Presença e importância do Helicobacter spp. na mucosa gástrica de cães portugueses

Presença e importância do Helicobacter spp.
Na mucosa gástrica de cães portugueses
Abstract Background
não-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) também são capazes de causar doenças em seres humanos. Os cães são um reservatório natural para muitas destas espécies. Fechar e intenso contato humano com os animais tem sido identificada como um fator de risco e, portanto, um importante significado zoonótica tem sido atribuída a NHPh.
Métodos
Para determinar a prevalência de Helicobacter
espécies e as gástricas alterações histopatológicas associadas , foram avaliadas amostras de mucosa gástrica de 69 cães.
Resultado
Apenas um cão apresentou uma mucosa histopatológico normal, com ausência de organismos em forma de espiral. Uma mucosa gástrica normal e a presença de bactérias em forma de espiral foi observado em dois cães. Todos os animais restantes apresentaram alterações representante histopatológico de gastrite. Helicobacter
espécies foram detectados em 60 cães (87,0%) de, pelo menos, um método de detecção. Histológico, as avaliações histoquímica e imuno-histoquímica revelou que Helicobacter
spp. estavam presentes em 45 (65,2%), 52 (75,4%) e 57 (82,6%) cães, respectivamente. bactérias em forma de espiral foram detectados por análise de qPCR em 33 (47,8%) cães. H. heilmannii-
organismos similares foram identificadas em 22 animais (66,7%) e, predominantemente, na região gástrica antral. H. salomonis
foi a segunda espécie mais prevalente (51,5%) embora tenha sido encontrada principalmente em associação com outros Helicobacter
spp. e na região gástrica do corpo. H. bizzozeronii e H. felis
foram menos frequentemente detectado.
Conclusões
Concluiu-se que, apesar da alta incidência e distribuição mundial de NHPh gástrica em cães, a presença de Helicobacter
espécies específicas podem variam entre as regiões geográficas. infecções NHPh foram significativamente acompanhado de leve a moderada infiltração de linfócitos intra-epitelial e leve a moderada lesão epitelial gástrica, mas não foi possível estabelecer uma relação clara entre gastrite e infecção pelo Helicobacter
.
Palavras-chave
Canine gástrico mucosa Cães Não- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) histoquímica Imuno-histoquímica (IHQ) reação em cadeia da polimerase (PCR) estômago Introdução
O gênero Helicobacter
é composto de pelo menos 40 espécies [1]. Entre estes, H. pylori
é considerado como um importante patógeno cujo hospedeiro natural é o homem, mas a sua presença no estômago canino tem sido raramente relatada [2-4].
Um grande número de não-Helicobacter pylori Helicobacter
espécies (NHPh) também foram reconhecidos em seres humanos e em muitos animais. Anteriormente, foram NHPh geralmente referido como H. heilmannii sensu lato
(SL) e incluiu H. suis
, uma espécie que colonizam os estômagos dos porcos e um grupo de espécies conhecido para colonizar a mucosa gástrica de cães e gatos : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
e H. heilmannii sensu stricto
(ss) [5] . A maioria destes NHPh gástrico também são capazes de causar doença em humanos [6,7]. Fechar e intenso contato humano com os animais tem sido identificada como um fator de risco e, portanto, um significado importante zoonótica tem sido atribuída a NHPh [6,8,9].
Em animais de companhia, Helicobacter gástrica
spp. têm sido frequentemente descrita com uma prevalência que varia de 67-86% em cães clinicamente saudáveis ​​e 61-100% em animais que apresentam vômitos crônicos [10-14]. Estes microrganismos foram detectados no estômago de cerca de 100% dos cães e cães beagle de laboratório de abrigos locais [15-17]. A predominante gástrica Helicobacter spp.
Em gatos e cães são H. felis
, H. bizzozeronii Comprar e H. heilmannii sensu stricto
(ss
), enquanto H. salomonis
é menos frequentemente detectada e a prevalência de H. cynogastricus Comprar e H. baculiformis
ainda não foi estudado [9,18-20]. infecções mistas com espécies diferentes também pode ocorrer [3,19].
Enquanto muitos estudos têm relatado que o fundo eo corpo têm maior densidade bacteriana e uma maior probabilidade de encontrar Helicobacter
spp. [17,21,22] pessoas não encontraram diferenças significativas entre a densidade da NHPh no fundo, corpo e antro [2,23-26] do estômago canino. As discrepâncias nestes resultados podem ser atribuídos às diferentes metodologias de diagnóstico laboratoriais utilizados pelos vários grupos de pesquisa.
Os métodos de diagnóstico utilizados para Helicobacter
spp.
Pode ser não-invasiva e invasiva [24]. Os métodos não-invasivos como sorologia ou a detecção do DNA bacteriano e antígenos nas fezes não requerem uma biópsia gástrica ou anestesia. Os métodos invasivos, como culturas de bactérias, histopatologia, manchas, microscopia eletrônica ou de reacção em cadeia da polimerase (PCR) pode exigir uma biópsia gástrica, que é frequentemente obtida através da endoscopia sob anestesia ou por necropsia. Normalmente Helicobacter
organismos não são facilmente visualizados com a hematoxilina e eosina (HE) e assim, a sua observação directa em amostras de biópsia é realçado pelo uso de colorações especiais, tais como a mancha modificada Giemsa (MG). Helicobacter
métodos -Detecção mais elaboradas e sensíveis, tais como imuno-histoquímica (IHQ) ou reação em cadeia da polimerase (PCR) são ferramentas de pesquisa raramente usados ​​em um ambiente de diagnóstico.
Várias investigações têm discutido a prevalência de Helicobacter spp.
em cães [2,10,11,14,16], mas em apenas poucos estudos foram determinadas as espécies específicas presentes no estômago canino [4,19,27,28]. A identificação precisa dos helicobacters gástricas ao nível de espécie é essencial, a fim de determinar a prevalência e significado clínico de todos os táxons. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de diferentes Helicobacter
espécies gástricos presentes em regiões distintas do estômago do estômago canino (corpo e antro) usando histológica, histoquímica, imuno-histoquímica e técnicas de diagnóstico molecular. O grau de colonização foi caracterizada e correlacionada com as respectivas alterações histopatológicas na mucosa gástrica canina.
Métodos
coleta de amostras
tecidos gástricos foram obtidas de 69 cães (45 do sexo masculino e 24 do sexo feminino, com idade variando de 3 meses a 15 anos). As amostras foram selecionados aleatoriamente a partir dos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária, ICBAS-UP (Portugal) onde foram recebidos entre 2010 e 2013. As amostras foram obtidas de 20 cães durante procedimentos endoscópicos, de cinco durante a cirurgia e de 44 cães durante a necropsia exames. Todos os procedimentos (excisão cirúrgica e exame de necropsia) foram realizadas em um contexto clínico de tentar tratar os animais com base na melhor julgamento clínico de seus profissionais presentes. O uso de tecidos excisadas para a pesquisa foi explicado aos proprietários e um consentimento informado foi obtido para cada caso. Nenhuma das ações foram tomadas exclusivamente para fins de investigação e os investigadores não teve influência sobre a seleção e execução de tais procedimentos. Somente as amostras gástricas em bom estado de preservação foram incluídos neste estudo.
Os tecidos foram fixados em formalina a 10% tamponada neutra e embebido em cera de parafina. Três secções consecutivas de 3 mm foram feitas, que está sendo corados com HE, outro com uma mancha MG eo terceiro foi utilizado para coloração imuno-histoquímica.
Avaliação Amostra
As amostras gástricas foram avaliadas independentemente por dois observadores (IA e FG ). parâmetros histopatológicos, tais como alterações na celularidade, fibrose da lâmina própria
e da glândula atrofia foram analisados ​​de acordo com a Small World Veterinary Association Animal (WSAVA) orientações [29]. O grau de características morfológicas e alterações inflamatórias foi classificado como normal, ligeira, moderada ou marcada, utilizando a padronização WSAVA gastrointestinal visual analógica disponíveis [29].
A avaliação microscópica foi realizada através da análise de toda a secção do tecido gástrico. A presença de Helicobacter
spp.
Foi avaliada por HE e manchas MG e por IHC. Um cão foi classificada como Helicobacter
positivo quando um destes métodos deram um resultado positivo. Além disso, a colonização densidade bacteriana foi quantificada: +, alguns organismos (< 10 organismos /400x); ++, Moderado número de organismos (10 a 50 organismos /400x); +++, Grande número de organismos. (≫ 50 organismos /400x) [24]

Imunohistoquímica Para o estudo imuno-histoquímica, os cortes foram deparaffinised, recuperação hidratado e antigénio foi realizada numa panela de pressão, em 10 mmol /L tampão citrato de sódio, pH 6,0, durante 2 minutos (min). As lâminas foram arrefecidas durante 10 min à temperatura ambiente e lavadas duas vezes em solução salina tamponada trifosfato (TBS) durante 5 min. O sistema de detecção NovolinkTM Max-polímero (Novocastra, Newcastle, UK) foi usado para visualização, de acordo com as instruções do fabricante. Após o bloqueio da peroxidase endógena com peróxido de hidrogénio a 3% em metanol durante 10 min, as secções foram incubadas durante a noite a 4 ° C, com um anti-soro policlonal contra o H. pylori
(RBK012; Zytomed, Alemanha), que mostra a imunorreactividade com uma vasta gama de bactérias pertencentes ao género Helicobacter
. As secções foram enxaguadas com TBS entre cada passo do processo. A cor foi desenvolvida por até 7 min à temperatura ambiente com 3,3-diamino-benzidina (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) e as secções foram então levemente contracoradas com hematoxilina, desidratadas e montadas. imunorreactividade positiva foi registada como uma rotulagem castanho-dourado distinta das bactérias localizadas na superfície da mucosa, em poços gástricos ou glândulas e nas células parietais.
extracção, amplificação por PCR e sequenciação de ADN
O DNA foi extraído a partir de 5 fatias consecutivos de 20 um utilizando um DNeasy Blood and Tissue kit (Qiagen), de acordo com as instruções do fabricante. Foram desenvolvidos Helicobacter
espécies específicas qPCRs com base em um curto fragmento dos genes da urease A e B para a identificação de H. heilmannii SS
, H. felis
, H. e H. bizzozeronii
salomonis
. Para a geração de padrões para cada qPCR, uma grande parte do grupo de genes ureAB de H. heilmannii
ASB1 (1224 pb), H. felis
CS1 (1228 pb), H. salomonis
R1053 (1224 pb) e H. bizzozeronii
R1051 (1230 pb) foi amplificado utilizando iniciadores U430F e U1735R, como descrito anteriormente [30]. O padrão consistiu de 10-fold-diluições a partir de 10 8 amplicons de PCR para cada 10 l de mistura de reacção. Um ul de molde de ADN extraído foi suspenso numa mistura de reacção de 10 uL que consiste em 0,25 ul de frente e iniciadores (Tabela 1), água para HPLC 3.5 ul e 5 ul SensiMix ™ SYBR n-ROX (Bioline Reagentes Ltd, Reino Unido) inverter. Ambos os padrões e as amostras foram testadas em duplicado em um sistema CFX96 ™ RT-PCR com um termociclador de C1000 (Bio-Rad, Hercules CA, EUA). A (versão 1.6) software Bio-Rad CFX Manager foi utilizado para o cálculo de ciclos de limite (TC) -Valores e análise de curva de fusão do ADN amplificado. Os valores médios dos duplicados foram utilizados para quantificação de ADN por Helicobacter
nas amostras de tecido. Para excluir amostras com falsos positivos, os amplicons de cada amostra positiva foram sequenced.Table 1 Lista dos iniciadores utilizados para qPCR
nome Primer
Sequência de nucleótidos
Especificidade
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G ss
H. heilmannii

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT CCG ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

análise estatística
teste do qui-quadrado de Pearson e exato de Fisher foram usados ​​para determinar a dependência entre duas categorias. valores < p 0,05 foram considerados como estatisticamente significativos. A análise estatística foi realizada utilizando o pacote estatístico SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisboa, Portugal).

Resultados Um total de 117 amostras gástricas (66 da região do corpo e 51 do região antro) foram analisados.
Entre os 69 animais, ambas as regiões gástricas estavam disponíveis para avaliação em 48 cães, enquanto que apenas regiões do corpo ou antro estavam disponíveis em 18 e três cães, respectivamente.
dos 69 cães, apenas um apresentaram uma mucosa histopatológico normal, com ausência de organismos em forma de espiral. Uma mucosa gástrica normal e a presença de bactérias em forma de espiral foi observado em dois cães (2,9%). Os animais restantes, apresentou alterações histopatológicas representativos de gastrite (66/69 ou 95,7%) (Tabela 2). Com base nas alterações histopatológicas na mucosa gástrica, que diagnosticou uma ligeira a moderada, gastrite crônica em 88,4% (61/69) que afeta o corpo gástrico de 51,5% (34/66) e na região antral de 92,2% (47/51 ) do animals.Table 2 Quadro resumindo as alterações histopatológicas e colonização densidade observada no estômago canino, de acordo com os resultados positivos específicos de espécies NHPh PCR, os resultados género positivos e os negativos
PCR resultados positivos com espécies específicas identificação, localização, independentemente gástrica (cento & número) (n = 33)
resultados positivos para Helicobacter spp. (Cento & número) (n = 27)
resultados negativos (cento & número) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
Histopatologia classificação
(Day et al., 2008)
normal
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
0
7,4 (2/27)
11,1 (1/9 )
NS
gastrite leve
15,2 (5/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
gastrite moderada
12,1 (4/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Marcado gastrite
0
0
0
0
0
6.1 (2/33)
0
0
0
0
11,1 (1/9)
lesão epitelial
Mild
27,3 (9/33)
3.0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Moderado
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 (1 /33)
0
0
14,8 (4/27)
11,1 (1/9)
fibrose /atrofia da mucosa
Mild
18,2 (6/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Moderado
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27)
11,1 (1/9)
linfócitos intra-epiteliais
Mild
15,2 (5/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15.2 (5 /33)
0
0
6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
0,016
Moderado
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27)
0
Lymphofollicular hiperplasia
Mild
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
NS
densidade bacteriana (com base em os resultados IHC)
NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27)
++
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legenda: HH
, H. heilmannii-like
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
densidade bacteriana:. +, Poucos organismos; ++, Número moderado de organismos; +++, Grande número de organismos. NA, não aplicável. NS, não significativo (P > 0,05).
Ambos ligeira a moderada e lesões epiteliais ligeira a moderada infiltração de linfócitos intra-epiteliais foram encontrados em 88,4% (61/69)
atrofia da mucosa gástrica, aninhamento glandular ou fibrose foi. presente em 44,9% (31/69) cães. Em 18,2% dos animais desta alteração foi observada na região de corpo (12/66) e em 47,1% na região do antro (24/51) do estômago canino.
Infiltração neutrofílica anormal foi detectado apenas no antro do estômago de dois animais: em um, esta alteração era suave e, no outro, e que foi marcado associado com a ulceração gástrica. Outras células inflamatórias, consistindo em infiltração ligeira de mastócitos, foram observados na região do corpo de quatro animais e no antro de dois animais.
Entre todos os animais, 87,0% foram positivos (60/69) (Figura 1A) e 13,0% foram negativos para Helicobacter
spp. (9/69), independentemente do ensaio utilizado para detectar as bactérias. Independentemente da localização estômago, Helicobacter spp
. foram observados usando HE, MG e IMC em 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) e 82,6% (57/69) dos cães, respectivamente. Com coloração HE, bactéria em forma de espiral foram detectados em 62,1% das amostras do corpo (41/66) e em 70,6% das amostras antrais (36/51). Utilizando a mancha MG, esta foi de 68,2% para as amostras corporais (45/66) e 78.4% para as amostras (40/51) antrais. Helicobacter
antigénio foi detectada por imunoquímica em 84,9% (56/66) das amostras corporais e em 80,4% (41/51) das amostras antrais (Tabela 3). A Figura 1
Helicobacter spp. no estômago canino. A) Numerosas bactérias em forma de espiral que colonizam a superfície do epitélio gástrico poço. ELE. Barra = 10 um; B) Observe a infiltração de linfócitos intra-epiteliais dentro das glândulas gástricas mais profundas na mucosa antral de um cão NHPh-positivo. ELE. Barra = 20 uM. C) Presença de NHPh no interior das células parietais da região do corpo gástrica canina (seta preta). MG. Barra = 10 um; D) Grandes quantidades de antigénio de Helicobacter
dentro do muco gástrico superficial e no lúmen das glândulas gástricas da região do corpo do estômago canino. mancha de imunoperoxidase-diaminobenzidina com counterstain hematoxilina de Mayer. Barra = 50 uM. O encarte mostra antígeno Helicobacter
dentro das células parietais, os organismos em forma de espiral, bem preservados, por vezes, detectável ou pontos redondos castanhos. mancha de imunoperoxidase-diaminobenzidina com counterstain hematoxilina de Mayer. Barra = 10 uM.
Tabela 3 Detecção de Helicobacter spp. nos diferentes compartimentos do estômago do estômago canino recorrendo a diferentes métodos de diagnóstico da região gástrica
Os métodos de detecção
Positivo (cento & número)
HE

MG
IHC *
PCR
corporal (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legenda: HE: hematoxilina-eosina; MG: modificado Giemsa; IHC: imuno-histoquímica; qPCRs específicos espécies
Outras identificação em nível de espécie foi realizada utilizando Helicobacter
; reação em cadeia da polimerase
* Os resultados positivos obtidos com IHC não diferiram significativamente entre cada região do estômago (0,05 p >): PCR.. . Helicobacter
spp. foram detectadas em 47,8% dos animais (33/69) (Tabela 3). A maioria das amostras foram positivas na H. heilmannii
qPCR específico. No entanto, os produtos de amplificação mostrou que apenas cerca de 92% de homologia com H. S. S. heilmanni
. Portanto, esses casos foram reclassificados como H. heilmannii-
gosto. Loja Online em 51,5% (17/33) das amostras positivas, apenas uma Helicobacter
espécie foi identificada enquanto as infecções mistas foram detectadas em 48,5% (16/33) (Tabela 2). H. heilmannii-
organismos similares foram os mais comumente encontrados (22/33 ou 66,7%), sendo identificado em dez cães como uma única infecção e em 12 cães infecções mistas. H. salomonis
foi a segunda espécie mais prevalente (17/33 ou 51,5%) embora tenha sido encontrada principalmente em associação com outros NHPh (42%), em vez de por si só (9,1%). Iguais proporções de H. felis Comprar e H. bizzozeronnii
foram detectados (6/33 ou 18,2%), quer como infecções simples (6,3%) ou mistas (12,1%). infecções mistas com H. heilmannii
-como e H. salomonis
foram mais frequentes (33,3%) (Tabela 2). Na área do corpo, as espécies mais frequentemente identificado foi H. salomonis
(44,0%), enquanto que no antro a espécie mais prevalente foi H. heilmannii-
como (57,7%) (Tabela 4) .table 4 Specific espécies de Helicobacter detectados por PCR nos diferentes compartimentos do estômago do estômago canino
específico PCR-Helicobacter spp. resultados positivos
região gástrica (cento & número)
corpo
Antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-like
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii-like + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii-like + H. felis
4.0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4.0 (1/25)
0
Houve uma correlação significativa entre a presença de Helicobacter
spp. e ambos ligeira a moderada lesão epitelial e ligeira a moderada infiltração de linfócitos intra-epiteliais (Figura 1B) do estômago canino (p < 0,05). Estatisticamente significativa foram encontradas correlações entre Helicobacter
infecção e atrofia da mucosa gástrica ou fibrose, lâmina própria
lymphoplasmacytic infiltração ou hiperplasia lymphofollicular. Não foram detectadas diferenças significativas em relação à densidade de colonização bacteriana entre as duas regiões do estômago (p > 0,05).
O número de Helicobacter
casos -positivas detectados com os diferentes métodos diferiram significativamente (P < 0,05). resultados IHC positiva não diferiram significativamente entre cada região do estômago (p > 0,05), enquanto os números obtidos com HE, GM e qPCR diferiram significativamente entre o corpo e o antro (p < 0,05).
Discussão
neste estudo, foi observada uma elevada prevalência da gastrite (95,7%). Estes resultados estão de acordo com outros estudos relatando a ocorrência de gastrite, como um achado comum em cães [14,31,32]. Em contraste, as erosões gástricas e úlceras foram raramente encontrados nestes animais.
NHPh infecção foi determinada por quatro métodos (HE, MG, IHC e qPCR) e uma prevalência de 87,0% em cães foi detectado. Estes resultados são consistentes com os dados disponíveis na literatura, que documentou alta prevalência de NHPh na mucosa gástrica canina [12,19,33-35]. No nosso estudo canino infecção NHPh foi significativamente acompanhada por ligeira a moderada infiltração de linfócitos intra-epitelial e ligeira a moderada lesão epitelial gástrica, independentemente da localização do estômago. A relação clara entre a gastrite canina e infecção pelo Helicobacter
foi, no entanto, não estabelecido que está de acordo com os resultados de outros [11,14,15,34].
Em um inquérito anterior, a percentagem de Helicobacter
casos -positivas detectadas depois que a coloração de amostras gástricas caninos foi de 17,5% [24]. No presente estudo, todas as amostras foram examinadas por dois patologistas altamente experientes na detecção de Helicobacter
spp.
Organismos após a coloração de rotina. Isso pode ter desempenhado um papel na taxa de detecção mais elevada (65,2%) relataram aqui.
De acordo com estudos anteriores, NHPh eram frequentemente observado não só no muco superficial e dentro das glândulas gástricas, mas também intracelularmente, no citoplasma de células parietais [31,33,36] (Figura 1C e D). organismos em forma de espiral presentes nesta localização subcelular particular, eram difíceis de detectar depois que ele e MG coloração devido à granulação citoplasma das células parietais. Nas nossas mãos, IHC parecia ser uma técnica valiosa para identificar NHPh dentro destas células (Figura 1D). No geral, IHC coloração apresentaram os maiores Helicobacter
valores -positivas (82,6%). Esta descoberta está de acordo com outros resultados mostrando que os anticorpos comercialmente disponíveis contra H. pylori Quais são úteis para a detecção de Helicobacter
spp. . Em parafina amostras de embutidos de estômagos de cão [24,26,36]
Estudos anteriores relataram nenhuma diferença estatisticamente significativa entre a detecção de Helicobacter
organismos por meio de técnicas de IHC e PCR (p > 0,05) [24]. Chung et ai.
(2014) relatou que o ensaio de PCR tinha maior sensibilidade e especificidade do que os outros métodos [4]. No entanto, em nosso estudo, a taxa de prevalência de Helicobacter
spp.
Obtido com a qPCR foi a mais baixa (47,8%). Investigações anteriores demonstraram que a fixação de formalina e inclusão em parafina dificultar a análise de PCR [37,38]. Sjödin et ai.
(2011) comparou a eficiência da amplificação de ADN de fresco (n = 28) e embebido em parafina (n = 28) para a identificação de amostras Helicobacte
R spp.
De diferentes órgãos ( felino estômago, duodeno, fígado e pâncreas) e concluíram que o valor médio da concentração de ADN obtida foi maior quando obtida a partir de tecidos frescas [39]. A análise do DNA de amostras de tecidos embebidos em parafina utilizando PCR /qPCR pode ser comprometida devido a fragmentação do ADN, substâncias inibidoras, ou uma combinação de ambos. A fixação de formalina pode, de facto provocar a fragmentação do ADN, bem como a destruição parcial do ADN [38,40], e as reacções de PCR também pode ser inibida por resíduo formalina [37]. Os efeitos negativos da formalina estão diretamente relacionados com a duração da fixação [40]. Embora os exemplos incluídos neste estudo foram todos processados ​​no mesmo laboratório, e, por conseguinte, submetidas aos mesmos protocolos padrão, a duração de fixação podem variar entre amostras, devido à variação no intervalo de tempo entre a recolha da amostra e a sua chegada ao laboratório.
Diferente abordagens moleculares para a identificação de espécies NHPh foram abordadas [4,14,24,28]. Técnicas baseadas na detecção ou sequenciação de genes 16S ou 23S-codificam podem, contudo, não distingue entre os diferentes canino e Helicobacter
espécies gástrico felino, ao passo que os testes baseados na detecção ou sequenciação do gene de hsp60 de
, a urease genes a e B ou gene gyrB
permitir a identificação dessas bactérias ao nível de espécie [9].
em nosso estudo, amplicons obtidos no H. heilmannii
qPCR específica só mostrou aproximadamente 92% de homologia com H . heilmannii,
que até agora só foi cultivada a partir da mucosa gástrica de gatos. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

• Mecanismos moleculares de adesão celular epitelial gástrica e injeção de CagA por mecanismos moleculares Helicobacter pylori
• Incidência e sobrevivência de esofágico e câncer gástrico na Inglaterra entre 1998 e 2007, uma study