Mise en place et la caractérisation d'un modèle de métastases du cancer gastrique humain chez la souris nude

Mise en place et la caractérisation d'un modèle de métastases du cancer gastrique humain chez la souris nude
Résumé de l'arrière-plan
Un modèle de souris de métastases du cancer gastrique humain est l'un des outils les plus importants pour l'étude des mécanismes biologiques du cancer gastrique humaine sous-jacente métastase. Dans cet article, nous avons établi un modèle murin de cancer gastrique humain métastatique chez la souris nude qui a un taux de formation des tumeurs et des métastases que les modèles existants plus élevé.
Méthodes
Pour générer le modèle murin de cancer gastrique métastatique humain, fraîche les tissus tumoraux de patients qui ont subi une intervention chirurgicale pour le cancer gastrique ont été sous-cutanée implantés dans le droit et aines de souris nude gauche. Lorsque le tissu implanté est passé à 1 centimètre cube, les souris ont été sacrifiées et les tissus tumoraux ont été examinés et réséqué. Les tissus de tumeur ont été implantés dans des souris nude et on les soumet à un examen pathologique, immunohistochimie et PCR en temps réel pour la cytokératine 8/18 (CK8 /18), E-cadhérine, vasculaire molécule-1 d'adhésion cellulaire (VCAM-1) et intercellulaire la molécule d'adhésion-1 (ICAM-1). Les souris ont été également analysés pour déterminer les métastases dans leur péritoine, de la cavité abdominale, et les organes internes d'un examen histopathologique. Les tissus prélevés à partir de ces organes ont été examinés pour la pathologie.
Résultats
Après dix générations d'implantation, toutes les souris ont développé une croissance tumorale dans la position implantée, 94% des souris ont développé des métastases dans le rétropéritoine et les viscères. La tumeur métastatique implanté et maintient les mêmes caractéristiques histologiques de toutes les générations et les métastases a été observée dans l'oesophage, l'estomac, la rate, le foie, les reins, les glandes surrénales, de l'intestin et le pancréas. Ces tumeurs métastatiques révélé aucune expression détectable de CK8 /18, E-cadhérine, VCAM-1 et ICAM-1.
Conclusions
Ce modèle servira outil aussi précieux pour comprendre le processus métastatique du cancer de l'estomac humain.
Caractérisation Establishment cancer gastrique Métastase souris modèles Fond de mots clés
cancer gastrique est le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause de décès par cancer après le cancer du poumon dans le monde [1]. Bien que le pronostic des patients atteints de cancer gastrique a été prolongée distinctement par les méthodes actuelles de diagnostic et de traitement, le taux de survie à 5 ans après le diagnostic des patients atteints de cancer gastrique avec toutes les étapes est < 50% [2]. Métastases explique en partie la forte mortalité par cancer de l'estomac. La proportion de patients atteints de cancer gastrique meurent de métastases péritoine est d'environ 50% [3]. Par conséquent, la métastase est devenu un objet de nombreuses études de cancer gastrique. Métastase est un processus très complexe, impliquant plusieurs étapes consécutives [4]. Les gènes associés à l'adhésion cellulaire, la motilité, la prolifération, la survie, le métabolisme et la transduction du signal jouent un rôle important dans le cancer métastatique [5-8]. Comment ces protéines travaillent ensemble pour promouvoir les métastases reste mal comprise.
Un modèle murin de cancer gastrique métastatique est un outil extrêmement précieux pour comprendre le processus métastatique. Le premier modèle de carcinome humain chez la souris nude a été créé en 1969 par Rygaard et Povlsen par la transplantation hypodermical du tissu du cancer du côlon humain [9]. Bien que la tumeur transplantée a conservé ses caractéristiques malignes, il a perdu son potentiel métastatique, et la structure d'origine et le comportement de la tumeur a changé [10]. Un modèle métastatique du cancer du côlon humain a d'abord été construit par Morikawa en 1988 en utilisant des cellules de cancer du côlon humain implantées dans subserously caecum [11]. Ce modèle a montré une croissance tumorale et les métastases orthotopique du foie. Furukawa encore modifié ce modèle en 1993 par chirurgicalement couture tissu de cancer gastrique humain dans le Gastria tunica séreuse des souris nude [12]. Ce modèle développé des tumeurs robuste et a montré un taux très élevé de métastases au foie. Etant donné que la perturbation de l'adhérence du tissu tumoral modifie son comportement biologique et malignes, les modèles de souris décrits conservé l'intégrité des tumeurs permettant un «patient comme modèle" [13, 14]. Ci-après, des modèles de souris beaucoup de cancer gastrique métastatique humain ont été générés par la transplantation orthotopique de tissu de cancer gastrique [15-18]
Les modèles murins de cancer gastrique métastatique humain signalé jusqu'à présent posent de multiples défis. l'implantation orthétique chez la souris nude nécessaire une intervention chirurgicale et les tissus de tumeurs implantées ont été dérivées de la lignée cellulaire gastrique cancéreuse humaine à la place des patients. En conséquence, la procédure est longue et pourrait causer des saignements abondants et la mort chez les souris. En outre, bien que le taux de formation de tumeur orthotopique est presque 80-100%, le taux de métastase pas aussi élevé; les taux métastatiques de tumeur du foie étaient à 45-60% [16, 17] et que, avec le péritoine à seulement 40% [18]. Ainsi, l'établissement de ces modèles de souris pourrait bénéficier de l'amélioration des méthodes qui rendraient la transplantation plus facile et entraîner une métastase plus robuste. Dans ce rapport, nous avons décrit un modèle de souris de cancer de l'estomac humain métastatique qui aborde les questions de modèles de souris précédents. Nous avons établi notre modèle murin de cancer métastatique de l'estomac humain par implantation sous-cutanée de tissus tumoraux provenant directement par voie chirurgicale sur des patients atteints d'un cancer gastrique. Comparé à d'autres modèles de souris décrites précédemment, ce modèle de souris forme des tumeurs à un taux élevé et plus important encore, montre des métastases robustes
. Méthodes
déclaration éthique
Tous les protocoles impliquant l'utilisation d'animaux de laboratoire et les tissus tumoraux à partir les patients atteints de cancer gastrique dans cette étude ont été approuvés par le comité d'éthique de la médecine et de l'Institut de recherche en sciences de la province du Gansu (groupe des animaux de laboratoire scientifique et le groupe d'essai clinique, numéro de référence: P201108150024), les programmes approuvés comprenaient la collecte, le traitement et l'implantation de la tumeur les tissus de patients atteints de cancer de l'estomac, et la résection, le stockage et l'examen des tissus tumoraux de souris nude. Tous les participants à l'étude ont donné leur consentement éclairé à participer à l'étude.
Animaux et BALB /C des souris nues de tissus tumoraux cliniques à 4-6 semaines d'âge et 16-18 g en poids, à la fois mâle et femelle, ont été fournis par Shanghai Tumor Institute et élevés dans pathogènes spécifiques (SPF) condition. tissus tumorales ont été obtenues à partir de patients atteints de cancer gastrique ayant subi une chirurgie à l'hôpital de la tumeur du Gansu. Les tissus tumoraux frais ont été implantées immédiatement après la résection. Les données cliniques des patients sont énumérés dans le tableau 1.Table 1 Les données cliniques
Samplea
histopathologique classification
des étapes cliniques
Taux de métastase ganglionnaire

1er
adénocarcinome peu différencié
PT4aN3a M0 IIIc
7/30
2e
modérément différenciés adénocarcinome
PT4aN0M0 IIb
0/12
3ème
ulcéreuse tapez adénocarcinome différencié modérément
PT4aN0M0 IIb
0/30
4ème
adénocarcinome peu différencié
PT4aN3a M0 IIIc
16/17
tissu de cancer gastrique a1st et 4 étaient mal adénocarcinome différencié et ont métastase ganglionnaire. 2e et 3e ont été modérément différencié adénocarcinome et ne pas avoir des ganglions lymphatiques métastases
implantation sous-cutanée de tissus tumoraux frais dans des souris nues
Les tissus tumoraux frais réséquées provenant de patients atteints de cancer gastrique ont été coupés à 1 cubes pièces millimétriques qui ont été diluées avec DMEM moyen, puis sous-cutanée implanté dans le droit et les aisselles et les aines de souris nude gauche avec l'aiguille 16-gague sous des conditions aseptiques. Chaque échantillon a été implanté à quatre souris, 5-6 pièces (0,8 ml) par souris. Les souris nude ont ensuite été élevées dans des conditions SPF et la croissance tumorale chez des souris nude ont été examinés tous les jours. Une fois que la tumeur dans les souris nues a augmenté à 1 centimètre cube, la souris a été tué par dislocation cervicale et les tissus tumoraux ont été examinés et réséqué dans un état aseptique. Le tissu tumoral à partir de chaque souris a été séparé en trois parties - l'un a été utilisé pour un autre tour d'implantation dans des souris nude, l'autre a été fixé à 10% de formaldéhyde pour examen pathologique et immunohistochimique (IHC) coloration pour CK8 /18, E-cadhérine, VCAM-1 et ICAM-1, le troisième a été stocké dans de l'azote liquide et à -80 ° C pour une analyse PCR en temps réel de la CK8 /18, E-cadhérine, la VCAM-1 et ICAM-1. Les souris ont été disséqués et examinés pour les métastases tumorales dans leur péritoine, de la cavité abdominale, du foie, de la rate, de l'estomac, les intestins, les reins, les poumons et le cerveau. tissus prélevés ont été fixés dans 10% de formaldéhyde pour un examen pathologique
. Établissement et caractérisation de modèle murin de cancer gastrique métastatique humain
Le tissu tumoral excisé a été sous-cutanée implantés à droite et aines de 5 souris nude laissés sous des conditions aseptiques en utilisant 5-6 pièces (0,8 ml) par souris. La découpe et la dilution du tissu tumoral, un examen de la croissance et de la résection de la tumeur chez la souris nude, le stockage et l'examen des tissus implantés les tissus tumoraux, des tumeurs métastatiques, et les organes de souris ont été traitées comme décrit ci-dessus. les tissus tumoraux ont été implantés repiquées pendant dix générations.
d'examen effet du site d'implantation sur le taux de métastases
Tel que décrit, le tissu de cancer gastrique humain implanté chez des souris nues a été implantée par voie sous- cutanée à trois groupes de souris nues à différentes sites sous conditions aseptiques. Une moyenne de 5-6 pièces ont été implantées dans des souris, avec un groupe recevant les tissus à droite et à gauche aines, l'autre groupe à droite et à gauche les aisselles, et le troisième sur deux sites dans le dos. Comme il est mentionné ci-dessus, l'examen de la croissance et de la résection de la tumeur chez les souris nude ont été traitées. D'autres analyses comprenaient l'examen de la croissance tumorale à des sites différents et des métastases dans le péritoine et la cavité abdominale.
L'implantation et la métastase des préalablement congelés et repiquées tissu de cancer gastrique humain chez la souris nude Les tissus implantés
de cancer gastrique humain à un passage de la quatrième et huitième génération par implantation dans des souris nude ont été stockés dans de l'azote liquide et sous-cutanée implanté dans des souris nude à droite et à gauche aines comme décrit ci-dessus. D'autres analyses comprenaient l'examen de la croissance tumorale sur des sites différents et des métastases dans la cavité péritonéale et abdominale.
Examen anatomopathologique des tissus gastriques humains implantés et métastatiques de souris nues
Les tissus humains gastriques cancéreuses implantées et métastatiques de souris nues ont été fixé à 10% de formaldehyde, inclus dans la paraffine, coupés en sections, teinté hématoxyline-éosine (HE). Les lames ont été évaluées à l'aide d'un microscope optique Olympus BX50, et l'acquisition d'image a été réalisée par Mias pathologique système poste de travail 4.0.
Coloration IHC
Les niveaux de E-cadhérine, VCAM-1, ICAM-1 expression et CK8 /18 ont été examinés par immunohistochimie dans les tissus tumoraux implantés et métastatiques provenant de souris nude et dans les échantillons chirurgicaux utilisés pour l'implantation. Sections utilisées pour la coloration ont été obtenues à partir des échantillons chirurgicaux, les tissus tumoraux et les implantés métastatiques, et les tissus qui contiennent des tumeurs métastatiques. Les réactifs utilisés pour la coloration étaient SP-9000 Histostain ™ -Plus Kits, 3-3'-diaminobenzidine (DAB) Kits, des anticorps monoclonaux de souris primaire contre la E-cadhérine (1: 200 dilution), ICAM-1 (dilution 1: 500) et primaire anticorps polyclonaux de lapin contre VCAM-1 (dilution 1: 500) (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co Ltd, Beijing, Chine). Les lames de coloration IHC ont été évalués indépendamment par deux pathologistes, et toute différence dans la décision issue a été résolue par consensus. l'intensité de coloration a été évaluée comme négative, faible, modérée ou forte. Le logiciel de microscope et l'acquisition d'images de lumière étaient les mêmes que ci-dessus.
Extraction de l'ARN total en temps réel et l'ARN total de PCR a été extrait par Trizol (Sheng gong biotechnologie, Shanghai, Chine) à partir de tissus tumoraux implantés et métastatiques que a augmenté chez les souris nues et des spécimens chirurgicaux utilisés pour l'implantation, en suivant les instructions du fabricant. L'ADNc a été synthétisé par la transcriptase inverse (Sheng Biotechnology gong), selon les recommandations du fabricant. Le prémélange TaqTM SYBR Ex (Takara biotechnologie, Dalian, Chine) a été utilisé pour la PCR en temps réel. La réaction de 20 ul contenant 10 ul de pré-mélange SYBR Ex TaqTM, 1 pi de matrice d'ADN, 0,4 pi de chaque amorce, et 8,2 ul dH 20. La condition de cycle de PCR était la suivante: 37 ° C pendant 5 min, 95 ° C pendant 30 s et 40 cycles de 95 ° C pendant 5 s à 60 ° C pendant 30 s. L'ARNm de β-actine a été utilisée comme contrôle interne, et le mélange réactionnel sans l'ADN de matrice a été utilisé comme témoin négatif. Tous les échantillons ont été mesurés 3 fois de manière indépendante, et les données de PCR quantitative ont été analysées en utilisant le procédé CT comparatif. En bref, la différence de seuil de cycle, ACt, a été déterminée comme étant la différence entre le gène testé et β-actine humaine. Nous avons ensuite obtenu ΔΔCT en trouvant la différence entre les deux groupes. Le facteur de variation a été calculé comme 2 -ΔΔCT. Les amorces sont énumérées dans le tableau 2.Table 2 Amorces utilisées dans la PCR en temps réel
Gene
Amorce
inversée primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Résultats
formation des tumeurs et des métastases
Parmi les quatre souris implantées avec les spécimens chirurgicaux 1ère, seule une tumeur développée au niveau du site d'implantation de 76 jours (Fig. 1a). Vingt-cinq jours plus tard, la souris a été tué par dislocation cervicale et on a analysé les tumeurs. Le tissu tumoral à une moyenne de 1 centimètre cube taille, fait preuve d'une enveloppe intacte et une texture dure (Fig. 1b). Métastase dans le rétropéritoine a été trouvé par inspection visuelle (Fig. 1c). Aucune métastase n'a été détectée dans le péritoine, la cavité abdominale, du foie, de la rate, de l'estomac, les intestins, les reins, les poumons et le cerveau. Figue. Une croissance métastasique de tumeurs du tissu de cancer gastrique implantable par voie chirurgicale obtenu (X 400). a, b: Implantés tissu de cancer a augmenté à ~ 1 centimètre cube et affiche une enveloppe intacte et texture dure; c: Tumeur métastasé dans le rétropéritoine de la souris; d, e: Le tissu implanté et des tumeurs métastatiques consistaient en des cellules de carcinome faiblement différencié et quelques cellules de mésenchyme et les vaisseaux sanguins, avec une certaine ressemblance avec la cavité glandulaire. Les cellules cancéreuses ont montré des noyaux sombres tachée et le cytoplasme peu et manquaient la proportion normale entre noyau et le cytoplasme; f: tumeur Implantés montrant l'analyse anatomopathologique infiltration des tissus a révélé que les tissus tumoraux implantés et métastatiques étaient composés de cellules de carcinome peu différenciés, et seulement un peu de mésenchyme et des vaisseaux sanguins. Ces tissus semblent répandus, manquaient la structure, et ressemblent à la lumière glandulaire. En outre, les cellules affichées noyaux sombres tachée, le cytoplasme peu, et les noyaux misproportioned et le cytoplasme (Fig. 1d, e, f). Des résultats similaires ont été obtenus dans une étude parallèle impliquant l'implantation du tissu tumoral des souris en 4; une seule souris tumeur développée (taille moyenne: 1,5 centimètre cube) 26 jours après l'implantation. Aucune métastase n'a été observée dans le péritoine, la cavité abdominale, du foie, de la rate, de l'estomac, les intestins, les reins, les poumons et le cerveau. Les autres souris implantées avec le deuxième et les spécimens chirurgicaux 4e montrent aucune croissance tumorale. De la stabilité de la tumeur implantée après le passage dans plusieurs générations The tumeur qui se développe à partir de l'échantillon chirurgical a été repiquées 1ère pendant dix générations. Le taux de croissance de la tumeur a été de 100% et que des métastases dans rétropéritoine et les viscères était 80-100% (moyenne 94%), indépendamment du fait que le tissu primaire a été utilisé frais ou congelé (tableau 3). Les métastases des viscères n'a été observée dans les ganglions lymphatiques autour de l'œsophage, au-dessous de la muqueuse gastrique, la tunique séreuse Gastria, de la rate, du foie zone du portail, venae central et du sinus hepaticus, parenchyme hépatique, d'une capsule du foie, hile rénal, du rein parenchyme, la glande surrénale, l'intestin séreuse, du pancréas et spermaduct (fig. 2). Le temps de génération est de 16 days.Table 3 Stabilité et taux de métastase des tumeurs implantées à positionsa différent de variable
la croissance No
en position implantée (en%)
Métastases rétropéritoine (%)
Viscera (%)
temps de génération (jours)
numéro de passage
1er
5
100 (5/5 )
100 (5/5)
80 (4/5)
20
2ème
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
14
3ème
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
4ème
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
15
5ème
5
100 (5/5)
100 (5/5)
80 (4/5)
14
6
5
100 (5/5)
80 (4/5)
100 (5/5)
13
7
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5 /5)
17
8
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
9
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
10
5
100 (5 /5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
stocké dans l'azote liquide
4ème
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
17
8
5
100 (5/5)
100 (5/5)
100 (5/5)
18
Implantation dans Groins de position différente
50
100 (50/50)
94 (47/50)
94 (47/50 )
16
Retour
10
100 (10/10)
30 (3/10)
10 (1/10)
20
Aisselles
10
100 (10/10)
0 (0/10)
30 (3/10)
14
a Après dix générations d'implantation, toutes les souris ont développé la croissance de la tumeur au position implantée, et 94% des souris ont développé des métastases dans le rétropéritoine et les viscères, quelle que soit la source de la tumeur était fraîche ou congelée. Le temps moyen de supporter la tumeur est de 16 jours. L'aine de souris est meilleure position d'implantation, ce qui entraîne 94% rétropéritoine et les viscères métastases
Fig. 2 L'examen anatomopathologique de la tumeur qui métastasé aux viscères (X 100). Micro-métastases a été observée dans les ganglions lymphatiques autour de l'oesophage (a), au-dessous de la muqueuse gastrique (b) et dans d'autres domaines tels que la tunica séreuse Gastria (c), parenchyme sous la capsule hépatique (d), le foie zone du portail (E ), des sinus hepaticus (f), de la rate (g), venae cENTRALES hépatique (h), du pancréas (i), hile rénal (j), parenchyme rénal (k), la glande surrénale (l), de l'intestin séreuse (m), spermaduct (n) et du poumon (o)
la vitesse de métastase de la tumeur implantée dans différentes positions
implantation dans des positions différentes affectent le taux de métastases, mais pas le taux de croissance tumorale. Implantation dans l'aine a donné lieu à 94% rétropéritoine et les viscères métastases; implantation dans le dos a abouti à 30% métastase rétropéritoine et 10% des viscères métastases; implantation dans les aisselles n'a entraîné aucune métastase rétropéritoine et 20% des viscères métastase. Le temps de génération était: 16 jours pour les tumeurs implantées dans les aines, 20 jours pour ceux implantés dans le dos, et 14 jours pour ceux implantés dans les aisselles (tableau 3). Viscères métastatique inclus foie (50%), du rein (44%), de l'intestin (28%), de l'oesophage (12%), du pancréas (12%), de l'estomac (6%), la rate (6%) et spermaduct (6 %) (tableau 4) .Table 4 métastase dans la position implantée visceraa
Non
viscère métastase (%)
foie (%)

Kidney (%)
Intestin (%)
œsophage (%)
Pancréas (%)
estomac (%)

Spleen (%)
Spermaduct (%)
Groins
50
94 (47/50)
50 (25/50)
44 ( 22/50)
28 (14/50)
12 (6/50)
12 (6/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
6 (3/50)
Retour
10
10 (1/10)
0
0
0 0

0
10 ( 1/10)
10 (1/10)
0
Aisselles
10
30 (3/10)
20 (2/10)
0
0
10 (1/10)
0
0
0
0
un foie et les reins étaient les viscères avec taux le plus élevé de métastases (44-50%), et le l'estomac, la rate et spermaduct étaient les plus bas (6%)
Caractérisation de la tumeur implantée et métastatique The CHI et les résultats de PCR en temps réel a révélé que ICAM-1, VCAM-1 et CK8 /18, mais pas E-cadhérine, ont été principalement exprimé à la chirurgie et dans la tumeur implantée de génération primaire et premier (Fig. 3). Comme on le voit dans le tableau 5, la génération primaire et première de la tumeur a montré une coloration positive pour la VCAM-1 et CK8 /18, mais les générations ultérieures ont montré une faible coloration pour ces protéines: VCAM-1 a été notée comme la coloration légèrement positive (++) dans le primaire, signal faible (+) dans la première génération, et CK8 /18 coloration a été marqué comme signal faible (+) dans la première génération. Tumeurs à toutes les étapes ont présenté une coloration négative pour la E-cadhérine, alors que la tumeur métastatique à toutes les générations a montré une coloration négative pour E-cadhérine, ICAM-1, VCAM-1, et CK8 /18. En ce qui concerne les transcrits, on a détecté l'ARNm de VCAM-1 dans la tumeur primaire et de la première génération, mais non implanté au stade métastatique. E-cadhérine et ICAM-1 transcriptions ont pas été détectés dans toutes les générations de tumeurs implantées et métastatiques. Figue. 3 IHC analyse de l'expression de la E-cadhérine, la VCAM-1, ICAM-1 et CK8 /18 (X 200). CK8 /18 expression a été détectée dans les échantillons chirurgicaux utilisés pour l'implantation (a) et dans les tissus primaires implantés tumorales (b), mais pas dans la F1 tissus tumoraux génération implantée (c), la VCAM-1 est exprimée dans l'échantillon chirurgical ( d) et dans les tissus primaires implantés tumoraux (e), mais pas dans les tissus tumoraux génération F2 implantés (f). expression de la E-cadhérine n'a pas été détectable dans l'échantillon chirurgical (g) et dans les tissus primaires implantés tumorales (h). ICAM-1 a été exprimé dans la pièce opératoire (i), mais pas dans les tissus primaires de tumeurs implantées (j)
Tableau 5 Expression de la E-cadhérine, ICAM-1, VCAM-1 et CK8 /18 dans les tumeurs chez la chirurgie, lors de l'implantation et pendant la métastase
variable
Non
Protein expressiona
ARNm expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical spécimen 1
-
+++
+++
+++
primaire 1
Implanted tumeur
- -
++
+
0
0
0,0927
tumeur métastatique
-
- -
- 0
0
0
1er
5
tumeur
Implantés - (0/5)
- (0/5)
+ (5/5)
- (0/5 )
0
0
0,1997
tumeur métastatique
- (0/5)
- (0/5)
- (5/5)
- ( 0/5)
0
0
0
2 ~ 10
45
tumeur
Implantés - (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
- (0/45)
0
0
0
tumeur
métastatiques - (0/42)
- (0 /42)
- (0/42)
- (0/42)
0
0
0
analyse aMolecular des tumeurs implantées et métastatiques révélé aucune expression détectable de CK8 /18, E-cadhérine, la VCAM-1 et ICAM-1, à l'exception coloration positive pour la VCAM-1 dans les tissus de tumeurs implantées de la première génération
rapport de cancer se caractérise par une prolifération, l'invasion et les métastases. Plus de 90% de la mortalité par cancer est due à des métastases incitant ainsi la recherche intense [19]. Métastase est un processus complexe et mal compris impliquant des protéines avec des fonctions dans l'adhésion cellulaire, la dégradation de l'ECM et la motilité [19-21]. De nombreuses études sur les métastases du cancer de l'estomac ont été rapportés [22-26]. Cependant, la plupart de ces études ont été réalisées in vitro, à défaut de mimer le processus métastatique qui se produit in vivo. Cela suggère la nécessité d'un modèle animal de métastases du cancer qui a un phénotype solide et cohérent. Dans la présente étude, un modèle de cancer gastrique métastatique humain a été créé par l'inoculation hypodermique chez la souris nude avec des tissus cancéreux obtenus chirurgicalement chez des patients atteints de cancer gastrique. Toutes les souris ont développé une croissance tumorale à la position et les métastases rétropéritoine implantée, et 94% des souris ont développé des métastases dans les viscères, quelle que soit la source de la tumeur était fraîche ou congelée. La tumeur implantée et métastatiques ont maintenu les mêmes caractéristiques dans toutes les générations et les métastases des viscères n'a été observée dans les ganglions lymphatiques autour de l'œsophage, au-dessous de la muqueuse gastrique, la tunique séreuse Gastria, de la rate, du foie zone du portail, venae central et du sinus hepaticus, parenchyme du foie, la capsule du foie, hile rénal, du rein parenchyme, la glande surrénale, l'intestin séreuses et du pancréas. Métastase était robuste dans ce modèle de souris. Les métastases du rétropéritoine éventuellement résultant de la dissociation des cellules tumorales de la tumeur implantée, l'introduction dans les ganglions inguinaux et le transport vers le rétropéritoine. Cela peut expliquer la tumeur métastasé dans le foie zone de portail, venae central, et des sinus hepaticus, ainsi que dans tunica séreuse Gastria, hile rénal, la glande surrénale et séreuse intestin. Métastases pourrait également se produire dans les ganglions lymphatiques; Les tumeurs ont été observés dans les ganglions lymphatiques autour de l'œsophage, au-dessous de la muqueuse gastrique, de la rate, du pancréas, du rein et du parenchyme
L'apparition de métastases semble dépendre du site d'implantation sous-cutanée. implantation dans l'aine a donné lieu à 100% des métastases rétropéritonéale et 94% des viscères métastases; l'implantation dans le dos a donné lieu à 30% rétropéritoine métastases, et 10% des viscères métastases; implantation dans les aisselles n'a entraîné aucune métastase rétropéritoine et 20% des viscères métastase. Cette observation est cohérente avec les métastases associées à microenvironnement de la croissance tumorale, y compris des vaisseaux sanguins et la distribution lymphatique. En effet, l'aine de la souris a plus de vaisseaux sanguins et des réseaux lymphatiques qui se déversent dans la cavité abdominale et les viscères que le dos. Bien que les aisselles sont riches en vaisseaux sanguins et des réseaux lymphatiques, la direction de la veine est antérograde, et la plupart de la lymphe se connecter avec poumon, de la trachée et de la plèvre, le cancer gastrique endroits où se fait rarement transloqué. Par conséquent, le simple procédé d'implantation sous-cutanée des cellules cancéreuses dans les aines des souris nude résulte efficacement dans un modèle de cancer gastrique humain métastatique. Ce modèle a un taux de métastases des viscères supérieure à celle rapportée dans la littérature [13-18] et peut être aisément appliquée à d'autres types de cancer humain.
Invasion tumorale par des métastases subséquentes est la principale cause de morbidité et de mortalité chez les patients souffrant cancer. les métastases du cancer est un processus complexe dans lequel les cellules tumorales se séparent de la masse tumorale primaire, migrent à travers le système vasculaire, extravasation dans d'autres tissus et de se développer dans de nouvelles tumeurs [27-30]. Parmi ces divers procédés, une altération des propriétés adhésives des cellules tumorales primaires est un facteur critique pour la progression de la tumeur [28]. Il a été montré que l'adhésion cellulaire est responsable de la progression des tumeurs, impliquant des molécules qui jouent un rôle dans l'adhésion cellule-cellule et cellule-matrice d'adhérence [31-34]. L'adhésion cellulaire joue un rôle important dans les deux étapes du processus métastatique de la tumeur - le détachement de la tumeur primaire et son adhérence au système circulatoire [27]. Par conséquent, les molécules d'adhésion cellulaire jouent un rôle critique dans l'invasion et les métastases d'une variété de tumeurs humaines.
E-cadhérine joue un rôle important dans l'adhésion cellule-cellule dans les tissus épithéliaux [35]. Outre son rôle dans les cellules normales, cette molécule d'adhésion cellulaire peut jouer un rôle majeur dans la transformation maligne des cellules, le développement de la tumeur et la progression. La perte de l'intégrité du tissu tumoral peut conduire à une invasion locale [36]. Par conséquent, la perte de fonction de la E-cadhérine dans les tissus tumoraux est corrélée à l'invasivité des tumeurs et des métastases [37]. Des études ont montré que l'expression aberrante E-cadhérine est associée à l'acquisition de l'invasivité et le stade de la tumeur plus avancée pour le cancer gastrique [38-40].
ICAM-1 et VCAM-1 sont des molécules d'adhésion cellulaire très importants appartenant à l'immunoglobuline super-famille. L'ICAM-1 fonctionne dans la cellule-cellule et ECM adhérence, y compris polynucléaires physiologique (PMN) forte adhérence et de la migration endothéliale trans via le lymphocyte de intégrines leucocytaires functionassociated antigène-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) et macrophage-1 antigène ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. La VCAM-I médie l'adhésion cellulaire par l'intermédiaire de l'intégrine [42]. ICAM-1 joue un rôle important dans les interactions cellule-cellule et cellule-ECM, l'invasion et la cytotoxicité des lymphocytes en particulier une tumeur. Des études ont montré que le taux d'expression positive de l'ICAM-1 était liée à la métastase des ganglions lymphatiques et la profondeur de l'invasion tumorale et l'expression de VCAM-1 cancers gastriques positifs étaient plus invasive et ont été associées à une augmentation des métastases des ganglions lymphatiques de la VCAM-1 expression négative les [43-45]. Cytokératine apparaissent sur toutes les cellules epitheliales, certaines cellules non epitheliales, et la plupart des cellules tumorales. Les cytokératines, appartenant à la famille des protéines de filament intermédiaire (IF), sont des composants primaires de cellules de la corne et maintient l'organisation des tissus épithéliaux. Des études ont montré que les cytokératines sont très fortement conservées et important pour la différenciation des tissus. A l'heure actuelle, plus de 20 cytokératines différents ont été identifiés [46], dont CK 8, 18 et 19 sont les plus abondants dans les cellules épithéliales simples. Dans la présente étude, les résultats IHC et RT-PCR a révélé que l'expression de la E-cadhérine est négative, et celle de ICAM-1, VCAM-1, et CK8 /18 sont positifs dans l'échantillon chirurgicales utilisées pour l'implantation, en accord avec Des études antérieures [38, 40, 43, 45]. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

• Résistance des bactéries du rumen murein à lysozyme
• fibroblastes associés au cancer sont positivement corrélés avec le potentiel métastatique des fibroblastes associés au cancer de l'estomac cancers