erhölls i en parallell studie som involverar implantation av tumörvävnad i 4 möss; bara en mus utvecklad tumör (medelstorlek: 1,5 kubikcentimeter) 26 dagar efter implantation. Ingen metastas observerades i dess peritoneum, bukhålan, lever, mjälte, mage, tarmar, njurar, lunga och hjärna. De andra möss implanterade med den 2: a och 4: e kirurgiska prover visade ingen tumörtillväxt.
Stabilitet av den implanterade tumören efter passage i flera generationer
tumör som utvecklats från den 1: a kirurgiska prov passe tio generationer. Hastigheten för tumörtillväxt var 100% och den för metastas i retroperitoneum och viscera var 80-100% (i genomsnitt 94%), oavsett om den primära vävnad användes färsk eller fryst (tabell 3). Inälvor metastas observerades i lymfkörtlarna runt matstrupen, under magslemhinnan, tunica serosa gastria, mjälte, lever portal område, central venae och sinus hepaticus, leverparenkym, lever kapsel, njur hilum, njure parenkym, binjure, tarm slemhinnorna, pankreas och spermaduct (Fig. 2). Generationstid är 16 days.Table 3 Stabilitet och graden av metastasering av tumörer implanterade på olika positionsa
Variabel
Ingen
Tillväxten i implanterade läge (%)
metastas retroperitoneum (%)
Inälvor (%)
Generation tid (dagar)
Passage nummer
1
5
100 (5/5 ) katalog 100 (5/5) Review 80 (4/5) katalog 20
2nd
5
100 (5/5) Review 80 (4/5)
100 (5/5) katalog 14
3rd
5
100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 80 (4/5) Review 14
4th
5
100 (5/5) Review 80 (4/5) Review 100 (5/5) katalog 15
5th
5
100 (5/5) katalog 100 (5/5) Review 80 (4/5) katalog 14
6th
5
100 (5/5) Review 80 (4/5) Review 100 (5/5) katalog 13
7th
5
100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 100 (5 /5) katalog 17
8th
5
100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 100 (5/5) katalog 18
9
5
100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 100 (5/5) katalog 17
10th
5
100 (5 /5) Review 100 (5/5) Review 100 (5/5)
18
förvaras i flytande kväve
4.
5
100 (05/05)
100 (5/5) Review 100 (5/5) katalog 17
8th
5
100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 100 (5/5) Review 18
Implantation i olika positioner
ljumskar
50
100 (50/50) Review 94 (47/50) Review 94 (47/50 ) katalog 16
Tillbaka
10
100 (10/10) Review 30 (3/10) Review 10 (1/10) katalog 20
Armhålorna
10
100 (10/10) Review 0 (0/10) Review 30 (3/10) Review 14
en Efter tio generationer av implantation utvecklade alla möss tumörtillväxt vid implanterade läge, och 94% av möss utvecklade metastaser till retroperitoneum och inälvor, oavsett om tumören källan var färskt eller fryst. Den genomsnittliga tiden för bärande tumör är 16 dagar. Ljumsken av möss är bäst Implantation läge, vilket resulterar i 94% retroperitoneum och inälvor metastaser
Fig. 2 Patologisk undersökning av tumören som metastaserat till inälvorna (X 100). Micro-metastas observerades i lymfkörtlarna runt matstrupen (a), under magslemhinnan (b), och i andra områden såsom tunica serosa gastria (c), parenkymet i lever kapsel (d), leverportalområdet (e ), sinus hepaticus (f), mjälte (g), centraler venae hepatisk (h), pankreas (i), renal hilum (j), renal parenkym (k), binjure (l), tarm serosa (m), spermaduct (n), och lunga (o)
hastighet av metastas av tumören implanteras i olika positioner
Implantation in i olika positioner som påverkas hastigheten av metastas men inte graden av tumörtillväxt. Implantering i ljumsken resulterade i 94% retroperitoneum och inälvor metastaser; implantering i ryggen resulterade i 30% retroperitoneum metastaser och 10% inälvor metastaser; implantering i armhålorna gav ingen retroperitoneum metastaser och 20% inälvor metastaser. Generering Tiden var: 16 dagar för tumörer implanterade i ljumskarna, 20 dagar för de implanterade i ryggen, och 14 dagar för de som implanteras i armhålorna (tabell 3). Den metastatiska viscera inkluderade lever (50%), njure (44%), tarm (28%), matstrupe (12%), pankreas (12%), mage (6%), mjälte (6%), och spermaduct (6 %) (tabell 4) .table 4 metastas i visceraa
implanterade läge
Ingen
inälvor metastaser (%)
Lever (%) katalog
Kidney (%)
tarm (%)
matstrupen (%)
pankreas (%)
Mage (%) katalog
mjälte (%)
Spermaduct (%)
ljumskar
50
94 (47/50) Review 50 (25/50) Review 44 ( 22/50) Review 28 (14/50) Review 12 (6/50) Review 12 (6/50) Review 6 (3/50) Review 6 (3/50)
6 (3/50) Review Back
10
10 (1/10) katalog 0
0
0
0
0
10 ( 1/10) Review 10 (1/10) Review 0
Armhålorna
10
30 (3/10) Review 20 (2/10) katalog 0
0
10 (1/10) Review 0
0
0
0
en lever och njure var inälvorna med högsta andelen metastaser (44-50%), och mage, mjälte och spermaduct var den lägsta (6%) Review Karaktärisering av den implanterade och metastatisk tumör
IHC och realtids PCR-resultat avslöjade att ICAM-1, VCAM-1, och CK8 /18, men inte E-cadherin, var övervägande uttrycktes vid kirurgi och i den implanterade tumören av primär och första generationen (Fig. 3). Som framgår av tabell 5, den primära och första generationen av tumören visade positiv färgning för VCAM-1 och CK8 /18, men de efterföljande generationer visade svag färgning för dessa proteiner: VCAM-1 färgning räknades som måttligt positivt (++) i den primära, svag signal (+) i den första generationen, och CK8 /18 färgning bedömdes som svag signal (+) i den första generationen. Tumörer i alla led visade negativ färgning för E-cadherin, medan metastatisk tumör på alla generationer visade negativ färgning för E-cadherin, ICAM-1, VCAM-1, och CK8 /18. När det gäller utskrifter, upptäckte vi VCAM-1-mRNA i den primära och första generationens implanterad tumör men inte vid spridning. E-cadherin och ICAM-1-transkript detekterades inte i alla generationer av implanterade och metastatiska tumörer. Fikon. 3 IHC-analys av uttrycket av E-cadherin, VCAM-1, ICAM-1 och CK8 /18 (X 200). CK8 /18 uttryck detekterades i de kirurgiska provet används för implantation (a) och i de primära implanterade tumörvävnader (b), men inte i F1 generation implanterade tumörvävnader (c), VCAM-1 uttrycktes i de kirurgiska provet ( d), och i de primära implanterade tumörvävnader (e), men inte i de F2-generationen implanterade tumörvävnader (f). E-cadherin uttryck var inte detekteras i kirurgiska prov (g) och i de primära implanterade tumörvävnader (h). ICAM-1 uttrycktes i de kirurgiska provet (i), men inte i de primära implanterade tumörvävnader (j) Review Tabell 5 Expression av E-cadherin, ICAM-1, VCAM-1 och CK8 /18 i tumörerna vid kirurgi, efter implantation och under metastas
Variabel
Ingen
Protein expressiona
mRNA expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical prov 1
-
+++
+++
+++
Primär 1
implanterade tumören -
-
++
+
0
0
0,0927
metastatisk tumör -
- Omdömen - -
0
0
0
1st
5
implanterad tumör Omdömen - (0/5) Review - (0/5) Review + (5/5) Review - (0/5 ) katalog 0
0
0,1997
metastatisk tumör Omdömen - (0/5) Review - (0/5) Review - (5/5) Review - ( 0/5) Review 0
0
0
2 ~ 10
45
implanterad tumör Omdömen - (0/45) Review - (0/45)
- (0/45) Review - (0/45) katalog 0
0
0
metastatisk tumör Omdömen - (0/42) Review - (0 /42) Review - (0/42) Review - (0/42) katalog 0
0
0
aMolecular analys av de implanterade och metastaser visade ingen detekterbar expression av CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 och ICAM-1, med undantag av positiv färgning för VCAM-1 i de implanterade tumörvävnader av den första generationen
Diskussion
Cancer kännetecknas av proliferation, invasion och metastas. Mer än 90% av dödligheten i cancer beror på metastaser därigenom meddelar intensiv forskning [19]. Metastas är en komplicerad och dåligt förstådd process som omfattar proteiner med funktioner i celladhesion, ECM nedbrytning och rörlighet [19-21]. Ett flertal studier på magcancer metastaser har rapporterats [22-26]. Men de flesta av dessa studier utfördes in vitro, misslyckas med att efterlikna den metastatiska processen som sker in vivo. Detta tyder på ett behov av en djurmodell av cancermetastaser som har en robust och konsekvent fenotyp. I den aktuella studien var en modell av metastaserande human magcancer fastställts av injektions ympning i nakna möss med cancer vävnaderna kirurgiskt från patienter med magcancer. Alla möss utvecklade tumörtillväxt vid den implanterade läge och retroperitoneum metastasering, och 94% av möss utvecklade metastaser till inälvor, oavsett om tumören källan var färskt eller fryst. Den implanterade och metastatisk tumör upprätthålls samma funktioner i alla generationer, och inälvor metastaser observerades i lymfkörtlarna runt matstrupen, under magslemhinnan, tunica serosa gastria, mjälte, lever portal område, central venae och sinus hepaticus, leverparenkym, lever kapsel, njur hilum, njure parenkym, binjure, tarm serosa och bukspottkörtel. Metastas var stark i denna musmodell. Retroperitoneum metastaser möjligen berodde på dissociation av tumörceller från den implanterade tumören, införande i inguinal körtlar, och transport till retroperitoneum. Detta kan vara orsaken till tumören metastaserande till levern portalen område, central venae, och sinus hepaticus, liksom i tunica serosa gastria, njur hilum, binjure, och tarm slemhinnorna. Metastas kan också ha skett genom lymfkörtlarna; tumörer observerades i lymfkörtlarna runt matstrupen, under magslemhinnan, mjälte, bukspottkörtel och njure parenkymet
Förekomsten av metastaser förefaller vara beroende på platsen för implantation subkutant. implantering i ljumsken resulterade i 100% retroperitoneal metastaser och 94% inälvorna metastas; implantation i ryggen resulterade i 30% retroperitoneum metastas, och 10% inälvorna metastas; implantering i armhålorna gav ingen retroperitoneum metastaser och 20% inälvor metastaser. Denna observation överensstämmer med metastaser i samband med tumörtillväxt mikro inklusive blodkärl och lymfa distribution. I själva verket har musen ljumske fler blodkärl och lymfa nätverk som rinner ut i bukhålan och inälvor än ryggen. Även armhålorna har rika blodkärl och lymfatiska nätverk, är riktningen för vena antero, och de flesta av lymfa kontakt med lunga, luftstrupe och pleura, platser där magcancer sällan blir flyttas. Därför är den enkel metod för subkutan implantation av cancerceller in i ljumskarna hos nakna möss resulterar effektivt i en modell av metastatisk human magcancer. Denna modell har en högre inälvor metastaser takt än vad som rapporterats i litteraturen [13-18] och skulle lätt kunna tillämpas på andra typer av human cancer.
Tumörinvasion med efterföljande metastaser är den största orsaken till sjuklighet och dödlighet hos patienter med cancer. Cancermetastas är en komplex process, i vilken tumörceller separerar från den primära tumörmassan, migrera genom det vaskulära systemet, extravasera in i andra vävnader och växa till nya tumörer [27-30]. Bland dessa olika processer, är en förändring i de adhesiva egenskaperna hos de primära tumörceller en kritisk faktor för tumörprogression [28]. Det har visat sig att celladhesion är ansvarig för tumörprogression, inbegriper molekyler som spelar en roll i cell-cell-adhesion och cell-matrix adhesion [31-34]. Celladhesion spelar en viktig roll i de två olika stadier av tumörens metastatiska processen - avskiljandet från den primära tumören och dess vidhäftning till det cirkulatoriska systemet [27]. Därför celladhesionsmolekyler spelar en kritisk roll vid invasionen och metastas av ett flertal humana tumörer.
E-cadherin spelar en viktig roll i cell-cell-adhesion i epitelvävnader [35]. Förutom dess roll i normala celler, kan denna celladhesionsmolekyl spelar en viktig roll i malign celltransformation, tumörutveckling, och progression. Förlust av tumörvävnadsintegritet kan leda till lokal invasion [36]. Därför förlust av funktion av E-cadherin i tumörvävnader korrelerar med invasivitet och metastasering av tumörer [37]. Studier har visat att avvikande E-cadherin-uttryck i samband med förvärvet av invasiv och mer avancerad tumörstadium för magcancer [38-40].
ICAM-1 och VCAM-1 är mycket viktiga celladhesionsmolekyler hör till immunoglobulin superfamiljen. ICAM-1 fungerar i cell-cell och ECM vidhäftning, inklusive fysiologisk polymorfonukleära (PMN) tight adhesion och trans endotelial migration via leukocytintegriner lymfocyt functionassociated antigen-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) och makrofag-1-antigen ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. VCAM-I medierar celladhesion via integrin [42]. ICAM-1 spelar en viktig roll i cell-cell- och cell-ECM-interaktioner, särskilt tumörinvasion och cytotoxicitet av lymfocyter. Studier har visat att den positiva expressionshastigheten för ICAM-1 var relaterad med lymfkörtel metastas och djupet av tumörinvasion, och VCAM-1 expression positiva gastric cancer var mer invasiva och var förknippade med mer lymfnodmetastaser än VCAM-1 expression negativ de [43-45]. Cytokeratin visas på alla epitelceller, vissa icke-epitelceller, och de flesta tumörceller. De cytokeratiner, som tillhör det mellanliggande filament (IF) proteinfamiljen, är primära komponenter av hornceller och bibehåller anordnandet av epitelvävnad. Studier har visat att de cytokeratiner är mycket starkt konserverade och viktigt för vävnadsdifferentiering. För närvarande har mer än 20 olika cytokeratiner identifierats [46], varav CK 8, 18 och 19 är den vanligast förekommande i enkla epitelceller. I föreliggande studie, avslöjade av IHC och RT-PCR-resultat att uttrycket av E-cadherin är negativ, och den hos ICAM-1, VCAM-1, och CK8 /18 är positiva i de kirurgiska provet som används för implantation, i överensstämmelse med tidigare studier [38, 40, 43, 45]. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Motstånd av våmmen bakterier murein mot bovint gastric lysozyme
• Cancerassocierade fibroblaster är positivt korrelerade med metastatisk potential av mänskliga gastric cancers