Tilstedeværelse og betydningen af ​​Helicobacter spp. i maveslimhinden portugisiske hunde

Tilstedeværelse og betydningen af ​​Helicobacter spp.
I maveslimhinden portugisiske hunde
Abstrakt
Baggrund
Non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) er også i stand til at forårsage sygdom hos mennesker. Hunde er en naturlig reservoir for mange af disse arter. Tæt og intens menneskelig kontakt med dyr er blevet identificeret som en risikofaktor, og derfor har en vigtig zoonotisk betydning blevet tilskrevet NHPh.
Metoder
at bestemme forekomsten af ​​Helicobacter
arter og mavens histopatologiske ændringer i forbindelse , maveslimhinden prøver af 69 hunde blev evalueret. Search Results
Kun én hund præsenteret en normal histopatologisk slimhinde med fravær af spiralformede organismer. En normal maveslimhinden og tilstedeværelsen af ​​spiralformede bakterier blev observeret hos to hunde. Alle resterende dyr præsenterede histopatologiske ændringer repræsentative for gastritis. blev påvist Helicobacter
arter i 60 hunde (87,0%) af mindst en påvisningsmetode. Histologisk, histokemiske og immunohistokemiske vurderinger afslørede, at Helicobacter
spp. var til stede i 45 (65,2%), 52 (75,4%) og 57 (82,6%) hunde, hhv. Spiralformede bakterier blev påvist ved qPCR analyse i 33 (47,8%) hunde. H. heilmannii-
ligesom organismer blev identificeret i 22 dyr (66,7%) og overvejende antral gastrisk region. H. salomonis
var de næstmest udbredte arter (51,5%), selv om det primært blev fundet i forbindelse med andre Helicobacter
spp. og i kroppen gastrisk region. H. bizzozeronii og H. felis
blev mindre hyppigt opdaget.
Konklusioner
Det blev konkluderet, at på trods af den høje forekomst og verdensomspændende distribution af gastrisk NHPh hos hunde, tilstedeværelsen af ​​specifikke Helicobacter
arter kan varierer mellem geografiske regioner. NHPh infektioner blev betydeligt ledsaget af mild til moderat intraepithelial lymfocyt infiltration og mild til moderat gastrisk epitel skade, men en klar sammenhæng mellem gastritis og Helicobacter
infektion kunne ikke etableres.
Nøgleord
Canine maveslimhinden Dogs Ikke Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) Histochemistry Immunhistokemi (IHC) polymerasekædereaktion (PCR) mave Indledning
slægten Helicobacter
er sammensat af mindst 40 arter [1]. Blandt disse, H. pylori
betragtes som en vigtig patogen hvis naturlige vært er mennesker, men dets tilstedeværelse i hundens mave er set sjældent [2-4].
En lang række ikke-Helicobacter pylori Helicobacter
arter (NHPh) er også blevet anerkendt i mennesker og i flere dyr. Tidligere NHPh blev generelt benævnt H. heilmannii sensu lato
(sl) og omfattede H. suis
, en art koloniserer de maver svin og en gruppe af arter er kendt for at kolonisere maveslimhinden af ​​hunde og katte H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
og H. heilmannii snæver forstand
(ss) [5] . De fleste af disse gastrisk NHPh er også i stand til at forårsage sygdom hos mennesker [6,7]. Tæt og intens menneskelig kontakt med dyr er blevet identificeret som en risikofaktor, og derfor har en vigtig zoonotisk betydning blevet tilskrevet NHPh [6,8,9].
I selskabsdyr, gastrisk Helicobacter
spp. er ofte beskrevet med en prævalens spænder fra 67 til 86% i klinisk raske hunde og 61-100% i dyr, der frembyder kronisk opkastning [10-14]. Disse mikroorganismer blev opdaget i maven på omkring 100% af laboratorie Beagle hunde og hunde fra lokale krisecentre [15-17]. Den fremherskende gastrisk Helicobacter spp.
Hos katte og hunde er H. felis
, H. bizzozeronii
og H. heilmannii snæver forstand
(ss
), mens H. salomonis
er sjældnere opdages og forekomsten af ​​H. cynogastricus
og H. baculiformis
er endnu ikke blevet undersøgt [9,18-20]. Blandede infektioner med forskellige arter kan også forekomme [3,19].
Mens mange undersøgelser har rapporteret, at fundus og krop har højere bakteriel densitet og en højere sandsynlighed for at finde Helicobacter
spp. [17,21,22] andre har fundet nogen signifikante forskelle mellem tætheden af ​​NHPh i fundus, krop og antrum [2,23-26] af hunde mave. De uoverensstemmelser i disse resultater kan henføres til de forskellige laboratorium diagnostiske metoder, der anvendes af de forskellige forskningsgrupper.
Den diagnostiske metoder, der anvendes for Helicobacter
spp.
Kan være ikke-invasive og invasive [24]. Ikke-invasive metoder som serologi eller detektion af bakteriel DNA og antigener i afføring kræver ikke en gastrisk biopsi eller anæstesi. De invasive metoder, såsom bakteriekulturer, histopatologi, smears, elektronmikroskopi eller polymerasekædereaktion (PCR) kan kræve en gastrisk biopsi, der ofte opnås ved endoskopi under anæstesi eller ved obduktion. Typisk Helicobacter
organismer ikke let visualiseres med hæmatoxylin og eosin (HE) pletten og så er deres direkte observation i biopsi prøver fremhævet af anvendelsen af ​​særlige pletter, såsom den modificerede Giemsa (MG) plet. Mere udførlige og følsomme Helicobacter
-detection metoder såsom immunhistokemi (IHC) eller polymerasekædereaktion (PCR) er forskning værktøjer sjældent anvendes i en diagnostisk indstilling.
Adskillige undersøgelser har diskuteret forekomsten af ​​Helicobacter spp.
hos hunde [2,10,11,14,16], men i kun få studier de specifikke arter, der findes i hundens mave blev bestemt [4,19,27,28]. Den nøjagtige identifikation af mavens helicobacters til artsniveau er afgørende for at bestemme forekomsten og kliniske betydning af alle taxa. Formålet med denne undersøgelse var at bestemme prævalensen af ​​forskellige gastriske Helicobacter
arter i distinkte mave regioner af hunde mave (krop og antrum) ved hjælp af histologiske, histokemisk, immunhistokemiske og molekylære diagnostiske teknikker. Graden af ​​koloniseringen blev karakteriseret og korreleret med de respektive histopatologiske forandringer i hundens maveslimhinden.
Metoder
prøvetagning
gastriske væv blev opnået fra 69 hunde (45 mandlige og 24 kvindelige, spænder i alder fra 3 måneder til 15 år). Prøverne blev tilfældigt udvalgt fra arkiverne i Laboratorium for Veterinær Patologi, ICBAS-UP (Portugal), hvor de blev modtaget mellem 2010 og 2013. Prøverne blev opnået fra 20 hunde under endoskopiske procedurer, fra fem under operationen og fra 44 hunde under obduktion eksaminer. Alle procedurer (kirurgisk fjernelse og obduktion undersøgelse) blev udført i et klinisk sammenhæng forsøger at behandle dyr på grundlag af den bedste klinisk vurdering af deres deltager udøvere. Brugen af ​​de udskårne væv til forskning blev forklaret for ejerne og en informeret samtykke blev opnået for hvert enkelt tilfælde. Ingen af ​​de tiltag blev taget udelukkende til forskningsformål og efterforskerne havde ingen indflydelse på valg og udførelse af sådanne procedurer. Kun gastriske prøver i god stand af konservering blev inkluderet i denne undersøgelse. Salg Væv blev fikseret i 10% neutral bufret formalin og indlejret i paraffinvoks. Tre på hinanden følgende sektioner af 3 um blev foretaget, ene er farvet med HE, en anden med en MG pletten og den tredje blev brugt til immunhistokemisk farvning.
Sample evaluering
Den gastriske prøver blev evalueret uafhængigt af to observatører (IA og FG ). Histopatologiske parametre som ændringer i cellularitet, blev fibrose af lamina propria
kirtel atrofi analyseret ifølge World Small Animal Veterinary Association (WSAVA) retningslinjer [29]. Graden af ​​morfologiske træk og inflammatoriske forandringer blev gradueret som normalt, mild, moderat eller markeret ved hjælp af tilgængelige WSAVA mave standardisering visuel analog [29].
Mikroskopisk evaluering blev udført ved at analysere hele afsnittet af mavens væv. Tilstedeværelsen af ​​Helicobacter
spp.
Blev vurderet ved HE og MG pletter og ved IHC. En hund blev klassificeret som Helicobacter
positive, når en af ​​disse metoder gav et positivt resultat. Desuden blev bakteriel tæthed kolonisering kvantificeret: +, få organismer (< 10 organismer /400x); ++, Moderat antal organismer (10 til 50 organismer /400x); +++, Stort antal organismer. (≫ 50 organismer /400x) [24]
Immunhistokemi
For immunhistokemiske undersøgelse blev sektionerne deparaffinised blev hydreret og antigen hentning udført i en trykkoger i 10 mmol /L natriumcitrat, pH 6,0, i 2 minutter (min). Objektglas blev afkølet i 10 minutter ved stuetemperatur og skyllet to gange i triphosphat saltvand (TBS) i 5 min. Den NovolinkTM Max-Polymer detektionssystem (Novocastra, Newcastle, UK) blev anvendt til visualisering, ifølge producentens instruktioner. Efter blokering endogen peroxidase med 3% hydrogenperoxid i methanol i 10 minutter, blev snit inkuberet natten over ved 4 ° C, med et polyklonalt antiserum mod H. pylori
(RBK012; Zytomed, tysk), som viser immunoreaktivitet med en lang række bakterier hørende til Helicobacter
slægten. Snit blev skyllet med TBS mellem hvert trin i proceduren. Farve blev udviklet i op til 7 minutter ved stuetemperatur med 3,3'-diamino-benzidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) og snit blev derefter let modfarvet med hæmatoxylin, dehydreret og monteret. Positive immunoreaktivitet blev registreret som et særskilt gylden-brun mærkning af bakterierne placeret på slimhindeoverfladen, i gastriske gruber eller kirtler og i parietalceller.
Udvinding, PCR-amplifikation og sekventering af DNA
DNA blev ekstraheret fra 5 på hinanden følgende skiver 20 pM under anvendelse af en DNeasy blod og væv Kit (Qiagen) ifølge producentens instruktioner. Helicobacter
artsspecifikke qPCRs baseret på en kort fragment af urease A- og B-gener blev udviklet til identifikation af H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii
og H. salomonis
. For generation af standarder for hver qPCR, en stor del af ureAB gen klyngen fra H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. salomonis
R1053 (1224 bp) og H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) blev amplificeret ved anvendelse af primerne U430F og U1735R, som tidligere [30] beskrevne. Standarden bestod af 10-fold-fortyndinger startende ved 10 8 PCR amplikoner for hver 10 pi reaktionsblanding. En pi af ekstraheret DNA template blev suspenderet i en reaktionsblanding 10 pi bestående af 0,25 pi forward og reverse primere (tabel 1), 3,5 pi HPLC vand og 5 pi SensiMix ™ SYBR nr-ROX (Bioline Reagenser Ltd., UK). Både standarder og prøver blev kørt i duplikat på en CFX96 ™ RT-PCR System med en C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Den (version 1.6) software Bio-Rad CFX manager blev anvendt til beregning af tærskelværdier cyklusser (CT) -værdier og smeltekurveanalyse af amplificeret DNA. De gennemsnitlige værdier af dubletter blev anvendt til kvantificering af Helicobacter
DNA i vævsprøver. For at udelukke falsk positive prøver, de amplikoner fra hver positiv prøve var sequenced.Table 1 Liste over primere, der anvendes til qPCR
Primer navn
Nukleotidsekvens
Specificitet
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC FTT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Statistisk analyse
Pearsons chi-square test og Fishers eksakte test blev anvendt til at bestemme afhængigheden mellem to kategorier. p-værdier < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Statistisk analyse blev udført ved hjælp af den statistiske pakke SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lissabon, Portugal).
Resultater
En alt 117 gastriske prøver (66 fra kroppen regionen og 51 fra antrum region) blev analyseret.
Blandt de 69 dyr, både mavens regioner var tilgængelige for evaluering i 48 hunde mens kun krop eller antrum regioner var til rådighed i 18 og tre hunde, henholdsvis.
af de 69 hunde, kun én præsenteret en normal histopatologisk slimhinde med fravær af spiralformede organismer. En normal maveslimhinden og tilstedeværelsen af ​​spiralformede bakterier blev observeret hos to hunde (2,9%). De øvrige dyr, præsenteret histopatologiske ændringer repræsentant for gastritis (66/69 eller 95,7%) (tabel 2). På basis af histopatologiske ændringer i maveslimhinden, vi diagnosticeret en mild til moderat kronisk gastritis i 88,4% (61/69), der påvirker den gastriske legeme på 51,5% (34/66) og den antrale region på 92,2% (47/51 ) af animals.Table 2 tabel opsummerer den histopatologiske forandringer og kolonisering tæthed observeret i hunde mave, i henhold til de positive NHPh artsspecifikke PCR-resultater, positive slægten resultater og negative resultater
PCR positive resultater med specifikke arter identifikation, uanset gastrisk placering (procent & nummer) (n = 33)
Positive resultater for Helicobacter spp. (Procent & nummer) (n = 27)
Negative resultater (procent & antal) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
Histopatologi grading
(Day et al., 2008)
Normal
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
0
7,4 (2/27)
11,1 (1/9 )
NS
Mild gastritis
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
Moderat gastritis
12,1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3,0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Markant gastritis
0
0
0
0
0
6,1 (2/33)
0
0
0
0
11,1 (1/9)
epiteliale skade
Mild
27,3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9,1 (3/33)
3,0 (1/33)
30.3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6,1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Moderat
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 (1 /33)
0
0
14,8 (4/27)
11,1 (1/9)
fibrose /slimhinde atrofi
Mild
18,2 (6/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Moderat
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27)
11,1 (1/9)
intraepitelial lymfocytter
Mild
15.2 (5/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
15.2 (5 /33)
0
0
6,1 (2/33)
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
0,016
Moderat
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27)
0
lymfofollikulær hyperplasi
Mild
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
NS
Bakteriel densitet (baseret på de IHC resultater)-hoteller, NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27)
++
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
9,1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legend: Hh
, H. heilmannii-lignende
; Hf
,
H.felis; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
Bakteriel tæthed:. +, Få organismer; ++, Moderat antal organismer; +++, Stort antal organismer. NA, ikke anvendelse. NS, ikke signifikant (p > 0,05).
Begge mild til moderat epitel skader og mild til moderat intraepithelial lymfocytinfiltrering blev fundet i 88,4% (61/69)
maveslimhinden atrofi, glandulær nesting eller fibrose var. stede i 44,9% hunde (31/69). I 18,2% af dyrene denne ændring blev observeret i kropsområdet (12/66) og i 47,1% i antrum-regionen (24/51) af hunde maven.
Unormal neutrofil infiltration blev kun fundet i maven antrum af to dyr: i én, denne ændring var milde og i den anden blev det markeret og forbundet med gastrisk ulceration. Andre inflammatoriske celler, som består i mild infiltration af mastceller, blev observeret i kropsområdet fire dyr og i antrum af to dyr.
Blandt alle dyr, 87,0% var positive (60/69) (figur 1A) og 13,0% var negative for Helicobacter
spp. (9/69), uanset testen anvendes til at detektere bakterier. Uanset maven placering, Helicobacter
spp. blev observeret ved hjælp af HE, MG og IMC i 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) og 82,6% (57/69) af hundene, hhv. Med HE farvning, blev påvist spiralformede bakterier i 62,1% af kroppens prøver (41/66) og i 70,6% af antral prøver (36/51). Udnytte den MG pletten, var dette 68,2% for kroppen prøver (45/66) og 78,4% for de antrale prøver (40/51). Helicobacter
antigen blev påvist ved immunkemi i 84,9% (56/66) af legemet prøver og i 80,4% (41/51) af de antrale prøver (tabel 3). Figur 1 Helicobacter
spp. i hunde mave. A) Talrige spiralformede bakterier koloniserer overfladen epitel maveregionen. HAN. Bar = 10 um; B) Bemærk den intraepithelial lymfocytinfiltration inden for de dybere gastriske kirtler i antral slimhinde af en NHPh-positiv hund. HAN. Bar = 20 um. C) Tilstedeværelse af NHPh inde parietalcellerne af hunde gastrisk organ region (sort pil). MG. Bar = 10 um; D) Store mængder Helicobacter
antigen inden den overfladiske gastrisk slim og i lumen af ​​gastriske kirtler i kroppen region hunde mave. Immunoperoxidase-diaminobenzidin pletten med Mayers hæmatoxylin kontrastfarve. Bar = 50 um. Indsat viser Helicobacter
antigen inden parietalcellerne, undertiden påviselige som velbevarede spiralformede organismer eller brune runde prikker. Immunoperoxidase-diaminobenzidin pletten med Mayers hæmatoxylin kontrastfarve. Bar = 10 um.
Tabel 3 Påvisning af Helicobacter spp. i de forskellige mave rum i hundens mave tilbagevendende til forskellige diagnostiske metoder
Gastrisk region
Detection metoder
Positiv (procent & nummer)
HE

MG
IHC *
PCR
Krop (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legend: HE: hæmatoxylin-eosin; MG: modificeret Giemsa farve; IHC: immunhistokemi; PCR:.. Polymerasekædereaktion
* De positive resultater opnået med IHC adskilte sig ikke væsentligt på tværs af hver mave region (p > 0,05)
Yderligere identifikation på artsniveau blev udført ved hjælp af Helicobacter
artsspecifikke qPCRs . Helicobacter
spp. blev påvist i 47,8% af dyrene (33/69) (tabel 3). Størstedelen af ​​prøverne var positive i H. heilmannii
specifik qPCR. Viste imidlertid, amplikonnerne kun ca. 92% homologi med H. heilmanni S.S.
. Derfor blev disse sager omklassificeret som H. heilmannii-
gerne.
I 51,5% (17/33) af de positive prøver blev kun én Helicobacter
arter identificeret mens blandede infektioner blev påvist i 48,5% (16/33) (tabel 2). H. heilmannii-
ligesom organismer var den mest almindeligt forekommende (22/33 eller 66,7%), er identificeret i ti hunde som en enkelt infektion og i 12 hunde som blandede infektioner. H. salomonis
var de næstmest udbredte arter (17/33 eller 51,5%), selv om det primært blev fundet i forbindelse med andre NHPh (42%) i stedet for alene (9,1%). Lige andele af H. felis
og blev påvist H. bizzozeronnii
(6/33 eller 18,2%), enten som enkelte (6,3%) eller blandede infektioner (12,1%). Blandet infektioner med H. heilmannii
-lignende og H. salomonis
blev hyppigst forekommende (33,3%) (Tabel 2). I kroppen område, de hyppigst identificerede arter var H. salomonis
(44,0%) mens der i antrum de mest udbredte arter blev H. heilmannii-
lignende (57,7%) (tabel 4) .table 4 Specifik Helicobacter arter påvist ved PCR i de forskellige mave rum i hundens mave
Specific PCR- Helicobacter spp. positive resultater
Gastric region (procent & nummer)
Krop
antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-lignende
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii-lignende + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii-lignende + H. felis
4.0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4.0 (1/25)
0
Der var en signifikant sammenhæng mellem tilstedeværelsen af Helicobacter
spp. og begge mild til moderat epithelial skade og mild til moderat intraepithelial lymfocytinfiltration (figur 1B) af hunde mave (p < 0,05). Ingen statistisk signifikant korrelation blev fundet mellem Helicobacter
infektion og gastrisk mucosal atrofi eller fibrose, lamina propria
lymfoplasmacytisk infiltration eller lymfofollikulær hyperplasi. Ingen signifikante forskelle blev påvist vedrørende den bakterielle kolonisering tæthed mellem begge mave regioner (p > 0,05).
Antallet af Helicobacter
-positive tilfælde opdages med de forskellige metoder afveg signifikant (p < 0,05). Positiv IHC resultater afveg ikke væsentligt på tværs af hver mave region (p > 0,05), mens de opnåede med HE tal, GM og qPCR afveg betydeligt mellem kroppen og antrum (p < 0,05).
Diskussion
i denne undersøgelse blev en høj forekomst af gastritis observeret (95,7%). Disse resultater er i overensstemmelse med andre undersøgelser rapporterer forekomsten af ​​gastritis som en fælles konklusion i hunde [14,31,32]. I modsætning hertil blev gastriske erosioner eller sår sjældent findes i disse dyr.
NHPh infektion blev bestemt ved fire metoder (HE, MG, IHC og qPCR) og en prævalens på 87,0% i hunde blev påvist. Disse resultater er i overensstemmelse med dem, der findes i litteraturen, som dokumenterede høj forekomst af NHPh i hundens maveslimhinden [12,19,33-35]. I vores undersøgelse hunde NHPh infektion blev signifikant ledsaget af mild til moderat intraepithelial lymfocytinfiltration og mild til moderat gastrisk epitel skade, uanset maven placering. En klar sammenhæng mellem hunde gastritis og Helicobacter
infektion blev dog ikke etableret, og som er i overensstemmelse med resultaterne af andre [11,14,15,34].
I en tidligere undersøgelse, hvor stor en procentdel af Helicobacter
-positive tilfælde opdages efter HE farvning af hunde gastriske prøver var 17,5% [24]. I den aktuelle undersøgelse blev alle prøver undersøgt af to patologer meget erfarne i afsløring af Helicobacter
spp.
Organismer efter rutinemæssig farvning. Dette kan have spillet en rolle i den højere opdagelse sats (65,2%) rapporteret her.
Efter aftale med tidligere undersøgelser blev NHPh ofte observeret ikke kun i de overfladiske slim og inden for de gastriske kirtler, men også intracellulært, i cytoplasmaet i parietalcellerne [31,33,36] (figur 1C og D). Spiralformede organismerne i denne særlige subcellulære lokalisering var vanskelig at opdage efter at han og MG-farvning grund til cytoplasmaet granulering af parietalcellerne. I vores hænder, IHC syntes at være en meget værdifuld teknik til at identificere NHPh i disse celler (Figur 1D). Samlet set viste IHC farvning de højeste Helicobacter
-positive værdier (82,6%). Dette fund er i overensstemmelse med andre resultater, som viser, at kommercielt tilgængelige antistoffer mod H. pylori
er nyttige til påvisning af Helicobacter
spp. . I paraffin indlejrede prøver fra hunde maver [24,26,36]
Tidligere undersøgelser rapporterede ingen statistisk signifikant forskel mellem påvisning af Helicobacter
organismer ved IHC og PCR-teknikker (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) rapporterede, at PCR-assayet havde højere sensitivitet og specificitet end de andre metoder [4]. Men i vores undersøgelse,
den prævalens på Helicobacter
spp. Opnået med qPCR var den laveste (47,8%). Tidligere undersøgelser har vist, at formalin fiksering og paraffin indlejring hæmme PCR-analyse [37,38]. Sjödin et al.
(2011) sammenlignede effektivitet af DNA-amplifikation fra friske (n = 28) og paraffinindlejret (n = 28) prøver til identifikation af Helicobacte
r spp.
Fra forskellige organer ( feline mave, duodenum, lever og bugspytkirtel), og konkluderede, at middelværdien af ​​DNA-koncentrationen opnået var højere, når opnået fra friske væv [39]. DNA-analyse af paraffinindlejrede vævsprøver anvendelse af PCR /qPCR kan være kompromitteret på grund af DNA-fragmentering, inhiberende substanser, eller en kombination af begge. Formalin fiksering kan faktisk forårsage DNA-fragmentering samt delvis ødelæggelse af DNA [38,40], og PCR-reaktionerne, kan også inhiberes ved formalin rest [37]. De negative virkninger af formalin er direkte relateret til varigheden af ​​fiksering [40]. Selvom prøverne indgår i denne undersøgelse blev alle behandlet i samme laboratorium og derfor underlagt de samme standard protokoller, varighed af fiksering kan variere mellem prøver på grund af variation i tidsintervallet mellem prøvetagning og deres ankomst til laboratoriet.
Different er blevet behandlet molekylære metoder til identifikation af NHPh arter [4,14,24,28]. Teknikker baseret på detektering eller sekventering af 16S eller 23S rRNA-kodende gener kan dog ikke skelne mellem de forskellige hunde og katte gastriske Helicobacter
arter, mens test baseret på påvisning eller sekventering af hsp60
genet, urease A- og B-gener eller gyrB
gen tillader identifikation af disse bakterier til artsniveau [9].
i vores undersøgelse, amplikoner opnået i H. heilmannii
specifikke qPCR kun gav ca. 92% homologi med H . heilmannii,
som hidtil kun har været dyrket fra maveslimhinden af ​​katte. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Molekylære mekanismer i gastrisk epitelcelle vedhæftning og injektion af CagA af Helicobacter pylori
• Forekomst og overlevelse af spiserøret og mavekræft i England mellem 1998 og 2007, en populationsbaseret study