Perustaminen ja luonnehdinta etäpesäke malli ihmisen mahasyövän nude mice

perustaminen ja luonnehdinta etäpesäke malli ihmisen mahasyövän nude-hiirissä
tiivistelmä
tausta
hiirimallissa etäpesäke ihmisen mahasyöpä on yksi tärkeimmistä työkaluja tutkittaessa biologisten mekanismien taustalla ihmisen mahasyövän etäpesäke. Tässä artikkelissa, me perustettiin hiirimallissa metastasoituneen ihmisen mahasyövän nude-hiirissä, jotka on korkeampi kasvaimen muodostumisen ja etäpesäkkeiden kuin nykyiset mallit. Tool Menetelmät
Tuottaaksesi hiirimallissa metastasoituneen ihmisen mahasyöpä, tuoreet tuumorikudoksista potilaista, joille on tehty leikkaus mahasyövän implantoitiin ihon alle oikeaan ja vasemman groins nude-hiirten. Kun istutetaan kudoksen kasvoi 1 kuutiosenttimetriä, hiiret tapettiin, ja kasvaimen kudokset tutkittiin ja resekoitiin. Kasvainkudoksessa istutettiin nude-hiiriin, ja altistettiin patologiset tutkimukset, immunohistokemiallisella värjäyksellä ja reaaliaikaisen PCR: sytokeratiini 8/18 (CK8 /18), E-kadheriinin, verisuonten adheesiomolekyyli-1 (VCAM-1) ja intersellulaarinen adheesiomolekyyli-1 (ICAM-1). Hiiriä analysoitiin myös etäpesäkkeiden niiden vatsakalvon, vatsaontelon ja sisäelinten mukaan histopatologinen tutkimus. Kudokset kerätään nämä elimet tutkittiin patologian.
Tulokset
Kymmenen sukupolvien istutusta, kaikki hiirille kehittyi kasvaimen kasvua istutettu asennossa, 94% hiiristä kehitti etäpesäke retroperitoneum ja sisäelimet. Istutetun ja etäpesäkekasvainten säilytti saman histologiset piirteet sukupolvesta ja etäpesäkkeiden havaittiin ruokatorven, mahalaukun, perna, maksa, munuainen, lisämunuainen, suolisto, ja haima. Nämä etäpesäkkeitä ei paljastanut mitään havaittavaa ilmentymistä CK8 /18, E-kadheriinin, VCAM-1 ja ICAM-1.
Päätelmät
Tämä malli toimii arvokas työkalu ymmärtää metastaattisen prosessin ihmisen mahasyöpä.
Avainsanat
Characterization perustaminen Mahasyöpää etäpesäke Mouse mallit Background
Mahasyöpä on neljänneksi yleisin maligniteetti ja toiseksi yleisin syy syöpäkuolemista vain keuhkosyöpään maailmassa [1]. Vaikka ennusteen potilaita, joilla on varhaisen mahalaukun syöpä on jatkettu selvästi nykyisten menetelmien diagnoosin ja hoidon, 5 vuoden pysyvyys diagnoosin jälkeen mahalaukun syöpäpotilaat kaikissa vaiheissa on < 50% [2]. Etäpesäke osuus osittain korkeasta kuolleisuudesta mahasyöpä. Niiden potilaiden osuus, joilla mahalaukun syövän kuolla vatsakalvon etäpesäke on noin 50% [3]. Siksi etäpesäke on tullut painopiste monien mahasyövän tutkimuksissa. Etäpesäke on hyvin monimutkainen prosessi, johon sisältyy useita peräkkäisiä vaiheita [4]. Liittyviä geenejä soluadheesiota, liikkuvuuteen, lisääntymistä, eloonjääntiä, aineenvaihduntaa, ja signaalitransduktion tärkeä rooli syövän etäpesäkkeiden [5-8]. Miten nämä proteiinit toimivat yhdessä edistää etäpesäkkeiden edelleen huonosti ymmärretty.
Hiirimallissa metastasoituneen mahalaukun syöpä on erittäin arvokas väline ymmärtämisessä metastaattisen prosessin. Ensimmäinen ihmisen karsinooman malli nude-hiirissä perustettiin vuonna 1969 Rygaard ja Povlsen kautta hypodermical Ihmiskudosten paksusuolisyöpäkudoksessa [9]. Vaikka istutetut kasvain säilytti pahanlaatuinen ominaisuudet, se menetti metastaattista potentiaalia, ja alkuperäisen rakenteen ja käyttäytymisen kasvain muuttui [10]. Metastaattinen malli ihmisen paksusuolen syöpä rakennettiin ensin Morikawa vuonna 1988 käyttäen ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa subserously istutettiin umpisuoli [11]. Tämä malli osoitti potilaalle tehdä kasvaimen kasvua ja maksan etäpesäke. Furukawa edelleen muokata tätä mallia vuonna 1993 kirurgisesti ompelemalla ihmisen mahasyövän kudoksen tunica herakalvojen gastriini nude-hiirten [12]. Tämä malli kehitettiin kasvaimia voimakkaasti ja osoitti erittäin korkea etäpesäke maksassa. Koska häiriöt tarttuvuutta kasvainkudoksen muuttaa sen biologista ja pahanlaatuisten käyttäytymistä, hiiren kuvatut mallit säilyttivät eheyden kasvainten mahdollistaa "potilas-like-malli" [13, 14]. Tämän jälkeen monet hiiri malleja metastasoituneen ihmisen mahasyöpä on tuotettu potilaalle tehdä elinsiirron mahasyövän kudoksen [15-18].
Hiiri malleja metastasoituneen ihmisen mahasyövän toistaiseksi raportoitu aiheuttaa useita haasteita; ortoottisen istutusta nude-hiiriin tarvitsi leikkaushoitoa, ja kasvaimen kudokset istutettu olivat peräisin ihmisen mahasyöpä solulinja sijaan potilaista. Tämän seurauksena on hidas ja voi aiheuttaa voimakas verenvuoto ja hiirten kuoleman. Vaikka määrä potilaalle tehdä kasvainten muodostumista on lähes 80-100%, korko etäpesäkkeiden ole yhtä korkea; maksan kasvain metastaattista hinnat olivat 45-60% [16, 17] ja että vatsakalvon klo vain 40% [18]. Siten perustaminen nämä hiirimalleissa voisivat hyötyä paremmista menetelmistä, jotka tekisivät elinsiirrot helpompaa ja tuloksena on vankempi etäpesäke. Tässä raportissa kuvasimme hiirimallissa metastasoituneen ihmisen mahasyöpä että korjaa ongelmat aiemmista hiiri malleja. Olemme vakiinnuttaneet hiirimallissa metastasoituneen ihmisen mahasyöpä ihonalaisen istutuksen kasvainkudosnäytteet peräisin kirurgisesti suoraan potilaalla on mahasyöpä. Verrattuna muihin hiiri malleja on kuvattu, tämä hiirimallissa muodostaa kasvaimia suurella nopeudella ja mikä tärkeintä, näyttää vankka etäpesäkkeitä. Tool Menetelmät
Ethics selvitys
Kaikki protokollat, joissa käytetään koe-eläimiä ja kasvaimen kudokset potilaalla on mahasyöpä tässä tutkimuksessa oli hyväksynyt eettinen komitea of ​​Medicine and Science Research Institute of Gansun maakunnassa (koe-eläimiä tieteen ryhmä ja kliinisen tutkimuksen ryhmä, viitenumero: P201108150024), hyväksyttyjen ohjelmien mukana keräämiseen, käsittelyyn ja istuttaminen kasvaimen kudosten potilailta, joilla mahalaukun syövän, ja resektion, varastointi ja tarkastus kasvaimen kudokset nude-hiirissä. Kaikki tutkimukseen osallistuneista tarjotaan tietoisen suostumuksensa osallistua tutkimukseen.
Eläimet ja kliininen tuumorikudoksia
BALB /C nude-hiirissä 4-6 viikon iässä ja 16-18 g paino, sekä miesten että naisten, toimitettiin Shanghai Kasvain Institute ja kasvatettu erityinen-taudinaiheuttajista vapaat (SPF) kunnossa. Kasvainkudoksista saatiin potilailla, joilla on mahalaukun syövän, joille tehtiin leikkaus Gansun kasvaimen Hospital. Tuoretta kasvainkudoksista istutettiin heti resektio. Kliiniset tiedot potilaista on lueteltu taulukossa 1.Table 1 kliiniset tiedot
Samplea
histopatologinen luokitus
kliinisissä vaiheissa
Luokitus imusolmukkeiden etäpesäkkeiden

1.
huonosti eriytetty adenokarsinooma
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
toinen
kohtuullisesti erilaistunut adenokarsinooma
PT4aN0M0 Hb
0/12
kolmas
haavainen kirjoita kohtuullisesti erilaistunut adenokarsinooma
PT4aN0M0 Hb
0/30
neljäs
huonosti eriytetty adenokarsinooma
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
a1st ja neljäs mahasyövän kudos olivat huonosti eriytetty adenokarsinooma ja on imusolmuke etäpesäke. 2. ja 3. olivat kohtuullisesti erilaistunut adenokarsinooma ja ole imusolmuke etäpesäke
ihonalainen implantaatio tuoreen tuumorikudoksista nude-hiiriin
tuore tuumorikudoksista resektoitiin potilailta, joilla mahalaukun syövän leikattiin 1 kuutio millimetrin osista, joita laimennettiin DMEM medium, ja sitten ihon alle istutettiin oikean ja vasemman kainalot ja groins nude-hiirten kanssa 16-gague neula aseptisissa kunnossa. Kukin näyte istutetaan neljä hiirtä, 5-6 kappaletta (0,8 ml) per hiiri. Nude-hiiriä jälkeen kasvatetaan vuonna SPF kunnossa, ja kasvaimen kasvua nude-hiirissä tutkittiin päivittäin. Kun kasvain nude-hiirissä on kasvanut 1 kuutiosenttimetriä, hiiri tapettiin murtamalla niska ja kasvaimen kudokset tutkittiin ja resektoitiin aseptisten kunnossa. Kasvainkudoksen kustakin hiiret jaettiin kolmeen osaan - käytettiin toisen kierroksen implantaation nude-hiiriin, toinen kiinnitettiin 10% formaldehydillä patologinen tutkimus ja immunohistokemiallinen (IHC) värjäyksiä CK8 /18, E-kadheriinin, VCAM-1 ja ICAM-1, kolmas säilytettiin nestemäisessä typessä ja -80 ° C reaaliaikainen PCR-analyysi CK8 /18, E-kadheriinin, VCAM-1 ja ICAM-1. Hiiret leikeltiin ja tutkittiin kasvaimen etäpesäke niiden vatsakalvon, vatsaonteloon, maksa, perna, mahalaukku, suolisto, munuaiset, keuhkot ja aivot. Kerätyt kudokset fiksoitiin 10% formaldehydiä varten patologinen tutkimus.
Perustaminen ja luonnehdinta hiirimallissa metastasoituneen ihmisen mahasyövän
Leikattu Kasvainkudos ihon alle istutettiin oikealle ja vasemmalle groins 5 nude-hiirten aseptisissa kunnossa käyttämällä 5-6 kappaletta (0,8 ml) per hiiri. Leikkaus ja laimentava kasvainkudoksen, kasvuun tarkastus ja kasvaimen resektion, että nude-hiirissä, varastointi ja käsittely istutetun kasvaimen kudokset, metastaattinen kasvaimen kudokset, ja hiiren elimet käsiteltiin kuten edellä on kuvattu. Implantoitu kasvain kudokset siirrostettiin kymmenen sukupolville.
Tutkiminen vaikutus implantaatiokohdassa nopeudesta etäpesäkkeiden
Kuten on kuvattu, istutetaan ihmisen mahasyövän kudosta nude-hiirten ihon alle istutettiin kolmeen ryhmään nude-hiirten eri sivustot aseptisissa kunnossa. Keskimäärin 5-6 kappaletta istutettiin hiiriin, yksi ryhmä sai kudoksia oikeaan ja vasempaan groins, toinen ryhmä on oikea ja vasen kainaloihin, ja kolmas kahteen kohtaan selässä. Kuten edellä mainittiin, kasvun tutkiminen ja kasvaimen resektion nude-hiiriä käsitellään. Lisäanalyysit mukana tarkastelu kasvaimen kasvua eri paikoissa ja etäpesäkkeiden vatsakalvon ja vatsaonteloon.
Istuttaminen ja etäpesäke aikaisemmin jäädytetty ja siirrostettiin ihmisen mahasyövän kudos paljaisiin hiiriin
istutettu ihmisen mahasyöpä kudosten kuljetettiin neljänneltä ja kahdeksannen sukupolven istuttamalla nude-hiiriin säilytettiin nestemäisessä typessä ja implantoidaan ihon alle nude-hiiriin on oikea ja vasen groins kuten edellä on kuvattu. Lisäanalyysit mukana tarkastelu kasvaimen kasvua eri paikoissa ja etäpesäkkeiden vatsakalvon ja vatsaonteloon.
Patologinen tutkimus istutettu ja metastaattisen ihmisen mahalaukun kudoksia nude-hiirissä
istutettu ja metastasoituneen ihmisen mahasyövän kudoksia nude-hiirissä olivat kiinnitettiin 10% formaldehydiä, upotettiin parafiiniin, leikattiin osiin, värjättiin värjäys hematoksyliini-eosiinilla (HE). Objektilasit tutkittiin käyttäen Olympus BX50 valomikroskoopilla, ja kuva hankinta suoritettiin Mias patologiset työaseman 4,0-järjestelmän.
IHC värjäys
ekspressiotasot E-kadheriinin, VCAM-1, ICAM-1, ja CK8 /18 tutkittiin immunohistokemia istutettu ja etäpesäkekasvainten kudoksia nude-hiiriin ja kirurgisista näytteistä käytetään istutusta. Kohdat, joita käytetään värjäyksessä saatiin kirurgisista näytteistä, istutettu ja metastaattisen kasvaimen kudokset, ja kudokset, jotka sisältävät etäpesäkkeitä. Reagenssit, joita käytetään värjäyksessä oli SP-9000 Histostain ™ plus-Kits, 3-3'-Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) Kits, ensisijainen hiiren monoklonaalisia vasta-aineita E-kadheriinin (laimennos 1: 200), ICAM-1 (1: 500 laimennos) , ja ensisijainen kanin polyklonaalinen vasta-aine VCAM-1 (1: 500 laimennus) (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co Ltd, Peking, Kiina). IHC värjäys Levyjä itsenäisesti arvioineet kaksi patologien, ja mitään eroa päätöksen lopputulokseen ratkaistiin yksimielisesti. Värjäytymisvoimakkuus arvioitiin negatiiviseksi, heikko, kohtalainen tai voimakas. Valomikroskoopilla ja kuva hankinta ohjelmistot olivat samat kuin edellä.
Yhteensä RNA ja reaaliaikaisen PCR
Yhteensä RNA uutettiin Trizol (Sheng Gong Biotechnology, Shanghai, Kiina) peräisin istutetuista ja metastaattinen kasvain kudosten kasvoi nude-hiirissä ja kirurgiset yksilöihin, joita käytetään istutettavien, valmistajan ohjeita noudattaen. CDNA syntetisoitiin käänteistranskriptaasin (Sheng Gong Biotechnology), mukaisesti valmistajan suositusten mukaisesti. SYBR esiseos Ex TaqTM (TaKaRa Biotechnology, Dalian, Kiina) käytettiin reaaliaikainen PCR. 20-ul-reaktio sisälsi 10 ui SYBR esisekoite Ex TaqTM, 1 ui DNA-templaatti, 0,4 ui kutakin aluketta ja 8,2 ui dH 20. PCR pyöräily edellytys: 37 ° C 5 min, 95 ° C: ssa 30 s, ja 40 sykliä 95 ° C 5 s 60 ° C: ssa 30 s. Β-aktiini-mRNA: ta käytettiin sisäisenä kontrollina, ja reaktioseos ilman templaatti-DNA: ta käytettiin negatiivisena kontrollina. Kaikki näytteet mitattiin 3 kertaa itsenäisesti, ja kvantitatiivinen PCR tiedot analysoitiin käyttäen vertailevaa CT-menetelmällä. Lyhyesti, ero syklin kynnys, ACt, määritettiin ero testattiin geenin ja ihmisen β-aktiini. Sitten saatu ΔΔCT löytää ero näiden kahden ryhmän välillä. Taitteen muutos laskettiin 2 -ΔΔCT. Alukkeet luetellaan taulukossa 2.Table 2 käytetyt alukkeet on reaaliaikainen PCR-
Gene
Eteenpäin-aluke
Käänteinen primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Tulokset
kasvaimen muodostumisen ja etäpesäkkeiden
Niistä neljä hiirtä istutettiin 1. kirurgisista näytteistä, vain yksi kehittynyt kasvainta implantaatiokohdassa 76 päivää (Fig. 1a). Kaksikymmentäviisi päivää myöhemmin hiiri tapettiin saattamalla kaula sijoiltaan ja analysoitiin kasvaimia. Kasvainkudoksessa keskimäärin 1 kuutiosenttimetrin kokoisia, näytetään ehjä kirjekuoren ja kova rakenne (Kuva. 1 b). Etäpesäke retroperitoneum havaittiin silmämääräisesti (Fig. 1 c). Ei etäpesäkkeiden havaittu sen vatsakalvon, vatsaonteloon, maksa, perna, mahalaukku, suolisto, munuaiset, keuhkot ja aivot. Kuva. 1 etäpesäkekasvainten kasvua istutettu mahasyövän kudoksen saatu kirurgisesti (X 400). a, b: istutetut syöpäkudoksessa nousi ~ 1 kuutiosenttimetriä ja näytetään ehjä kirjekuoren ja kova rakenne; c: Kasvain metastasized hiiren retroperitoneum; d, e: Implantoituja kudosten ja etäpesäkkeitä koostui huonosti eriytetty masoluja ja muutama mesenchyma soluja ja verisuonia, joitakin yhtäläisyyksiä rauhas onteloon. Syöpäsolut osoitti tumma petsattu ytimet ja niukat sytoplasmassa puuttui Normaalipainoa välillä tuman ja sytoplasman; f: Istutetut kasvain osoittaa kudokseen tunkeutumisen
patologinen analyysi paljasti, että istutettu ja etäpesäkekasvainten kudosten koostui huonosti eriytetty masoluja, ja vain hieman mesenchyma ja verisuonten. Nämä kudokset näyttävät leviää, puuttui rakenne, ja muistuttavat rauhas lumenia. Lisäksi solut näkyvät tumman värjätään ytimet, niukasti sytoplasmaan, ja misproportioned ytimet ja sytoplasmassa (Fig. 1 d, e, f). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin rinnakkain tutkimuksessa, johon osallistui istuttaminen tuumorin kudoksen 4 hiirillä; vain yhdellä hiiren kehitetty kasvain (keskimääräinen koko: 1,5 kuutiosenttimetriä) 26 päivää istutuksen jälkeen. Ei etäpesäkkeiden havaittu sen vatsakalvon, vatsaonteloon, maksa, perna, mahalaukku, suolisto, munuaiset, keuhkot ja aivot. Toinen hiiret istutettu 2. ja 4. kirurgisista näytteistä ei todettu kasvainten kasvua.
Vakaus istutettu kasvain seuraava kohta useiksi sukupolvia
Kasvain että kehitetty ensimmäinen kirurginen näyte kuljetettiin kymmenen sukupolville. Tuumorin kasvu oli 100% ja etäpesäkkeiden retroperitoneum ja sisäelimet oli 80-100% (keskimäärin 94%), riippumatta siitä, onko ensisijainen kudosta käytettiin tuoreita tai pakastettuja (taulukko 3). Sisälmykset etäpesäke havaittiin imusolmukkeiden ympärillä ruokatorvessa, alle mahalaukun limakalvo, tunica herakalvojen gastriini, perna, maksa portaali alue, Keski venae ja sinus hepaticus, maksaparenkyymi, maksan kapseli, munuaisportti, munuainen parenchyma, lisämunuaisen, suoli herakalvoon haima, ja spermaduct (Fig. 2). Sukupolvi aika on 16 days.Table 3 vakaus ja nopeus etäpesäkkeiden istutettujen kasvaimien eri positionsa
Variable
Ei
kasvu istutetusta asennossa (%)
etäpesäke retroperitoneum (%)
Viscera (%)
Generation aika (päiviä)
Passage määrä
ensimmäinen
5
100 (5/5 )
100 (5/5) B 80 (4/5)
20
toinen
5
100 (5/5) B 80 (4/5)
100 (5/5) B 14
kolmas
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 80 (4/5) B 14
neljäs
5
100 (5/5) B 80 (4/5) B 100 (5/5) B 15
5th
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 80 (4/5)
14
kuudes
5
100 (5/5) B 80 (4/5) B 100 (5/5) B 13
7th
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 100 (5 /5)
17
kahdeksas
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 100 (5/5) B 18
9th
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 100 (5/5) B 17
10th
5
100 (5 /5) B-100 (5/5) B 100 (5/5) B 18
varastoitiin nestemäisessä typessä
neljäs
5
100 (5/5)
100 (5/5) B 100 (5/5) B 17
kahdeksas
5
100 (5/5) B 100 (5/5) B 100 (5/5)
18
Istuttaminen eri asennossa
groins
50
100 (50/50) B 94 (47/50) B 94 (47/50 )
16
Back
10
100 (10/10) B 30 (3/10) B 10 (1/10)
20
kainalot
10
100 (10/10) B-0 (0/10)
30 (3/10)
14
a Kun kymmenen sukupolvea istutusta, kaikki hiirille kehittyi kasvaimen kasvua on istutettu asema, ja 94% hiiristä kehittyi etäpesäke retroperitoneum ja sisäelimet, riippumatta siitä, onko kasvain lähde oli tuoreita tai pakastettuja. Keskimääräinen aika laakerin kasvain on 16 päivää. Nivusissa hiirillä on paras implantaatiopositiossa, jolloin 94% retroperitoneum ja sisäelimet etäpesäkkeitä
Fig. 2 patologinen tarkastelu kasvain, joka metastasized sisälmykset (X 100). Micro-etäpesäke havaittiin imusolmukkeiden ympärillä ruokatorveen (a), alle mahalaukun limakalvo (b), ja muilla aloilla, kuten tunica herakalvojen gastriini (c), parenchyma alle maksan kapseli (d), maksan portaali alue (e ), sinus hepaticus (f), perna (g), venae keskuksissa maksan (h), haima (i), munuaisportti (j), munuaisten parenchyma (k), lisämunuainen (l), suolen herakalvon (m), spermaduct (n), ja keuhkojen (o)
määrä etäpesäke kasvaimen istuttaa eri asentoihin
implantaatio eri asentoihin vaikutti määrä etäpesäkkeitä, mutta ei kasvaimen kasvunopeus. Istutettaviksi nivusissa johti 94% retroperitoneum ja sisäelimet etäpesäke; istuttaa takaisin johti 30% retroperitoneum etäpesäke ja 10% sisäelimet etäpesäke; istutettaviksi kainaloissa ei johtanut retroperitoneum etäpesäkkeitä ja 20% sisäelimet etäpesäke. Sukupolvi aika oli 16 päivää istutettujen kasvaimien groins 20 päivää ne istutetaan takaisin, ja 14 päivää niille istutetaan kainaloissa (taulukko 3). Metastaattisen sisälmykset mukana maksaan (50%), munuaisen (44%), suolessa (28%), ruokatorven (12%), haima (12%), vatsa (6%), perna (6%), ja spermaduct (6 %) (taulukko 4) .table 4 etäpesäke osaksi visceraa
implantoidut asema
Ei
sisäelimiä etäpesäkkeiden (%)
Maksa (%) B
Munuaiset (%)
suolisto (%)
Ruokatorven (%)
Haima (%)
Vatsa (%) B
Perna (%)
Spermaduct (%)
groins
50
94 (47/50) B 50 (25/50)
44 ( 22/50) B 28 (14/50) B 12 (6/50) B 12 (6/50) B-6 (3/50) B 6 (3/50)
6 (3/50) B Back
10
10 (1/10) B 0
0
0
0
0
10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
kainalot
10
30 (3/10) B 20 (2/10) B 0
0
10 (1/10)
0
0
0
0
maksan ja munuaisten olivat sisäelimet kanssa korkein etäpesäkkeiden (44-50%), ja vatsa, perna ja spermaduct olivat alhaisimmat (6%) B karakterisointi siirteitä ja metastaattista kasvaimen
IHC ja tosiaikaisen PCR: n tulokset osoittivat, että ICAM-1, VCAM-1, ja CK8 /18, mutta ei E-kadheriinin, olivat pääasiassa ilmaistu leikkauksen ja implantoitu kasvain ensisijaisen ja ensimmäisen sukupolven (Fig. 3). Kuten taulukossa 5 esitetään, ensisijaisen ja ensimmäisen sukupolven kasvaimen osoittivat positiivista värjäytymistä VCAM-1 ja CK8 /18, mutta seuraaville sukupolville osoitti heikkoa värjäytymistä näitä proteiineja: VCAM-1-värjäys pisteytettiin kohtalaisen positiivinen (++) ensisijainen, heikko signaali (+) ensimmäisen sukupolven, ja CK8 /18 värjäytyminen pisteytettiin heikko signaali (+) ensimmäisen sukupolven. Kasvaimet kaikissa vaiheissa osoittivat negatiivista värjäystä E-kadheriinin, kun taas etäpesäkekasvainten lainkaan sukupolvet osoittivat negatiivista värjäystä E-kadheriinin, ICAM-1, VCAM-1 ja CK8 /18. Mitä selostukset, havaitsimme VCAM-1-mRNA ensisijainen ja ensimmäisen sukupolven istutettu kasvain mutta ei etäpesäkkeitä. E-kadheriinin ja ICAM-1-transkriptien ei havaittu kaikkien sukupolvien istutettujen ja etäpesäkkeitä. Kuva. 3 IHC-analyysi ekspression E-kadheriinin, VCAM-1, ICAM-1 ja CK8 /18 (x 200). CK8 /18 ekspressiota havaittiin kirurgisen näytteen, jota käytetään istutettavien (a) ja ensisijaisen implantoitu kasvain kudosten (b), mutta ei F1 sukupolven implantoitu kasvain kudosten (c), VCAM-1 on ilmaistu kirurgisen näytteen ( d) ja ensisijaisen implantoitu kasvain kudosten (e), mutta ei F2-sukupolven implantoitu kasvain kudosten (f). E-kadheriinin ilmentyminen ei ollut havaittavissa kirurgisen näytteen (g) ja ensisijaisen implantoitu kasvain kudosten (h). ICAM-1 ilmentyi kirurgisen näytteen (i), mutta ei ensisijainen implantoitu kasvain kudosten (j) B Taulukko 5 Expression of E-kadheriinin, ICAM-1, VCAM-1 ja CK8 /18. kasvaimia kirurgia, kun istutusta ja aikana etäpesäkkeiden
Variable
Ei
Protein expressiona
mRNA expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical Näyte
1 -
+++
+++
+++
Ensisijainen
1
implantoidut kasvain
- -
++
+
0
0
0,0927
etäpesäkekasvainten
- -
-
- 0
0
0
ensimmäinen
5
istutetut kasvain
- (0/5) B - (0/5) B + (5/5) B - (0/5 )
0
0
0,1997
etäpesäkekasvainten
- (0/5) B - (0/5) B - (5/5) B - ( 0/5) B 0
0
0
toinen ~ 10th
45
istutetut kasvain
- (0/45) B - (0/45)
- (0/45) B - (0/45) B 0
0
0
etäpesäkekasvainten
- (0/42) B - (0 /42) B - (0/42) B - (0/42) B 0
0
0
aMolecular analyysi siirteitä ja etäpesäkkeitä havaittu mitään havaittavaa ilmentymistä CK8 /18, E-kadheriinin, VCAM-1 ja ICAM-1, lukuun ottamatta positiivista värjäytymistä VCAM-1 on implantoitu kasvain kudosten ensimmäisen sukupolven
keskustelu
syöpä on ominaista proliferaation, invaasio ja metastaasi. Yli 90% kuolleisuus syöpään johtuu etäpesäkkeiden siten pakottaen intensiivisen tutkimuksen [19]. Etäpesäke on monimutkainen ja huonosti prosessi proteiinien toiminnot solun tarttumiseen, ECM hajoamista, ja liikkuvuus [19-21]. Lukuisat tutkimukset mahalaukun syövän etäpesäkkeitä on raportoitu [22-26]. Kuitenkin suurin osa näistä tutkimuksista tehtiin in vitro, koska se ei ole jäljitellä metastaattinen prosessi, joka tapahtuu in vivo. Tämä viittaa siihen, tarve eläinmallissa syövän etäpesäkkeiden, joka on vankka ja johdonmukainen fenotyypin. Esillä olevassa tutkimuksessa, malli metastasoituneen ihmisen mahasyövän perustettiin hypodermisellä inokulaation nude-hiirissä, joilla on syöpä kudosten kirurgisesti potilailta mahalaukun syöpä. Kaikki hiirille kehittyi kasvaimen kasvua istutetun asemassa ja retroperitoneum etäpesäke, ja 94% hiiristä kehittyi etäpesäke sisälmykset, riippumatta siitä, onko kasvain lähde oli tuoreita tai pakastettuja. Istutetun ja etäpesäkekasvainten säilytti samat ominaisuudet kaikissa sukupolvien ja sisälmykset etäpesäkkeitä havaittiin imusolmukkeiden ympärille ruokatorven, alapuolella mahalaukun limakalvon, tunica herakalvojen gastriini, perna, maksa portaali alue, Keski venae ja sinus hepaticus, maksaparenkyymi, maksan kapseli, munuaisportti, munuainen parenchyma, lisämunuaisen, suoli herakalvoon ja haima. Etäpesäke oli vahvaa tässä hiirimallissa. Retroperitoneum etäpesäke mahdollisesti johtui dissosiaatiota syöpäsolujen istutettu kasvain, kulkeutuminen nivusten rauhaset, ja kuljetus retroperitoneum. Tämä voi selittää kasvain metastasizing maksaan portaaliin, keskellä venae, ja sinus hepaticus sekä osaksi tunica herakalvojen gastriini, munuaisportti, lisämunuaisen ja suolen herakalvon. Etäpesäke voisi myös tapahtuneet kautta imusolmukkeiden kasvaimia havaittiin imusolmukkeiden ympärillä ruokatorvessa, alle mahalaukun limakalvo, perna, haima, ja munuaisten parenchyma.
esiintyminen etäpesäke näyttää olevan riippuvainen implantaatio ihon alle: istutettaviksi nivusiin johti 100% vatsakalvontakainen etäpesäke ja 94% sisäelimet etäpesäke; istuttaa takaisin johti 30% retroperitoneum etäpesäke, ja 10% sisäelimet etäpesäke; istutettaviksi kainaloissa ei johtanut retroperitoneum etäpesäkkeitä ja 20% sisäelimet etäpesäke. Tämä havainto on sopusoinnussa etäpesäke kasvaimen kasvuun liittyvien mikroympäristölle lukien verisuonten ja imusuonten jakelu. Todellakin, hiiri nivusissa on enemmän verisuonia ja lymph verkostoja, jotka virtaavat vatsaonteloon ja sisäelimet kuin takana. Vaikka kainaloissa on rikas verisuonia ja imusuonten verkkojen suuntaan vena on anterogradista, ja suurin osa imusolmukkeiden yhteyden keuhkojen, henkitorven ja keuhkopussin, missä mahasyövän harvoin saa siirtämisellä. Näin ollen yksinkertainen menetelmä ihonalaisen istutuksen syöpäsolujen osaksi groins nude-hiirten tehokkaasti johtaa mallin metastaattisen ihmisen mahasyöpä. Tässä mallissa on korkeampi sisäelimet etäpesäke nopeudella kuin mitä on raportoitu kirjallisuudessa [13-18] ja voisi helposti soveltaa muun tyyppisiin ihmisen syövän.
Kasvaimen invaasio myöhempiin etäpesäkkeitä on merkittävä syy sairastuvuutta ja kuolleisuutta potilailla, joilla syöpä. Syöpä etäpesäke on monimutkainen prosessi, jossa kasvainsolut erillään primaarikasvaimen massa, kulkeutuvat verisuonistossa, ekstravasoitumaan muihin kudoksiin ja kasvaa uusia kasvaimia [27-30]. Näistä erilaisia ​​prosesseja, muutos on adheesio-ominaisuudet primaarikasvaimen solut on kriittinen tekijä kasvaimen etenemistä [28]. On käynyt ilmi, että soluadheesiota vastaa syövän etenemiseen, joissa molekyylit rooli solu-solu adheesiota ja soluväliaineen tarttumista [31-34]. Soluadheesiolla on tärkeä rooli kahdessa eri vaiheessa kasvaimen metastaattisen prosessin - irtoaminen primaarikasvaimen ja sen tarttuminen verenkiertojärjestelmän [27]. Näin ollen, soluadheesiomolekyylien on kriittinen rooli invaasiossa ja etäpesäkkeiden erilaisten ihmisen kasvainten.
E-kadheriinin on tärkeä rooli solu-adheesion epiteelikudoksissa [35]. Sen lisäksi sen rooli normaaleissa soluissa, tämä adheesiomolekyyli voi olla tärkeä rooli syöpäsolujen muutoksen, kasvainten kehittymiseen, ja etenemiseen. Menetys kasvainkudoksen eheys voi aiheuttaa paikallista invaasiota [36]. Näin ollen lakkaa toimimasta E-kadheriinin kasvainkudoksissa korreloi invasiivisuus ja etäpesäkkeiden kasvainten [37]. Tutkimukset ovat osoittaneet, että poikkeavaan E-kadheriinin ilmentyminen liittyy hankintaan invasiivisuus ja kehittyneempien kasvaimen vaiheessa mahasyövän [38-40].
ICAM-1 ja VCAM-1 ovat erittäin tärkeitä Soluadheesiomolekyylien kuuluva immunoglobuliini Super perhe. ICAM-1 toimii solu-solu ja ECM tarttuvuus, mukaan lukien fysiologinen polymorfonukleaarisia (PMN) tarttuu tiukasti ja trans endoteelin muuttoliike kautta leukosyyttien integriinien lymfosyytti functionassociated antigeeni-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) ja makrofagi-1-antigeenin ( MAC-1) (CD11 b /CD18) [41]. VCAM-I välittää soluadheesiota kautta integriinin [42]. ICAM-1 on tärkeä rooli solu-solu- ja solu-ECM vuorovaikutukset, erityisesti tuumorin invaasio ja sytotoksisuuden lymfosyyttien. Tutkimukset ovat osoittaneet, että positiivinen ilmentymisnopeudessa ICAM-1 liittyvät imusolmuke etäpesäke ja syvyys kasvaimen invaasio, ja VCAM-1 ilmentymisen positiivinen mahasyövistä olivat invasiivisia ja liittyi enemmän imusolmukemetastaaseja kuin VCAM-1 ilmentymisen negatiivinen ne [43-45]. Sytokeratiini näkyy kaikissa epiteelisolujen, joidenkin ei-epiteelisolujen, ja useimmat kasvainsolut. Sytokeratiineja kuuluva väli hehkulanka (IF) proteiini perhe, ovat pääkomponentit torven soluja ja ylläpitää organisaation epiteelikudosten. Tutkimuksissa on havaittu, että sytokeratiineja ovat erittäin hyvin säilyneitä ja tärkeitä kudoksen erilaistumista. Tällä hetkellä yli 20 erilaista sytokeratiineja on tunnistettu [46], josta CK 8, 18, ja 19 ovat runsaasti yksinkertainen epiteelisoluissa. Esillä olevassa tutkimuksessa IHC ja RT-PCR-tulokset osoittivat, että ilmentyminen E-kadheriinin on negatiivinen, ja, että ICAM-1, VCAM-1, ja CK8 /18 ovat positiivisia kirurgisen näytteen käytetään istutusta, sopusoinnussa viime tutkimuksissa [38, 40, 43, 45]. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Resistanssi pötsin bakteerien mureiinin naudan mahalaukun lysotsyymin
• Syöpään liittyvän fibroblastit korreloivat positiivisesti metastaattista potentiaalia ihmisen syöpien