Kūrimo ir apibūdinimo iš metastazių modeliu žmogaus skrandžio vėžio nuogas pelėmis

Kūrimo ir apibūdinimo iš metastazių modeliu žmogaus skrandžio vėžio nuogas pelių pervežimas tezės
Background
Pelė modelis metastazių žmogaus skrandžio vėžys yra viena iš svarbiausių priemonių tiriant biologinius mechanizmus, sukeliančius žmonių skrandžio vėžys metastazės. Šiame straipsnyje, mes sukūrėme pelės modelį metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio nuogas pelių, kurios turi didesnį tarifą auglio susidarymo ir metastazių nei esamų modelių.
Metodai
Norėdami sukurti pelės modelį metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio, švieži buvo po oda implantuojami į dešinę navikų audiniuose, iš pacientų, kurie buvo operuoti skrandžio vėžiu ir paliko groins apie nuogas pelių. Kai implantuoti audinio išaugo iki 1 kubiniame centimetre, pelės žuvo ir buvo išnagrinėti ir rezekcijos naviko audiniuose. Naviko audiniai buvo implantuoti į nuogas pelių ir taikomos patologinį tyrimą, imunohistocheminį dažymo, ir realaus laiko PGR už citokeratino 8/18 (CK8 /18), E-cad, kraujagyslių ląstelių adhezijos molekulės-1 (KLAM-1) ir tarpląstelinės sukibimas molekulė-1 (ICAM-1). Pelėms taip pat buvo analizuojami metastazių jų pilvaplėvės, pilvo ertmės ir vidaus organus histopatologiniams tyrimams. surinktos iš šių organų audiniai buvo tiriami patologijos.
rezultatai
Po dešimties kartų implantacijos, visos pelės sukūrė naviko augimą implantuoto padėtį, 94% pelių sukūrė metastazių į retroperitoniniame tarpe ir vidaus organų. Implantuoto ir metastazavusiu vėžinių išlaikė tuos pačius histologinius funkcijas visose kartoms, ir metastazės buvo pastebėta stemplės, skrandžio, blužnies, kepenų, inkstų, antinksčių, žarnyno ir kasos. Šie metastaziniai navikai atskleidė neaptinkama išraišką CK8 /18, E-cad, VCAM-1 ir ICAM-1.
Išvadas
šis modelis taps vertinga priemonė siekiant suprasti metastazavusiu procesą žmogaus skrandžio vėžio.
raktiniai žodžiai
apibūdinimas steigimas Skrandžio vėžys Metastazė Pelės modeliai faktai
Skrandžio vėžys yra ketvirtoji dažniausia piktybinių navikų ir antroji pagrindinė priežastis, mirčių nuo vėžio tik plaučių vėžio pasaulyje [1]. Nors pacientų prognoze su pradžioje skrandžio vėžio buvo pratęstas aiškiai dabartinių metodų diagnostikos ir gydymo, 5-metų išgyvenamumas po diagnozės skrandžio vėžiu sergantiems pacientams su visais etapais yra < 50% [2]. Metastazės sąskaitų iš dalies dėl didelio mirtingumo nuo skrandžio vėžio. Pacientų su skrandžio vėžio miršta nuo pilvaplėvės metastazių yra maždaug 50% [3]. Todėl metastazės tapo daugelio skrandžio vėžio tyrimų centre. Metastazės yra labai sudėtingas procesas, kuriame dalyvauja keli pakopos [4]. Genai, susiję su ląstelių sukibimą, judrumas, platinimo, išlikimą, metabolizmo ir signalo perdavime vaidina svarbų vaidmenį vėžio metastazių [5-8]. Kaip šie baltymai dirbti kartu skatinti metastazių lieka menkai suprantamas.
Pelės modelį skrandžio vėžiui yra labai vertingas įrankis suprasti metastazavusiu procesą. Pirmasis žmogaus karcinoma modelis nuogas pelių buvo įkurta 1969 m Rygaard ir Povlsen per hypodermical transplantacijos žmogaus storosios žarnos vėžio audinyje [9]. Nors persodinami navikas išlaikė savo piktybinius savybes, jis prarado savo metastazavusiu potencialą ir originalus struktūra ir elgsena naviko pasikeitė [10]. Metastazavusiu modelis žmogiškosios gaubtinės žarnos vėžio pirmą kartą buvo pastatytas Morikawa 1988 naudojant žmogaus storosios žarnos vėžinių ląstelių subserously implantuojami į Akloji žarna [11]. Šis modelis parodė, orthotopic naviko augimą ir kepenų metastazių. Furukawa toliau keistas šį modelį 1993 metais chirurginiu susiuvimo žmogaus skrandžio vėžys audinį į Apvalkalo serosa gastria iš nuogas pelių [12]. Šis modelis sukurtas navikai tvirtai ir parodė labai aukštą norma metastazių į kepenis. Nuo sutrikdymą dėl naviko audinyje sukibimo keičia savo biologinę ir piktybinį elgesį, pelės modeliai aprašyti išlaikė navikų, dėl to atsiranda "paciento, kaip modelio" vientisumą [13, 14]. Toliau, daugelis pelės modeliai metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio buvo sukurtas orthotopic transplantacijos skrandžio vėžio audinyje [15-18]
pele modelių metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio pranešė iki šiol kelia daug iššūkių.; Orthotic implantacija į nuogas pelėmis reikia operacijos, o navikų audiniuose implantuoti buvo kilęs iš pacientų žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos vietoj. Kaip rezultatas, procedūra yra ilga ir gali sukelti sunkų kraujavimą ir mirtį pelėms. Be to, nors orthotopic auglio susidarymo greitis yra beveik 80-100%, kad metastazių nėra toks didelis tarifas; kepenų naviko metastazių normos buvo ne 45-60% [16, 17], ir kad su pilvaplėvės ne vien 40% [18]. Taigi, nustatant šias pelės modeliai gali pasinaudoti geresnėmis metodus, kurie būtų padaryti transplantacijos lengviau ir sukelti tvirtesne metastazių. Šioje ataskaitoje, mes aprašyta pelės modelį metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio ", susijusį su iš ankstesnių pelės modeliai klausimus. Mes sukūrėme mūsų pelės modelį metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio per oda implantuojant navikų audiniuose, gautų chirurginiu būdu tiesiogiai iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu. Palyginti su kitomis pelės modeliai anksčiau aprašytų, tai pelės modelis formuoja auglius dideliu greičiu ir, dar svarbiau, rodo tvirtą metastazes.
Metodai
etikos pareiškimą pervežimas visų protokolų, susijusioje su eksperimentiniais gyvūnais ir navikų audiniuose naudoti nuo pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, šio tyrimo metu buvo patvirtinta etikos komiteto medicinos ir mokslo tyrimų instituto Gansu provincijoje (laboratoriniai gyvūnai mokslo grupės ir klinikinių tyrimų grupės Skelbimo numeris: P201108150024), patvirtintos programos įtraukti surinkimo, apdorojimo ir implantacijos naviko audinius nuo pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, ir rezekcija, saugojimo ir tyrimo vėžinių audinių iš nuogas pelių. Visi tyrimo dalyviai, jeigu informuotam sutikimui dalyvauti tyrime.
Gyvūnai ir klinikinės navikų audiniuose
BALB /c nuogas pelių 4-6 savaičių amžiaus ir 16-18 g svorio, tiek vyrų, tiek moterų, buvo numatyta Shanghai auglio instituto ir auginami konkrečiame-patogenais neužkrėsti (SPF) būklės. Navikų audiniuose, buvo gauti iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu, kuriems buvo atlikta operacija Gansu auglio ligoninėje. Šviežių navikų audiniuose buvo implantuoti iš karto po rezekcijos. Klinikiniai duomenys apie pacientų, išvardyti 1.Table 1 lentelė Klinikinių duomenų
Samplea
histopatologinis klasifikacija
klinikinės stadijos
norma limfmazgių metastazių

1.
blogai diferencijuotą adenokarcinoma
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2-asis
vidutiniškai diferencijuoti adenokarcinoma
PT4aN0M0 IIb
0/12
3.
opinis įrašykite vidutiniškai diferencijuoti adenokarcinoma
PT4aN0M0 IIb
0/30
4th
blogai diferencijuotą adenokarcinoma
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
a1st ir 4. skrandžio vėžio audinių buvo blogai diferencijuota adenokarcinoma ir turi limfmazgių metastazių. 2. ir 3. buvo vidutiniškai diferencijuoti adenokarcinoma ir neturi limfmazgių metastazių
oda implantacija šviežių navikų audiniuose, į nuogas pelių
švieži navikų audiniuose rezekcijos iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu buvo sumažintos iki 1 kubinis milimetras gabalus, kurie buvo skiedžiamas DMEM vidutinio, o tada po oda implantuojami į dešinę ir kairę, pažastų ir groins apie nuogas pelių 16-gague adata aseptinėmis sąlygomis. Kiekvienas mėginys buvo implantuotas į keturias peles, 5-6 gabalus (0,8 ml) per pele. Nuogas pelės vėliau buvo auginami SPF būklės, naviko augimas nuogas pelių buvo tiriamos kasdien. Kai navikas ant nuogas pelių išaugo iki 1 kubiniame centimetre, pelė buvo nužudytas slankstelių dislokaciją ir buvo išnagrinėti ir rezekcijos aseptinėmis sąlygomis naviko audiniuose. Navikas audinių iš kiekvienos pelių buvo suskirstyti į tris dalis - vienoje buvo naudojamas kito implantacijos šovinį į nuogas pelėmis, o kitas buvo nustatyta 10% formaldehido už patologinių tyrimų ir Imunohistocheminiais (IHC) dažymas, CK8 /18, E-cad, KLAM-1, ir ICAM-1, trečiasis buvo saugomi skystame azote ir -80 ° C realiu laiku PGR analizės CK8 /18, E-cad, VCAM-1, ir ICAM-1. Pelėms buvo išpjaustytų ir tiriami naviko metastazių jų pilvaplėvės, pilvo ertmės, kepenų, blužnies, skrandžio, žarnyno, inkstų, plaučių ir smegenų. Surinktos audiniai buvo nustatytas 10% formaldehido už patologinį tyrimą.
Buvo po oda implantuojami į dešinę ir į kairę groins iš 5 nuogas pelių aseptinėmis sąlygomis naudojant steigimas ir apibūdinimas pelės modelio metastazavusio žmogaus skrandžio vėžio Viesbutis The pašalintų navikų audiniuose 5-6 gabalėliai (0,8 ml) už pelę. Pjovimo ir skiedžiant naviko audinyje, augimo tyrimo ir rezekcijos naviko nuogas pelėmis, saugojimo ir tyrimo implantuotos navikų audiniuose, metastazavusiu vėžinių audinių ir pelės organų buvo apdorojami kaip aprašyta aukščiau. Implantuojami navikų audiniuose buvo passaged dešimt kartų.
Nagrinėjant poveikį implantacijos vietoje dėl metastazių
tarifą, kaip aprašyta, buvo po oda implantuoti tris grupes nuogas pelių skiriasi implantuoti žmogaus skrandžio vėžio audinių iš nuogas pelių svetainės aseptinėmis sąlygomis. 5-6 gabalus vidutiniškai buvo implantuoti į pelių, su viena grupė gauna audinius dešinėje ir kairėje groins, kita grupe dešinę ir į kairę pažastų, o ne dviejų vietų nugaros trečdaliu. Kaip minėta pirmiau, augimas tyrimas ir rezekcija nuogas pelių navikų buvo tvarkomi. Daugiau analizė įtraukti nagrinėjimą naviko augimas skirtingose ​​vietose ir metastazių į pilvaplėvės ir pilvo ertmę.
Implantacija ir metastazių anksčiau užšaldyti ir passaged žmogaus skrandžio vėžio audinio nuogas pelių
implantuoti žmogaus skrandžio vėžio audiniuose passaged nuo ketvirtą ir aštunta karta iki implantacijos į nuogas pelių buvo laikomi skystame azote ir oda implantuojami į nuogas pelių kairę ir į dešinę groins, kaip aprašyta aukščiau. Daugiau analizė įtraukti nagrinėjimą naviko augimas skirtingose ​​vietose ir metastazių į pilvaplėvės ir pilvo ertmę.
Patologinė išnagrinėjus implantuotus ir metastazavusiu žmogaus skrandžio audinių iš nuogas pelių
implantuoto ir metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio audiniai iš nuogas pelėms buvo nustatytas 10% formaldehido, įterptųjų parafinu, supjaustyti į dalis, tamsintas į hematoksilinu-eozino dažymo (HE). Skaidrės buvo įvertintas naudojant "Olympus BX50 šviesos mikroskopu, ir vaizdo įsigijimas buvo atliekamas Mias patologinės Workstation 4.0 sistema.
IHC dažymo
Sąvoka lygių E-cad, KLAM-1, ICAM-1 ir CK8 /18 buvo išnagrinėti imunohistocheminiu į implantuoto ir metastazavusiu vėžinių audinių iš nuogas pelių ir chirurginių egzempliorių, naudojamų implantacijos. naudojami dažymo skyriai buvo gauti iš chirurginio egzempliorių, implantuoto ir metastazavusiu vėžinių audinių ir audinių, kuriuose yra neišplitusios navikai. Naudojami reagentai dažymui buvo SP-9000 Histostain ™ PLUS Rinkiniai, 3-3'-diaminobenzidinas tetrahidrochlorido (DAB) Rinkiniai, pagrindinis pelės monokloniniai antikūnai prieš E-cad (1: 200 praskiedimas), ICAM-1 (1: 500 praskiedimas) ir pagrindinis triušis polikloninis antikūnas prieš VCAM-1 (1: 500 praskiedimas) (Pekinas Zhongshan Golden Bridge biotechnologijos Co Ltd ", Pekinas, Kinija). Į IHC dažymo skaidres buvo nepriklausomai įvertino du patologai ir bet koks sprendimų rezultatus skirtumas buvo išspręsta bendru sutarimu. Dažymo intensyvumą buvo įvertintas kaip neigiamas, silpnas, vidutinio ar stiprus. Šviesos mikroskopu ir vaizdo kaupimo programinė įranga buvo tas pats, kaip nurodyta pirmiau.
RNR gavyba ir realiojo laiko PGR
viso RNR buvo išgauti Trizol (Sheng gong Biotechnologijos, Šanchajus, Kinija) iš implantuotų ir metastazavusiu vėžinių audinių, kurie augo nuogas pelių ir iš chirurginio egzempliorių, naudojamų implantacija, šiais gamintojo instrukcijas. KDNR buvo susintetintas atvirkštinės transkriptazės (Sheng gong Biotechnology), pagal gamintojo rekomendacijas. SYBR premikso ex TaqTM (TAKARA Biotechnologijos, Dalianas, Kinija) buvo naudojamas realaus laiko PGR. 20-mikrol reakcija pateikta 10 mikrol SYBR mišininio Ex TaqTM, 1 iL DNR šabloną, 0,4 iL kiekvieną gruntą ir 8.2 iL DH 20. PGR dviračiu sąlyga buvo: 37 ° C temperatūroje 5 min, 95 ° C temperatūroje 30 s, ir 40 ciklų 95 ° C temperatūroje 5 s iki 60 ° C temperatūroje 30 s. Β-aktino mRNR buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės sistemą, o reakcijos mišinys be šablono DNR buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Visi iš mėginių buvo matuojamas 3 kartus nepriklausomai, ir kiekybine PGR duomenys buvo analizuojami naudojant lyginamąjį CT metodą. Trumpai tariant, iš ciklo riba, ΔCT skirtumas buvo nustatomas kaip skirtumas tarp bandomosios geno ir žmogaus beta-aktino. tada mes gauti ΔΔCT, ieškant tarp šių dviejų grupių skirtumą. Sulenktas pokytis buvo skaičiuojama kaip 2 -ΔΔCT. Pradmenys yra išvardyti 2.Table 2 lentelė gruntai naudojami realaus laiko PGR
Gene

priekį gruntas

Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Rezultatai
auglio susidarymo ir metastazių
Tarp keturių pelių implantuoti su 1st chirurginių egzempliorių tik vienas išvystyta naviko implantacijos svetainėje 76 dienų (pav. 1a). Dvidešimt penkių dienų, pelė buvo nužudytas slankstelių dislokaciją ir analizuojami navikų. Naviko audinio už 1 kubinį centimetrą dydžio vidurkis, rodomas sveika voką ir sunkaus tekstūra (pav. 1b). Metastazės į retroperitoniniame tarpe buvo rasti apžiūrint (pav. 1c). Nėra, metastazės buvo aptiktas jo pilvaplėvės, pilvo ertmės, kepenų, blužnies, skrandžio, žarnyno, inkstų, plaučių ir smegenų. Pav. 1 metastazavęs auglys augimas nuo implantuoto skrandžio vėžio audinių gautų chirurginiu būdu (x 400). A, B: Implantatsioonid vėžio audinio išaugo iki ~ 1 kubinis centimetras ir rodomas sveika voką ir sunkaus tekstūrą; C: Naviko Metastazė į pelės retroperitoniniame tarpe; D, E: Implantuotam audinių ir metastazavusiu navikai sudarė blogai diferencijuotų karcinoma ląstelių ir keletą mezenchima ląstelių ir kraujagyslių, su šiek tiek panašus į liaukinio ertmę. Vėžinės ląstelės parodė tamsiai tamsintas branduolius ir nepakankamai citoplazmos ir trūko normalų santykį branduolio ir citoplazmos; F: Implantatsioonid navikas rodo audinio infiltracija
Patologinės analizė parodė, kad implantuojami ir metastazavusiu vėžinių audinių sudarė blogai diferencijuotos karcinomos ląstelių, ir tik šiek tiek mezenchima ir kraujagyslę. Šie audiniai atrodo išsklaidytas, trūko struktūrą ir panašūs liaukų liumenų. Be to, ląstelės rodomas tamsiai tamsintas branduolius, nepakankamai citoplazmos ir misproportioned branduolių ir citoplazmos (. 1d pav, E, F). Panašūs rezultatai buvo gauti lygiagrečiai tyrime, kuriame dalyvavo implantacijos auglio audinių į 4 pelių; tik vienas pelės sukūrė navikas (vidutinis dydis: 1,5 kubiniame centimetre) 26 dienos po implantacijos. Ne metastazės buvo pastebėtas jos pilvaplėvės, pilvo ertmės, kepenų, blužnies, skrandžio, žarnyno, inkstų, plaučių, ir galvos smegenų. Kitos pelės implantuojami su 2 ir 4 chirurginių egzempliorių neparodė auglio augimą.
Stabilumas implantuoto naviko po patekimas į kelių kartų Viesbutis The navikas, kuris sukurtas nuo 1 chirurginių egzempliorius buvo passaged dešimt kartų. Navikų augimo norma buvo 100% ir kad iš metastazių retroperitoniniame tarpe ir vidaus organų buvo 80-100% (vidutinis 94%), nepriklausomai, ar pirminės audinių ir buvo naudojamas gryną arba užšaldytas (3 lentelę). Vidaus organai metastazės buvo pastebėta limfmazgių aplink stemplę, žemiau skrandžio gleivinės, tunica serosa gastria, blužnies, kepenų portalo ploto, centrinis venae ir sinusų hepaticus, kepenų parenchimos, kepenų kapsulėje, inkstų hilum, inkstų parenchimos, antinksčių, žarnyno serosa, kasos, ir spermaduct (2 pav.). Kartos laikas yra 16 days.Table 3 Stabilumas ir norma metastazių navikų implantuoti skirtingais positionsa
Variable
Ne

augimas implantuoto padėtį (%)
metastazės retroperitoniniame tarpe (%)
vidaus organai (%)
generavimo laikas (dienos)
pravažiavimas skaičius
1ST
5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20
2.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14
3rd
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
4.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
5.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14

6.
5
100 (5/5) 80 (4/5)
100 (5/5)
13
7.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9th
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10.
5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
Saugomi skystame azote
4.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
8-
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
implantuoti kitokios pozicijos
Groins
50

100 (50/50)
94 (47/50) 94 (47/50 )
16
Atgal
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
pažastų
10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10)
14
Po dešimties kartų implantacijos, visos pelės sukūrė naviko augimą ne implantuoti pozicija, ir 94% pelių sukūrė metastazių į retroperitoniniame tarpe ir vidaus organai, nepaisant to, ar navikas šaltinis buvo švieži arba sušaldyti. Vidutinis laikas turint auglį yra 16 dienų. Pelių kirkšnių geriausia Implantacija pozicija, todėl 94% retroperitoniniame tarpe ir vidaus organų metastazių
pav. 2 patologinių tyrimų naviko kad Metastazė į vidaus organus (x 100). Mikro-metastazės buvo pastebėta limfmazgių aplink stemplę (A), žemiau skrandžio gleivinės (B), ir kitose srityse, kaip antai tunica serosa gastria (C), parenchimos pagal kepenų kapsulės (D), kepenų portalo plotas (e ), sinuso hepaticus (f), blužnies (g), venae centralės kepenų (h), kasos (i), inkstų hilum (j), inkstų parenchima (k), antinksčių (L), žarnyno serosa (m), spermaduct (n), ir plaučių (o)
metastazių naviko implantuoti į skirtingose ​​padėtyse
implantacijai į skirtingose ​​padėtyse paveikė metastazių dydžius, bet ne bet kokių naviko augimo normos normą. Implantacija į kirkšnis lėmė 94% retroperitoniniame tarpe ir vidaus organų metastazių; implantacija į nugarą lėmė 30% retroperitoniniame tarpe metastazių ir 10% vidaus organų metastazių; implantacija į pažastų lėmė ne retroperitoniniame tarpe metastazių ir 20% vidaus organų metastazių. Kartos laikas buvo: 16 dienų, auglių implantuoti į groins, 20 dienų tiems, implantuoti į atgal, ir 14 dienų tiems implantuoti pažastų (3 lentelė). Metastazėms, vidaus organai įtraukti kepenims (50%), inkstų (44%), žarnyno (28%), stemplę (12%), kasos (12%), skrandžio (6%), blužnies (6%), ir spermaduct (6 %) (4 lentelė) .table 4 Metastazė į visceraa
implantuoti padėtyje
Nėra
vidaus organai metastazės (%)
Ilgaamžis (%)

Inkstų (%)
Žarnyno (%)
stemple (%)
Kasos (%)
Skrandis (%)

Blužnis (%)
Spermaduct (%)
Groins
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Atgal
10
(1/10)
10 0
0
0
0
0
10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
pažastų
10
30 (3/10)
20 (2/10)
0
0
10 (1/10)
0
0
0
0
kepenų ir inkstų buvo vidaus organai su didžiausia norma metastazių (44-50%), o skrandis, blužnis ir spermaduct buvo mažiausia (6%)
apibūdinimas implantuoto ir metastazavusiu vėžinių Viesbutis The IHC ir realaus laiko PGR rezultatai atskleidė, kad ICAM-1, KLAM-1 ir CK8 /18, bet ne El cad, buvo daugiausia išreiškė operacijos metu ir implantuotos naviko pirminės ir pirmosios kartos (pav. 3). Kaip parodyta 5 lentelėje, pagrindinis ir pirmosios kartos naviko parodė teigiamą dažymas, VCAM-1 ir CK8 /18, tačiau vėlesni kartos parodė silpną dažymo šių baltymų: KLAM-1 dažymo pelnytas, kaip saikingai teigiamas (++) į pirminę, silpnas signalas (+) pirmosios kartos, ir CK8 /18 dažymo pelnytas kaip silpno signalo (+) yra nurodyta pirmosios kartos. Navikai visuose etapuose parodė neigiamą dažymo E-cad, o metastazavusio auglys ne visoms kartoms parodė neigiamą dažymo E-cad, ICAM-1, KLAM-1, ir CK8 /18. Kaip ir transkriptq, mes nustatėme, VCAM-1 mRNR į pirminę ir pirmosios kartos implantuoti naviko bet ne metastazavusio etape. El cad ir ICAM-1 nuorašai nebuvo aptikta visų implantuotus ir metastazavusiu navikų kartoms. Pav. 3 IHC analizė E-cad išraiškos, KLAM-1, ICAM-1 ir CK8 /18 (x 200). CK8 /18 išraiška buvo aptikta chirurginių pavyzdį, naudojamų implantacijos (a) ir į pirminę implantuoti navikų audiniuose (b), bet ne F1 kartos implantuoti navikų audiniuose, (c), buvo išreikšta KLAM-1 chirurginių pavyzdį ( d), ir į pirminę implantuoti navikų audiniuose, (e), bet ne F2 kartos implantuoti navikų audiniuose (f). El cad išraiška nebuvo aptinkamas chirurginiai pavyzdį (G) ir pirminių implantuotų navikinių audinių (H). ICAM-1 buvo išreikšta chirurginių pavyzdį (I) formulėje, bet ne į pirminę implantuoti navikų audiniuose (j)
5 lentelė ekspresijai E-cad, ICAM-1, VCAM-1 ir CK8 /18 navikų ne chirurgija, nuo implantacijos ir metastazių metu
Kintamojo
Nėra
Baltymai expressiona
iRNR expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical pavyzdys
1 -
+++
+++
+++
Pirminis
1
implantuoti navikas -
-
++
+
0
0
0,0927
metastazavęs auglys -
- CR.LT - -
0
0
0
1.
5
Implantatsioonid navikas UAB - (0/5) UAB - (0/5)
+ "(5/5) UAB - (0/5 )
0
0
0,1997
metastazavęs auglys UAB - (0/5) UAB - (0/5) UAB - (5/5) UAB - ( 0/5)
0
0
0
2. ~ 10.
45
Implantatsioonid navikas UAB - (0/45) UAB - (0/45)
- (0/45) UAB - (0/45)
0
0
0
metastazavęs auglys UAB - (0/42) UAB - (0 /42) UAB - (0/42) UAB - (0/42)
0
0
0
aMolecular analizė implantuotus ir metastazavusiu navikų atskleidė neaptinkama išraišką CK8 /18, LT-cad, KLAM-1 ir ICAM-1, išskyrus teigiamą dažymo už VCAM-1 implantuotų navikinių audinių pirmosios kartos
diskusija
Vėžys yra būdingas platinimu, invazijos ir metastazių. Daugiau nei 90% mirtingumo nuo vėžio priežastis yra metastazių taip raginimų intensyvus tyrimus [19]. Metastazės yra sudėtingas ir sunkiai suprantamas procesas, baltymus su funkcijų ląstelių sukibimą, ECM degradacija, ir judrumas [19-21]. Buvo pranešta Daugybė tyrimų skrandžio vėžio metastazių [22-26]. Tačiau dauguma šių tyrimų buvo atliekami in vitro, jei imituojant metastazavusiu procesas, vykstantis in vivo. Tai rodo, skirtą gyvūnų modelyje vėžio metastazių, kad turi tvirtą ir nuoseklų fenotipą poreikį. Šioje studijoje, iš metastazavusiu žmogaus skrandžio vėžio modelis buvo įsteigta poodinio suleistas nuogas pelių su vėžio audiniuose chirurginiu būdu iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu. Visi pelės sukūrė naviko augimą implantuoto pozicijos ir retroperitoniniame tarpe metastazių, o 94% pelių sukūrė metastazių į vidaus organai, nepaisant to, ar navikas šaltinis buvo švieži arba sušaldyti. Implantuoto ir metastazavusiu vėžinių išlaikė tas pačias funkcijas visose kartoms, o vidaus organai metastazės buvo pastebėta limfmazgių aplink stemplę, žemiau skrandžio gleivinę, Apvalkalo serosa gastria, blužnies, kepenų portalo zona, centrinis venae ir sinusų hepaticus, kepenų parenchimos, kepenų kapsulėje, inkstų hilum, inkstų parenchimos, antinksčių liaukos, žarnų serosa ir kasos. Metastazės buvo tvirti šiame pelės modelį. Retroperitoniniame tarpe metastazės galbūt lėmė nuo vėžinių ląstelių disociacija iš implantuoto naviko, įvežimo į kirkšnies liaukų ir transportavimo į retroperitoniniame tarpe. Tai gali sudaryti naviko metastasizing į kepenų portalo ploto, centrinis venae ir sinusų hepaticus, taip pat į tunica serosa gastria, inkstų hilum, antinksčių ir žarnyno serosa. Metastazės taip pat galėjo įvyko per limfmazgius; navikai buvo pastebėta limfmazgių aplink stemplę, žemiau skrandžio gleivinės, blužnies, kasos, inkstų ir parenchimos
Pasirodo metastazių atsiradimo būti priklausomas nuo implantacijos oda svetainėje:. implantacija į kirkšnis lėmė 100% retroperitoninį metastazių ir 94% vidaus organai metastazių; implantacija į nugarą lėmė 30% retroperitoniniame tarpe metastazių, ir 10% vidaus organai metastazių; implantacija į pažastų lėmė ne retroperitoniniame tarpe metastazių ir 20% vidaus organų metastazių. Šis pastebėjimas yra suderinamas su metastazėmis susijęs su naviko augimo mikroaplinkos įskaitant kraujagysles ir limfos pasiskirstymą. Iš tiesų, pelė kirkšnių turi daugiau kraujagysles ir limfos tinklus, kurie suplaukia į pilvo ertmę ir vidaus organų, nei atgal. Nors pažastų turime daug kraujagysles ir limfos tinklus, iš Vena kryptis anterogradinę, ir dauguma limfos prisijungti su plaučių, trachėjos ir pleuros, vietose, kur skrandžio vėžys retai pasireiškia perkelta ". Todėl, paprastas metodas po oda implantacijos vėžinių ląstelių į nuogas pelių groins efektyviai Dėl minėto poveikio metastazavusio žmogaus skrandžio vėžio modelį. Šis modelis turi didesnę vidaus organų metastazes koeficientas nei kad literatūroje [13-18] ir gali būti lengvai taikoma ir kitų rūšių žmogaus vėžio.
Auglys invazija su vėlesniais metastazių yra pagrindinė priežastis, sergamumo ir mirtingumo pacientams, sergantiems vėžys. Vėžys metastazės yra sudėtingas procesas, kuriame naviko ląstelės atskirti nuo pirminio naviko masės, migruoja per kraujagyslių sistemos, išsilieti iš gyslų į kitus audinius ir augti į naujus navikus [27-30]. Tarp šių įvairių procesų, in lipniomis savybių pirminio naviko ląstelių pakeitimas yra esminis veiksnys naviko progresavimo [28]. Tai buvo atskleista, kad ląstelių adhezija yra atsakingas už naviko progresavimo, įtraukiant molekules, kurios vaidina svarbų vaidmenį ląstelių ląstelių sukibimą ir ląstelių matrica sukibimo [31-34]. Mobilusis sukibimas vaidina svarbų vaidmenį šių dviejų skirtingų etapų naviko metastazavusiu procesas - nusišalinimą nuo pirminio naviko ir jo sukibimo su kraujotakos sistemos [27]. Todėl ląstelių adhezijos molekulės atlieka labai svarbų vaidmenį invazija ir metastazių dėl žmogaus navikų įvairovė.
El cad vaidina svarbų vaidmenį ląstelių ląstelių adhezijos į epitelinio audinio [35]. Be to jos vaidmuo normalios ląstelės, tai Ląstelės adhezijos molekulė gali vaidinti svarbų vaidmenį piktybinės ląstelės transformacijos, auglių vystymuisi ir progresavimui. Navikų audinių vientisumo praradimas gali sukelti vietos invazijos [36]. Todėl praradimas funkcija E-cad naviko audiniuose susijęs su invazijos ir metastazių navikų [37]. Tyrimai parodė, kad nukrypęs nuo normos, E-cad išraiška yra susijęs su invaziškumą ir daugiau pažangiosios naviko etape įsigijimo skrandžio vėžio [38-40].
ICAM-1 ir KLAM-1 yra labai svarbūs ląstelių adhezijos molekulių, priklausančių imunoglobulino Super šeima. ICAM-1 funkcijos ląstelių ląstelių ir ECM sukibimo, įskaitant fiziologinio polimorfonuklearinių (PMN) stora sukibimo ir trans endotelio migracijos per leukocitų integrinams limfocitų functionassociated antigeno-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) ir makrofagų-1 antigeno ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. KLAM-aš tarpininkauja ląstelių sukibimą per integrinu [42]. ICAM-1 vaidina svarbų vaidmenį ląstelių ląstelių ir ląstelių ECM sąveiką, ypač naviko invazija ir citotoksiškumo limfocitų. Tyrimai parodė, kad teigiamas išraiška rodiklis ICAM-1 buvo susijęs su limfmazgių metastazių ir gylio naviko invazijos, ir KLAM-1 išraiškos teigiami skrandžio vėžio buvo daugiau invazinių ir buvo susiję su daugiau metastazių limfmazgiuose nei KLAM-1 išraiškos neigiamas tie [43-45]. Citokeratino ant visų epitelio ląstelių, kai kurie ne epitelio ląstelių, ir dauguma vėžinių ląstelių. Į citokeratinams, priklausanti Tarpinė gija (IF) baltymų šeimai, yra pirminiai komponentai ragų ląstelių ir išlaiko epitelinių audinių organizaciją. Tyrimais nustatyta, kad citokeratinams yra labai gerai išsaugota ir svarbus audinių diferenciacijos. Šiuo metu, buvo nustatė, kad daugiau nei 20 skirtingų citokeratinams [46], iš kurių CK8, 18, ir 19 yra gausiausias paprastų epitelio ląstelių. Šioje tyrimo duomenimis, IHC ir AT-PGR rezultatai atskleidė, kad E-cad išraiška yra neigiamas, ir kad ICAM-1, KLAM-1 ir CK8 /18 yra teigiamas chirurginių pavyzdį naudojamų implantacijos, suderinamas su pastaruosius tyrimuose [38, 40, 43, 45]. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Atsparumas nuo suirimo didžiajame skrandyje bakterijų murein galvijų skrandžio lysozyme
• Vėžio susijęs fibroblastai yra teigiamai koreliuoja su metastazavusiu potencialo žmogaus skrandžio cancers