Vznik a charakterizácia metastáz modelu ľudského karcinómu žalúdka u nahých mice

zriadenie a charakterizáciu metastáz modelu ľudského karcinómu žalúdka u nahých myší
abstraktné
pozadia
myšiam modeli metastázy ľudskej rakoviny žalúdka je jedným z najdôležitejších nástrojov pre štúdium biologické mechanizmy, na ktorých rakovina žalúdka metastáz. V tomto článku sme založili na myšom modeli metastatické rakovina žalúdka u nahých myší, ktoré má vyššiu rýchlosť tvorby nádorov a metastáz než existujúce modely.
Metódy
Ak chcete vygenerovať na myšom modeli ľudského metastatického karcinómu žalúdka, čerstvý nádorového tkaniva od pacientov, ktorí podstúpili operáciu pre rakovinu žalúdka boli podkožne implantované do pravého a ľavého triesla nahých myší. Keď je implantovaný tkaniva zvýšil na 1 centimeter kubický, boli myši utratia a nádorové tkanivá boli skúmané a resekcia. Nádorového tkaniva boli implantované do holých myší a podrobí sa patologické vyšetrenie, imunohistochemické farbenie, a real-time PCR pre cytokeratin 8/18 (CK8 /18), E-cadherin, vaskulárne adhézny molekula-1 (VCAM-1) a medzibunkových adhézne molekula-1 (ICAM-1). Myši boli tiež analyzované na metastázy v ich peritonea, brušnej dutiny, a vnútorných orgánov u histopatologické vyšetrenie. Tkanivá odobraté z týchto orgánov boli skúmané na patológiu.
Výsledky
Po desiatich generáciách implantácie, u všetkých myší vyvinula rastu nádoru v implantované polohe, 94% myší vyvinula metastasis retroperitonea a vnútorných orgánov. Implantovaný a metastatické nádor udržiavané rovnaké histologické vlastnosti naprieč generáciami, a metastázy bol pozorovaný v pažeráku, žalúdku, sleziny, pečene, obličiek, nadobličiek, čreva, pankreasu a. Tieto metastatických nádorov z neodhalili žiadnu detekovateľnú expresiu CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 a ICAM-1.
Závery
modelu bude slúžiť ako hodnotný nástroj pre pochopenie metastatického procesu ľudského karcinómu žalúdka.
Kľúčové slová
modely Charakteristika Vznik Žalúdočné rakovina metastázy Mouse pozadia
rakovinou žalúdka je štvrtou najčastejšou zhubné bujnenie a druhou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu len na rakovinu pľúc na svete [1]. Aj keď prognóza pacientov s počiatkom karcinómu žalúdka bola predĺžená odlišne od súčasných metódach diagnostiky a liečby, 5-ročné prežitie po stanovení diagnózy u pacientov s karcinómom žalúdka u všetkých fázach je < 50% [2]. Metastázy účty v časti pre vysokej úmrtnosti na rakovinu žalúdka. Podiel pacientov s rakovinou žalúdka umiera pobrušnice metastáz je približne 50% [3]. Z tohto dôvodu, metastázy sa stal ohniskom mnohých štúdiách s karcinómom žalúdka. Metastáza je veľmi zložitý proces, ktorý zahŕňa niekoľko po sebe idúcich krokov [4]. Gény so vzťahom k adhézii buniek, pohyblivosti, množenia, prežitie, metabolizmus, a prenos signálu hrajú dôležitú úlohu v nádorových metastáz [5-8]. Ako tieto proteíny pracujú spoločne na podporu metastáz zostáva zle pochopený.
Myšiam modelu metastatického karcinómu žalúdka je veľmi cenným nástrojom pre pochopenie metastatického procesu. Prvý model ľudského karcinómu u holých myší bola stanovená v roku 1969 a Rygaard Povlsen prostredníctvom hypodermical transplantácii ľudských tkanív hrubého čreva [9]. Aj keď sa transplantovaný nádor udržal jeho malígny vlastnosti, to stratilo jeho metastatické potenciál, a pôvodná štruktúra a správanie nádoru zmenila [10]. Metastatickým model ľudskej rakoviny hrubého čreva bol najprv konštruovaný Morikawa v roku 1988 za použitia ľudského karcinómu hrubého čreva subserously implantované do slepého čreva [11]. Tento model ukázal ortotopické nádorový rast a pečeňových metastáz. Furukawa ďalej upravená tento model v roku 1993 chirurgicky šitím rakovina žalúdka u ľudí tkanivo do tunica seróza Gastria u nahých myší [12]. Tento model vyvinutý nádory robustne a vykazovali veľmi vysokú rýchlosť metastáz do pečene. Vzhľadom k tomu, narušenie adhézie nádorového tkaniva mení svoj biologický a malígne povahy, že myšou modely popísané zachovala celistvosť nádorov, ktoré umožňujú pre "pacienta-ako-model" [13, 14]. Ďalej, mnoho modelov myš metastatické ľudskej rakoviny žalúdka boli generované ortotopické transplantácii žalúdočného karcinómu tkaniva [15-18]
myších modeloch metastatické rakovina žalúdka u ľudí hlásené doposiaľ predstavovať niekoľko problémov .; orthotic implantácia do nahých myší vyžaduje chirurgický zákrok, a nádorové tkanivá implantované boli odvodené z ľudského karcinómu žalúdka bunkové línie namiesto pacientov. V dôsledku toho je postup je zdĺhavý a môže spôsobiť ťažké krvácanie a smrť u myší. Okrem toho, aj keď sa rýchlosť ortotopické tvorby nádoru je takmer 80 až 100%, miera metastáz nie je tak vysoká; nádorové pečeňových metastáz ceny sa v 45-60% [16, 17], a že sa pobrušnice u púhy 40% [18]. Tak, zriadenie týchto myšiach modeloch by mohli mať prospech zo zlepšených metód, ktoré by umožnili transplantáciu jednoduchšie a výsledkom je robustnejšia metastáz. V tejto správe sme popísali na myšom modeli ľudského metastatické rakoviny žalúdka, ktorá rieši problémy z minulých myších modeloch. Sme založili našu myšiam modelu ľudského metastatické rakoviny žalúdka cez podkožného implantácii nádorového tkaniva odvodených chirurgicky priamo od pacientov s rakovinou žalúdka. V porovnaní s inými myších modeloch opísaných vyššie, tento model myš tvoria nádory vysokou rýchlosťou a čo je dôležitejšie, ukazuje robustný metastáz.
Metódy
vyhlásenie Etické
Všetky protokoly zahŕňajúce použitie experimentálnych zvierat a nádorových tkanivách z pacienti s rakovinou žalúdka v tejto štúdii boli schválené etickou komisiou lekárskej a Science Research Institute of provincii Kan-su (laboratórne zvieratá Science Group a klinického hodnotenia skupiny referenčné číslo: P201108150024), schválené programy zahŕňali zber, spracovanie a implantáciu nádoru tkaniva od pacientov s rakovinou žalúdka, a resekcie, skladovanie a vyšetrenie nádorového tkaniva z holých myší. Všetci účastníci štúdie za predpokladu, informovaný súhlas s účasťou v štúdii.
Zvieratá a klinický nádorového tkaniva
Balb /C nahých myší na 4-6 týždňov veku a 16-18 g hmotnosti, muži aj ženy, boli poskytnuté od Shanghai nádoru ústavom a chované v konkrétnom patogénom stave bez (SPF). Nádorového tkaniva boli získané od pacientov s rakovinou žalúdka, ktorí podstúpili chirurgický zákrok v nemocnici nádoru Kan-su. Čerstvé nádorového tkaniva bol implantovaný ihneď po resekcii. Klinické údaje pacientov sú uvedené v tabuľke 1.Table 1 klinické údaje
Samplea
Histopathologic klasifikácie
štádiách
miera lymfatických uzlín

1.
zle diferencované adenokarcinóm
PT4aN3a M0 Hic
7/30
2.
stredne diferencovaný adenokarcinóm
PT4aN0M0 IIb
0/12
3.
vredová typ stredne diferencovaného adenokarcinóme
PT4aN0M0 IIb
0/30
4.
zle diferencované adenokarcinóm
PT4aN3a M0 Hic
16/17
a1st a 4. rakovina žalúdka tkanivo boli zle diferencovaný adenokarcinóm a majú metastáz do lymfatických uzlín. 2. a 3. boli stredne diferencovaný adenokarcinóm a nemajú lymfatických uzlín
Podkožný implantácia čerstvé nádorového tkaniva do holých myší
Čerstvé nádorového tkaniva operaciindikováni od pacientov s rakovinou žalúdka boli znížené na 1 kubický milimeter kusov, ktoré boli rozpustené v DMEM médium, a potom podkožne implantované do pravého a ľavého podpazušia a triesla u nahých myší s 16-gagov ihlou asepticky. Každá vzorka bol implantovaný do štyroch myší, 5-6 kusov (0,8 ml) na myš. Tieto nahých myší bolo následne chovajú v stave SPF a rast nádoru u holých myší bola skúmaná denne. Akonáhle nádor na nahých myší vzrástla na 1 centimeter kubický, sa myši usmrtia cervikálny dislokáciou a nádorové tkanivá boli skúmané a resekcie v sterilných podmienok. Nádorové tkanivo z každej myši sa rozdelia do troch častí - jeden bol použitý pre ďalšie kolo implantáciu do nahých myší, druhá bola stanovená v 10% formaldehydu pre patologické vyšetrenia a imunohistochemických (IHC) farbenie na CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 a ICAM-1, tretí sa uchovávajú v kvapalnom dusíku a pri teplote -80 ° C pre real-time PCR analýzy CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 a ICAM-1. Myši boli vybraté a vyšetrená na tumorových metastáz v ich peritonea, dutiny brušnej, pečene, sleziny, žalúdka, čriev, obličiek, pľúc a mozgu. Odobraté tkanivá boli fixované v 10% formaldehydu pre patologické vyšetrenie.
Vznik a charakterizácia myšieho modelu metastatického ľudského karcinómu žalúdka
Odstránené nádorového tkaniva bol implantovaný subkutánne do pravej a ľavej triesla z 5 nahých myší asepticky za použitia 5-6 kusy (0,8 ml) na myš. Rezacie a riedenie z nádorového tkaniva, vyšetrenie rastu a resekcii nádoru v holých myší, skladovanie a vyšetrenie implantovaných nádorových tkanivách, metastatické nádorové tkanivá a orgány myší boli spracované ako je popísané vyššie. Implantované nádorové tkanivá boli pasážovania na desať generácií.
Skúmanie účinku mieste implantácie na rýchlosť metastáz
Ako je uvedené, implantovaný rakovina žalúdka tkanivo z nahých myší bolo subkutánne implantované do troch skupín u nahých myší pri rôznych pozemky pod aseptických podmienok. V priemere 5-6 kusy boli implantované do myší, pričom jedna skupina dostáva tkaniva na pravej a ľavej slabinách, na druhej skupine na pravej a ľavej podpazušie, a tretí na dvoch miestach v chrbte. Ako je uvedené vyššie, boli spracované vyšetrenie rast a resekcie nádoru v nahých myšiach. Ďalšie analýzy zahŕňal overenie rastu nádoru na rôznych miestach a metastáz do pobrušnice a brušnej dutiny.
Implantácia a metastázy predtým zmrazené a pasážovania ľudské tkanivo žalúdočné rakoviny u nahých myší
Implantované rakovina žalúdka u ľudí tkaniva pasážovania zo štvrtého miesta a ôsma generácia implantáciou do nahých myší boli uložené v tekutom dusíku a subkutánne implantované do nahých myší na pravej a ľavej triesla, ako je popísané vyššie. Ďalšie analýzy zahŕňal overenie rastu nádoru na rôznych miestach a metastáz do pobrušnice a brušnej dutiny.
Patologické vyšetrenie implantovaných a metastatických ľudských žalúdočných tkanivách z holých myší
Implantované a metastatický rakovina žalúdka u ľudí tkaniva z nahých myší boli fixované v 10% formaldehydu, vložené do parafínu, rezané do sekcií, morenie v hematoxylín-eozín (HE). Sklíčka bola hodnotená za použitia svetelného mikroskopu Olympus BX50, a získanie obrazu sa vykonáva pomocou Mias patologickým systémom pracovné stanice 4.0.
IHC farbenie
expresiu hladín E-cadherinu, VCAM-1, ICAM-1, a CK8 /18 boli skúmané imunohistochemicky v implantovaných a metastatických nádorových tkanív nahých myší a v chirurgických vzoriek použitých pre implantáciu. Profily používané na farbenie boli získané z chirurgických vzoriek, implantovaný a metastatické nádorové tkanivá a tkanivá, ktoré obsahujú metastatické nádory. Reagencie použité na farbenie boli SP-9000 ™ Histostain -plus súpravy, 3-3'-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride (DAB) Kits, primárne myší monoklonálne protilátky proti E-cadherinu (riedenie 1: 200), ICAM-1 (1: 500 riedenie) a primárne králičie polyklonálne protilátka proti VCAM-1 (1: 500 riedenie) (Peking Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co Ltd, Peking, Čína). Farbenie sklíčka IHC boli nezávisle posúdené dvoma patológmi a prípadný rozdiel vo výsledku rozhodovania bola vyriešená na základe konsenzu. Farbenie intenzita bola vyhodnotená ako negatívne, slabé, stredné alebo silné. Svetelnom mikroskope a snímanie obrazu softvér boli rovnaké ako je uvedené vyššie.
Celkom extrakcii RNA a real-time PCR
Celková RNA bola extrahovaná TRIzolu (Sheng gong Biotechnology, Shanghai, Čína) z implantovaných a metastatických nádorových tkanivách, ktoré rástol v holých myší a z chirurgických vzoriek použitých na implantáciu podľa pokynov výrobcu. CDNA bola syntetizovaná reverznej transkriptázy (Sheng gong Biotechnology), podľa odporúčania výrobcu. SYBR premix Ex TaqTM (Takara Biotechnology, Dalian, Čína) bol použitý pre real-time PCR. 20-ul reakcia obsahovala 10 ul SYBR premixu Ex TaqTM, 1 ul DNA šablóny, 0,4 ul každého primeru a 8,2 ul dH 20. Cyklovanie PCR bol stav: 37 ° C počas 5 min, 95 ° C počas 30 sekúnd, a 40 cyklov 95 ° C počas 5 sekúnd až 60 ° C počas 30 sekúnd. MRNA β-aktínu bol použitý ako vnútorná kontrola a reakčná zmes bez templátu DNA bola použitá ako negatívna kontrola. Všetky vzorky boli merané 3 krát nezávisle na sebe, a kvantitatívne údaje PCR boli analyzované za použitia porovnávacej metódy CT. V stručnosti je rozdiel v prahu cykle, ΔCT, bola stanovená ako rozdiel medzi skúšaným génu a ľudského p-aktínu. Potom sme získali ΔΔCT tým, že nájde rozdiel medzi týmito dvoma skupinami. Násobok zmena bola vypočítaná ako 2 -ΔΔCT. Primery sú uvedené v tabuľke 2.Table 2 Primery používané v real-time PCR
Gene
dopredný primer
Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Výsledky
vzniku nádorov a metastáz
Zo štyroch myší s implantovanými 1. chirurgických vzoriek, iba jeden vyvinutého nádoru v mieste implantácie o 76 dní (obr. 1a). Dvadsať päť dní neskôr sa myši usmrtia cervikálny dislokáciou a analyzované na nádory. Nádorového tkaniva v priemere 1 kubický centimeter vo veľkosti, zobrazí sa intaktné obálku a tvrdú štruktúru (obr. 1b). Metastázy v retroperitonea bolo zistené vizuálnym (obr. 1c). Žiadne metastázy bola detekovaná v jeho pobrušnice, dutiny brušnej, pečene, sleziny, žalúdka, čriev, obličiek, pľúc a mozgu. Obr. 1 metastatické rast nádoru z implantované tkaniva karcinómu žalúdka získané chirurgicky (X 400). a, b: Implantované rakovina tkaniva zvýšil na ~ 1 cm3 a zobrazí intaktnej obálku a tvrdú štruktúru; c: Tumor metastázovať do myšieho retroperitonea; d, e: Je implantuje tkanivo a metastatický nádory sa skladala zo zle diferencovaných buniek karcinómu a niekoľkých mezenchýmové buniek a krvných ciev, s nejakou podobnosť s žliaz dutiny. Rakovinové bunky vykazovali tmavo zafarbených jadra a nedostatočný cytoplazmy a postrádal normálny pomer medzi jadrom a cytoplazmy; f: Implantované tumor zobrazujúci infiltrácie tkanív
patologických analýza ukázala, že implantované a metastatické nádorové tkanivá sa skladala zo zle diferencovaných buniek karcinómu, a len málo z mezenchymu a krvné cievy. Tieto tkanivá sa javí rozptýlené, postrádal štruktúru a pripomínajú žliaz lumen. Okrem toho, bunky zobrazené tmavo zafarbených jadra, nedostatočnou cytoplazmu a misproportioned jadra a cytoplazmy (obr. 1d, e, f). Podobné výsledky boli získané v paralelnej štúdii zahŕňajúcej implantáciu nádorového tkaniva do 4 myší; iba jedna myš vytvoril tumor (priemerná veľkosť: 1,5 cm3) 26 dní po implantácii. Žiadne metastázy bolo pozorované v jeho pobrušnice, dutiny brušnej, pečene, sleziny, žalúdka, čriev, obličiek, pľúc a mozgu. Ostatné Myši implantované sa na 2. a 4. chirurgických vzoriek nevykazoval rast nádoru.
Stabilita implantovaného nádoru po priechode do niekoľkých generácií
nádor, ktorý vyvinula od 1. preparátu bola pasážovania po dobu desiatich generácií. Rýchlosť rastu nádoru bola 100% a metastáz v retroperitonea a vnútorných orgánov bola 80 až 100% (priemer 94%), bez ohľadu na to, či primárna tkaniva bolo použité čerstvé alebo mrazené (tabuľka 3). Vnútornosti metastázy bolo pozorované v lymfatických uzlinách okolo pažeráka, pod žalúdočnej sliznice, tunica seróza Gastria, sleziny, pečene oblasti portálu, centrálne Vena a sinus hepaticus, regeneračné schopnosti pečene, pečeňové kapsule, obličiek hilum, obličiek parenchýmu, nadobličky, črevá blany, slinivky brušnej, a spermaduct (obr. 2). Doba generácie je 16 days.Table 3 Stabilita a rýchlosť metastáz nádorov implantovaných v rôznych Positions
Variabilný
No
spoločností Rast v implantované polohe (%)
metastázy retroperitoneum (%)
Vnútornosti (%)
Generation lehota (dni)
počet Passage
1st
5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20
2.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14
3.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
4.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
5.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
6.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
13
7.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10.
5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
uložených v tekutom dusíku
4.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
8.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
implantovanie do odlišnej polohy
triesla
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16
Back
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
podpazušia
10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10)
14
Po desiatich generáciách implantácie všetky myši vyvinutý rast nádoru u implantované polohe, a 94% myší vyvinula metastasis retroperitonea a vnútornosti, bez ohľadu na to, či je zdrojom nádor čerstvé alebo mrazené. Priemerná doba ložiska nádoru je 16 dní. Slabine myšou je najlepšie Implantácia pozície, čo má za následok 94% retroperitonea a vnútornosti metastáz
Obr. 2 patologické vyšetrenia nádoru, ktorý metastázovať do vnútorností (X 100). Mikro-metastázy bolo pozorované v lymfatických uzlinách po pažeráka (a), pod žalúdočnej sliznice (b), a v iných oblastiach, ako je tunica seróza Gastria (c), parenchýmu v pečeňové kapsule (d), pečeňové oblasti portálu (e ), sínus hepaticus (f), slezina (g), Vena ústredne pečeňové (h), pankreasu (i), obličkovej hilum (j), obličkovej parenchým (k), nadobličky (l), črevo serosa (m), spermaduct (n) a pľúc (o)
rýchlosť metastázy nádoru implantovaného do rôznych polôh
implantácie do rôznych polôh ovplyvnená rýchlosť metastázy, ale nie tempo rastu nádoru. Implantácia do rozkroku za následok 94% retroperitonea a vnútornosti metastázy; implantáciu do zadnej malo za následok 30% retroperitonea metastázy a 10% vnútorností metastáz; implantácia do podpazušia za následok žiadnu retroperitonea metastáz a 20% vnútorností metastáz. Doba generácia bola: 16 dní pre nádory implantované do slabín, 20 dní pre tých, implantované do chrbta, a 14 dní pre tie implantované v podpazuší (tabuľka 3). Metastatickým vnútornosti súčasťou pečene (50%), obličiek (44%), črevá (28%), pažeráka (12%), pankreasu (12%), žalúdka (6%), slezinu (6%), a spermaduct (6 %) (tabuľka 4) .Table 4 metastázy do visceraa
implantované pozíciu
Nie
vnútornosti metastázy (%)
pečene (%)

Kidney (%)
črevo (%)
pažeráka (%)
Pankreas (%)
žalúdka (%)

Spleen (%)
Spermaduct (%)
triesla
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Back
10
10 (1/10)
0
0
0
0
0
10 ( 1/10)
10 (1/10) NETHRY.cz 0
podpazuší
10
30 (3/10)
20 (2/10)
0
0
10 (1/10) NETHRY.cz 0
0
0
0
pečeň a obličky boli vnútornosti s najvyššou mierou metastázy (44-50%) a žalúdka, sleziny a spermaduct boli najnižšie (6%)
Charakteristika implantovaného a metastatický nádor
IHC a real-time PCR výsledkov vyplynulo, že ICAM-1, VCAM-1, a CK8 /18, ale nie E-cadherin, bol exprimovaný prevažne v chirurgii a implantovaného nádoru primárneho a prvej generácie (Obr. 3). Ako je uvedené v tabuľke 5, primárne a prvej generácie nádoru ukázali pozitívny farbenie pre VCAM-1 a CK8 /18, ale nasledujúce generácie ukázali slabé farbenie týchto proteínov: VCAM-1 farbenie bola hodnotená ako mierne pozitívny (++) v primárnom, slabý signál (+) v prvej generácii, a CK8 /18 farbenie bol hodnotený ako slabý signál (+) v prvej generácii. Nádory vo všetkých fázach ukázali negatívny farbenie pre E-cadherinu, zatiaľ čo metastatické nádor u všetkých generácií ukázali negatívny farbenie pre E-cadherinu, ICAM-1, VCAM-1 a CK8 /18. Čo sa týka prepisov sme zistili, VCAM-1 mRNA v nádore primárnom a prvej generácie implantované, ale nie na metastatické fáze. E-cadherinu a ICAM-1 prepisy neboli detekované vo všetkých generácií implantovaných a metastatických nádorov. Obr. 3 IHC analýza expresie E-cadherinu, VCAM-1, ICAM-1 a CK8 /18 (X 200). CK8 /18 Expresia bola detekovaná v preparáte používaných na implantáciu (a) a v primárnych implantovaných nádorových tkanivách (b), ale nie v F1 generácii implantované nádorové tkanivá (c), VCAM-1 bol exprimovaný v preparáte ( d) a v primárnych implantovaných nádorových tkanivách (e), ale nie v generácie F2 implantovaných nádorových tkanivách (f). E-cadherin expresie nebola detekovateľná v preparáte (g), a v primárnych implantovaných nádorových tkanivách (h). ICAM-1 bol exprimovaný v preparáte (i), ale nie v primárnych implantovaných nádorových tkanivách (j)
Tabuľka 5 Expresia E-cadherinu, ICAM-1, VCAM-1 a CK8 /18 v nádoroch u chirurgický zákrok, pri implantácii a počas metastáz
Variable
Nie
Protein Expression
mRNA Expression

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical Vzorka
1 -
+++
+++ +++
Primárne
1
implantovaných nádorových -
-
++
+
0
0
0,0927
metastatický nádor -
- -
- NETHRY.cz 0
0
0
prvý
5
Implantované nádorové
- (0/5)
- (0/5)
+ (5/5)
- (0/5 )
0
0
0,1997
metastatický nádor
- (0/5)
- (0/5)
- (5/5)
- ( 0/5)
0
0
0
2. ~ 10. 45
Implantované nádorové
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
0
0
0
metastatický nádor
- (0/42)
- (0 /42)
- (0/42)
- (0/42)
0
0
0
aMolecular analýza implantovaných a metastatických nádorov neukázali zistiteľnú expresiu CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 a ICAM-1, s výnimkou pozitívne farbenie na VCAM-1 v implantované nádorovom tkanive prvej generácie
diskusia
Cancer sa vyznačuje tým, proliferácie, invázie a metastáz. Viac ako 90% úmrtí na rakovinu je spôsobené metastáz a tým vyvolávajúce intenzívny výskum [19]. Metastáza je zložitá a zle rozumie proces, ktorý zahŕňa proteíny s funkciou v bunkovej adhézii, degradáciu ECM, a pohyblivosti [19-21]. Početné štúdie na žalúdočné nádorových metastáz boli popísané [22 až 26]. Avšak, väčšina z týchto štúdií boli vykonané in vitro, ak nie je k napodobenie metastatického procesu, ku ktorému dochádza in vivo. To naznačuje potrebu zvieracom modeli nádorových metastáz, ktorý má robustnú a konzistentné fenotyp. V tejto štúdii, model ľudského metastatického karcinómu žalúdka bola založená podkožná inokuláciou v nahých myší s rakovinou tkaniva získané chirurgicky od pacientov s karcinómom žalúdka. Všetky myši vyvinutý rastu nádoru v implantované polohe a retroperitoneum metastáz, a 94% myší vyvinula metastasis vnútorností, bez ohľadu na to, či je zdrojom nádor čerstvé alebo mrazené. Implantovaný a metastatické nádor udržiavané rovnaké vlastnosti vo všetkých generácií, a vnútornosti metastázy bol pozorovaný v lymfatických uzlinách okolo pažeráka, pod žalúdočnej sliznice, tunica serosa Gastria, slezina, pečeň oblasti portálu, centrálne Vena a sinus hepaticus, pečeňového parenchýmu, pečeň kapsule, obličková hilum, obličky parenchýmu, nadobličky, črevá seroza a pankreasu. Metastázy bol robustný v tomto modeli myši. Retroperitonea metastázy možno vyplývalo z rozkladu nádorových buniek z implantovaného nádoru, úvod do tanínových žľazy, a transport do retroperitonea. To môže vysvetľovať nádor metastázuje do pečene oblasti portálu, centrálne Vena a sinus hepaticus, rovnako ako do tuniky seróza Gastria, obličkovej hilum, nadobličky a črevné blany. Metastáz by tiež dôjsť prostredníctvom lymfatických uzlín; nádory boli pozorované v lymfatických uzlinách okolo pažeráka, nižšia ako žalúdočnej sliznice, sleziny, pankreasu, obličiek a parenchýmu
výskyt metastáz sa zdá byť závislá na mieste implantácie podkožne :. implantácie do rozkroku za následok 100% retroperitoneálna metastáz a 94% vnútornosti metastázy; implantáciu do zadnej malo za následok 30% retroperitonea metastáz, a 10% vnútornosti metastázy; implantácia do podpazušia za následok žiadnu retroperitonea metastáz a 20% vnútorností metastáz. Toto pozorovanie je v súlade s metastázami spojená s rastom nádoru mikroprostredie, vrátane krvných ciev a lymfatických distribúciu. Naozaj, triesla myš má viac krvných ciev a lymfatických sietí, ktoré ústia do brušnej dutiny a vnútornosti, než vzadu. Aj keď podpazušia majú bohaté krvné cievy a lymfatické siete, smer Vena je anterográdna, a väčšina z lymfatických spojiť s pľúc, priedušnice a pleury, miestach, kde sa len zriedka rakovina žalúdka dostane premiestnený. Preto je jednoduchá metóda pre subkutánnu implantáciu nádorových buniek do slabín nahých myší účinne vedie k modelu metastatického ľudského karcinómu žalúdka. Tento model má vyššiu rýchlosť metastázy vnútorných orgánov, ako je uvedené v literatúre [13-18] a môže byť ľahko aplikované na iné typy rakoviny u ľudí.
Invázia tumoru s následnými metastáz je hlavnou príčinou morbidity a mortality u pacientov s rakovina. Nádorových metastáz je komplexný proces, v ktorom nádorové bunky oddeliť od primárneho nádorové hmoty, migrujú do cievneho systému, extravasate do iných tkanív a rast nových nádorov [27-30]. Medzi týmito rôznymi procesmi, alterácia v adhezívnymi vlastnosťami primárnych nádorových buniek je kritickým faktorom pre progresiu nádoru [28]. Bolo zistené, že adhézia buniek je zodpovedný za progresiu nádoru, ktorý zahŕňa molekuly, ktoré hrajú úlohu v adhéziu bunka-bunka a bunka-matrica adhézie [31-34]. adhézie buniek hrá dôležitú úlohu v dvoch rozličných fázach metastatického nádorového procesu - na odstup od primárneho nádoru a jeho priľnavosť k obehového systému [27]. Preto, bunkové adhézne molekuly hrajú kritickú úlohu v invázii a metastázy rôznych ľudských nádorov.
E-cadherin hrá dôležitú úlohu v adhéziu bunka-bunka v epiteliálnych tkanív [35]. Vedľa jeho úlohu v normálnych bunkách, tento adhézny molekula môže hrať významnú úlohu v transformácii malígnych buniek, vývoj nádoru, a progresiu. Strata integrity nádorového tkaniva môže viesť k lokálnej invázii [36]. Preto strata funkcie E-cadherinu v nádorových tkanivách koreluje s invazívnosti a metastázovaniu nádorov [37]. Štúdie ukázali, že aberantne E-cadherin expresie je spojená s obstaraním invazívnosti a pokročilejšom štádiu nádoru u rakoviny žalúdka [38-40].
ICAM-1 a VCAM-1 sú veľmi dôležité bunkové adhézne molekuly, ktoré patria do imunoglobulínu super rodina. Funkcie v bunka-bunka a ECM priľnavosťou, vrátane fyziologického polymorfonukleárnych (PMN) tesné adhéziu a trans migráciu endoteliálnych cez leukocytov integrínov lymfocytu functionassociated antigén-1 (LFA-1) (CD11 /CD18) a makrofágov-1 antigénu (1 ICAM- MAC-1), (CD11b /CD18) [41]. VCAM-I sprostredkuje bunkovú adhéziu cez integrínu [42]. ICAM-1 hrá dôležitú úlohu v bunka-bunka a bunka-ECM interakcií, najmä nádorovú inváziu a cytotoxicity lymfocytov. Štúdie ukázali, že pozitívny miera expresie ICAM-1, bola v súvislosti s lymfatických uzlín a hĺbky invázie tumoru, a expresie VCAM-1 pozitívnych karcinómov žalúdka boli viac invazívne a bolo spojené s viacerými lymfatických uzlín, ako expresia VCAM-1 negatívne tie, [43-45]. Cytokeratin uvedené na všetkých epitelových buniek, niektoré non-epiteliálne bunky, a vo väčšine nádorových buniek. Že cytokeratiny, ktoré patria do rodiny proteínov medziprodukt vlákno (IF), sú hlavnou súčasťou roh buniek a udržuje organizáciu epiteliálnych tkanív. Štúdie preukázali, že cytokeratiny sú veľmi vysoko konzervatívne a dôležitá pre diferenciáciu tkanív. V súčasnej dobe bolo identifikovaných viac než 20 rôznych cytokeratiny [46], z ktorých CK 8, 18, a 19 sú najhojnejšia v jednoduchých epiteliálnych bunkách. V tejto štúdii, IHC a RT-PCR Výsledky ukázali, že expresia E-cadherinu je negatívny, a ICAM-1, VCAM-1, a CK8 /18 sú pozitívne v preparáte použité pre implantáciu, v súlade s minulé štúdie [38, 40, 43, 45]. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Odolnosť baktérií bachora mureínu na bovinné žalúdočné lyzozým
• fibroblasty s rakovinou spojené so pozitívnu koreláciu s metastatickým potenciálom ľudských karcinómov žalúdka