Создание и характеристика метастаз модели рака желудка человека у голых мышей

Создание и характеристика метастаза модели рака желудка человека в голых мышах
Аннотация
фон
модель мыши метастазирования рака желудка человека является одним из наиболее важных инструментов для изучения биологических механизмов, лежащих человеческого рака желудка метастаз. В этой статье мы создали мышиную модель метастатического рака желудка человека в голых мышах, которая имеет более высокую скорость образования опухоли и метастазов, чем существующие модели.
Методы
Для создания модели мыши метастатического рака желудка человека, свежие различных гистологических, подвергшиеся операции по поводу рака желудка, были имплантированы подкожно в правую и левую паху голых мышей. Когда имплантированы ткани вырос до 1 кубический сантиметр, мыши были убиты, и опухолевые ткани были рассмотрены и резекцию. Ткани опухоли были имплантированы голым мышам и подвергали гистологического исследования, иммуногистохимического окрашивания и ПЦР в реальном времени для цитокератином 8/18 (CK8 /18), E-кадгерина, сосудистой молекулы клеточной адгезии-1 (VCAM-1) и межклеточного адгезивной молекулы-1 (ICAM-1). Мыши были также проанализированы на метастазирование в их брюшины, брюшной полости и внутренних органов гистопатологическим исследованием. Ткани, полученные из этих органов были исследованы на патологии.

Результаты После десяти поколений имплантации все мыши развивали рост опухоли в имплантированной положении, 94% мышей разработаны метастазами в забрюшинного и внутренностей. Имплантировали и метастатической опухоли поддерживают одни и те же гистологические особенности во всех поколениях, и метастаз наблюдалось в пищеводе, желудке, селезенке, печени, почек, надпочечников, кишечника и поджелудочной железы. Эти метастатические опухоли не выявлено обнаруживаемой экспрессии CK8 /18, E-кадгерина, VCAM-1 и ICAM-1.
Выводы
Эта модель будет служить ценным инструментом для понимания метастатического процесса рака желудка человека. <бр> Ключевые слова
Характеристика Создание рак желудка метастазы мышь модели фона
рак желудка является четвертым наиболее распространенным злокачественным и второй ведущей причиной смерти от рака только к раку легких в мире [1]. Хотя прогноз пациентов с ранними стадиями рака желудка продлена отчетливо текущими методами диагностики и лечения, уровень 5-летней выживаемости после постановки диагноза у больных раком желудка со всеми этапами &л; 50% [2]. Метастазы счета частично за высокой смертности от рака желудка. Доля пациентов с раком желудка умирает от брюшины метастазов составляет около 50% [3]. Поэтому, метастазирование стала центром многих исследований рака желудка. Метастазы это очень сложный процесс, включающий несколько последовательных стадий [4]. Гены, связанные с клеточной адгезии, подвижности, пролиферации, выживания, обмена веществ и сигнальной трансдукции, играют важную роль в метастазировании раковых заболеваний [5-8]. Как эти белки совместно работать в целях содействия метастаз остается мало изучен.
Мышиной модели метастатического рака желудка является чрезвычайно ценным инструментом для понимания метастатического процесса. Первая модель человека карциномы у голых мышей была основана в 1969 году Rygaard и Povlsen через hypodermical трансплантации человеческих тканей рака толстой кишки [9]. Хотя пересаженные опухоли сохранила злокачественные свойства, она потеряла свой метастатический потенциал, а исходная структура и поведение опухоли изменилось [10]. Метастазное модель рака толстой кишки человека была впервые построена Морикавы в 1988 году с использованием клеток рака толстой кишки человека subserously имплантированы в слепую кишку [11]. Эта модель показала рост ортотопической опухоли и метастазов печени. Furukawa дополнительно модифицировать эту модель в 1993 году хирургическим путем сшивания желудка ткань рака человека в туники серозной gastria голых мышей [12]. Эта модель развились опухоли робастно и показал очень высокую скорость метастазирования в печень. Так как нарушение адгезии опухолевой ткани изменяет свою биологическую и злокачественное поведение, модели мыши, описанные сохранили целостность опухолей, предусматривающим "пациент-как-модели" [13, 14]. Здесь и далее, многие мышиные модели метастатического рака желудка человека были получены путем ортотопической трансплантации желудка раковой ткани [15-18]
моделях мыши метастатического рака желудка человека сообщалось до сих пор создают многочисленные проблемы. ортопедическое имплантации голым мышам требуется хирургическое вмешательство, а также опухолевые ткани, имплантированных были получены из желудка человека линии клеток рака, а не пациентов. В результате, эта процедура является длительным и может привести к обильное кровотечение и смерть у мышей. К тому же, хотя скорость образования ортотопической опухоли почти на 80-100%, скорость метастазирования не столь высок; опухолевые печени метастатические показатели были на 45-60% [16, 17], и что с брюшины на всего лишь 40% [18]. Таким образом, создание этих моделей мыши могут извлечь пользу из более совершенных методов, которые сделают пересадку легче и привести к более надежной метастазирования. В этом докладе мы описали модель мыши метастатического рака желудка человека, учитывающего вопросы от предыдущих моделей мыши. Мы создали нашу модель мыши метастатического рака желудка человека путем подкожной имплантации опухолевых тканей, полученных хирургическим путем непосредственно у больных раком желудка. По сравнению с другими моделями мыши, описанных ранее, эта модель мыши образует опухоли с высокой скоростью и, что более важно, показывает надежную метастазирование.
Методы
заявления по вопросам этики
все протоколы, связанные с применением экспериментальных животных и опухолевых тканей от пациентов с раком желудка в данном исследовании были одобрены Комитетом по этике медицины и научно-исследовательский институт провинции Ганьсу (лабораторных животных научной группы и клинических испытаний группы, справка номер: P201108150024) путем, утвержденные программы включали в себя сбор, обработку и имплантацию опухоли тканей у пациентов с раком желудка, а также резекции, хранения и изучения опухолевых тканей от голых мышей. Все участники исследования предоставили письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Животных и клинических опухолевых тканей
BALB /C голых мышей в возрасте 4-6 недель и 16-18 г в весе, как мужчины и женщины, были предоставлены Шанхай Tumor Institute и выращены в СПФ-ТЕХНОЛОГИИ (SPF) состоянии. Опухолевые ткани были получены у пациентов с раком желудка, перенесших операцию в больнице Ганьсу опухоли. Свежие ткани опухоли были имплантированы сразу после резекции. Клинические данные пациентов приведены в таблице 1.Table 1 Клинические данные
Samplea

Гистопатологическая классификации

Клинические этапы

Темп узла метастаза лимфатический
<бр> 1-ый
малодифференцированных аденокарциномы
PT4aN3a M0 IIIc
Результаты 7/30
2-й
умеренно дифференцированной аденокарциномы
PT4aN0M0 IIb
0/12
третий
язвенный тип умеренно дифференцированная аденокарцинома
PT4aN0M0 IIb
Результаты 0/30
4-ый
малодифференцированных аденокарциномы
PT4aN3a M0 IIIc
Результаты 16/17
À1-й и 4-й желудка раковой ткани были слабо дифференцированы аденокарциномы и есть узел метастазирование лимфы. 2-й и 3-й были умеренно дифференцированной аденокарциномы и не имеют никакого узла метастаз лимфатический
Подкожная имплантация свежих опухолевых тканей в голых мышей
Свежие ткани опухоли резецированные от больных раком желудка были вырезаны до 1 кубических штук миллиметровых, которые были разбавлены DMEM среда, а затем имплантировали подкожно в правый и левый подмышки и паху безволосых мышей с 16-gague иглой при асептических условиях. Каждый образец был имплантирован четырех мышей, 5-6 штук (0,8 мл) на мышь. Голым мышам впоследствии выращены в состоянии SPF, и рост опухоли на голых мышей исследовали ежедневно. После того, как опухоль на голых мышей выросла до 1 кубический сантиметр, мышь была убита цервикальной дислокацией и опухолевые ткани были рассмотрены и иссекают в асептических условиях. Опухолевой ткани от каждого мышей была разделена на три части - одна была использована для очередного раунда имплантации в голых мышей, а другой был зафиксирован в 10% формальдегиде для патологического исследования и иммуногистохимического (IHC) окрашивание CK8 /18, E-кадгерина, VCAM-1 и ICAM-1, третий хранили в жидком азоте и в -80 ° с в течение ПЦР в реальном времени анализа CK8 /18, E-кадгерина, VCAM-1 и ICAM-1. Мыши были вскрыты и исследованы на метастаз опухоли в их брюшины, брюшной полости, печени, селезенки, желудка, кишечника, почек, легких и головного мозга. Собранные ткани фиксировали в 10% формальдегиде для патологического исследования.
Создание и характеристика мышиной модели метастатического рака желудка человека
вырезанной ткани опухоли имплантировали подкожно в правую и левую паху от 5 голых мышей в асептических условиях с использованием 5-6 штук (0,8 мл) на мышь. Режущий и разбавлением опухолевой ткани, обследования роста и резекции опухоли в голых мышах, хранения и изучения имплантированных тканей опухоли, метастатических опухолевых тканей и органов мышей были обработаны, как описано выше. Внедренные ткани опухоли были пассировать в течение десяти поколений.
Изучение влияния места имплантации на скорость метастазирования
Как описано выше, имплантированный желудка человека раковой ткани от голых мышей имплантировали подкожно три группы голых мышей при разных участки под асептических условиях. В среднем 5-6 штук были имплантированы в организм мышей, с одной группой приема тканей на правой и левой паховой, другой группой на правой и левой подмышки, а третья на двух площадках в спину. Как упоминалось выше, были обработаны экспертиза роста и иссечение опухоли в голых мышах. Дальнейший анализ включал в себя изучение роста опухоли на разных сайтах и ​​метастазирования в брюшину и брюшной полости.
Имплантация и метастазирование ранее заморожена и пассировать желудка ткань рака человека в голых мышах
Имплантированные желудка человека раковые ткани, пассированные с четвертого и восьмое поколение путем имплантации голым мышам, хранили в жидком азоте и подкожно имплантировали голым мышам в правом и левом паху, как описано выше. Дальнейший анализ включал в себя изучение роста опухоли на разных сайтах и ​​метастазирования в брюшной полости и брюшной полости.
Патологическое исследование имплантированных и метастатических человека желудка тканей от голых мышей
Имплантированные и метастатических желудка человека раковые ткани от голых мышей были фиксировали в 10% формальдегиде, заливали в парафин, разрезали на секции, окрашенные в окрашивание гематоксилином-эозином (ОН). Слайды были оценены с помощью светового микроскопа Olympus BX50, и приобретение изображений посредством патологической системы Mias Workstation 4.0.
IHC окрашивания
Уровни экспрессии Е-кадгерина, VCAM-1, ICAM-1 и CK8 /18 были рассмотрены иммуногистохимии в имплантированных и метастатических опухолевых тканей от голых мышей и в хирургических образцах, используемых для имплантации. Разделы, используемые для окрашивания получали из хирургических образцов, имплантированных и метастатических опухолевых тканей, а также тканей, которые содержат метастатических опухолей. Реагенты, используемые для окрашивания были SP-9000 Histostain ™ -plus комплекты, 3-3'-диаминобензидино тетрагидрохлорид (DAB) наборы, первичные мышиные моноклональные антитела против E-кадгерина (1: 200 разведение), ICAM-1 (1: 500 разбавление) и первичная кроличьи поликлональные антитела против VCAM-1 (1: 500 разведение) (Пекин Чжуншань Золотой мост Biotechnology Co Ltd, Пекин, Китай). Окрашивание слайды IHC были независимо друг от друга оценивали двумя патологоанатомами, и любая разница в итоговом решении был решен на основе консенсуса. Окрашивание интенсивность была оценена как отрицательная, слабая, умеренная или сильная. Световой микроскоп и получение изображений программное обеспечение были такими же, как описано выше.
Total экстракцию РНК и ПЦР в реальном времени
Суммарную РНК экстрагировали с помощью Trizol (Шэн гонг биотехнологии, Шанхай, Китай) из имплантированных и метастатических опухолевых тканей, что вырос в голых мышей и из хирургических образцов, используемых для имплантации, следуя инструкциям изготовителя. КДНК синтезируют с помощью обратной транскриптазы (Шэн гонг биотехнологии), в соответствии с рекомендациями завода-изготовителя. SYBR премикс Ex TaqTM (Takara Biotechnology, Далянь, Китай) использовали для ПЦР в реальном времени. 20 мкл реакции, содержала 10 мкл SYBR премикса Ex TaqTM, ДНК-матрицы 1 мкл, 0,4 мкл каждого праймера, 8,2 мкл дН <суб> 20. Цикличность состояние ПЦР: 37 ° С в течение 5 мин, 95 ° С в течение 30 с и 40 циклов при 95 ° С в течение от 5 сек до 60 ° C в течение 30 сек. Β-актина мРНК использовали в качестве внутреннего контроля, и реакционную массу без ДНК-матрицы использовали в качестве негативного контроля. Все образцы были измерены в 3 раза независимо друг от друга, и количественные данные ПЦР анализировали с использованием сравнительного метода КТ. Если коротко, то разница в порогового цикла, Δ CТ, определяли как разность между тестируемым геном и человеческого бета-актина. Затем полученный ΔΔCT путем нахождения разности между этими двумя группами. Складка изменение рассчитывалась как 2 -ΔΔCT. Праймеры перечислены в таблице 2.Table 2 праймеры, используемые в ПЦР в реальном времени
Gene

прямого праймера

Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Результаты
опухолевидное образование и метастазирование
Среди четырех мышей, которым имплантировали 1-ых хирургических образцов, только один развитой опухоли в месте имплантации на 76 дней (фиг. 1а). Двадцать пять дней спустя, мышь была убита цервикальной дислокацией и анализировали опухоли. Опухоль ткани в среднем на 1 кубический сантиметр в размере, отображается неповрежденный конверт и твердую текстуру (рис. 1b). Метастазы в забрюшинного пространства был найден при визуальном осмотре (рис. 1в). Ни один метастаз не был обнаружен в его брюшины, брюшной полости, печени, селезенки, желудка, кишечника, почек, легких и головного мозга. Инжир. 1 рост метастатической опухоли из имплантированного ткани рака желудка, полученного хирургическим путем (X 400). а, б: Имплантированных ткани рака вырос до ~ 1 кубический сантиметр и отображается неповрежденный конверт и твердую текстуру; C: Опухоль метастаз в забрюшинного мыши; д, е: Имплантированная ткани и метастатические опухоли состояли из слабо дифференцированных клеток карциномы и несколько мезенхимы клеток и кровеносных сосудов, с некоторым сходством с железистой полости. Раковые клетки показали темно-окрашенных ядер и скудную цитоплазму и не имеют нормального соотношения между ядром и цитоплазмой; F: Имплантированных опухоль, показывающая ткани инфильтрации
Патологическая анализ показал, что имплантированные и метастатических опухолевых тканей состоял из слабо дифференцированных клеток карциномы, и лишь немного мезенхимы и кровеносных сосудов. Эти ткани появляются рассеянным, не хватало структуры, и напоминают железистой просвет. Кроме того, клетки отображается темно-окрашенных ядер, скудное цитоплазму и misproportioned ядра и цитоплазмы (рис. 1д, д, е). Аналогичные результаты были получены в параллельном исследовании, включающем имплантацию опухолевой ткани на 4 мышей; только одна мышь разработана опухоли (средний размер: 1,5 кубический сантиметр) 26 дней после имплантации. Ни один метастазирование не наблюдалось в его брюшины, брюшной полости, печени, селезенки, желудка, кишечника, почек, легких и головного мозга. Другие мышей с имплантированным 2-го и 4-го хирургических образцов не показали рост опухоли.
Стабильность имплантированного опухоли следующий пассаж в нескольких поколений
опухоль, которая разработана с 1-го хирургического образца пассируют в течение десяти поколений. Скорость роста опухоли составляла 100%, а метастазирование в забрюшинного и внутренностей был 80-100% (в среднем 94%), независимо от того, использовался ли первичная ткань свежей или замороженной (таблица 3). Внутренностей метастаз наблюдалось в лимфатических узлах вокруг пищевода, ниже слизистой оболочки желудка, белочной серозной gastria, селезенки, печени области портала, центральный полых и синусовым hepaticus, паренхимы печени, капсулы печени, почек рубчика, почечной паренхиме, надпочечниках, кишечника серозной, поджелудочной железы, и семяпровод (рис. 2). Время генерации составляет 16 days.Table 3 Стабильность и скорость метастазирования опухолей, имплантированных в различных positionsa
переменной

Нет

Рост имплантированным позиции (%)

метастазы забрюшинного пространства (%)

Внутренности (%)

время генерации (дней)

номер Прохождение
1-ый страница 5 100 (5/5 )
100 (5/5) 80
(4/5)
20
вторая страница 5 из 100 (5/5) 80
(4/5)
100 (5/5) 14

3rd страница 5 из 100 (5/5)
100 (5/5) 80
(4/5)
14
4-я страница 5 из 100 (5/5) 80
(4/5)
100 (5/5) 15

пятый
5 <бр> 100 (5/5) 100
(5/5)
80 (4/5)
14
шестой страница 5 из 100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
13
7-е страница 5 из 100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8-я страница 5 из 100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9-е место страница 5 из 100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10-я страница 5 100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
Хранится в жидком азоте
4-е страница 5 из 100 (5/5) <бр> 100 (5/5)
100 (5/5)
17
8-страница 5 из 100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
Имплантация в различном положении
паху
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16
Назад
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
подмышек <бр> 10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10)
14
A После десяти поколений имплантации все мыши развивали рост опухоли на имплантировали положение, и 94% мышей разработаны метастаз в забрюшинного и внутренностей, был независимо от того, источник опухоли свежим или замороженным. Среднее время несения опухоли составляет 16 дней. Пах мышей лучше положение Имплантация, в результате чего 94% забрюшинного и внутренностей метастазирования
Рис. 2 гистологического исследования опухоли, что метастазы в внутренностей (X 100). Микро-метастаз наблюдалось в лимфатических узлах вокруг пищевода (а), ниже слизистой оболочки желудка (б), а также в других областях, таких как белочной серозной gastria (с), паренхимы при печеночной капсулы (д), печени область портала (е ), синусовая hepaticus (F), селезенка (г), полых централей печени (h), поджелудочной железы (I), почечная рубчик (J), почечной паренхимы (K), надпочечников (л), кишечника серозной (м), семяпровод (п) и легких (о)
скорость метастазирования опухоли, имплантированных в различных положениях
Имплантация в различные положения повлияли на скорость метастазирования, но не скорость роста опухоли. Имплантация в паховую привело к 94% забрюшинного и внутренностей метастазирования; Имплантация в спину привело к 30% забрюшинного метастазирования и 10% внутренностей метастазирования; Имплантация в подмышках не приводила к забрюшинного метастазирования и 20% внутренностей метастазирования. Время генерации было: 16 дней для опухолей, имплантированных в паху, 20 дней для тех, кто имплантировали в спину, и 14 дней для тех, кто имплантированы в подмышечных впадинах (таблица 3). Метастатический внутренностей входит печень (50%), почек (44%), кишечник (28%), пищевод (12%), поджелудочной железы (12%), желудка (6%), селезенка (6%) и семяпровод (6 %) (таблица 4) .table 4 метастазы в visceraa
имплантированного положение

Нет

внутренностей метастаз (%)

Печень (%)

почки (%)

кишка (%)

пищевод (%)

Поджелудочная (%)

Желудок (%)

Селезенка (%)

семяпровод (%)

паху
50
94 (47/50) 50
(25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50) 12
(6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Назад
10
10 (1/10)
0 0

0 0

0
10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
подмышки
10
30 (3/10)
20 (2/10)
0
0
10 (1/10)
0 0

0
0
печени и почек были внутренностей с самым высоким уровнем метастазирования (44-50%), и желудок, селезенку и семяпровод были самыми низкими (6%)
Характеристика имплантированной и метастатических опухолей
ВВК и в режиме реального времени результатов ПЦР показал, что ICAM-1, VCAM-1, и CK8 /18, но не E-кадгерин, были преимущественно выражены в хирургии и в имплантированной опухоли первичного и первого поколения (рис. 3). Как показано в таблице 5, первичный и первое поколение опухоли показало положительное окрашивание на VCAM-1 и CK8 /18, но последующие поколения показали слабое окрашивание на этих белков: VCAM-1 окрашивание оценивали как умеренно положительный (++) в первичном, слабый сигнал (+) в первом поколении, и CK8 /18 окрашивания оценивали как слабый сигнал (+) в первом поколении. Опухоли на всех этапах показали отрицательное окрашивание на E-кадгерина, в то время как метастатической опухоли у всех поколений показали отрицательное окрашивание на E-кадгерина, ICAM-1, VCAM-1 и CK8 /18. Что касается транскриптов, мы обнаружили VCAM-1 мРНК в первичной и первого поколения имплантировали опухоли, но не на метастатической стадии. Е-кадгерин и ICAM-1 транскрипты не были обнаружены во всех поколениях имплантированных и метастатических опухолей. Инжир. 3 IHC анализ экспрессии Е-кадгерина, VCAM-1, ICAM-1 и CK8 /18 (Х 200). Выражение CK8 /18 был обнаружен в хирургических образцов, используемых для имплантации (а), а также в первичных имплантированных опухолевых тканей (б), но не в F1 поколения имплантированных опухолевых тканей (с), была выражена VCAM-1 в хирургическом образце ( г), а также в первичных имплантированных опухолевых тканей (е), но не в поколении F2, имплантированных тканей опухоли (F). Выражение Е-кадгерин обнаружен не был в хирургическом образца (г), а также в первичных имплантированных опухолевых тканей (ч). Было выражено ICAM-1 в хирургическом образце (I), но не в первичных имплантированных опухолевых тканей (J)
Таблица 5 экспрессия Е-кадгерина, ICAM-1, VCAM-1 и при CK8 /18 в опухолях хирургии, при имплантации и во время метастазирования
Переменная

нет

белка expressiona

мРНК expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical Образец
1
-
+++
+++ +++

Первичный
1
имплантированных опухолей
- Форум - <бр> ++
+
0 0

0,0927
метастатической опухоли
-
-
- Форум -
0
0 <бр> 0
первый страница 5 имплантированные опухоли
- (0/5)
- (0/5)
+ (5/5)
- (0/5 )
0 0

0,1997
метастатической опухоли
- (0/5)
- (0/5)
- (5/5)
- ( 0/5)
0 0

0
2-й ~ 10-е
45
имплантированные опухоли
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
0 0

0
метастатической опухоли
- (0/42)
- (0 /42)
- (0/42)
- (0/42)
0 0

0
aMolecular анализ имплантированных и метастатических опухолей не выявлено обнаруживаемой экспрессии CK8 /18, Е-кадгерин, VCAM-1 и ICAM-1, за исключением того, положительное окрашивание на VCAM-1 в имплантированном опухолевых тканях первого поколения
Обсуждение
Рак характеризуется пролиферацией, инвазию и метастазирование. Более 90% смертности от рака связано с метастазированием, таким образом, предлагающее интенсивные исследования [19]. Метастазы является сложным и плохо понимают процесс, включающий белки с функциями в клеточной адгезии, деградации ECM и моторики [19-21]. Многочисленные исследования желудка раковых метастаз сообщалось [22-26]. Тем не менее, большинство из этих исследований были проведены в лабораторных условиях, не в состоянии имитировать метастатического процесса, который происходит в естественных условиях. Это наводит на мысль о необходимости животной модели метастаза рака, который имеет надежный и последовательный фенотип. В настоящем исследовании, модель метастатического рака желудка человека был создан подкожных инокуляции у голых мышей с раком тканей, полученных хирургическим путем от больных раком желудка. Все мыши развивали рост опухоли в имплантированной положении и забрюшинного метастазирования, и 94% мышей разработаны метастаз в внутренностей, независимо от того, был источник опухоли свежим или замороженным. Имплантировали и метастатической опухоли поддерживают те же функции, во всех поколениях, и внутренностей метастаз наблюдалось в лимфатических узлах вокруг пищевода, ниже слизистой оболочки желудка, туники серозной gastria, селезенка, печень площадь портал, центральный полых и пазух hepaticus, паренхимы печени, капсулы печени, почек рубчик, паренхимы почек, надпочечников, кишечника серозной и поджелудочной железы. Метастазы был устойчивым в этой модели мыши. Забрюшинного пространства метастаз, возможно, в результате диссоциации опухолевых клеток из имплантированной опухоли, введение в паховую желез, а также транспортировки в забрюшинного пространства. Это может объяснить опухоль метастазирует в печени области портала, центральной и полых синусового hepaticus, а также в белочной серозной gastria, почечная рубчика, надпочечниках и кишечника серозной. Метастазы также могло произойти через лимфатические узлы; опухоли наблюдались в лимфатических узлах вокруг пищевода, ниже слизистой оболочки желудка, селезенки, поджелудочной железы и почек паренхимы
Появление метастаз по-видимому, зависит от места имплантации подкожно:. имплантирования в паховой области приводит к 100% забрюшинного метастазирования и 94% внутренностей метастаз; Имплантация в спину привело к 30% забрюшинного метастазирования, а 10% внутренностей метастаз; Имплантация в подмышках не приводила к забрюшинного метастазирования и 20% внутренностей метастазирования. Это наблюдение согласуется с метастазами, связанной с микросреды роста опухоли в том числе кровеносного сосуда, и лимфатического распределения. Действительно, паха мышь имеет больше кровеносных сосудов и лимфатических сетей, которые впадают в брюшной полости и внутренностей, чем сзади. Хотя подмышки имеют богатые кровеносные сосуды и лимфатические сети, направление вэна является антероградный, и большая часть лимфы соединения с легких, трахеи и плевры, местах, где рак желудка редко получает транслоцируются. Таким образом, простой способ подкожной имплантации раковых клеток в паху голых мышей эффективно приводит к модели метастатического рака желудка человека. Эта модель имеет более высокую скорость метастазирования внутренностей, чем сообщалось в литературе [13-18] и может быть легко применены к другим типам раковых заболеваний человека.
Опухоль вторжение с последующими метастазами является основной причиной заболеваемости и смертности у пациентов с рак. метастазирования представляет собой сложный процесс, в котором опухолевые клетки отделяются от массы первичной опухоли, мигрируют через сосудистую систему, в другие вытекать из сосудов в ткань ткани и превращаются в новых опухолей [27-30]. Среди этих разнообразных процессов, изменение в адгезионных свойств первичных опухолевых клеток является критическим фактором для прогрессирования опухоли [28]. Было выявлено, что клеточная адгезия ответственна за развитие опухоли, включая молекулы, которые играют определенную роль в межклеточной адгезии и клеточной матрицы адгезии [31-34]. Адгезия клеток играет важную роль в двух разных этапах метастатического опухолевого процесса - отсоединение от первичной опухоли и ее адгезии к кровеносной системе [27]. Таким образом, молекулы клеточной адгезии играют решающую роль в инвазии и метастазировании разнообразных опухолей человека.
Е-кадгерина играет важную роль в межклеточной адгезии в эпителиальных тканях [35]. К тому же его роль в нормальных клетках, эта молекула клеточной адгезии может играть важную роль в опухолевой трансформации клеток, развитие опухоли и прогрессии. Потеря целостности опухолевой ткани может привести к местной инвазии [36]. Таким образом, потеря функции Е-кадгерина в опухолевых тканях коррелирует с инвазивности и метастазирования опухолей [37]. Исследования показали, что экспрессия аберрантных Е-кадгерин, связанный с приобретением инвазивности и более продвинутой стадии опухоли при раке желудка [38-40].
ICAM-1 и VCAM-1 являются очень важными молекулы клеточной адгезии, принадлежащих к иммуноглобулину супер семьи. ICAM-1 функции в межклеточных и адгезии ECM, в том числе физиологической полиморфноядерных (ПМН) плотно адгезией и транс миграции эндотелиальной через лейкоцитарных интегринов лимфоцит functionassociated антиген-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) и макрофаги-1 антигена ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. VCAM-I опосредует клеточную адгезию через интегрин [42]. ICAM-1 играет важную роль в межклеточных и клеточно-ECM взаимодействий, особенно опухолевой инвазии и цитотоксичности лимфоцитов. Исследования показали, что положительная скорость экспрессии ICAM-1 была связана с метастазов в лимфатических узлах и глубиной инвазии опухоли и экспрессию VCAM-1 положительных видов рака желудка были более инвазивными и были связаны с более метастазов в лимфатических узлах, чем VCAM-1 выражение отрицательного те [43-45]. Цитокератин появляются на всех эпителиальных клеток, некоторые не-эпителиальных клеток, а также большинство опухолевых клеток. В цитокератины, принадлежащий к семейству белков промежуточное волокно (IF), являются главными компонентами роговых клеток и поддерживает организацию эпителиальной ткани. Исследования показали, что цитокератины очень высоко консервативны и важно для тканевой дифференцировки. В настоящее время более 20 различных цитокератины были идентифицированы [46], из которых CK 8, 18 и 19 являются наиболее распространенными в простых эпителиальных клетках. В настоящем исследовании, результаты IHC и ОТ-ПЦР показал, что экспрессия Е-кадгерина является отрицательным, и что из ICAM-1, VCAM-1, и CK8 /18 положительных в хирургических образцов, используемых для имплантации, в соответствии с прошлые исследования [38, 40, 43, 45]. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Сопротивление рубца бактерий муреин к бычьей желудка lysozyme
• Рак-ассоциированные фибробласты положительно коррелирует с метастатическим потенциалом желудка человека ca…