Uspostavljanje i karakterizacija metastaza modela humanog karcinoma želuca u golih miševa

Uspostavljanje i karakterizacija metastaza modela ljudskog karcinoma želuca u miševima
apstraktne pregled pozadine
mišji model metastaza ljudskog karcinoma želuca je jedan od najvažnijih alata za proučavanje biološke mehanizme temeljni ljudski rak želuca metastaza. U ovom radu, uspostavili smo mišjeg modela metastatskog ljudskog karcinoma želuca u miševima koji ima veću brzinu formiranja tumora i metastaza, nego postojeće modele.
Metode
Za generiranje mišjeg modela metastatskog ljudskog karcinoma želuca, svježe tumorskih tkiva pacijenata koji su podvrgnuti operaciji raka želuca su potkožno implantirane u lijevoj i desnoj strani prepone gole miševe. Kada se ugrađuju tkiva rastao do 1 kubičnom centimetru, miševi su ubijeni, a tumorsko tkivo ispitan i resected. Tumorske tkiva su implantirani u gole miševe i podvrgne patoloških ispitivanja, imunohistokemijsko bojanje i u realnom vremenu PCR za citokeratin 8/18 (CK8 /18), E-kadherina, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) i međustanične adhesion molecule-1 (ICAM-1). Miševi su također analizirani metastaza u njihovoj peritoneuma, trbušne šupljine, i unutarnjih organa od strane patohistološku pregleda. Tkiva prikupljeni od ovih organa ispitani su patologije. Pregled rezultata pregled Nakon deset generacija implantacije, svi miševi su razvili rast tumora u usađena, 94% miševa razvila metastaza u retroperitoneum i utrobe. Implantiranih i metastatski tumor održava iste histološke značajke u svim generacijama, a metastaze zabilježeno je u jednjak, želudac, slezena, jetra, bubreg, nadbubrežna, crijeva i gušterače. Ove metastatski tumori otkrila mjerljivu izraz CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 i ICAM-1. Pregled Zaključci
ovaj model će poslužiti kao vrijedan alat za razumijevanje metastatskog procesa ljudskog raka želuca.
Ključne riječi
Karakterizacija Uspostava rak želuca Metastaza miš modeli Pozadina pregled, rak želuca je četvrti najčešći zloćudni tumor i drugi vodeći uzrok smrti od raka samo raka pluća u svijetu [1]. Iako je prognoza bolesnika s ranim rakom želuca je izrazito produžuje aktualnim metodama dijagnosticiranja i liječenja, stopa 5-godišnjeg preživljavanja nakon dijagnoze pacijenata oboljelih od raka želuca sa svim fazama je < 50% [2]. Metastaza račune u dijelu za visoke smrtnosti od raka želuca. Udio bolesnika s karcinom želuca umire od peritoneuma metastaza je oko 50% [3]. Dakle, metastaza je postao fokus mnogih studija s rakom želuca. Metastaza je vrlo složen proces, koji uključuje više uzastopnih koraka [4]. Gena povezane sa staničnom adhezijom, pokretljivosti, proliferaciju, preživljavanje, metabolizam i prijenosa signala igraju važnu ulogu u metastazi raka [5-8]. Kako ovi proteini rade zajedno na promicanju metastaze i dalje slabo razumije.
Mišjem modelu metastatskog karcinoma želuca je vrlo vrijedan alat u razumijevanju metastatski proces. Prvi model ljudskog karcinoma u golim miševima je osnovana 1969 od strane Rygaarda i Povlsen kroz hypodermical transplantacije [9] tkiva ljudskog raka debelog crijeva. Iako je presađeni tumor zadržala svoje zloćudne karakteristike, izgubila je metastatski potencijal, a izvorna struktura i ponašanje tumora promijenilo [10]. Metastatskim model ljudskog raka debelog crijeva je prvi konstruirao Morikawa 1988. koristeći ljudske stanice raka debelog crijeva subserously usađenih u slijepog crijeva [11]. Ovaj model pokazao ortotropnih rasta tumora i metastaza u jetri. Furukawa dalje modificirati ovaj model u 1993 od strane kirurški šivanje ljudskog želučanog raka tkiva u Tunica serosa gastria od golih miševa [12]. Ovaj model razvili tumore robusno i pokazao vrlo visoku stopu od metastaze na jetri. Budući da je prekid prionljivosti tumorskog tkiva mijenja svoju biološku i zloćudne, modeli miš opisani zadržao integritet tumora dopuštajući za "pacijenta nalik modelu" [13, 14]. U nastavku, mnogi miš modeli metastatskim ljudskog raka želuca su generirani od strane ortotropnih transplantacije želučanog raka tkiva [15-18]
mišjim modelima metastatskim ljudskog karcinoma želuca prijavljen sada predstavljaju višestruke izazove. orthotic implantacija u golih miševa je potrebno operacije, i tumorskih tkiva implantirani su izvedeni iz humanog raka stanične linije želučane umjesto pacijenata. Kao rezultat toga, postupak je dugotrajan i mogu uzrokovati teške krvarenja i uginuće miševa. Osim toga, iako je stopa ortotropnih tumora je gotovo 80-100%, stopa metastaza nije veći; metastatske stope tumor jetre bile na 45-60% [16, 17], te da s peritoneum na pukog 40% [18]. Dakle, uspostavljanje tih mišjim modelima mogla imati koristi od poboljšanih metoda koje bi transplantacija lakše i rezultat u više robustan metastaza. U ovom izvješću opisali smo mišjeg modela metastatskog ljudskog raka želuca koji se bavi pitanjima iz prethodnih mišjim modelima. Utvrdili smo naš model miša metastatskog karcinoma ljudskog želuca kroz potkožne implantacije tumorskih tkiva dobivenih kirurški izravno od pacijenata s rakom želuca. U usporedbi s drugim modelima miševa prethodno opisane, ovaj miš Model formira tumora na visokoj brzini i što je još važnije, pokazuje snažnu metastaza. Pregled Metode pregled izjavi za etiku
svih protokola koji uključuje korištenje eksperimentalnih životinja i tumorskih tkiva iz bolesnika s karcinomom želuca u ovoj studiji su odobreni od strane Etičkog povjerenstva Medicinskog i znanosti istraživačkog instituta Gansu provincije (laboratorijske životinje znanosti grupe i kliničkih ispitivanja skupine, poziv na broj: P201108150024), odobrene programe uključene prikupljanje, obradu i ugradnju tumora tkiva kod pacijenata s rakom želuca, kao i resekcije, skladištenje i provjeru tumorskih tkiva od miševa. Svi sudionici studije pod uvjetom informirani pristanak za sudjelovanje u istraživanju. Pregled životinja i kliničkim tumorskih tkiva
BALB /C miševe na 4-6 tjedana starosti i 16-18 g na težini, i muško i žensko, osigurana su Shanghai Tumor Institute i uzgajali u određenom bez patogena (SPF) stanju. Tumorskog tkiva dobiveni su od pacijenata s rakom želuca koji je operiran u Tumor bolnice Gansu. Svježe tumorskih tkiva su implantirani neposredno nakon resekcije. Klinički podaci o pacijentima navedene su u tablici 1.Table 1 Klinički podaci
Samplea
Histopatološka klasifikacija
kliničkim fazama pregled
stopi od limfnih čvorova metastaza pregled
1. pregled, slabo diferencirani adenokarcinom pregled PT4aN3a M0 IIIc pregled 7/30 pregled 2. pregled umjereno diferencirani adenokarcinom pregled PT4aN0M0 IIb pregled 0/12 pregled 3. pregled ulcerozni tip umjereno diferenciran adenokarcinom pregled PT4aN0M0 IIb pregled 0/30
4. pregled slabo diferencirani adenokarcinom pregled PT4aN3a M0 IIIc pregled 16/17 pregled a1st i 4. rak želuca tkiva su slabo diferencirani adenokarcinom i imaju limfnog čvora metastaza. 2. i 3. su umjereno diferencirani adenokarcinom i nemaju limfnog čvora metastaza pregled potkožne implantacije svježeg tumorskog tkiva u gole miševe pregled Svježe tumorskih tkiva resected od pacijenata s rakom želuca su izrezati na 1 kubičnom milimetru komadima koji su se razrijedi s DMEM medij, a zatim potkožno implantirane u desno i lijevo pazuha i prepona golih miševa s 16-gague iglom pod aseptičkim uvjetima. Svaki uzorak je usađen na četiri miševima 5-6 komada (0,8 mL) po mišu. Gole miševe su zatim uzgajane u SPF stanja i tumorski rast u golih miševa ispitana dnevno. Nakon što je tumor na bezdlakim miševima je narasla do 1 kubičnom centimetru, miš je ubiju cervikalnom dislokacijom, a tumorske Tkiva su pregledana i reseciran u aseptičnim uvjetima. Tumorsko tkivo iz svakog miša bio je podijeljen u tri dijela - jedan je korišten za drugi krug implantacije u gole miševe, a drugi je fiksirana u 10% formaldehidu za patološke preglede i imunohistokemijsko (IHH) obojenjenja CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 i ICAM-1, a treći je odložen u tekućem dušiku i -80 ° C, u realnom vremenu PCR analizu CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 i ICAM-1. Miševi su izrezana i ispitana na metastaze tumora u njihovom peritoneum, trbušne šupljine, jetre, slezene, želuca, crijeva, bubrega, pluća, i mozga. Prikupljeni tkiva su fiksirani u 10% formaldehidu za patološkog pregleda. Pregled Uspostavljanje i karakterizacija mišjem modelu metastatskim ljudskog karcinoma želuca
Izvađeni tumorskog tkiva potkožno implantira u desno i lijevo prepona od 5 golih miševa pod sterilan uvjet korištenja 5-6 komada (0,8 ml) po mišu. Rezanje i razrjeđivanja tkiva tumora, pregled rasta te resekcija tumora u golih miševa, skladištenje i ispitivanje implantiranih tumorskim tkivima, metastatskog tumorskog tkiva i mišje tijela obrađeni su kao što je gore opisano. Implantirani tumorsko tkivo pasaža deset generacija.
Ispitivanje učinka na mjestu implantacije na stopu metastaza
Kao što je opisano, implantiranog ljudski rak želuca tkiva golih miševa potkožno implantira u tri skupine golih miševa, na drugačiji stranice pod aseptičkim uvjetima. U prosjeku je 5-6 komada su implantirani u miševe, a jedna skupina prima tkiva na desnu i lijevu prepona, s druge skupine na lijevoj i desnoj strani ispod pazuha, a treći je na dva mjesta u leđa. Kao što je gore navedeno, ispitivanje rast i resekcija tumora u golih miševa je obrađeno. Daljnje analize obuhvaćala ispitivanje rasta tumora na različitim mjestima i metastaza u peritoneum i trbušne šupljine. Pregled Implantacija i metastaze prethodno zamrznuta i presađuju se ljudski rak želuca tkiva na miševe pregled implantiranih ljudska tkiva raka želuca pasiranih iz četvrtog i osma generacija implantacijom u golih miševa su pohranjeni u tekućem dušiku i subkutano implantirani u golim miševima, na lijevoj i desnoj strani prepona kako je gore opisano. Daljnje analize obuhvaćala ispitivanje rasta tumora na različitim mjestima i metastaza u peritoneum i trbušne šupljine. Pregled Patološka pregled implantiranih i metastatskih ljudskih želučanih tkiva iz golim miševima pregled bili su implantirani i metastatski ljudskog želuca tkiva raka iz gole miševe fiksiran u 10% -tnom formaldehidu, uklopljeno u parafin, rezano u sekcijama, obojena s Hematoxylin-eozinskom bojenju (HE). Rezovi su ocijenjeni pomoću Olympus BX50 svjetlosnog mikroskopa, te stjecanje slika je izvela MIA patološkog workstation 4.0 sustav.
IHC bojenje pregled razine ekspresije E-kadherina, VCAM-1, ICAM-1 i CK8 /18 ispitana su imunohistokemijski u implantiranih i metastatskih tumora tkiva iz golim miševima i kirurških uzoraka koji se koriste za implantaciju. Sekcije se koriste za bojenje dobiveni su iz kirurških uzoraka, implantiranih i metastatskih tumora tkiva i tkiva koja sadrže metastatskih tumora. Reagensi koji se koriste za bojenje su SP-9000 Histostain ™ uklanjaju preko Kits, 3-3'-diaminobenzidin tetrahidroklorida (DAB) Kits, primarne mišje monoklonsko protutijelo na E-kadherina (1: 200 razrjeđenje), ICAM-1 (1: 500 razrjeđenje) i primarno zečje poliklonska antitijela protiv VCAM-1 (1: 500 razrjeđenje) (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotehnologija Co Ltd, Peking, Kina). U IHC bojanja slajdovi su samostalno ocjenjuju dva patologa, i svaka razlika u ishodu odluke koju je riješio konsenzusom. Bojenje intenzitet je ocijenjen kao negativan, slab, umjeren ili jak. Svjetlo mikroskop i prikupljanje slike softver bili isti kao gore.
Ukupno ekstrakcija RNA i real-time PCR pregled Ukupna RNA je ekstrahirana Trizol (Sheng gong Biotechnology, Shanghai, Kina) od implantiranih i metastatskih tumora tkiva koje rastao u gole miševe, a iz kirurških uzoraka korištenih za implantaciju, slijedeći upute proizvođača. CDNA je sintetizirana reverznom transkriptazom (Sheng Gong Biotechnology), prema preporukama proizvođača. SYBR premiks Ex TaqTM (Takara Biotechnology, Dalian, Kina) korišten je za real-time PCR. 20-ul reakcija je sadržavala 10 ul SYBR premix Ex TaqTM, 1 ul DNA predložak, 0,4 jal svakog primera i 8.2 ul DH 20. Biciklistički stanje PCR je bio: 37 ° C 5 min, 95 ° C tijekom 30 s i 40 ciklusa 95 ° C u trajanju od 5 sekundi do 60 ° C za 30 s. Β-aktin mRNA se koristi kao unutarnje kontrole, a reakcijska smjesa bez templatnoj DNA korištena je kao negativna kontrola. Svi uzorci su mjereni 3 puta nezavisno i kvantitativni podaci PCR su analizirani korištenjem usporedne CT metode. Ukratko, razlika u prag ciklusa, ΔCT, određen je kao razlika između testiranog gena i ljudskog p-aktin. Mi smo tada dobiva ΔΔCT za pronalaženje razlika između dviju skupina. Mnogostrukost promjene izračunata je kao 2 -ΔΔCT. Primeri su prikazani u tablici 2.Table 2 primera korištena u realnom vremenu PCR pregled Gene
Forward primer
unatrag primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Rezultati
nastajanja tumora i metastaza
Među četiri miševa implantanog 1. kirurških uzoraka, samo je jedna razvijena tumora na mjestu implantacije do 76 dana (Sl. 1). Dvadeset i pet dana kasnije, miš je ubiju cervikalnom dislokacijom i analiziraju na tumore. Tumorsko tkivo u prosjeku od 1 kubičnom centimetru u veličini, prikazuje netaknuti omotnicu i tvrdi tekstura (Sl. 1b). Metastaze u retroperitoneum pronađen vizulanom provjerom (sl. 1c). Nema metastaze je otkriven u peritoneum, trbušne šupljine, jetre, slezene, želuca, crijeva, bubrega, pluća, i mozga. Sl. 1 rasta tumorskih metastaza od usađenog raka želuca tkiva dobivenog kirurški (X 400). a, b: implantirani rak tkiva porastao na ~ 1 kubični centimetar i prikazani netaknuti omotnicu i tvrdi tekstura; c: Tumor metastazirao u mišju retroperitoneum; d, e: implantiranih tkiva i metastatskih tumora koja se sastoji od slabo diferenciranih karcinoma stanica i nekoliko mezenhim stanica i krvnih žila, uz neke sličnosti s žljezdanog šupljine. Stanice raka su pokazali tamno obojeni jezgrama i oskudnim citoplazmu i nedostajalo je normalan odnos između jezgre i citoplazme; f: implantiran tumor pokazuje infiltraciju tkiva pregled Patološka analiza pokazala je da su implantirani i metastatski tumor tkiva se sastoji od slabo diferenciranih stanica karcinoma, a samo malo mezenhim i krvnih žila. Ove tkiva pojavljuju difuzno, nedostajalo strukturu, a nalikuju žljezdani lumen. Pored toga, stanice prikazuje tamne umrljan jezgre, oskudne citoplazme i misproportioned jezgre i citoplazme (sl. 1d, e, f). Slični rezultati dobiveni su u paralelnom studiji koja uključuje implantaciju tkivu tumora u 4 miševa samo jedan miš razvili tumor (prosječna veličina: 1,5 kubični centimetar) 26 dana nakon implantacije. Nema metastaze opažena u peritoneum, trbušne šupljine, jetre, slezene, želuca, crijeva, bubrega, pluća, i mozga. Ostali miševi implantirani sa 2. i 4. kirurških uzoraka pokazali su da nema rasta tumora. Pregled Stabilnost implantirani tumora sljedeći odlomak u više generacija pregled Tumor koji se razvio iz 1. kirurških uzoraka pasirana deset generacija. Stopa rasta tumora bila je 100%, a da se metastaze u retroperitoneum i organa je bio 80-100% (prosjek 94%), bez obzira da li je primarni tkivo korištena je svježi ili zamrznuti (Tablica 3). Utroba metastaze uočeno je u limfnim čvorovima oko jednjaka, ispod sluznici želuca, tunica serosa gastria, slezene, jetre portal prostor centralnog venae i sinusna hepaticus, parenhimu jetre, kapsule jetre, bubrega hilus, bubrega parenhima, nadbubrežne žlijezde, crijeva seroze, gušterače i spermaduct (Sl. 2). Vrijeme generacije je 16 days.Table 3 Stabilnost i brzina metastaza tumora usađenih u različitim positionsa pregled varijabilnog
Ne
pregled Rast usađena (%)
metastaza retroperitoneum (%)
utrobe (%)
Generation vrijeme (dani)
Prolazni broj
1. pregled 5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20 pregled 2. pregled 5 pregled 100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14 pregled 3.
5 pregled 100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5) pregled 14 pregled, 4. pregled 5 pregled 100 (5/5)
80 (4/5) pregled, 100 (5/5)
15 pregled, 5. pregled 5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14 pregled, 6. pregled 5 pregled 100 (5/5)
80 (4/5) pregled, 100 (5/5)
13 pregled, 7. pregled 5 pregled 100 (5/5) pregled, 100 (5/5) pregled, 100 (5 /5)
17 pregled, 8. pregled 5 pregled 100 (5/5) pregled, 100 (5/5) pregled, 100 (5/5)
18
9. pregled 5 pregled 100 (5/5) pregled, 100 (5/5) pregled, 100 (5/5)
17 pregled 10. pregled 5 pregled 100 (5 /5) pregled, 100 (5/5) pregled, 100 (5/5)
18 pregled čuva u tekućem dušiku pregled 4. pregled 5 pregled 100 (5/5)
100 (5/5) pregled, 100 (5/5)
17 pregled, 8.
5 pregled 100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
implantacije u drugačijem položaju pregled prepona
50 pregled 100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16 pregled Natrag
10 pregled 100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20 pregled pazuha
10 pregled 100 (10/10) pregled, 0 (0/10)
30 (3/10)
14 pregled, a Nakon deset generacija implantacije, svi miševi su razvili rast tumora u usađena, i 94% miševa razvila metastaze na retroperitoneum i utrobe, bez obzira na to da li je izvor tumor svježe ili smrznute. Prosječno vrijeme nosi tumor je 16 dana. Prepone miševa je najbolje Implantacija položaj, što je rezultiralo 94% retroperitoneum i utrobe metastaza pregled slika. 2. Patološki pregled tumora koji metastazirao na utrobe (X 100). Mikro-metastaze uočeno je u limfnim čvorovima oko jednjaka (a), ispod sluznice želuca (b), te u drugim područjima kao što su Tunica serosa gastria (c), parenhim pod jetre kapsule (d), jetre portal područje (e ) sinus hepaticus (f), slezene (g), venae centrala jetru (h), gušterače (i), bubrežne hilus (j), bubrežnog parenhima (k), nadbubrežne žlijezde (l), crijevo serosa (m), spermaduct (n) i pluća (o)
Učestalost metastaze tumora ugrađuju u različitim položajima pregled Implantacija u različitim položajima utječe na stupanj metastaza, ali ne i na stopu rasta tumora. Implantacija u prepone rezultiralo 94% retroperitoneum i utrobe metastaze; usađivanje u stražnji rezultiralo 30% retroperitoneum metastazama i 10% viscera metastaze; implantacija u pazuhu rezultiralo bez retroperitoneum metastazama i 20% utrobe metastaza. Vrijeme generacije je bio: 16 dana za tumore ugrađuju u prepona, 20 dana za one ugrađuju u leđa, a 14 dana za one koji ugrađuju ispod pazuha (Tablica 3). Metastatskog organi uključeni jetre (50%), bubrega (44%), crijeva (28%), jednjak (12%), gušterača (12%), želudac (6%), slezena (6%), a spermaduct (6 %) (Tablica 4) .table 4 metastaza u visceraa pregled usađena
Ne
organi metastaze (%)
jetre (%) pregled
bubrega (%)
crijeva (%)
jednjak (%)
Gušterača (%)
želuca (%) pregled
Slezena (%)
Spermaduct (%)
prepona
50 pregled, 94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50) pregled 6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50) pregled Natrag pregled 10 pregled, 10 (1/10) pregled, 0
0
0
0
0 pregled 10 ( 1/10)
10 (1/10)
0 pregled pazuha
10 pregled, 30 (3/10)
20 (2/10) pregled, 0
0 pregled 10 (1/10)
0 pregled 0
0
0 pregled jetre i bubrega su organi s najvećom stopom metastaza (44-50%), a želudac, slezena i spermaduct bila najniža (6%) pregled Karakterizacija implantiranog i metastatskog tumora
IHC i real-time PCR rezultate pokazala je da ICAM-1, VCAM-1 i CK8 /18, ali ne i E-kadherina, pretežno su se na operacije i implantiranog tumora primarne i prve generacije (Sl. 3). Kao što je prikazano u tablici 5, primarni i prve generacije tumora pokazalo je pozitivno bojenje za VCAM-1 i CK8 /18, a dalje se generacije pokazali slabu bojanje tih proteina: VCAM-1 bojenja je ocijenjen kao umjereno pozitivnih (++) u primarnoj, slab signal (+) u prvoj generaciji, a CK8 /18 bojenja ocijenjena je kao slabog signala (+) u prvoj generaciji. Tumori u svim fazama pokazali negativan bojanje E-kadherina, dok je metastatski tumor na svim naraštajima pokazala negativan bojanje E-kadherina, ICAM-1, VCAM-1, i CK8 /18. Što se tiče transkripata, otkrili smo VCAM-1 mRNA u primarnoj i prve generacije ugrađuju tumor ali ne i na metastatske faze. E-kadherinom i ICAM-1 transkripti nisu detektirani u svim generacije ugrađuju i metastatske tumore. Sl. 3 IHC analiza ekspresije E-kadherina, VCAM-1, ICAM-1 i CK8 /18 (X 200). CK8 /18 ekspresija je otkriven u kirurških uzoraka korištenih za implantaciju (a) i u primarnim implantiranih tumorskim tkivima (b), ali ne u F1 generiranja ugrađuju tumorskih tkiva (c), VCAM-1 se eksprimira u kirurškim uzorka ( d), te u primarnim implantiranih tumorskim tkivima (e), ali ne u F2 generacija implantiranih tumorskim tkivima (f). Ekspresija E-kadherin se nije mogao otkriti na kirurške uzorka (g), a u primarnim implantiranih tumorskim tkivima (h). ICAM-1 se izražava u kirurškim uzorka (i), ali ne i u primarnim implantiranih tumorskim tkivima (j) pregled Tablica 5. Ekspresija E-kadherina, ICAM-1, VCAM-1 i CK8 /18 u tumorima u kirurgija, nakon implantacije, a tijekom metastaza pregled Varijabilni
Ne
protein expressiona
mRNA expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical Uzorak pregled 1
- +++ pregled +++ pregled +++ pregled Primarni pregled 1 pregled implantiran tumor
- -
++ pregled + pregled, 0
0 pregled 0,0927 pregled metastatskog tumorskog
- - pregled -
- 0 pregled 0
0 pregled prvi pregled pet pregled implantiran tumor pregled - (0/5) pregled - (0/5) pregled + (5/5) pregled - (0/5 )
0 pregled 0 pregled 0,1997 pregled metastatskog tumorskog pregled - (0/5) pregled - (0/5) pregled - (5/5) pregled - ( 0/5) pregled, 0
0
0 pregled 2. ~ 10. pregled 45 pregled implantiran tumor pregled - (0/45) pregled - (0/45)
- (0/45) pregled - (0/45) pregled, 0
0
0 pregled metastatskog tumorskog pregled - (0/42) pregled - (0 /42) pregled - (0/42) pregled - (0/42) pregled, 0
0
0 pregled aMolecular analiza implantiranih i metastatskih tumora pokazala mjerljivu izraz CK8 /18 E-kadherina, VCAM-1 i ICAM-1, osim pozitivnim bojanjem VCAM-1 u implantiranih tumorskim tkivima prve generacije pregled Rasprava pregled rak je karakteriziran proliferaciju, invaziju i metastaziranje. Više od 90% smrtnosti od raka zbog metastaza na taj način pitajući intenzivna istraživanja [19]. Metastaza je složen i slabo razumio proces koji uključuje proteine ​​sa funkcije u adheziju stanica, razgradnju ECM i pokretljivosti [19-21]. Brojne studije na želučanu metastaza raka su izvijestili [22-26]. Međutim, većina ovih studija provedena in vitro, u nedostatku da oponaša metastatskog proces koji se odvija u vivo. To ukazuje na potrebu za životinjskom modelu metastaze raka koji je robustan i dosljedan fenotip. U ovom istraživanju, model metastatskim ljudskog karcinoma želuca je osnovana od strane potkožne inokulacije u golim miševima s rakom tkiva dobivenog kirurškim od pacijenata s rakom želuca. Svi miševi su razvili rast tumora na usađena i retroperitoneum metastaza, te 94% miševa razvila metastaze na utrobe, bez obzira na to da li je izvor tumor svježe ili smrznute. Implantiranih i metastatski tumor održava iste značajke u svim generacijama, a utroba metastaze uočeno je u limfnim čvorovima oko jednjaka, ispod sluznice želuca, Tunica serosa gastria, slezena, jetra portal područje, centralno venae i sinusa hepaticus, parenhim jetre, kapsula jetre, renalne hilus, bubrega parenhimu nadbubrežne žlijezde, crijeva serosa i gušterače. Metastaze robustan u ovom mišjem modelu. Retroperitoneum metastaze vjerojatno proizlazi iz disocijacije tumorskih stanica iz implantirani tumora, uvod u inguinal žlijezde, te prijevoz do retroperitoneum. To može objasniti metastaziranja tumora na jetri portal područje, središnje venae, i sinusna hepaticus, kao i na tunike serosa gastria, bubrežne hilus, nadbubrežne žlijezde i crijeva seroze. Metastaza i mogli su se pojavili kroz limfne čvorove; tumori su uočeni u limfnim čvorovima oko jednjaka, ispod sluznice želuca, slezene, gušterače i bubrega parenhima
Pojava metastaza čini se da ovisi o mjestu implantacije supkutano. implantacija u prepone rezultiralo 100% retroperitonealnog metastaza i 94% organi metastaze; usađivanje u stražnji rezultiralo 30% retroperitoneum metastaze i 10% organi metastaze; implantacija u pazuhu rezultiralo bez retroperitoneum metastazama i 20% utrobe metastaza. Ovo opažanje je u skladu s metastazama povezan s mikro okolinu za rast tumora, uključujući krvne žile i limfni distribucije. Doista, miš prepone ima više krvnih žila i limfnih mreže koje se ulijevaju u trbušnoj šupljini i organa od leđa. Iako pazuha imaju bogatu krvne žile i limfne mreže, smjer šupljoj je anterogradna, a većina limfe povezati s pluća, dušnik i pleure, mjesta gdje je rak želuca rijetko dobiva premještena. Dakle, jednostavan način supkutanom implantacijom tumorskih stanica u prepona golih miševa učinkovito rezultira u modelu humanog metastatskog raka želuca. Ovaj model ima višu stopu metastaza utrobe nego što je objavljeno u literaturi [13-18] i mogu se lako primijeniti i na druge vrste raka kod ljudi. Pregled, tumorske invazije s kasnijim metastazama je glavni uzrok pobola i smrtnosti u bolesnika s Rak. Metastaze karcinoma je složen proces u kojem tumorske stanice odvajaju od primarne mase tumora, migriraju kroz krvožilni sustav, extravasate u druga tkiva i rasti u nove tumore [27-30]. Među tim različitim procesima, promjenu u adhezivnim svojstvima primarnih stanica tumora je kritični faktor za progresije tumora [28]. Ona je pokazala da stanična adhezija je odgovoran za napredovanje tumora, uključujući molekule koje igraju ulogu u staničnim prianjanjem i adhezije stanica-matriks [31-34]. Adhezija stanica igra važnu ulogu u dvije različite faze metastatskog tumorskog procesa - odvajanje od primarnog tumora i njegovog pričvršćivanja na krvožilni sustav [27]. Stoga stanične adhezijske molekule igraju kritičnu ulogu u invaziji i metastaziranju različitih humanih tumora, pregled E-kadherina igra važnu ulogu u adheziji stanica-stanica u epitelnim tkivima, [35]. Osim uloge u normalnim stanicama, stanične adhezije molekula može igrati važnu ulogu u transformaciji stanica malignog tumora, razvoj i napredovanje. Gubitak integriteta tkiva tumora može dovesti do lokalne invazije [36]. Stoga, gubitak funkcije E-kadherina u tumorskim tkivima korelira s invazivnost i metastaziranje tumora [37]. Istraživanja su pokazala da je nenormalna ekspresija E-kadherina je povezan sa stjecanjem invazivnost i višem stupnju tumora za rakom želuca [38-40]. Pregled, ICAM-1 i VCAM-1 molekule vrlo važne stanične adhezije pripadaju imunoglobulina super obitelj. ICAM-1 djeluje u stanično-staničnoj i adheziji ECM, uključujući fiziološke polimorfonuklearne (PMN) čvrsto prianjanje i trans migraciju endotelnih preko integrina leukocita limfocita functionassociated antigen-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) i makrofaga-1 antigen ( MAC-1) (CD 11 /CD18) [41]. VCAM-ja posreduje adheziju stanica preko integrin [42]. ICAM-1 igra važnu ulogu u stanica-stanica i stanica-ECM interakcije, posebno tumorske invazije i citotoksičnost limfocita. Studije su pokazale da je pozitivan izraz postotak ICAM-1 bio je vezan s limfnih čvorova metastazama i dubine invazije tumora, i VCAM-1 ekspresije pozitivni gastrični karcinomi su invazivne i bili su povezana s više metastaza u limfnim čvorovima od VCAM-1 ekspresije negativnog oni [43-45]. Keratin se pojaviti na svim epitelnim stanicama, neke ne-epitelnih stanica, a većina tumorskih stanica. U Citokeratini, spada u srednji nit (IF) obitelji proteina su primarne komponente rog stanicama i održava organizaciju epitelnih tkiva. Studije su otkrili da su Citokeratini su vrlo dobro sačuvana i važno za diferencijaciju tkiva. Trenutno, više od 20 različitih Citokeratini su identificirani [46], od kojih CK 8, 18 i 19 su najrasprostranjeniji u jednostavnim epitelnim stanicama. U ovom istraživanju, IHC i RT-PCR rezultati pokazali da je ekspresija E-kadherina je negativan, te da ICAM-1, VCAM-1, i CK8 /18 su pozitivni u kirurških uzoraka koji se koriste za implantaciju, u skladu s Prethodne studije [38, 40, 43, 45]. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Otpornost Rumen bakterija murein do goveđeg želuca lysozyme
• Povezane s rakom fibroblasti u pozitivnoj korelaciji s metastatskim potencijalom ljudskih povezane s rakom želuca cancers