Närvaro och betydelsen av Helicobacter spp. i magslemhinnan portugisiska dogs

Närvaro och betydelsen av Helicobacter spp.
I magslemhinnan portugisiska hundar Bild Sammanfattning
Bakgrund
icke-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) kan också orsaka sjukdom hos människor. Hundar är en naturlig reservoar för många av dessa arter. Nära och intensiv mänsklig kontakt med djur har identifierats som en riskfaktor, och därför har en viktig zoonotisk betydelse tillskrivits NHPh.
Metoder
att bestämma förekomsten av Helicobacter
arter och mag histopatologiska förändringar associerade , magslemhinnan prover av 69 hundar utvärderades. Search Results
Endast en hund fram en normal histopatologisk slemhinna med avsaknad av spiralformade organismer. En normal magslemhinna och närvaron av spiralformade bakterier observerades hos två hundar. Alla återstående djur presenterade histopatologiska förändringar representativa för gastrit. Helicobacter
species detekterades i 60 hundar (87,0%) av åtminstone en detekteringsmetod. Histologiska visade histokemiska och immunohistokemiska utvärderingar som Helicobacter
spp. var närvarande i 45 (65,2%), 52 (75,4%) och 57 (82,6%) hundar, respektive. Spiralformade bakterier detekterades genom qPCR analys 33 (47,8%) hundar. H. heilmannii-
liknande organismer identifierades i 22 djur (66,7%) och huvudsakligen i antral gastric regionen. H. Salomonis
var den näst vanligaste arterna (51,5%) även om det var främst i samband med andra Helicobacter
spp. och i den gastriska regionen kroppen. H. bizzozeronii och H.felis
var mindre ofta upptäcks.
Slutsatser
Det konstaterades att, trots den höga förekomsten och global distribution av gastric NHPh hos hundar, närvaro av specifika Helicobacter
arter varierar mellan geografiska områden. NHPh infektioner signifikant åtföljs av mild till måttlig intraepitelial lymfocyter infiltration och mild till måttlig gastric epithelial skada, men ett tydligt samband mellan gastrit och Helicobacter
infektion kunde inte fastställas.
Nyckelord
Canine magslemhinnan Dogs Icke Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) Histochemistry Immunohistokemi (IHC) polymeras~~POS=TRUNC kedjereaktion~~POS=HEADCOMP (PCR) Mage Introduktion
släktet Helicobacter
är sammansatt av åtminstone 40 arter [1]. Bland dessa, H. pylori
betraktas som en viktig patogen vars naturliga värd är människa men dess närvaro i hundens mage har i sällsynta fall rapporterats [2-4].
Ett stort antal icke-Helicobacter pylori Helicobacter
arter (NHPh) har också uppmärksammats i människor och i flera djur. Tidigare NHPh allmänhet kallas H. heilmannii sensu lato
(SL) och inkluderade H. suis
, en art koloniserar magen på grisar och en grupp av arter kända för att kolonisera magslemhinnan av hundar och katter : H.felis
, H. bizzozeronii
, H. Salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
och H. heilmannii sensu stricto
(ss) [5] . De flesta av dessa gastric NHPh har även möjlighet att orsaka sjukdom hos människa [6,7]. Nära och intensiv mänsklig kontakt med djur har identifierats som en riskfaktor, och därför har en viktig zoonotisk betydelse tillskrivits NHPh [6,8,9].
Sällskapsdjur, gastric Helicobacter
spp. har ofta beskrivits med en prevalens varierar från 67 till 86% i kliniskt friska hundar och 61-100% i djur som kronisk kräkningar [10-14]. Dessa mikroorganismer upptäcktes i magen på cirka 100% av beagle hundar och hundar från lokala skyddsrum [15-17]. Den dominerande gastric Helicobacter spp.
I katter och hundar är H. felis
, H. bizzozeronii Mössor och H. heilmannii egentlig bemärkelse
(ss
), medan H. Salomonis
är mindre ofta upptäcks och förekomsten av H. cynogastricus Mössor och H. baculiformis
har ännu inte studerats [9,18-20]. Blandade infektioner med olika arter kan också förekomma [3,19].
Medan många studier har rapporterat att fundus och kroppen har högre bakterietäthet och en högre sannolikhet att finna Helicobacter
spp. [17,21,22] andra har funnit några signifikanta skillnader mellan densitet NHPh i fundus, kropp och antrum [2,23-26] av hundens mage. Skillnaderna i dessa resultat kan tillskrivas de olika laboratorie diagnostiska metoder som används av de olika forskargrupperna. Sälja The diagnostiska metoder som används för Helicobacter
spp.
Kan vara icke-invasiv och invasiv [24]. Icke-invasiva metoder som serologi eller detektering av bakteriellt DNA och antigen i avföring inte kräver en gastric biopsi eller anestesi. De invasiva metoder, såsom bakteriekulturer, histopatologi, fläckar, elektronmikroskopi eller polymeraskedjereaktion (PCR) kan kräva en gastric biopsi, som ofta erhålls genom endoskopi under narkos eller genom obduktion. Typiskt Helicobacter
organismer inte lätt visualiseras med hematoxylin och eosin (HE) fläcken och så är deras direkta observationer i biopsier exemplar markeras genom användning av särskilda fläckar, såsom den modifierade Giemsa (MG) fläck. Mer genomarbetade och känsliga Helicobacter
-detection metoder såsom immunohistokemi (IHC) eller polymeraskedjereaktion (PCR) är forskningsverktyg sällan används i en diagnostisk miljö.
Flera undersökningar har diskuterat förekomsten av Helicobacter spp.
hos hundar [2,10,11,14,16] men endast ett fåtal studier av specifika arter som förekommer i hundens mage bestämdes [4,19,27,28]. Den exakta identifieringen av mag helicobacters till artnivå är nödvändig för att fastställa förekomsten och kliniska betydelsen av alla taxa. Syftet med denna studie var att fastställa förekomsten av olika gastric Helicobacter
arter som förekommer i olika magen regioner av hund magen (kropp och antrum) med hjälp av histologiska, histokemisk, immunhistokemisk och molekylärdiagnostiska metoder. Graden av kolonisering präglades och korreleras med de respektive histopatologiska förändringar i hundens magslemhinnan.
Metoder
provsamling
Gastric vävnader erhölls från 69 hundar (45 manliga och 24 kvinnliga, i åldrarna 3 månader till 15 år). Proverna valdes slumpmässigt från arkiv laboratoriet för veterinär patologi, ICBAS-UP (Portugal), där de mottogs mellan 2010 och 2013. Prover erhölls från 20 hundar under endoskopiska procedurer, från fem under kirurgi och från 44 hundar under obduktion undersökningar. Alla förfaranden (kirurgisk excision och obduktion undersökning) utfördes i ett kliniskt sammanhang försöker att behandla djur och baseras på den kliniska bedömning av deras deltar utövare. Användningen av utskurna vävnaderna för forskning förklarades till ägarna och en informerat samtycke erhölls för varje enskilt fall. Ingen av de åtgärder som vidtogs enbart för forskningsändamål och utredarna hade något inflytande på valet och genomförandet av sådana förfaranden. Endast gastriska prover i gott skick för konservering inkluderades i denna studie.
Vävnaderna fixerades i 10% neutral buffrad formalin och bäddades in i paraffinvax. Tre på varandra följande sektioner av 3 pm gjordes, en som färgas med HE, en annan med en MG fläck och den tredje användes för immunohistokemisk färgning.
Prov utvärdering sälja The gastric prover utvärderades oberoende av två observatörer (IA och FG ). Histopatologiska parametrar såsom förändringar i cellularitet, hade fibros i lamina propria Mössor och körtel atrofi analyseras enligt World smådjursVeterinärFörbund (WSAVA) riktlinjer [29]. Graden av morfologiska egenskaper och inflammatoriska förändringar graderades som vanligt, mild, måttlig eller märkas genom att använda tillgängliga WSAVA gastrointestinal standardisering visuell analog [29].
Mikroskopisk utvärdering genomfördes genom att analysera hela avsnittet av mag vävnad. Förekomsten av Helicobacter
spp.
Bedömdes av HE och MG fläckar och IHC. En hund klassificerades som Helicobacter
positiv när en av dessa metoder gav ett positivt resultat. Dessutom var bakterietäthet kolonisering kvantifieras: +, några organismer (< 10 organismer /400x); ++, Måttligt antal organismer (10 till 50 organismer /400x); +++, Stort antal organismer. (≫ 50 organismer /400x) [24]
Immunhistokemi
För immunohistokemisk studie var sektioner deparaffinised, hydratiserades och antigenåtervinning utförs i en tryckkokare i 10 mmol /L natriumcitratbuffert, pH 6,0, under 2 minuter (min). Objektglasen kyldes under 10 min vid rumstemperatur och sköljdes två gånger i trifosfat buffrad saltlösning (TBS) under 5 min. Den NovolinkTM Max-Polymer detektionssystem (Novocastra, Newcastle, UK) användes för visualisering, enligt tillverkarens anvisningar. Efter blockering endogen peroxidas med 3% väteperoxid i metanol under 10 min tillsattes sektioner inkuberades över natten vid 4 ° C, med ett polyklonalt antiserum mot H. pylori
(RBK012; Zytomed, tyska) som visar immunoreaktivitet med ett brett spektrum av bakterier som tillhör Helicobacter
släktet. Sektioner sköljdes med TBS mellan varje steg av förfarandet. Färg utvecklades under upp till 7 min vid rumstemperatur med 3,3'-diamino-bensidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) och sektionerna fick sedan lätt motfärgades med hematoxylin, dehydrerades och monterades. Positiv immunreaktivitet registrerades som en tydlig gyllenbrun märkning av bakterierna som finns på slemhinneytan i mag gropar eller körtlar och i parietalcellerna.
Extraction, PCR-förstärkning och sekvensering av DNA
DNA extraherades från 5 på varandra följande skivor av 20

• Molekylära mekanismer för gastrisk epitelial cellvidhäftning och injektion av CagA av Helicobacter pylori
• Förekomst och överlevnad esofagus och magcancer i England mellan 1998 och 2007, en populationsbaserad study