Vzpostavitev in karakterizacija model metastaz raka človeške želodčne pri nude mice

Vzpostavitev in karakterizacijo modela metastaz raka človeške želodčne pri golih miših
Abstract
Ozadje
model miši metastaz raka človeške želodčne ena najpomembnejših orodij za preučevanje biološke mehanizme, ki podpirajo človekovo želodca metastaze raka. V tem prispevku smo vzpostavili model miške za metastatskega raka človeškega želodca v golih miših, ki ima višjo stopnjo nastanka tumorjev in metastaz od obstoječih modelov.
Metode
želite ustvariti model miške za metastatskega raka človeškega želodca, sveža tumor tkiva od bolnikov, ki so bili operirani zaradi raka želodca so podkožno vsadili v desno in levo groins o golih miših. Ko se vsadi tkivo naraslo na 1 kubični centimeter, je bilo ubitih miši, in so bili pregledani in resekcija tumorske tkiva. Tumorske tkiva smo implantirali v golih miših podvržemo patološkim pregledom, imunohistokemično barvanjem in v realnem času PCR za citokeratina 8/18 (CK8 /18), E-kadherina, vaskularna celična adhezijska molekula-1 (VCAM-1) in medceličnem adhezijska molekula-1 (ICAM-1). Miši so bili analizirani tudi metastaze v svoji peritonej, trebušno votlino in notranjih organov, ki ga histopatološko preiskavo. Tkiva, zbrani od teh organov so bili pregledani za patologijo.
Rezultati
Po desetih generacijah implantaciji, vse miši razvilo rast tumorja na vsajene položaju, 94% miši razvilo metastaze na retroperitoneja in notranjih organov. Vsajene in metastatskega tumor ohranila iste histološke značilnosti vseh generacij in metastaze so opazili pri požiralnika, želodca, vranice, jeter, ledvic, nadledvično žlezo, črevesju in trebušni slinavki. Te metastatskih tumorjev pokazale nobenih zaznavno izražanje CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 in ICAM-1.
Sklepe
ta model bo služil kot dragoceno orodje za razumevanje metastatskega procesa človeškega raka želodca.
Ključne besede
Karakterizacija Vzpostavitev želodca metastaza raka Mouse modeli Ozadje
raka želodca je četrti najpogostejši malignom, in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka samo pljučnega raka v svetu [1]. Čeprav je prognoza pacientov s zgodnjega raka želodca izrazito podaljšan s sedanjimi metodami diagnosticiranja in zdravljenja, 5-letna stopnja preživetja po diagnozi bolnikov z rakom želodca pri vseh stopnjah je < 50% [2]. Metastaze računov v delu za visoko smrtnost zaradi raka želodca. Delež bolnikov z rakom želodca smrti zaradi potrebušnice metastaz je približno 50% [3]. Zato je metastaze postala središče mnogih želodca raziskav raka. Metastaze je zelo kompleksen proces, ki vključuje več zaporednih korakov [4]. Geni povezani z celično adhezijo, gibljivosti, proliferacijo, preživetje, presnovo in signalov igrajo pomembno vlogo pri metastaz raka [5-8]. Kako ti proteini delujejo skupaj za spodbujanje metastaze še vedno slabo razumljen.
Mišjem modelu metastatskega raka želodca je izredno dragoceno orodje pri razumevanju metastatskega procesa. Prvi človek karcinom model v golih miših je bilo ustanovljeno leta 1969, ki ga Rygaard in Povlsen z hypodermical presaditev človeškega tkiva raka debelega črevesa [9]. Čeprav presajenih tumor ohranila maligne lastnosti, je izgubila svojo metastatskega potenciala, in prvotna struktura in obnašanje tumorja spremenila [10]. Metastatskega model človeškega raka debelega črevesa je bila prvič zgrajena z Morikawa leta 1988 z uporabo človeških rakavih celic debelega črevesa subserously vsajene v slepo črevo [11]. Ta model je pokazala orthotopic rast tumorjev in metastaz jeter. Furukawa nadalje modificiramo ta model v letu 1993, ki ga kirurško šivanje človeškega želodca raka tkivo v tunica seroza gastria na golih miših [12]. Ta model razvit tumorjev odločno in pokazali zelo visoko stopnjo metastaz v jetrih. Ker motnje adhezije tumorsko tkivo spreminja njegovo biološko in maligne vedenje, modeli miške opisane ohranila celovitost tumorjev, ki omogočajo za "bolnika, kot so-model" [13, 14]. V nadaljevanju so bili veliko modelov miške metastatskega raka človeške želodčne ustvari orthotopic presaditev želodčnega tkiva raka [15-18]
modele miške metastatskega raka človeške želodčne poročali doslej predstavljajo več izzivi.; ortopedije implantacija v golih miših zahtevano operacijo in tumorskih tkiv vsadi izvirajo iz človeške želodčne rak celične linije, namesto bolnikov. Kot rezultat, je postopek dolgotrajen in lahko povzroči težke krvavitve in smrt pri miših. Čeprav je hitrost orthotopic nastanka tumorja skoraj 80-100%, stopnja metastaz ni tako visok; na jetra tumor metastatskim mere so bile pri 45-60% [16, 17] in da z potrebušnice na zgolj 40% [18]. Tako bi lahko vzpostavitev teh modelov miši koristi od izboljšanih metod, ki naj bi omogočila, presaditev lažje in posledica je bolj robustno metastaz. V tem poročilu smo opisali model miške za metastatskega raka človeškega želodca, ki obravnava vprašanja iz prejšnjih modelov miši. Ugotovili smo naš model miške za metastatskega raka človeškega želodca s podkožno vsaditvijo tumorskih tkiv, pridobljenih kirurško neposredno od bolnikov z rakom želodca. V primerjavi z drugimi modeli miško prej opisanih, ta model miške tvori tumorje na visoki stopnji, in kar je še pomembneje, kaže močan metastaze.
Metode
izjavo etiko
vseh protokolov, ki vključuje uporabo poskusnih živali in tumorskih tkivih iz bolnikov z rakom želodca v tej študiji je odobril Odbor za etiko za medicino in znanost Research Institute v provinci Gansu (laboratorijske živali znanost skupine in kliničnega preskušanja skupine, referenčno številko: P201108150024), odobrenih programov, vključenih v zbiranje, obdelavo in vsaditev tumorja tkiva pri bolnikih z rakom želodca, in resekcijo, shranjevanje in pregled tumorskih tkiv golih miših. Vsi udeleženci študija pod pogojem, informirano soglasje za sodelovanje v raziskavi.
Živali in kliničnega tumorskih tkivih
BALB /C nude miši po 4-6 tednih starosti in 16-18 g teže, tako moški in ženske, so bili zagotovljeni s Shanghai tumor inštitutu in gojene v posebnem-brez patogenov (SPF) stanju. Tumor tkiva so bili pridobljeni pri bolnikih z rakom želodca, ki so bili operirani v tumor bolnišnici Gansu. Sveže tumor tkiva so vsadi takoj po resekciji. Kliničnih podatkov o bolnikih, ki so navedeni v tabeli 1.Table 1 Klinični podatki
Samplea
Histopatološka klasifikacija
klinični stadij
stopnja bezgavk metastaz

1.
slabo diferenciran adenokarcinom
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2nd
zmerno diferencirani adenokarcinom
PT4aN0M0 IIb
0/12
3.
ulcerozni tip zmerno diferenciran adenokarcinom
PT4aN0M0 IIb
0/30
4th
slabo diferenciran adenokarcinom
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
a1st in 4. želodčni rak tkivo bilo slabo diferencirani adenokarcinom in imajo bezgavka metastaz. 2. in 3. so zmerno diferencirani adenokarcinom in nimajo bezgavko metastaze
subkutano implantacijo svežih tumorskih tkivih, v golih miših
Sveže tumorske tkiva odstranjenimi pri bolnikih z rakom želodca je bilo zmanjšanje za 1 kubičnih kosov milimetra, ki so bili popravljeni z DMEM medij, nato pa podkožno vsadili v desno in levo pazduhe in groins o golih miškah s 16-gague iglo pod aseptičnih pogojih. Vsak vzorec smo implantirali štirih miši, 5-6 kosov (0,8 ml) na miš. Na golih miši potem gojijo v SPF stanju, in rast tumorja na golih miših je bila preučena na dan. Ko je tumor na golih miših zrasla za 1 kubični centimeter, se je miš ubil cervikalno dislokacijo in so bili pregledani in odstranili pri aseptičnih pogojih tumorske tkiva. Tkiva tumorja iz vsake miši smo ločili na tri dele - eden je bil uporabljen za drug krog implantacijo v golih miših, je druga določena v 10% formaldehida za patološkim pregledom in imunohistokemijske (IHK) barvanjem za CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 in ICAM-1, tretji shranimo v tekočem dušiku in -80 ° C za PCR v realnem času analize CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 in ICAM-1. Miši smo secirali in pregledamo tumorske metastaze v svoji peritonej, trebušno votlino, jeter, vranice, želodca, črevesja, ledvic, pljuč in možganov. Zbrani tkiva so bile določene na 10% formaldehida za patološkim pregledom.
Ustanovitev in karakterizacija mišjem modelu metastatskega raka človeške želodčne
izrezan tumorsko tkivo je subkutano vsadi v desno in levo groins po 5 golih miši pod aseptičnih pogojih uporabe 5-6 kosov (0,8 ml) na miš. Rezanje in redčenje tumorskega tkiva, pregleda rasti in resekcijo tumorja v golih miših, shranjevanje in pregled vsajenega tumorskih tkivih, metastaznih tumorskih tkiv in organov za miško so bili obdelani, kot je opisano zgoraj. Vsadi tumor tkiva smo deset generacij pasaže.
Preizkus učinek mestu implantacije o stopnji metastaziranje
Kot je opisano, je vsadi človeških želodčni rak tkiva iz golih miši subkutano implantirali v tri skupine golih miših pri drugačni mesta pod aseptičnih pogojih. V povprečju 5-6 kosov so vsadili v miši, z eno skupino, ki prejema tkiva na desni in levi groins, drugo skupino na levi in ​​desni strani pod pazduho, in tretji na dveh lokacijah v hrbtu. Kot je navedeno zgoraj, smo obdelali pregled rasti in resekcijo tumorja v golih miših. Nadaljnje analize vključen pregled rasti tumorja na različnih lokacijah in metastaz v potrebušnice in trebušno votlino.
Implantacija in metastaze prej zamrznjeno in pasaže človeške želodčne tkiva raka v golih miših
vsajene človekovih želodčni rak tkiva pasaže iz četrtega in osma generacija z implantacijo v golih miši shranimo v tekočem dušiku in podkožno vsadili v golih miših na desni in levi groins kot je opisano zgoraj. Nadaljnje analize vključen pregled rasti tumorja na različnih lokacijah in metastaz v potrebušnice in trebušno votlino.
Patološko pregled vsajenih in metastatskih človeške želodčne tkiv golih miših
so vsajene in metastatskega človekovih želodčni rak tkiva iz golih miših določen v 10% formaldehida, vgrajeni v parafin, narezana na odsekih, obarvane v Hematoxylin-eozin barvanjem (HE). Drsniki so ovrednotili z uporabo Olympus BX50 svetlobnega mikroskopa je, in pridobitev slike smo izvedli z Mias patološkega Postaja 4,0 sistema.
IHC obarvanje
izražanjem E-kadherina, VCAM-1, ICAM-1 in CK8 /18 je pregledal imunohistokemijo v vsajenih in metastaznih tumorskih tkiv golih miših in pri kirurških osebke, ki se uporabljajo za vsaditev. Oddelki, ki se uporabljajo za obarvanje so bili pridobljeni iz kirurške vzorci, vsajene in metastaznih tumorskih tkivih, in tkiv, ki vsebujejo metastazne tumorje. Reagenti za obarvanje je bilo SP-9000 Histostain ™ -Plus Kits, 3-3'-Diaminobenzidine tetrahidroklorid (DAB) Kits, monoklonska protitelesa primarne mišje proti E-kadherina (1: 200 redčenja), ICAM-1 (1: 500 redčenje) in glavni zajec poliklonsko protitelo proti VCAM-1 (1: 500 redčenje) (Peking Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co Ltd, Peking, Kitajska). Za barvanje diapozitivi IHC so neodvisno ocenila dva patologi, in morebitna razlika v rezultatu odločitev je bila rešena s soglasjem. Obarvanjem intenzivnost je bila ocenjena kot negativna, šibko, srednje ali močan. Svetloba mikroskop in nakup slik programsko opremo so enaki kot zgoraj.
Skupaj ekstrakcijo RNA in PCR v realnem času
Total RNA je bil izločen s TRIzola (Sheng Gong biotehnologija, Šanghaj, Kitajska) od vsajenega in metastaznih tumorskih tkivih, ki zrasel v golih miših in od kirurških osebkov, ki se uporabljajo za vsaditev, po navodilih proizvajalca. CDNA smo sintetizirali z reverzno transkriptazo (Sheng Gong Biotechnology), v skladu s priporočili proizvajalca. SYBR premiks Ex TaqTM (Takara Biotechnology, Dalian, Kitajska) smo uporabili za PCR v realnem času. 20-ul reakcija vsebuje 10 ml SYBR docetaksela Ex TaqTM, 1 p predlogo DNA, 0.4 ul vsak premaz in 8,2 ul dH 20. Kolesarska pogoj PCR je bil: 37 ° C za 5 minut, 95 ° C za 30 sekund in 40 ciklov 95 ° C za 5 sekund do 60 oC za 30 sekund. Β-aktina mRNK uporabimo kot notranjo kontrolo in reakcijsko zmes brez šablonske DNA smo uporabili kot negativno kontrolo. Vsi vzorci so bili izmerjeni 3-krat neodvisno in količinski podatki PCR so bili analizirani z metodo primerjalne CT. Na kratko, razlika v prag kolesa, ΔCT bila določena kot razlika med testirane gena in humanega P-aktina. Nato smo dobili ΔΔCT z iskanjem razlike med obema skupinama. Pokrovček sprememba je bila izračunana kot 2 -ΔΔCT. Primerji so navedeni v tabeli 2.Table 2 premazi, ki se uporabljajo v realnem času PCR
Gene
Forward premaz,
Reverse primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Rezultati
nastanka tumorjev in metastaz
Med štirimi miši vsajenih s 1. kirurškimi vzorci, le eno razvil tumor na mestu implantacije za 76 dni (sl. 1a). Petindvajset dni kasneje, je miška ubil cervikalno dislokacijo in analizirajo tumorjev. Tumorsko tkivo v povprečju 1 kubični centimeter v velikosti, prikaže nepoškodovano ovojnico in trdo strukturo (sl. 1b). Metastaze v retroperitoneja bilo ugotovljeno z vizualnim pregledom (sl. 1c). Ni metastaze bila odkrita v svojem peritonej, trebušno votlino, jeter, vranice, želodca, črevesja, ledvic, pljuč in možganov. Fig. 1 metastatske tumorske rasti od vsajene tkiva raka želodca dobljenega kirurško (x 400). a, b: Vsajene rak tkivo naraslo na približno 1 kubični centimeter in prikaže nepoškodovano ovojnico in trdega teksturo; c: Tumor metastaziral v retroperitoneja miške; d, e: vsadi tkivo in metastatskih tumorjev, sestavljen iz slabo diferenciranih celic karcinoma in nekaj mesenchyma celic in krvnih žil, z nekaj spominja na žleznega votlino. Rakave celice so pokazali, temno obarvanih jeder in pičlo citoplazmo in ni imela normalno razmerje med jedrom in citoplazmo; f: Vsajene tumor kaže tkiva infiltracijo
patoloških analiza je pokazala, da se vsadi in metastatskega tumor tkiva sestavljen iz slabo diferenciranih celic karcinoma, in le malo mesenchyma in krvne žile. Te tkiva zdi razpršena, manjkalo strukturo in podobni žleznega lumen. Poleg tega so celice prikazane temno obarvane jedra, le malo citoplazmo in misproportioned jedra in citoplazmo (sl. 1d, e, f). Podobne rezultate smo dobili v vzporedni študiji z vsaditvijo tkiva tumorja v 4 miših; samo ena miš razvil tumor (povprečna velikost: 1,5 kubični centimeter) 26 dni po vsaditvi. Ni metastaze opazili v svojem peritonej, trebušno votlino, jeter, vranice, želodca, črevesja, ledvic, pljuč in možganov. Drugi miši vsadi z 2. in 4. kirurške osebkov ni pokazala rast tumorja.
Stabilnost vsajeno tumorja po prehodu v več generacij
je Tumor, ki se je razvil iz 1st kirurških vzorcu pasaže za deset generacij. Stopnja rasti tumorja je bila 100% in da metastaz v retroperitoneja in notranjih organov je 80-100% (povprečno 94%), glede na to ali je bila primarna tkivo uporabili sveže ali zamrznjene (tabela 3). Drobovje metastaze so opazili v bezgavkah po požiralniku, pod želodčne sluznice, tunike seroza gastria, vranico, območje jeter portala, centralno venae in sinus hepaticus, jeter parenhimu, jetra kapsule, ledvic hilum, ledvic parenhima, nadledvične žleze, črevesa korena, trebušne slinavke in spermaduct (sl. 2). Čas generacija je 16 days.Table 3 stabilnost in hitrost metastaz tumorjev vsajenih v različnih positionsa
spremenljivo
Ne

Rast vsajeno položaju (%)
metastaze retroperitoneja (%)
Notranji organi (%)
Generation čas (dni)
Passage število
1.
5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20
2.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14
3.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
4.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
5.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
6.
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
13
7.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9. mesto
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10.
5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
hranimo v tekočem dušiku
4.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
8.
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
vsaditev v drugačnem položaju
Groins
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16
Nazaj
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
pazduho
10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10)
14
po desetih generacijah implantaciji, vse miši razvilo rast tumorjev na vsajen položaj, in 94% miši razvilo metastaze na retroperitoneja in notranjih organov, glede na to, ali je bil vir tumor sveže ali zamrznjene. Povprečni čas nosi tumor, je 16 dni. Dimljah miši je najboljši položaj implantacija, kar 94% retroperitoneja in notranji organi metastaz
Sl. 2 patološkem preiskava tumorja, metastaze na drobovja (x 100). Mikro-metastaze opazili v bezgavkah okoli požiralnika (a), pod želodčne sluznice (b), in na drugih področjih, kot tunike seroza gastria (c) parenhima pod jeter kapsulo (d), portal območju jeter (e ), sinus hepaticus (f), vranica (g), venae central jeter (h), trebušno slinavko (i), ledvična hilum (j), ledvičnega parenhima (k), nadledvične žleze (l), črevesja korena (m), spermaduct (n), in pljuč (o)
stopnja metastaz tumorja vsajene v različnih položajih
implantacija v različne položaje prizadetih stopnjo metastaz, ne pa hitrost rasti tumorja. Implantacija v dimljah povzročila 94% retroperitoneja in notranjih organov metastaz; implantacija v zadnji povzročila 30% retroperitoneja metastaz in 10% notranjih organov metastaz; implantacija v pazduho povzročila nikakršne retroperitoneja metastaz in 20% notranjih organov metastaz. Čas generacija je: 16 dni za tumorji vsajenih v groins, 20 dni za tiste, ki so vgrajene v hrbtu, in 14 dni za tiste, ki so vgrajene v pazduho (tabela 3). Metastatskem drobovje vključena jetra (50%), ledvice (44%), črevo (28%), požiralnik (12%), trebušno slinavko (12%), želodca (6%), vranico (6%) in spermaduct (6 %) (tabela 4) .table 4 metastasis v visceraa
implantiranih položaju
Ne
drobovje metastaze (%)
jeter (%)

ledvic (%)
črevo (%)
požiralnika (%)
trebušne slinavke (%)
želodca (%)

vranice (%)
Spermaduct (%)
Groins
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Nazaj
10
10 (1/10)
0
0
0
0
0
10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
pazduho
10
30 (3/10)
20 (2/10)
0
0
10 (1/10)
0
0
0
0
na jetra in ledvice so drobovje z najvišjo stopnjo metastaz (44-50%), in želodec, vranica in spermaduct bila najnižja (6%)
Karakterizacija vsajene in metastatskega tumorja
imunohistokemijo in v realnem času rezultatov PCR je pokazala, da ICAM-1, VCAM-1, in CK8 /18, vendar ne E-kadherina, so bili izraženi predvsem v kirurgiji in v vsajeno tumorja primarne in prve generacije (sl. 3). Kot je prikazano v tabeli 5, primarna in prva generacija tumorja je pokazala pozitivno barvanje za VCAM-1 in CK8 /18, vendar naslednje generacije pokazal majhno obarvanje teh proteinov: VCAM-1 obarvanje je dosegel kot zmerno pozitivno (++) v primarni, šibek signal (+) v prvi generaciji, in CK8 /18 barvanja je dosegel kot šibkim signalom (+) v prvi generaciji. Tumorji na vseh stopnjah pokazala negativno obarvanje za E-kadherina, medtem metastatski tumor na vseh generacij, so pokazali negativno barvanje za E-kadherina, ICAM-1, VCAM-1 in CK8 /18. Kot je za prepise, smo zaznali VCAM-1 mRNA v primarnem in prve generacije vsadili tumorja, vendar ne na metastatskega fazi. E-kadherina in ICAM-1 prepisi niso bili odkriti v vseh generacij vsajenih in metastatskih tumorjev. Fig. 3 IHK analizo ekspresije E-kadherina, VCAM-1, ICAM-1 in CK8 /18 (X 200). CK8 /18 ekspresijo bila ugotovljena pri kirurških vzorcu, ki se uporabljajo za implantacijo (a) in v primarnih implantiranih tumorskih tkiv (b), vendar ne v F1 generacije implantirali tumorske tkiva (c), VCAM-1 je bil izražen v kirurških vzorcem ( d) in primarnih implantiranih tumorskih tkiv (e), vendar ne v generacijo F2 implantiranih tumorskih tkiv (f). E-kadherina ekspresija ni bilo mogoče odkriti v kirurški vzorca (g) in v primarnih implantiranih tumorskih tkiv (h). ICAM-1 je bil izražen v kirurških primerka (i), vendar ne primarnih implantiranih tumorskih tkiv (j)
Tabela 5 ekspresije E-kadherina, ICAM-1, VCAM-1 in CK8 /18 v tumorjih pri kirurgija, po implantaciji in med metastaz
Variable
Ne
Protein expressiona
mRNA expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical Vzorec
1 -
+++
+++
+++
Primary
1
vsadi tumor -
-
++
+
0
0
0,0927
metastatski tumor
- -
- -
0
0
0
1.
5
Vsajene tumor
- (0/5)
- (0/5)
+ (5/5)
- (0/5 )
0
0
0,1997
metastatski tumor
- (0/5)
- (0/5)
- (5/5)
- ( 0/5)
0
0
0
2. ~ 10.
45
Vsajene tumor
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
0
0
0
metastatski tumor
- (0/42)
- (0 /42)
- (0/42)
- (0/42)
0
0
0
aMolecular analiza vsajenih in metastatskih tumorjev niso odkrile zaznavno izražanje CK8 /18, E-kadherina, VCAM-1 in ICAM-1, razen pozitivni obarvanjem za VCAM-1, v vstavljeno tumorskih tkiv prve generacije
je diskusija
Rak označen s proliferacije, invazije in metastaziranja. Več kot 90% smrtnih primerov zaradi raka je posledica metastaz tako izpisujejo intenzivne raziskave [19]. Metastaze je zapleten in slabo razumljen proces, ki vključuje beljakovine s funkcijami v celično adhezijo, degradacije ECM in gibljivosti [19-21]. Poročali so številne študije o želodca metastaz raka [22-26]. Vendar pa je večina teh študij je bilo opravljenih in vitro, ni posnemajo metastaz proces, ki se pojavi in ​​vivo. To kaže na potrebo po živalskem modelu raka, metastaze, ki ima trdno in dosledno fenotip. V tej raziskavi je bil model metastatskega raka človeške želodčne ustanovljen s podkožno inokulacijo pri golih miših z rakom tkivu, pridobljenem kirurško pri bolnikih z rakom želodca. Vse miši razvilo rast tumorja na vsajene položaju in retroperitoneja metastaze, in 94% miši razvilo metastaze na notranjih organov, glede na to, ali je bil vir tumor sveže ali zamrznjene. Vsajene in metastatskega tumor ohranila enake značilnosti vseh generacij in drobovje metastaze opazili v bezgavkah okrog požiralnika, pod želodčne sluznice, tunica serosa gastria, vranica, območje jeter portal, centralno venae in sinus hepaticus, jetra parenhima, jetra kapsula, ledvična hilum, ledvičnega parenhima, nadledvična žleza, črevesna serosa in trebušne slinavke. Metastaze je močna v tem modelu miši. Retroperitoneja metastaze verjetno posledica disociacije tumorskih celic od vsajene tumor, vnosu v dimeljske žlez in prevoz do retroperitoneja. To lahko predstavlja tumor metastaziranja v območju jeter portal, centralno venae in sinusov hepaticus, kot tudi v tunike seroza gastria, ledvic hilum, nadledvične žleze in črevesa korena. Metastaze bi se lahko zgodila tudi z bezgavk; tumorji so se v bezgavkah po požiralniku opazili, pod želodčne sluznice, vranice, trebušne slinavke in ledvic parenhima
zdi, da je odvisna od mestu implantacije subkutano Pojav metastaz. implantacijo v dimljah povzročila 100% retroperitonealno metastaze in 94% notranji organi metastaze; implantacijo v hrbtu povzročila 30% retroperitoneja metastaze in 10% drobovje metastaze; implantacija v pazduho povzročila nikakršne retroperitoneja metastaz in 20% notranjih organov metastaz. Ta ugotovitev je skladna z metastazami, povezano z rastjo tumorja mikrookolja vključno žile in distribucijo limfne. Dejansko je v dimljah miška ima več krvne žile in limfne mrež, ki se iztekajo v trebušno votlino in notranjih organov, kot zadnji. Čeprav imajo pod pazduho bogate krvne žile in limfne omrežij, smer vena je anterogradno, in večina limfe povezati z pljuč, sapnika in poprsnice, lokacijah, kjer rak želodca redko dobi prenesen. Zato je preprost način subkutano implantacijo rakavih celic v groins golih miši učinkovito posledico modelu metastatskega raka človeške želodčne. Ta model ima višjo stopnjo metastaz notranje organe, kot da poročajo v literaturi [13-18] in bi se lahko uporablja za druge vrste raka pri ljudeh.
Tumor invazija z nadaljnjimi metastazami je glavni vzrok obolevnosti in smrtnosti pri bolnikih z rak. Metastaza raka je kompleksen proces, v katerem tumorske celice ločiti od primarne mase tumorja, migrirajo skozi ožilje, extravasate v drugih tkivih in rast novih tumorjev [27-30]. Med temi različnimi procesi, sprememba v lepljivost primarnih tumorskih celic je ključni dejavnik za napredovanja tumorja [28]. To je pokazala, da je oprijem celic odgovoren za napredovanja tumorja, ki vključuje molekule, ki igrajo pomembno vlogo pri celični-celično adhezijo in celice matrike oprijema [31-34]. Celične adhezije igra pomembno vlogo v dveh različnih fazah metastatskega procesa tumorja - premesti iz primarnega tumorja in njene oprijema na obtočil [27]. Zato celične adhezijske molekule igrajo ključno vlogo pri invaziji in metastaziranju različnih človeških tumorjev.
E-kadherina igra pomembno vlogo pri celični celično adhezijo v epitelijskih celic [35]. Poleg svoje vloge v normalnih celicah, lahko to celične adhezije molekule igrajo pomembno vlogo pri preoblikovanju malignih celic, razvoj tumorjev in napredovanje. Izguba celovitosti tumorskega tkiva lahko privede do lokalne invazije [36]. Zato izgubo funkcije E-kadherina v tumorskih tkivih korelira z invazivnosti in metastaziranja tumorjev [37]. Študije so pokazale, da je odklonski E-kadherina izraz povezana s pridobitvijo invazivnosti in bolj fazi tumorja za raka želodca [38-40].
ICAM-1 in VCAM-1, so zelo pomembne celične adhezijske molekule, ki pripadajo imunoglobulin super družina. ICAM-1 funkcije mobilnega celice in ECM oprijema, vključno s fiziološko polimorfonuklearnih (PMN) tesen oprijem in trans endotelija migracije preko levkocitov integrinov limfocita functionassociated antigen-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) in makrofagov-1 antigen ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. VCAM-I posreduje celično adhezijo preko integrin [42]. ICAM-1 igra pomembno vlogo pri medsebojnem delovanju celic celic in celic ECM, zlasti tumorja invazijo in citotoksičnosti limfocitov. Študije so pokazale, da je bila pozitivna stopnja izraz ICAM-1 povezana z bezgavkah metastazami in globine tumorske invazije, in VCAM-1 ekspresije pozitivni želodčni rak bile bolj invazivne in bil povezan z več bezgavkah kot VCAM-1 ekspresije negativnega tisti, [43-45]. Cytokeratin pojavljajo na vseh epitelnih celic, nekaterih ne-epitelnih celic in večini tumorskih celic. V citokeratinov, ki spada v vmesni žarilno nitko (IF) proteinske družine, so osnovne sestavine rogov celic in ohranja organizacijo epitelijskih celic. Študije so pokazale, da so citokeratinov zelo visoko ohranjeni in pomembni za diferenciacijo tkiva. Do zdaj so bile ugotovljene več kot 20 različnih citokeratinov [46], od katerih so CK 8, 18 in 19 najbolj bogat s preprostimi epitelijskih celic. V tej študiji so IHC in RT-PCR Rezultati so pokazali, da je izražanje E-kadherina negativna, in to z ICAM-1, VCAM-1, in CK8 /18 so pozitivni v kirurški vzorcu, ki se uporabljajo za implantacijo, skladen z zadnjih študij [38, 40, 43, 45]. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Odpornost vampnih bakterij murein goveji želodca lizocim
• Rak povezano fibroblasti so pozitivni korelaciji z metastatskega potenciala želodčnega raka človekovih