Establecimiento y caracterización de un modelo de metástasis de cáncer gástrico humano en mice

nude Establecimiento y caracterización de un modelo de metástasis de cáncer gástrico humano en ratones desnudos
Abstract
Antecedentes
un modelo de ratón de metástasis de cáncer gástrico humano es uno de las herramientas más importantes para el estudio de los mecanismos biológicos que subyacen a la metástasis del cáncer gástrico humano. En el presente trabajo, hemos establecido un modelo de ratón de cáncer gástrico humano metastásico en ratones desnudos que tiene una mayor tasa de formación de tumores y metástasis que los modelos existentes.
Métodos
Para generar el modelo de ratón de cáncer gástrico humano metastásico, fresca tejidos tumorales de pacientes que han sido sometidos a cirugía para el cáncer gástrico se implantaron subcutáneamente en la derecha y las ingles de ratones desnudos fueron. Cuando el tejido implantado creció hasta 1 centímetro cúbico, los ratones se sacrificaron, y los tejidos tumorales fueron examinados y resecado. Los tejidos tumorales se implantaron en ratones desnudos y se sometieron a examen patológico, la tinción inmunohistoquímica y PCR en tiempo real para citoqueratina 8/18 (CK8 /18), E-cadherina, vascular molécula de adhesión celular-1 (VCAM-1) y intercelular molécula de adhesión-1 (ICAM-1). Los ratones también se analizaron para la metástasis en su peritoneo, la cavidad abdominal, y los órganos internos por examen histopatológico. Los tejidos recogidos de estos órganos se examinaron para patología.
Resultados
Después de diez generaciones de la implantación, todos los ratones desarrollaron el crecimiento del tumor en la posición implantada, 94% de los ratones desarrollaron metástasis en el retroperitoneo y las vísceras. El tumor implantado y metastásico mantiene las mismas características histológicas en todas las generaciones, y se observó metástasis en el esófago, estómago, bazo, hígado, riñón, adrenal, el intestino y el páncreas. Estos tumores metastásicos revelaron ninguna expresión detectable de CK8 /18, E-cadherina, VCAM-1 e ICAM-1.
Conclusiones
Este modelo servirá como herramienta valiosa para comprender el proceso de metástasis de cáncer gástrico humano.
Palabras clave
Caracterización Establecimiento cáncer gástrico Metástasis ratón modelos Antecedentes
el cáncer gástrico es el cuarto cáncer más común y la segunda causa principal de muerte por cáncer sólo para el cáncer de pulmón en el mundo [1]. Aunque el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico precoz se ha prolongado claramente por los métodos actuales de diagnóstico y tratamiento, la tasa de supervivencia a 5 años después del diagnóstico de los pacientes con cáncer gástrico con todas las etapas es < 50% [2]. Metástasis explica en parte por la alta mortalidad por cáncer gástrico. La proporción de pacientes con cáncer gástrico morir por metástasis peritoneo es de aproximadamente 50% [3]. Por lo tanto, la metástasis se ha convertido en un foco de muchos estudios sobre el cáncer gástrico. La metástasis es un proceso muy complejo, que implica múltiples pasos consecutivos [4]. Genes asociados con la adhesión celular, la motilidad, la proliferación, la supervivencia, el metabolismo, y la transducción de señales desempeñan un papel importante en la metástasis del cáncer [5-8]. ¿Cómo estas proteínas trabajan en conjunto para promover la metástasis sigue siendo poco conocida.
Un modelo de ratón de cáncer gástrico metastásico es una herramienta extremadamente valiosa para entender el proceso metastásico. El primer modelo de carcinoma humano en ratones nude se estableció en 1969 por Rygaard y Povlsen a través de trasplante de tejido hypodermical cáncer de colon humano [9]. Aunque el tumor trasplantado retuvo sus características malignas, perdió su potencial metastásico, y la estructura original y el comportamiento del tumor cambió [10]. Un modelo metastásico de cáncer de colon humano se construyó primero por Morikawa en 1988 el uso de células de cáncer de colon humano subserously implantados en el ciego [11]. Este modelo mostró el crecimiento del tumor ortotópico y metástasis de hígado. Furukawa modifica adicionalmente este modelo en 1993 por la costura quirúrgicamente el tejido de cáncer gástrico humano en el Gastria túnica serosa de ratones desnudos [12]. Este modelo se desarrolló tumores robusta y mostró una muy alta tasa de metástasis en el hígado. Desde la interrupción de la adhesión del tejido tumoral altera su comportamiento biológico y maligna, los modelos de ratón descritos conservan la integridad de los tumores que permiten una "paciente-like-modelo" [13, 14]. De aquí en adelante, muchos modelos de ratón de cáncer gástrico humano metastásico han sido generados por el trasplante ortotópico de tejido de cáncer gástrico [15-18]
Los modelos de ratón de cáncer gástrico humano metastásico informado hasta ahora plantean múltiples desafíos.; la implantación de ortesis en ratones desnudos requiere cirugía, y los tejidos tumorales implantadas fueron derivados de la línea celular de cáncer gástrico humano en lugar de los pacientes. Como resultado, el procedimiento es largo y podría causar una hemorragia intensa y la muerte en ratones. Por otra parte, aunque la tasa de formación de tumores ortotópico es casi 80 a 100%, la tasa de metástasis no tan alto; los tipos de tumores metastásicos del hígado estaban en 45 a 60% [16, 17], y que con el peritoneo en una meramente 40% [18]. Por lo tanto, el establecimiento de estos modelos de ratón podría beneficiarse de la mejora de los métodos que harían que el trasplante sea más fácil y dar lugar a un más robusto metástasis. En este informe, se describe un modelo de ratón de cáncer de estómago humano metastásico que se ocupa de los problemas de los modelos anteriores de ratón. Establecimos nuestro modelo de ratón de cáncer de estómago humano metastásico a través de la implantación subcutánea de los tejidos tumorales derivadas quirúrgicamente directamente de los pacientes con cáncer gástrico. En comparación con otros modelos de ratón descritos anteriormente, este modelo de ratón forma tumores a una velocidad alta y más importante, muestra metástasis robusto.
Métodos
declaración Ética
Todos los protocolos que implican el uso de animales de experimentación y los tejidos tumorales de los pacientes con cáncer gástrico en este estudio fueron aprobados por el Comité de Ética de Medicina y Ciencias Instituto de Investigación de la provincia de Gansu (grupo de animales de laboratorio la ciencia y el grupo de ensayo clínico, número de referencia: P201108150024), los programas aprobados incluyen la recogida, el procesamiento y la implantación del tumor los tejidos de pacientes con cáncer gástrico, y la resección, el almacenamiento y el examen de los tejidos tumorales de ratones desnudos. Todos los participantes del estudio dieron su consentimiento informado para participar en el estudio.
Animales y tejidos tumorales clínicos
Balb /c ratones desnudos a las 4-6 semanas de edad y 16-18 g de peso, tanto hombres como mujeres, fueron proporcionados por Shanghai Instituto de Tumores y criados en condiciones (SPF) libres de patógenos específicos. Los tejidos tumorales fueron obtenidas de pacientes con cáncer gástrico que se sometieron a cirugía en el Hospital de Tumores de Gansu. Los tejidos tumorales frescos fueron implantadas inmediatamente después de la resección. Los datos clínicos de los pacientes se enumeran en la Tabla 1 1.Table datos clínicos
muestraa
histopatológico clasificación
estadios clínicos
tasa de metástasis en los ganglios linfáticos

1ª
pobremente diferenciadas adenocarcinoma
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2ª
adenocarcinoma moderadamente diferenciado
PT4aN0M0 IIb
0/12
3ª
ulcerosa escriba un adenocarcinoma moderadamente diferenciado
PT4aN0M0 IIb
0/30
cuarto
pobremente diferenciadas adenocarcinoma
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
tejido cáncer gástrico A1ST y 4 fueron pobremente diferenciadas adenocarcinoma y tienen metástasis ganglionares. 2 y 3 fueron adenocarcinoma moderadamente diferenciado y no tienen metástasis en los ganglios linfáticos
La implantación subcutánea de los tejidos tumorales recientes en ratones desnudos
Los tejidos tumorales recientes resecados de pacientes con cáncer gástrico fueron cortadas a trozos 1 milímetro cúbico que se diluyeron con DMEM medio, y luego por vía subcutánea implanta en el derecho y las axilas y las ingles de ratones desnudos dejó con la aguja 16-gague bajo condiciones asépticas. Cada muestra se implanta a cuatro ratones, 5-6 piezas (0.8 ml) por ratón. Los ratones desnudos se criaron posteriormente en condiciones SPF y el crecimiento del tumor en ratones desnudos se examinaron diariamente. Una vez que el tumor en los ratones desnudos ha crecido a 1 centímetro cúbico, el ratón fue matado por dislocación cervical y los tejidos tumorales fueron examinados y resecada en condiciones asépticas. El tejido tumoral de cada ratón se separó en tres partes - una fue utilizado para otra ronda de implantación en ratones desnudos, la otra se fijó en 10% de formaldehído durante el examen patológico e inmunohistoquímico (IHC) la tinción de CK8 /18, E-cadherina, VCAM-1, ICAM-1 y, la tercera se almacenó en nitrógeno líquido y en -80 ° C para análisis en tiempo real PCR de CK8 /18, e-cadherina, VCAM-1 y la ICAM-1. Los ratones se diseccionaron y se examinaron para metástasis tumoral en su peritoneo, la cavidad abdominal, el hígado, el bazo, el estómago, los intestinos, los riñones, los pulmones y el cerebro. tejidos recogidos fueron fijadas en formol al 10% para el examen patológico.
Establecimiento y caracterización de modelo de ratón de cáncer gástrico humano metastásico Francia El tejido tumoral extirpado se implantó por vía subcutánea a la derecha y las ingles de 5 ratones desnudos dejaron bajo condiciones asépticas usando 5-6 piezas (0,8 ml) por ratón. El corte y dilución del tejido tumoral, el examen del crecimiento y la resección del tumor en los ratones nude, el almacenamiento y el examen de los tejidos implantados tumorales, tejidos de tumores metastásicos, y órganos de ratón se procesaron como se ha descrito anteriormente. tejidos tumorales implantados se pasaron durante diez generaciones.
efecto del sitio de implantación en la tasa de metástasis
Como se describe Examinar, el implantado tejido de cáncer gástrico humano de los ratones nude se implantó por vía subcutánea a tres grupos de ratones desnudos a diferentes sitios bajo condiciones asépticas. Un promedio de 5-6 piezas fueron implantados en ratones, con un solo grupo que recibió los tejidos a la derecha y las ingles izquierda, el otro grupo a la derecha e izquierda axilas, y el tercero en dos sitios en la parte posterior. Como se mencionó anteriormente, se procesaron examen crecimiento y la resección del tumor en los ratones desnudos. Otros análisis incluyen el examen del crecimiento tumoral en diferentes sitios y metástasis en el peritoneo y la cavidad abdominal.
Implantación y metástasis de las previamente congeladas y se pasaron el tejido de cáncer gástrico humano en ratones desnudos Francia El cáncer gástrico tejidos humanos implantados a pases de cuarto y octava generación por implantación en ratones desnudos se almacenaron en nitrógeno líquido y se implanta por vía subcutánea en ratones desnudos en la derecha y la izquierda las ingles como se describe anteriormente. Otros análisis incluyen el examen del crecimiento tumoral en diferentes sitios y metástasis en la cavidad abdominal y el peritoneo.
El examen patológico de los tejidos gástricos humanos implantados y metastáticos de ratones desnudos
eran los humanos cáncer gástrico tejidos implantados y metastáticos de ratones desnudos fijado en formaldehído al 10%, embebidos en parafina, corte en secciones, se tiñeron en la tinción de hematoxilina-eosina (HE). Las diapositivas fueron evaluados utilizando un microscopio óptico Olympus BX50, y la adquisición de imágenes se realizó por el sistema de estación de trabajo 4.0 patológica Mias.
Tinción IHC
los niveles de expresión de E-cadherina, VCAM-1, ICAM-1, y CK8 /18 fueron examinados por inmunohistoquímica en los tejidos tumorales implantados y metastásicos de ratones desnudos y en los especímenes quirúrgicos utilizados para la implantación. Secciones utilizados para la tinción se obtuvieron de las muestras quirúrgicas, los tejidos tumorales implantados y metastásicos, y los tejidos que contienen tumores metastásicos. Los reactivos utilizados para la tinción eran SP-9000 Histostain ™ -plus Kits, 3-3'-diaminobenzidina tetrahidrocloruro Kits (DAB), anticuerpos monoclonales de ratón primarios contra E-cadherina (dilución 1: 200), ICAM-1 (dilución 1: 500) y anticuerpo primario policlonal de conejo contra la VCAM-1 (dilución 1: 500) (Pekín de Zhongshan puente Golden Biotecnología Co Ltd, Beijing, china). Los portaobjetos de tinción IHC se evaluaron de forma independiente por dos patólogos, y cualquier diferencia en el resultado de la decisión se resolvió por consenso. intensidad de la tinción se evaluó como negativa, débil, moderado o fuerte. El software de adquisición de imágenes de microscopio y la luz eran los mismos que anteriormente.
Extracción de RNA total y PCR en tiempo real
ARN total fue extraído por Trizol (Sheng gong Biotecnología, Shanghai, China) a partir de los tejidos tumorales implantados y metastásicos que se crecieron en ratones desnudos y de los especímenes quirúrgicos utilizados para la implantación, siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADNc se sintetizó por transcriptasa inversa (Sheng gong Biotechnology), según las recomendaciones del fabricante. El SYBR premezcla Ex TaqTM (Takara Biotecnología, Dalian, China) se utilizó para la PCR en tiempo real. La reacción de 20 l contenía 10 l SYBR premezcla Ex TaqTM, plantilla de ADN 1 l, 0,4 l cada cebador, y 8,2 l dH 20. La condición de ciclo PCR fue: 37 ° C durante 5 min, 95 ° C durante 30 s, y 40 ciclos de 95 ° C durante 5 s a 60 ° C durante 30 s. El ARNm β-actina se utilizó como control interno, y se utilizó la mezcla de reacción sin la plantilla de ADN como control negativo. Todas las muestras se midieron 3 veces de forma independiente, y se analizaron los datos de PCR cuantitativa mediante el método CT comparativa. En pocas palabras, la diferencia en el ciclo umbral, Ct, se determinó como la diferencia entre el gen probado y β-actina humana. a continuación, se obtuvieron ΔΔCT mediante la búsqueda de la diferencia entre los dos grupos. El cambio veces se calculó como 2 -ΔΔCT. Los primers se enumeran en la Tabla 2 2.Table Los cebadores utilizados en la PCR en tiempo real
génica
Cebador inverso
primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Resultados
formación de tumores y metástasis
Entre los cuatro ratones implantados con el 1er especímenes quirúrgicos, sólo un tumor desarrollado en el sitio de implantación por 76 días (Fig. 1a). Veinticinco días después, el ratón fue muerto por dislocación cervical y se analiza para tumores. El tejido tumoral en un promedio de 1 centímetro cúbico de tamaño, aparece un sobre intacto y textura dura (Fig. 1b). Metástasis en el retroperitoneo se encontró mediante inspección visual (Fig. 1c). No se detectó metástasis en su peritoneo, abdominal cavidad, el hígado, el bazo, el estómago, los intestinos, los riñones, los pulmones y el cerebro. Higo. 1 el crecimiento metastásico de tumores de los tejidos de cáncer gástrico implantado quirúrgicamente obtenido (X 400). a, b: Implantado el tejido de cáncer aumentó a ~ 1 centímetro cúbico y se muestra un sobre intacto y textura dura; c: El tumor metástasis en el retroperitoneo ratón; d, e: El tejido implantado y tumores metastásicos consistieron en células de carcinoma poco diferenciado y unas pocas células mesénquima y los vasos sanguíneos, con cierto parecido a la cavidad glandular. Las células cancerosas mostraron núcleos teñidos oscuros y escaso citoplasma y carecían de la proporción normal entre núcleo y el citoplasma; f: tumor implantado mostrando infiltración de tejidos
análisis patológico reveló que los tejidos tumorales implantados y metastásicos consistieron en células de carcinoma pobremente diferenciado, y sólo un poco de mesénquima y los vasos sanguíneos. Estos tejidos aparecen difusas, carecían de estructura, y se asemejan lumen glandular. Además, las células muestran núcleos manchado oscuro, escaso citoplasma y núcleos misproportioned y citoplasma (Fig. 1d, e, f). Se obtuvieron resultados similares en un estudio paralelo que entrañan la implantación del tejido del tumor en 4 ratones; sólo un ratón desarrollado tumores (tamaño medio: 1,5 centímetro cúbico) 26 días después de la implantación. No se observó metástasis en su peritoneo, abdominal cavidad, el hígado, el bazo, el estómago, los intestinos, los riñones, los pulmones y el cerebro. Los otros ratones implantados con el 2º y 4º especímenes quirúrgicos no mostraron crecimiento tumoral.
Estabilidad del tumor implantado siguiente pasaje en varias generaciones Francia El tumor que se desarrolla a partir de la pieza quirúrgica 1ª se hizo pasar durante diez generaciones. La tasa de crecimiento del tumor fue de 100% y la de la metástasis en retroperitoneo y las vísceras fue 80-100% (promedio 94%), independientemente de si el tejido primario se utilizó fresco o congelado (Tabla 3). La metástasis vísceras se observó en los ganglios linfáticos alrededor del esófago, por debajo de la mucosa gástrica, tunica Gastria serosa, el bazo, el área portal del hígado, venae central y hepaticus sinusal, parénquima hepático, cápsula hepática, hilio renal, el parénquima del riñón, la glándula suprarrenal, serosa intestino, páncreas, y spermaduct (Fig. 2). El tiempo de generación es de 16 days.Table 3 Estabilidad y tasa de metástasis de los tumores implantados en diferentes positionsa
variable
Sin
Crecimiento en posición implantada (%) guía empresas metástasis retroperitoneo (%) guía empresas vísceras (%) tiempo de generación
(días)
número Passage to 1ª página 5
100 (5/5 ): perfil 100 (5/5)
80 (4/5)
20
segunda página 5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5) página 14
tercera página 5
100 (5/5)
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80 (4/5)
14
cuarta página 5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
quinta página 5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5) página 14
sexta página 5
100 (5/5) 80
(4/5)
100 (5/5) página 13
7ª página 5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
octava página 5
100 (5/5)
100 (5/5)
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9ª página 5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10º página 5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
almacenados en nitrógeno líquido
cuarta página 5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
octava página 5
100 (5/5)
100 (5/5) 100
(5/5)
18
implantación en diferentes posiciones
Espigones
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16 Bligoo Volver
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
axilas
10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10) página 14
una Después de diez generaciones de la implantación, todos los ratones desarrollaron el crecimiento del tumor en el posición implantada, y 94% de los ratones desarrollaron metástasis en el retroperitoneo y las vísceras, independientemente de si la fuente de tumor era fresco o congelado. El tiempo medio de portadores de tumor es de 16 días. La ingle de los ratones es la mejor posición de implantación, lo que resulta en el 94% retroperitoneo y las vísceras metástasis
Fig. 2 El examen patológico del tumor que hizo metástasis a las vísceras (X 100). Micro-metástasis se observó en los ganglios linfáticos alrededor del esófago (a), por debajo de la mucosa gástrica (b), y en otras áreas tales como la túnica serosa Gastria (c), el parénquima bajo la cápsula hepática (d), el hígado área del portal (correo ), hepaticus sinusal (f), el bazo (g), venae centrales hepática (h), páncreas (i), hilio renal (j), el parénquima renal (k), glándula adrenal (l), serosa delgado (m), spermaduct (n), y el pulmón (o)
la tasa de metástasis del tumor implantado en diferentes posiciones
implantación en diferentes posiciones afectado a la tasa de metástasis pero no la tasa de crecimiento del tumor. La implantación en la ingle resultó en 94% retroperitoneo y la metástasis vísceras; la implantación en la parte posterior dio como resultado un 30% de metástasis retroperitoneo y el 10% de metástasis vísceras; la implantación en las axilas no dio lugar a metástasis retroperitoneo y 20% metástasis vísceras. El tiempo de generación era: 16 días para los tumores implantados en las ingles, 20 días para los que se implanta en la parte posterior, y 14 días para los implantados en las axilas (Tabla 3). Las vísceras metastásico incluye el hígado (50%), riñón (44%), intestino grueso (28%), el esófago (12%), páncreas (12%), estómago (6%), el bazo (6%), y spermaduct (6 %) (Tabla 4) .Tabla 4 metástasis en la posición visceraa
implantado
Sin
vísceras metástasis (%) guía empresas hígado (%)

riñón (%) guía empresas Intestino (%) guía empresas Esófago (%) guía empresas páncreas (%) guía empresas de estómago (%)

Bazo (%) guía empresas spermaduct (%) guía empresas Espigones
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50) página 12 (6/50) página 12 (6/50) página 6 (3/50) página 6 (3/50)
6 (3/50) Bligoo Volver
10
10 (1/10)
0 0

0
0 0

10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
axilas
10
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0
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0 0

0 0

un hepática y renal, las vísceras con la más alta tasa de metástasis (44-50%), y el estómago, el bazo y spermaduct fueron los más bajos (6%)
Caracterización del tumor implantado y metastásico
la IHC y en tiempo real los resultados de PCR reveló que ICAM-1, VCAM-1, y CK8 /18, pero no e-cadherina, se expresa predominantemente en la cirugía y en el tumor implantado de la generación primaria y primero (Fig. 3). Como se muestra en la Tabla 5, la generación primaria y primera del tumor mostró tinción positiva para VCAM-1 y CK8 /18, pero las generaciones posteriores mostraron tinción débil para estas proteínas: VCAM-1 tinción se anotó como moderadamente positivo (++) en la primaria, la señal es débil (+) en la primera generación, y CK8 /18 tinción se puntuó como señal débil (+) en la primera generación. Los tumores en todas las etapas mostraron tinción negativa para E-cadherina, mientras que el tumor metastásico en todas las generaciones mostró tinción negativa para E-cadherina, ICAM-1, VCAM-1, y CK8 /18. En cuanto a los transcritos, que hemos detectado VCAM-1 mRNA en el tumor primario y la primera generación implantado pero no en la fase metastásica. E-cadherina y de ICAM-1 transcripciones no se detectaron en todas las generaciones de los tumores implantados y metastásicos. Higo. 3 análisis IHC de la expresión de E-cadherina, VCAM-1, ICAM-1 y CK8 /18 (X 200). CK8 /18 expresión se detectó en la muestra quirúrgicos utilizados para la implantación (a) y en los tejidos tumorales implantados primarios (b), pero no en la F1 generación implantado tejidos tumorales (c), se expresó VCAM-1 en la pieza quirúrgica ( d) y, en los tejidos tumorales implantados primarios (e), pero no en los tejidos tumorales generación F2 implantados (f). la expresión de E-cadherina no era detectable en la muestra quirúrgica (G) y en los tejidos tumorales implantados primarios (h). ICAM-1 se expresó en la pieza quirúrgica (i), pero no en los tejidos tumorales implantados primarios (j)
Tabla 5 expresión de E-cadherina, ICAM-1, VCAM-1 y CK8 /18 en los tumores en cirugía, tras la implantación y durante la metástasis
variable
Sin
proteína expresióna
ARNm expresióna

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical espécimen
1 -
+++ +++

+++
primaria
1 | implantado tumores
- -
++ +

0 0

0,0927
metastásico del tumor CD - CD - CD -
- 0
0
0
1ª página 5
tumor implantado CD - (0/5) CD - (0/5)
+ (5/5) CD - (0/5 ): perfil 0 0

0,1997
metastásico del tumor CD - (0/5) CD - (0/5) CD - (5/5) CD - ( 0/5)
0
0 0

segundo ~ 10 de
45
tumor implantado CD - (0/45) CD - (0/45)
- (0/45) CD - (0/45)
0 0

0
tumor metastásico CD - (0/42) CD - (0 /42) CD - (0/42) CD - (0/42)
0
0 0

análisis aMolecular de los tumores implantados y metastásicos reveló ninguna expresión detectable de CK8 /18, e-cadherina, VCAM-1 y la ICAM-1, a excepción de tinción positiva para VCAM-1 en los tejidos tumorales implantados de la primera generación
Discusión
cáncer se caracteriza por la proliferación, invasión y metástasis. Más de 90% de la mortalidad por cáncer se debe a la metástasis provocando de ese modo una intensa investigación [19]. La metástasis es un proceso complicado y poco entendido participación de las proteínas con funciones en la adhesión celular, la degradación de ECM, y la motilidad [19 a 21]. Numerosos estudios sobre la metástasis del cáncer gástrico se ha informado [22 a 26]. Sin embargo, la mayoría de estos estudios fueron realizados in vitro, en su defecto para imitar el proceso metastásico que se produce in vivo. Esto sugiere una necesidad de un modelo animal de la metástasis del cáncer que tiene un fenotipo robusto y consistente. En el presente estudio, un modelo de cáncer gástrico humano metastásico fue establecido por la inoculación hipodérmica en ratones desnudos con tejidos de cáncer obtenidos quirúrgicamente de pacientes con cáncer gástrico. Todos los ratones desarrollaron el crecimiento del tumor en la posición y el retroperitoneo metástasis implantado, y 94% de los ratones desarrollaron metástasis a las vísceras, independientemente de si la fuente de tumor era fresco o congelado. El tumor implantado y metastásico mantiene las mismas características en todas las generaciones, y se observó la metástasis vísceras en los ganglios linfáticos alrededor del esófago, por debajo de la mucosa gástrica, la túnica serosa Gastria, el bazo, el área portal del hígado, venae central y sinusal hepaticus, parénquima hepático, cápsula hepática, hilio renal, el parénquima del riñón, la glándula suprarrenal, serosa del intestino y el páncreas. La metástasis fue robusto en este modelo de ratón. La metástasis retroperitoneo posiblemente el resultado de la disociación de las células tumorales desde el tumor implantado, introducción en los ganglios inguinales, y el transporte al retroperitoneo. Esto puede explicar la metástasis tumoral en zona hepática portal, venas central y Hepaticus sinusal, así como en la túnica serosa Gastria, hilio renal, glándula suprarrenal, y la serosa del intestino. La metástasis también podría haber ocurrido a través de los ganglios linfáticos; tumores se observaron en los ganglios linfáticos alrededor del esófago, por debajo de la mucosa gástrica, el bazo, el páncreas, y el parénquima del riñón
La aparición de metástasis parece ser dependiente en el sitio de implantación por vía subcutánea:. implantación en la ingle resultó en 100% metástasis retroperitoneal y el 94% vísceras metástasis; la implantación en la parte posterior dio como resultado 30% metástasis retroperitoneo, y 10% metástasis vísceras; la implantación en las axilas no dio lugar a metástasis retroperitoneo y 20% metástasis vísceras. Esta observación es consistente con la metástasis asociada con microambiente crecimiento tumoral incluyendo vasos sanguíneos y la distribución de la linfa. De hecho, la ingle ratón tiene más vasos sanguíneos y linfáticos redes que desembocan en la cavidad abdominal y las vísceras de la parte posterior. Aunque las axilas tienen vasos sanguíneos ricos y redes linfáticas, la dirección de la vena es anterógrada, y la mayor parte de la linfa conectar con pulmón, tráquea y pleura, lugares en los que el cáncer gástrico rara vez se translocada. Por lo tanto, el simple método de implantación subcutánea de las células cancerosas en las ingles de los ratones desnudos se traduce eficientemente en un modelo de cáncer gástrico humano metastásico. Este modelo tiene una tasa de metástasis vísceras superior a la reportada en la literatura [13 a 18] y puede ser fácilmente aplicada a otros tipos de cáncer humano.
Invasión del tumor con metástasis posterior es la principal causa de morbilidad y mortalidad en pacientes con cáncer. metástasis del cáncer es un proceso complejo en el que las células tumorales se separan de la masa del tumor primario, migrar a través del sistema vascular, extravasate en otros tejidos y crecer en nuevos tumores [27-30]. Entre estos diversos procesos, una alteración en las propiedades adhesivas de las células tumorales primarias es un factor crítico para la progresión del tumor [28]. Se ha revelado que la adhesión celular es responsable de la progresión del tumor, implicando moléculas que juegan un papel en la adhesión célula-célula y célula-matriz de adhesión [31-34]. La adhesión celular juega un papel importante en las dos etapas diferentes del proceso metastásico tumor - el desprendimiento desde el tumor primario y su adhesión al sistema circulatorio [27]. Por lo tanto, las moléculas de adhesión celular juegan un papel crítico en la invasión y la metástasis de una variedad de tumores humanos.
E-cadherina juega un papel importante en la adhesión célula-célula en tejidos epiteliales [35]. Además de su papel en las células normales, esta molécula de adhesión celular puede desempeñar un papel importante en la transformación maligna de células, el desarrollo del tumor, y la progresión. La pérdida de la integridad del tejido tumoral puede conducir a la invasión local [36]. Por lo tanto, pérdida de la función de E-cadherina en los tejidos tumorales se correlaciona con la invasividad y metástasis de tumores [37]. Los estudios han demostrado que la expresión de E-cadherina aberrante está asociada con la adquisición de capacidad de invasión y la etapa del tumor más avanzado para el cáncer gástrico [38-40].
ICAM-1 y VCAM-1 son muy importantes moléculas de adhesión celular que pertenecen a la inmunoglobulina super familia. Las funciones de célula-célula y la adhesión ECM, incluyendo polimorfonucleares fisiológica (PMN) la adhesión firme y la migración endotelial trans a través de las integrinas de leucocitos linfocitos functionassociated antígeno-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) y el antígeno de macrófagos-1 (ICAM-1 MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. La VCAM-I media la adhesión celular a través de la integrina [42]. ICAM-1 desempeña un papel importante en las interacciones célula-célula y célula-ECM, especialmente invasión tumoral y la citotoxicidad de los linfocitos. Los estudios han demostrado que la tasa de expresión positiva de ICAM-1 estaba relacionado con la metástasis de los ganglios linfáticos y la profundidad de la invasión tumoral, y la expresión de VCAM-1 cánceres gástricos positivos fueron más invasivos y se asociaron con más metástasis de ganglios linfáticos de VCAM-1 expresión negativa los [43-45]. La citoqueratina aparece en todas las células epiteliales, algunas células no epiteliales, y la mayoría de las células tumorales. Las citoqueratinas, que pertenece a la familia de proteínas de filamentos intermedios (IF), son componentes primarios de las células del asta y mantiene la organización de los tejidos epiteliales. Los estudios han encontrado que las citoqueratinas son muy altamente conservadas e importante para la diferenciación de tejidos. En la actualidad, más de 20 citoqueratinas diferentes se han identificado [46], de los cuales CK 8, 18, y 19 son los más abundantes en las células epiteliales simples. En el presente estudio, los resultados de IHC y RT-PCR reveló que la expresión de E-cadherina es negativo, y la de ICAM-1, VCAM-1, y CK8 /18 son positivos en la pieza quirúrgica utilizados para la implantación, en consonancia con estudios anteriores [38, 40, 43, 45]. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• Resistencia de las bacterias del rumen mureína a la lisozima bovina gástrica
• fibroblastos asociados al cáncer se correlacionan positivamente con el potencial metastásico de los cánceres gástricos humanos