Vaststelling en karakterisering van een metastase model van menselijke maagkanker in naakt mice

vestiging en karakterisering van een metastase model van menselijke maagkanker in naakt muizen
Abstracte achtergrond
een muismodel van uitzaaiing van menselijke maagkanker is één van de belangrijkste hulpmiddelen voor het bestuderen van de biologische mechanismen bij menselijke maagkanker metastase. In dit artikel hebben we een muismodel van uitgezaaide menselijke maagkanker in naakt muizen die een hoger percentage van tumorvorming en metastase dan de bestaande modellen heeft.
Methoden Belgique Om het muismodel van uitgezaaide menselijke maagkanker te genereren, vers tumorweefsels van patiënten die een operatie hebben ondergaan voor maagkanker werden subcutaan geïmplanteerd in de rechter en linker liezen van naakt muizen. Wanneer het geïmplanteerde weefsel gegroeid tot 1 kubieke centimeter, werden de muizen gedood en de tumor weefsels werden onderzocht en gereseceerd. De tumorweefsels werden geïmplanteerd in naakt muizen en onderworpen aan pathologisch onderzoek, immunohistochemische kleuring en real-time PCR voor cytokeratine 8/18 (CK8 /18), E-cadherine, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) en intercellulaire adhesiemolecuul-1 (ICAM-1). De muizen werden ook geanalyseerd op metastase in hun peritoneum, buikholte en inwendige organen door histopathologisch onderzoek. Weefsel dat uit deze organen werden onderzocht op pathologische resultaten.
Na tien generaties implantatie, alle muizen ontwikkelden tumorgroei bij de geïmplanteerde positie 94% van de muizen ontwikkelden metastase de retroperitoneum en ingewanden. De geïmplanteerde en metastatische tumor behouden dezelfde histologische kenmerken in alle generaties en metastasen werd waargenomen in de slokdarm, maag, milt, lever, nier, bijnier, darm en pancreas. Deze metastatische tumoren toonde geen detecteerbare expressie van CK8 /18, E-cadherine, VCAM-1 en ICAM-1.
Conclusies
Dit model wordt als waardevol hulpmiddel om het metastatische proces van menselijke maagkanker dienen.
Trefwoorden
karakterisering Establishment Maagkanker metastase muismodellen Achtergrond
Maagkanker is de vierde meest voorkomende kanker en de tweede belangrijkste oorzaak van sterfgevallen door kanker alleen voor longkanker in de wereld [1]. Hoewel de prognose van patiënten met vroege maagkanker is duidelijk verlengd door de huidige methoden voor diagnose en behandeling, de 5-jaarsoverleving na de diagnose van maagkanker patiënten met alle stadia is < 50% [2]. Metastase is goed voor een deel voor de hoge sterfte aan maagkanker. Het percentage patiënten met maagkanker sterven peritoneum metastase ongeveer 50% [3]. Daarom heeft een metastase focus van veel maagkanker studies worden. Metastase is een zeer complex proces, waarbij meerdere opeenvolgende stappen [4]. Genen geassocieerd met celadhesie, beweeglijkheid, proliferatie, overleving, metabolisme en signaaltransductie spelen een belangrijke rol in kanker metastase [5-8]. Hoe deze eiwitten samen te werken om te bevorderen metastase slecht begrepen blijft.
Een muismodel van uitgezaaide maagkanker is een uiterst waardevol instrument bij het begrijpen van het metastatische proces. De eerste menselijke carcinoma model in naakt muizen werd opgericht in 1969 door Rygaard en Povlsen door middel hypodermical transplantatie van menselijke darmkanker weefsel [9]. Hoewel de getransplanteerde tumor kwaadaardig zijn kenmerken behouden, verloor het metastatisch potentieel, en de originele structuur en het gedrag van de tumor veranderde [10]. Een metastatische model van humane darmkanker werd eerst geconstrueerd door Morikawa in 1988 met menselijke darmkankercellen subserously geïmplanteerd in caecum [11]. Dit model toonde orthotope tumorgroei en de lever metastase. Furukawa verder gemodificeerd dit model in 1993 door chirurgisch stikken menselijke maagkanker weefsel in de tunica serosa gastria van naakt muizen [12]. Dit model ontwikkelde tumoren krachtig en vertoonden een zeer hoge mate van metastase naar de lever. Aangezien verstoring van de hechting van het tumorweefsel verandert de biologische en maligne gedrag, de muismodellen beschreven behield de integriteit van de tumoren waardoor een "patiënt-like-model" [13, 14]. Hierna hebben veel muismodellen van metastatische menselijke maagkanker gegenereerd door orthotope transplantatie van maagkanker weefsel [15-18] Ondernemingen De muismodellen van metastatische menselijke maagkanker gemeld tot nu toe meerdere uitdagingen met zich meebrengen.; de orthopedische implantatie in naakt muizen een operatie nodig, en de tumor weefsel geïmplanteerd waren afkomstig van menselijke maagkanker cellijn in plaats van de patiënten. Dientengevolge, de procedure duurt lang en kunnen zware bloeden en dood in muizen veroorzaken. Ofschoon de snelheid van orthotope tumorvorming bijna 80-100%, het percentage van metastase minder hoog; de levertumor metastatische tarieven waren 45-60% [16, 17] en dat het buikvlies van een slechts 40% [18]. Aldus oprichting van deze muizen kunnen profiteren van verbeterde werkwijzen die transplantatie zou vergemakkelijken en resulteren in een meer robuuste metastase. In dit rapport beschrijven we een muismodel van uitgezaaide menselijke maag kanker die de problemen van de vorige muismodellen adressen. Hebben we onze muismodel van uitgezaaide menselijke maag kanker door middel van subcutane implantatie van tumor weefsels chirurgisch direct afgeleid van patiënten met maagkanker. In vergelijking met andere muismodellen eerder beschreven, deze muis model vormt tumoren in een hoog tempo en wat nog belangrijker is, toont robuust metastase.
Methods
Ethics statement
Alle protocollen die het gebruik van proefdieren en tumor weefsel van patiënten met maagkanker in deze studie werden goedgekeurd door de ethische commissie of Medicine and Science Research Institute of provincie Gansu (proefdieren Science group en klinische trial groep, referentienummer: P201108150024), de goedgekeurde programma's die het verzamelen, verwerken en implantatie van de tumor weefsels van patiënten met maagkanker, en de resectie, de opslag en behandeling van de tumor weefsel van naakt muizen. Alle deelnemers aan de studie verstrekt geïnformeerde toestemming om deel te nemen aan het onderzoek.
Dieren en klinische tumorweefsels
BALB /C naakt muizen op 4-6 weken oud en 16-18 g in gewicht, zowel mannen als vrouwen, werden verstrekt door Shanghai Tumor Instituut en gefokt in specifieke pathogeenvrije (SPF) conditie. Tumorweefsels werden verkregen van patiënten met maagkanker die een operatie in de Gansu tumor ziekenhuis onderging. De frisse tumor weefsels werden geïmplanteerd onmiddellijk na de resectie. Klinische gegevens van de patiënten zijn opgenomen in Tabel 1.Table 1 klinische gegevens
Samplea
Histopathologic indeling
klinische fasen
Rate van lymfeklier metastase

1
slecht gedifferentieerd adenocarcinoom
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2
matig gedifferentieerd adenocarcinoom
PT4aN0M0 IIb
0/12
3
colitis typ matig gedifferentieerd adenocarcinoom
PT4aN0M0 IIb
0/30
4
slecht gedifferentieerd adenocarcinoom
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
een 1e en 4e maagkanker weefsel waren slecht gedifferentieerd adenocarcinoom en hebben lymfeknoop metastase. 2e en 3e werden matig gedifferentieerd adenocarcinoom en hebben geen lymfeklier uitzaaiingen
Subcutane implantatie van verse tumorweefsels in naakt muizen
De frisse tumor weefsel resectie van patiënten met maagkanker werden tot 1 kubieke millimeter stukken die met DMEM werden verdund gesneden medium en daarna subcutaan geïmplanteerd in de rechter en linker oksels en liezen van naakt muizen met 16-gague naald onder aseptische toestand. Elk monster werd geïmplanteerd vier muizen, 5-6 stuks (0,8 ml) per muis. De naakt muizen werden vervolgens gekweekt in SPF staat, en de tumorgroei op naakt muizen dagelijks onderzocht. Zodra de tumor op de naakt muizen gegroeid tot 1 kubieke centimeter werd de muis gedood door cervicale dislocatie en de tumorweefsels onderzocht en gereseceerd aseptische toestand. Het tumorweefsel van elke muis werd in drie delen - on werd toegepast voor een andere ronde van implantatie in naakt muizen, werd de andere gefixeerd in 10% formaldehyde voor pathologisch onderzoek en immunohistochemische (IHC) kleuring CK8 /18, E-cadherine, VCAM-1 en ICAM-1, de derde was opgeslagen in vloeibare stikstof en bij -80 ° C voor real-time PCR-analyse van CK8 /18, E-cadherine, VCAM-1 en ICAM-1. De muizen werden uitgesneden en onderzocht op tumormetastase in het peritoneum, buikholte, lever, milt, maag, darmen, nieren, longen en hersenen. Verzamelde weefsels werden gefixeerd in 10% formaldehyde voor pathologisch onderzoek.
Vaststelling en karakterisering van muismodel van metastatische menselijke maagkanker
uitgesneden tumorweefsel werd subcutaan geïmplanteerd naar rechts en links liezen van 5 naakt muizen onder aseptische toestand middels 5-6 stuks (0,8 ml) per muis. Het snijden en verdunnen van tumorweefsel, groei onderzoek en resectie van de tumor in de naakt muizen, opslag en behandeling van het geïmplanteerde tumorweefsels, metastatische tumorweefsels en muis lichamen werden verwerkt zoals hierboven beschreven. Geïmplanteerde tumorweefsels werden gepasseerd tien generaties.
Onderzoeken effect van de plaats van implantatie op de snelheid van metastase
Zoals beschreven, werd het geïmplanteerde menselijke maagkanker weefsel van naakt muizen subcutaan geïmplanteerd drie groepen naakt muizen op verschillende plaatsen onder aseptische conditie. Een gemiddelde van 5-6 stukken werden geïmplanteerd in muizen, één groep die het weefsel aan de rechter en linker liezen, de andere groep aan de rechter en linker oksels en de derde op twee plaatsen in de rug. Zoals hierboven vermeld, werden groei onderzoek en resectie van de tumor in naakt muizen verwerkt. Verdere analyses opgenomen onderzoek van tumorgroei op verschillende plaatsen en uitzaaiingen in het buikvlies en de buikholte.
Implantatie en metastase van eerder bevroren en gepasseerd menselijke maagkanker weefsel in naakt muizen
De geïmplanteerde menselijke maagkanker weefsels gepasseerd van de vierde en achtste generatie van implantatie in naakt muizen werden opgeslagen in vloeibare stikstof en subcutaan geïmplanteerd in naakt muizen rechts en links liezen zoals hierboven beschreven. Verdere analyses opgenomen onderzoek van tumorgroei op verschillende plaatsen en uitzaaiingen in het buikvlies en de buikholte.
Pathologisch onderzoek van de geïmplanteerde en metastatische menselijke maag weefsels van naakt muizen
De geïmplanteerde en metastatische menselijke maagkanker weefsels van naakt muizen werden in 10% formaldehyde gefixeerd, ingebed in paraffine, gesneden in secties, gekleurd met hematoxyline-eosine kleuring (HE). De objectglaasjes werden geëvalueerd onder gebruikmaking van een Olympus BX50 lichtmicroscoop en beeldacquisitie werd uitgevoerd door Mias pathologische werkstation 4.0 systeem.
IHC
de expressieniveaus van E-cadherine, VCAM-1, ICAM-1, en CK8 /18 werden onderzocht door immunohistochemie in de geïmplanteerde en metastatische tumorweefsels van naakt muizen en in de chirurgische monsters voor implantatie. Gedeelten voor kleuring werden verkregen van de chirurgische specimens, de geïmplanteerde en metastatische tumor weefsels en de weefsels die metastatische tumoren bevatten. Reagentia die gebruikt worden voor het kleuren waren SP-9000 Histostain ™ -plus Kits, 3-3'-Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) Kits, primaire muis monoklonale antilichamen tegen E-cadherine (1: 200 verdunning), ICAM-1 (1: 500 verdunning) , en primaire konijn polyklonaal antilichaam tegen VCAM-1 (1: 500 verdunning) (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnologie Co, Ltd, Beijing, China). De IHC kleuring glaasjes werden onafhankelijk beoordeeld door twee pathologen, en een verschil in de beslissing uitkomst werd opgelost door consensus. Kleuring intensiteit werd beoordeeld als negatief, zwak, matig of sterk. De lichtmicroscoop en het beeld acquisitie software waren hetzelfde als hierboven.
Totaal RNA-extractie en real-time PCR
Totaal RNA werd geëxtraheerd door Trizol (Sheng gong Biotechnology, Shanghai, China) van de geïmplanteerde en metastatische tumor weefsels die groeide in naakt muizen en de chirurgische monsters voor implantatie volgens de instructies van de fabrikant. Het cDNA werd gesynthetiseerd door reverse transcriptase (Sheng Gong Biotechnology) volgens de aanbevelingen van de fabrikant. De SYBR premix Ex TaqTM (TaKaRa Biotechnology, Dalian, China) werd gebruikt voor de real-time PCR. De 20-ul reactie bevatte 10 pi SYBR premix Ex TaqTM, 1 pl DNA-matrijs, 0,4 ul elke primer en 8,2 ui dH 20. De PCR cycling toestand was: 37 ° C gedurende 5 min, 95 ° C gedurende 30 s en 40 cycli van 95 ° C gedurende 5 s bij 60 ° C gedurende 30 s. De β-actine mRNA werd gebruikt als interne controle en het reactiemengsel zonder template-DNA werd gebruikt als negatieve controle. Alle monsters werden gemeten 3 maal onafhankelijk en kwantitatieve PCR data werden geanalyseerd met de vergelijkende CT methode. Kort samengevat is het verschil in cyclus drempelwaarde, OCT, werd bepaald als het verschil tussen de geteste gen en humaan β-actine. Vervolgens ΔΔCT verkregen door het vinden van het verschil tussen de twee groepen. De vouw verandering werd berekend als 2 -ΔΔCT. De primers worden in tabel 2.Table 2 Primers gebruikt in de real-time PCR
Gene
Forward primer
Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Resultaten
vorming en metastase Tumor
Van de vier muizen geïmplanteerd met de 1e chirurgische specimens enige ontwikkelde tumor op de plaats van implantatie op 76 dagen (fig. 1a). Vijfentwintig dagen later werd de muis gedood door cervicale dislocatie en geanalyseerd op tumoren. Tumorweefsel bij een gemiddelde van 1 kubieke centimeter groot, getoond een intact envelop en harde textuur (fig. 1b). Metastase in het retroperitoneum werd gevonden door visuele inspectie (fig. 1c). Geen metastase werd gedetecteerd in het peritoneum, buikholte, lever, milt, maag, darmen, nieren, longen en hersenen. Fig. 1 metastatische tumorgroei van de geïmplanteerde maagkanker weefsel chirurgisch verkregen (X 400). a, b: Geïmplanteerd kankerweefsel groeide uit tot ~ 1 kubieke centimeter en weergegeven een intacte envelop en harde textuur; c: Tumor uitgezaaid in de muis retroperitoneum; d, e: De geïmplanteerde weefsel en metastatische tumoren bestaat uit slecht gedifferentieerd carcinoom cellen en enkele mesenchym cellen en bloedvaten, met enige gelijkenis met glandulaire holte. De kankercellen toonde donker gekleurde kernen en weinig cytoplasma en miste de normale verhouding tussen kern en cytoplasma; f: Geïmplanteerde tumor toont weefselinfiltratie
Pathologische analyse bleek dat de geïmplanteerde en metastatische tumor weefsels bestond uit slecht gedifferentieerde carcinoomcellen, en slechts een weinig mesenchym en bloedvaten. Deze weefsels lijken gediffundeerd, ontbrak structuur en lijken glandulaire lumen. Bovendien getoonde cellen donker gekleurde kernen, weinig cytoplasma en misproportioned kernen en cytoplasma (fig. 1d, e, f). Vergelijkbare resultaten werden verkregen in een parallelle studie met implantatie van de tumor weefsel in 4 muizen; slechts één muis ontwikkelde tumor (gemiddelde grootte: 1,5 kubieke centimeter) 26 dagen na de implantatie. Geen metastasen werd waargenomen in het peritoneum, buikholte, lever, milt, maag, darmen, nieren, longen en hersenen. De andere muizen geïmplanteerd met de 2e en 4e chirurgische monsters toonde geen tumorgroei.
Stabiliteit van de geïmplanteerde tumor volgende passage in meerdere generaties
De tumor die zich ontwikkelde vanaf de 1e chirurgische specimen werd gepasseerd voor tien generaties. De snelheid van tumorgroei was 100% en die van metastase in retroperitoneale en ingewanden was 80-100% (gemiddeld 94%), ongeacht of het primaire weefsel werd gebruikt vers of bevroren (Tabel 3). De ingewanden metastasen werd waargenomen in de lymfeknopen rond slokdarm hieronder maagslijmvlies, tunica serosa gastria, milt, lever havengebied, centrale venae en sinus hepaticus, leverparenchym, levercapsule, renale hilus, nierparenchym, bijnier, darm serosa, pancreas en spermaduct (fig. 2). De generatie tijd is 16 days.Table 3 Stabiliteit en snelheid van de uitzaaiing van tumoren geïmplanteerd bij verschillende positionsa
Variable-verhuur No
Groei in geïmplanteerde positie (%)
metastase retroperitoneum (%)
Viscera (%)
Generation (dagen)
Passage aantal
1
5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20
2
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14
3
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
4
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
5
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
6
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
13
7
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10
5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
opgeslagen in vloeibare stikstof
4
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
8
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
Implantatie in verschillende positie
Groins
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16
Terug
10 | 100 (10/10)
30 (10/03)
10 (1/10)
20
Benen
10 | 100 (10/10)
0 (0/10)
30 (10/03)
14
Na tien generaties van de implantatie, alle muizen ontwikkelden tumorgroei bij de geïmplanteerde positie, en 94% van de muizen ontwikkelden uitzaaiingen naar de retroperitoneum en de ingewanden, ongeacht of de tumor bron was vers of bevroren. De gemiddelde tijd van het dragen van de tumor is 16 dagen. De lies van muizen beste Implantatie positie, wat resulteert in 94% retroperitoneale en ingewanden metastase
Fig. 2 Pathologisch onderzoek van de tumor uitgezaaid naar de ingewanden (X 100). Micro-metastasen werd waargenomen in de lymfeklieren rond de slokdarm (a), onder het maagslijmvlies (b), en in andere gebieden zoals tunica serosa gastria (c), parenchym onder hepatische capsule (d), lever havengebied (e ), sinus hepaticus (f), milt (g), venae Centrals lever (h), pancreas (i), renale hilus (j), nierparenchym (k), bijnier (l), ingewanden serosa (m), spermaduct (n) en long (o) Ondernemingen de mate van metastase van de tumor geïmplanteerd in verschillende posities
implantatie in verschillende posities beïnvloedde de snelheid van metastase maar niet de snelheid van tumorgroei. Implantatie in de lies resulteerde in 94% retroperitoneale en ingewanden metastase; implantatie in de rug resulteerde in 30% retroperitoneale metastasen en 10% ingewanden metastase; implantatie in oksels leverde geen retroperitoneale metastasen en 20% ingewanden metastase. De generatietijd was: 16 dagen voor tumoren geïmplanteerd in de liezen, 20 dagen voor die geïmplanteerd in de rug, en 14 dagen voor die geïmplanteerd in de oksels (tabel 3). De metastatische ingewanden opgenomen lever (50%), nieren (44%), darm (28%), slokdarm (12%), pancreas (12%), maag (6%), milt (6%) en spermaduct (6 %) (tabel 4) .table 4 metastase in de visceraa
geïmplanteerde positie verhuur No
ingewanden metastase (%)
lever (%)

Kidney (%)
Darm (%)
slokdarm (%)
alvleesklier (%)
Maag (%)

Spleen (%)
Spermaduct (%)
Groins
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Terug
10 | 10 (1/10)
0
0
0
0
0
10 ( 10/01)
10 (1/10)
0
Benen
10 | 30 (10/03)
20 (10/02)
0
0
10 (1/10)
0
0
0
0
lever en nieren waren de ingewanden met het hoogste tarief van metastase (44-50%), en de maag, milt en spermaduct was de laagste (6%)
Karakterisering van de geïmplanteerde tumor en metastatische
IHC en real-time PCR resultaten lieten zien dat ICAM-1, VCAM-1 en CK8 /18, maar niet E-cadherine werden voornamelijk tot expressie in chirurgie en in de geïmplanteerde tumor primaire en eerste generatie (Fig. 3). Zoals getoond in Tabel 5, de primaire en de eerste generatie van de tumor vertoonde positieve kleuring voor VCAM-1 en CK8 /18, maar de volgende generaties toonde zwakke kleuring voor deze eiwitten: VCAM-1 kleuring werd gescoord als gematigd positief (++) in de primaire, zwak signaal (+) in de eerste generatie, en CK8 /18 kleuring werd gescoord als zwak signaal (+) in de eerste generatie. Tumoren in alle stadia toonden negatieve kleuring van E-cadherine, terwijl metastatische tumor geslacht toonden negatieve kleuring van E-cadherine, ICAM-1, VCAM-1 en CK8 /18. Wat de transcripten detecteerden we VCAM-1 mRNA in de primaire en eerste generatie geïmplanteerde tumor maar niet in de metastatische fase. E-cadherine en ICAM-1 transcripten werden niet gedetecteerd in alle generaties geïmplanteerde en metastatische tumoren. Fig. 3 IHC analyse van de expressie van E-cadherine, VCAM-1, ICAM-1 en CK8 /18 (X 200). CK8 /18 expressie werd gedetecteerd in het chirurgische monster voor implantatie (a) en de primaire geïmplanteerde tumorweefsels (b), maar niet in de F1-generatie geïmplanteerde tumorweefsels (c), VCAM-1 werd uitgedrukt in de chirurgische specimen ( d) en in de primaire geïmplanteerde tumorweefsels (e), maar niet in de F2 generatie geïmplanteerde tumorweefsels (f). E-cadherine-expressie was niet detecteerbaar in het chirurgische monster (g) en de primaire geïmplanteerde tumorweefsels (h). ICAM-1 werd uitgedrukt in de chirurgische monster (i), maar niet in de primaire geïmplanteerde tumorweefsels (j)
Tabel 5 expressie van E-cadherine, ICAM-1, VCAM-1 en CK8 /18 in de tumoren op chirurgie, bij implantatie en tijdens metastase
Variable-verhuur No
Protein expressiona
mRNA expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical specimen
1
- +++
+++
+++
Primary 1
geïmplanteerde tumor
- -
++
+
0
0
0,0927
gemetastaseerde tumor
- - Frankrijk -
- 0
0
0
1
5
geïmplanteerde tumor
- (0/5)
- (0/5)
+ (5/5)
- (0/5 )
0
0
0,1997
gemetastaseerde tumor
- (0/5)
- (0/5)
- (5/5)
- ( 0/5)
0
0
0
2 ~ 10
45
geïmplanteerde tumor
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
0
0
0
gemetastaseerde tumor
- (0/42)
- (0 /42)
- (0/42)
- (0/42)
0
0
0
aMolecular analyse van de geïmplanteerde en uitgezaaide tumoren bleek geen detecteerbare expressie van CK8 /18, E-cadherine, VCAM-1 en ICAM-1, behalve positieve kleuring voor VCAM-1 in de geïmplanteerde tumorweefsels van de eerste generatie
Discussie
Kanker wordt gekenmerkt door proliferatie, invasie en metastase. Meer dan 90% van de sterfte aan kanker wordt veroorzaakt door metastase daardoor intensief onderzoek [19] gevraagd. Metastase is een ingewikkelde en slecht begrepen proces waarbij eiwitten met functies in cel adhesie, ECM degradatie, en de beweeglijkheid [19-21]. Talrijke studies over maagkanker metastasen zijn gerapporteerd [22-26]. De meeste van deze studies werden uitgevoerd in vitro, niet de metastatische proces dat plaatsvindt in vivo na te bootsen. Dit duidt op een behoefte aan een diermodel van kanker metastase die een robuuste en consistente fenotype heeft. In de huidige studie, een model van metastatische menselijke maagkanker werd opgericht door onderhuidse inenting in naakt muizen met kanker weefsels chirurgisch verkregen van patiënten met maagkanker. Alle muizen ontwikkelden tumorgroei bij de geïmplanteerde positie en retroperitoneum metastase en 94% van de muizen ontwikkelden metastasen naar de ingewanden, ongeacht of de tumor bron was vers of bevroren. De geïmplanteerde en uitgezaaide tumor behouden dezelfde functies in alle generaties, en de ingewanden metastase werd waargenomen in de lymfeklieren rond de slokdarm, onder het maagslijmvlies, tunica serosa gastria, milt, lever portal gebied, Centraal venae en sinus hepaticus, leverparenchym, lever capsule, nier navel, nier- parenchym, bijnier, darm serosa en alvleesklier. Metastase was robuust in dit muismodel. De retroperitoneale metastasen mogelijk het gevolg van de dissociatie van tumorcellen uit de geïmplanteerde tumor, inbrengen in de inguinale klieren en transport naar de retroperitoneum. Dit kan verantwoordelijk zijn voor de tumor uitzaaiingen in lever havengebied, centrale venae en sinus hepaticus, alsook naar tunica serosa gastria, renale hilus, bijnier en darmen serosa. Metastase kan ook zijn opgetreden door de lymfeknopen; tumoren waargenomen in de lymfeklieren rond de slokdarm, onder maagslijmvlies, milt, alvleesklier en nieren parenchym
Het voorkomen van metastase wordt afhankelijk van de plaats van implantatie subcutaan zijn. implantatie in de lies resulteerde in 100% retroperitoneale metastasen en 94% ingewanden metastase; implantatie in de rug resulteerde in 30% retroperitoneum metastase en 10% ingewanden metastase; implantatie in oksels leverde geen retroperitoneale metastasen en 20% ingewanden metastase. Deze waarneming is consistent met metastase geassocieerd met tumorgroei micro waaronder bloedvaten en lymfe distributie. Inderdaad, de muis lies meer bloedvaten en lymfe netwerken die uitmonden in buikholte en de ingewanden dan de rug. Hoewel de oksels rijke bloedvaten en lymfatische netwerken, de richting van de vena is anterograde, en vooral lymfe verbinden longen, de luchtpijp en de pleura, plaatsen waar maagkanker zelden wordt getransloceerd. Daarom is de eenvoudige wijze van subcutane implantatie van kankercellen in de liezen van naakt muizen efficiënt resulteert in een model van metastatische menselijke maagkanker. Dit model heeft een hogere ingewanden metastase snelheid dan die in de literatuur [13-18] en kan gemakkelijk worden toegepast op andere vormen van kanker bij de mens.
Tumorinvasie latere uitzaaiingen is de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit bij patiënten met kanker. metastase kanker is een complex proces waarin tumorcellen te scheiden van de primaire tumormassa, migreren door het vasculaire systeem, extravaseren in andere weefsels en uitgroeien tot nieuwe tumoren [27-30]. Van deze verschillende werkwijzen, een verandering in de klevende eigenschappen van de primaire tumorcellen is een kritische factor voor tumorprogressie [28]. Het is gebleken dat celhechting verantwoordelijk voor tumorprogressie, waarbij moleculen die een rol spelen bij cel-cel adhesie en cel-matrix adhesie [31-34] spelen. Celadhesie speelt een belangrijke rol bij de twee verschillende stadia van de tumor metastasering - het losmaken van de primaire tumor en de hechting aan de bloedsomloop [27]. Daarom celadhesiemoleculen spelen een cruciale rol in de invasie en metastase van een verscheidenheid van menselijke tumoren.
E-cadherine een belangrijke rol speelt in cel-celadhesie in epitheliale weefsels [35]. Naast zijn rol in normale cellen, kan deze celadhesie molecuul een belangrijke rol spelen bij maligne celtransformatie, tumorontwikkeling en progressie spelen. Het verlies van tumorweefsel integriteit kan leiden tot lokale invasie [36]. Daarom functieverlies van E-cadherine in tumorweefsel correleert met invasiviteit en metastase van tumoren [37]. Studies hebben aangetoond dat afwijkende E-cadherine-expressie is geassocieerd met de acquisitie van invasiviteit en verder gevorderd stadium tumoren maagkanker [38-40].
ICAM-1 en VCAM-1 zeer belangrijk celadhesiemoleculen die behoren tot de immunoglobuline superfamilie. De ICAM-1 functies bij cel-cel- en ECM adhesie, waaronder fysiologische polymorfonucleaire (PMN) strakke adhesie en trans endotheliale migratie via de leukocyt-integrinen lymfocyt functionassociated antigen-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) en macrofaag-1 antigen ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. De VCAM-I medieert cellulaire adhesie via integrine [42]. ICAM-1 speelt een belangrijke rol in cel-cel en cel-ECM interacties bijzonder tumorinvasie en cytotoxiciteit van lymfocyten. Studies hebben aangetoond dat de positieve expressiesnelheid van ICAM-1 werd in verband met lymfeknoop metastase en diepte van tumorinvasie en het VCAM-1-expressie positief maagkanker waren meer invasieve en werden geassocieerd met meer lymfeknoop metastasen dan VCAM-1 expressie negatief degenen [43-45]. Cytokeratine op alle epitheelcellen, enkele niet-epitheliale cellen en de meeste tumorcellen. De cytokeratinen, behoren tot de intermediaire filamenten (IF) eiwitfamilie, zijn de primaire componenten van hoorncellen en onderhoudt de organisatie van epitheliale weefsels. Studies hebben aangetoond dat het cytokeratine zeer sterk geconserveerd en belangrijk voor weefseldifferentiatie. Momenteel zijn meer dan 20 verschillende cytokeratines geïdentificeerd [46], waarvan CK 8, 18 en 19 zijn de meest voorkomende eenvoudige epitheelcellen. In deze studie, de IHC en RT-PCR resultaten bleek dat de expressie van E-cadherine negatief, en die van ICAM-1, VCAM-1 en CK8 /18 positief in de chirurgische specimen gebruikt voor implantatie, in overeenstemming met eerdere studies [38, 40, 43, 45]. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Verzet van pensbacteriën mureïne boviene maag lysozym
• Kanker geassocieerde fibroblasten zijn positief gecorreleerd met metastatische potentieel van menselijke maagkanker