Läsnäolo ja merkityksestä Helicobacter spp. mahalaukun limakalvon Portugalin dogs

läsnäolo ja merkitys Helicobacter spp.
mahalaukun limakalvon Portugalin koirien
tiivistelmä
tausta
Non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) pystyvät myös aiheuttaa ihmiselle tautia. Koirat ovat luonnollinen säiliö monille näistä lajeista. Sulje ja voimakas ihmisen kosketuksiin eläinten on todettu riskitekijäksi ja siksi tärkeä zoonoottiset merkitys on katsottu johtuvan NHPh. Tool Menetelmät
määrittämiseksi esiintyvyys Helicobacter
lajien ja mahalaukun histopatologisia muutoksia, jotka liittyvät , mahalaukun limakalvo näytteitä 69 koiraa arvioitiin.
tulokset
Vain yksi koira esitti normaali histopatologinen limakalvon puuttuminen spiraalin muotoinen organismeja. Normaali mahan limakalvon ja läsnäolo spiraalin muotoisia bakteereita havaittiin kaksi koiraa. Kaikki jäljellä olevat eläimet esitetään histopatologisia muutoksia edustaja gastriitti. Helicobacter
lajeja havaittiin 60 koiraa (87,0%), vähintään yksi havaitsemismenetelmä. Histologinen, histokemialliset ja immunohistokemiallinen arvioinneissa ilmeni, että Helicobacter
spp. oli läsnä 45 (65,2%), 52 (75,4%) ja 57 (82,6%) koirilla, tässä järjestyksessä. Spiraalimainen bakteeri havaittiin qPCR analyysi 33 (47,8%) koiria. H. heilmannii-
kaltaiset organismit tunnistettiin 22 eläimissä (66,7%) ja pääosin antral mahalaukun alueella. H. salomonis
oli toiseksi yleisin laji (51,5%), vaikka se esiintyy lähinnä yhdessä muiden Helicobacter
spp. ja kehossa mahalaukun alueella. H. bizzozeronii ja H. felis
olivat harvemmin havaittu.
Johtopäätökset
Tuolloin todettiin, että huolimatta esiintyy paljon ja maailmanlaajuinen jakelu mahalaukun NHPh koirilla, spesifisten Helicobacter
lajeja voi vaihtelevat eri maantieteellisillä alueilla. NHPh infektioita merkittävästi mukana lievää tai kohtalaista intraepiteliaalisten lymfosyyttien tunkeutumisen ja lievä tai kohtalainen mahalaukun epiteelin vammoja, mutta selkeä suhde gastriitti ja helikobakteeri
infektiota ei voitu muodostaa.
Avainsanat
Koirien mahalaukun limakalvon Koirat Ei- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) Histochemistry immunohistokemia (IHC) polymeraasiketjureaktion (PCR) Vatsa Johdanto
suku Helicobacter
koostuu ainakin 40 lajia [1]. Näistä H. pylori
pidetään tärkeänä taudinaiheuttaja, jonka luonnollinen isäntä on ihminen, mutta sen läsnäolo koiran vatsassa on raportoitu harvoin [2-4].
Suuri määrä ei-Helicobacter pylori Helicobacter
lajit (NHPh) on myös tunnustettu ihmisillä ja useissa eläimillä. Aiemmin NHPh olivat yleensä nimitystä H. heilmannii sensu lato
(sl) sisältäen H. suis
, laji asettumaan vatsat sikojen ja lajiryhmän tiedetään asuttaa mahalaukun limakalvon koiria ja kissoja H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
ja H. heilmannii suppeassa
(ss) [5] . Useimmat näistä mahalaukun NHPh pystyvät myös aiheuttaa ihmiselle tautia [6,7]. Sulje ja voimakas ihmisen kosketuksiin eläinten on todettu riskitekijäksi ja siksi tärkeä zoonoottiset merkitys syyksi on NHPh [6,8,9].
Lemmikkieläimillä, mahalaukun Helicobacter
spp. on usein kuvattu kanssa esiintyvyys vaihtelee 67-86% vuonna kliinisesti terveitä koiria ja 61-100% vuonna eläimistä krooninen oksentelu [10-14]. Nämä mikro-organismit havaittiin vatsassa noin 100% laboratorion Beagle koiria ja koiria paikallisen suojien [15-17]. Hallitseva mahan Helicobacter spp.
Kissoilla ja koirilla ovat H. felis
, H. bizzozeronii
ja H. heilmannii suppeassa
(ss
), kun taas H. salomonis
on vähemmän usein havaitaan ja yleisyys H. cynogastricus
ja H. baculiformis
ei ole vielä tutkittu [9,18-20]. Sekainfektioissa eri lajeihin voi esiintyä myös [3,19].
Vaikka monet tutkimukset ovat osoittaneet, että silmänpohjan ja keho on suurempi bakteerien tiheys ja suurempi todennäköisyys löytää Helicobacter
spp. [17,21,22] toiset ovat löytäneet merkittäviä eroja tiheyden NHPh silmänpohjan, runko ja antrum [2,23-26] koiraeläin vatsaan. Erot näissä tuloksissa voi johtua eri laboratoriodiagnoosimenettelyä käyttämiä menetelmiä eri tutkimusryhmät.
Diagnostisia menetelmiä käytetään Helicobacter
spp.
Voi olla ei-invasiivisia ja invasiivisia [24]. Ei-invasiivisia menetelmiä kuten serologia tai havaitsemista bakteerien DNA ja antigeenejä ulosteessa eivät edellytä mahalaukun koepala tai nukutusta. Invasiivisen menetelmät, kuten bakteeriviljelmät, histopatologia, tahroja, elektronimikroskoopilla tai polymeraasiketjureaktio (PCR) voi vaatia mahalaukun koepala, joka on usein saatu endoskopia nukutuksessa tai ruumiinavaus. Tyypillisesti Helicobacter
eliöitä ei helppo visualisoida kanssa hematoksyliinillä ja eosiinilla (HE) tahra ja niin niiden suora havainnointi koepala näytteistä on korostettu käyttää erityisiä tahroja, kuten modifioitu Giemsa (MG) tahra. Yksityiskohtaisempia ja herkkä Helicobacter
-detection menetelmiä, kuten immunohistokemiallinen (IHC) tai polymeraasiketjureaktio (PCR) ovat tutkimusvälineitä harvoin käytetty diagnostinen ympäristössä.
Useissa tutkimuksissa on keskusteltu esiintyvyys Helicobacter spp.
koirilla [2,10,11,14,16], mutta vain harvat tutkimukset erityisiä lajeja esiintyy koiran mahassa määritettiin [4,19,27,28]. Tarkka tunnistaminen mahalaukun helicobacters lajiin tasolla on välttämätöntä, jotta voidaan määrittää yleisyyttä ja kliinistä merkitystä kaikkien taksonien. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää esiintyvyys eri mahalaukun Helicobacter
lajeja esiintyy erillisiä vatsassa alueilla koiran mahaan (runko ja antrumiin) käyttäen histologisia, histokemialliset immunohistokemiallinen ja molekyylidiagnoositekniikoiden tekniikoita. Aste siirtokuntien leimasi ja korreloi vastaavien histopatologisia muutoksia koiran mahalaukun limakalvon. Tool Menetelmät
Näytteiden kerääminen
Mahalaukun kudokset saatiin 69 koiraa (45 uros ja 24 naaras, joiden iät vaihtelevat 3 kk-15 vuotta). Näytteet valittiin satunnaisesti arkistoista Laboratory of Veterinary Pathology, ICBAS-UP (Portugal) kun ne on saatu vuosien 2010 ja 2013. Näytteitä saatiin 20 koirien endoskooppiset menettelyjä, viidestä leikkauksen aikana ja 44 koirien ruumiinavauksessa tutkimukset. Kaikki menettelyt (kirurginen ja ruumiinavaus tutkimus) suoritettiin kliinisessä yhteydessä yritetään hoitaa eläimet perustuvat parhaaseen kliinisen arvion niiden hoitavan harjoittajien. Käyttö irrotettiin kudosten tutkimuksen selitettiin omistajille ja tietoisen suostumuksen saatiin tapauskohtaisesti. Mikään toimintaan ryhdytään vain tutkimustarkoituksiin ja tutkijoilla ei ollut vaikutusta valita ja suorittaa tällaisten menettelyjen. Vain mahalaukun näytteet hyvässä kunnossa säilyttäminen olivat mukana tässä tutkimuksessa.
Kudokset kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin ja upotettiin parafiiniin vaha. Kolme peräkkäistä osa 3 um tehtiin, joista toinen on värjätty HE, toisessa MG tahra ja kolmas käytettiin immunohistokemiallisella värjäyksellä.
Näytteet arviointi
mahalaukun Näytteet arvioitiin itsenäisesti kaksi tarkkailijaa (IA ja FG ). Histopatologisia parametreja kuten muutoksia soluihin, fibroosi lamina proprian
ja rauhanen surkastumista analysoitiin mukaan Maailman pieneläinlääketieteen Eläinlääkäriliitto (WSAVA) suuntaviivat [29]. Aste morfologisia ominaisuuksia ja tulehdusmuutoksia luokiteltiin normaali, lievä, keskivaikea tai merkitty käyttämällä saatavilla WSAVA maha standardoinnin visuaalinen analoginen [29].
Mikroskooppinen arviointi suoritettiin analysoimalla kokonainen osa mahalaukun kudosta. Läsnäolo Helicobacter
spp.
Arvioitiin HE ja MG tahrat ja IHC. Koira luokiteltiin helikobakteeri
positiivinen, kun yksi näistä menetelmistä antoi positiivisen tuloksen. Lisäksi bakteerien tiheys kolonisaatio kvantifioitiin: +, harvat organismien (< 10 organismit /400x); ++, Kohtalainen organismien määrä (10-50 organismit /400x); +++, Suuri määrä organismeja (> 50 organismit /400x) [24].
Immunohistokemia
varten immunohistokemiallinen tutkimus, leikkeet deparaffinised, sammutettua ja antigeeni haku suoritettiin Painekeitintä 10 mmol /L natriumsitraattia, pH 6,0, 2 minuutin (min). Objektilasit jäähdytettiin 10 min ajan huoneen lämpötilassa ja huuhdeltiin kahdesti trifosfaatin puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS) 5 min. NovolinkTM Max-Polymer tunnistusjärjestelmä (Novocastra, Newcastle, UK) käytettiin visualisointi, mukaan valmistajan ohjeiden. Jälkeen estää endogeenisen peroksidaasin 3% vetyperoksidilla metanolissa 10 min, leikkeitä inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa, jossa polyklonaalista antiseerumia H. pylori
(RBK012; Zytomed, saksaksi), joka osoittaa immunoreaktiivisuus monenlaisia bakteerit, jotka kuuluvat Helicobacter
sukuun. Leikkeet huuhdeltiin TBS: llä kunkin vaiheen välillä menettelyn. Väri kehitettiin jopa 7 min huoneenlämpötilassa 3,3'-diamino-bentsidiiniä (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) ja leikkeitä sitten kevyesti vastavärjättiin hematoksyliinillä, kuivattu ja kiinnitetty. Positiivinen immunoreaktiivisuus kirjattiin erillisenä kullanruskeita merkitseminen bakteerien sijaitsee limakalvon pinnalle, mahalaukun kuoppia tai rauhaset ja parietaalisoluissa.
Extraction, PCR-monistus ja sekvensointi DNA
DNA uutettiin 5 peräkkäistä viipaleiksi 20 uM käyttäen DNeasy Veri ja Tissue Kit (Qiagen), mukaan valmistajan ohjeiden. Helicobacter
lajikohtaisia ​​qPCRs perustuu lyhyen fragmentti ureaasia A ja B geenit kehitettiin tunnistamiseksi H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii
ja H. salomonis
. Tuottamiseen vaatimukset kullekin qPCR, suuri osa ureAB geeniklusterin H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. salomonis
R1053 (1224 bp) ja H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) monistettiin käyttäen alukkeita U430F ja U1735R, kuten aiemmin on kuvattu [30]. Standardi koostui 10-kertainen-laimennoksilla alkaen 10 8 PCR amplikonit jokaista 10 ui reaktioseosta. Yksi ui uutettua DNA: ta templaattina suspendoitiin 10 ui reaktioseosta, joka sisälsi 0,25 ui eteenpäin ja taaksepäin-alukkeita (taulukko 1), 3,5 ui HPLC vettä ja 5 ui SensiMix ™ SYBR o-ROX (Bioline Reagenssit Ltd, UK). Sekä standardit ja näytteet ajettiin kahtena kappaleena on CFX96 ™ RT-PCR System, jossa on C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Bio-Rad CFX Manager (versio 1.6) ohjelmisto käytettiin laskettaessa kynnyksen jaksoa (Ct) -arvot ja sulamiskäyräanalyysi monistettua DNA. Keskiarvot päällekkäiset käytettiin kvantifiointia Helicobacter
DNA kudosnäytteistä. Jos haluat sulkea pois vääriä positiivisia näytteitä, amplikoneista kustakin positiivisesta näytteestä olivat sequenced.Table 1 Luettelo käytettyjen alukkeiden qPCR
Primer nimi
Nukleotidisekvenssi
erityisyys
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

tilastollinen analyysi
Pearsonin khiin neliö -testi ja Fisherin testiä käytettiin määrittämään välinen riippuvuus kahteen ryhmään. p-arvot < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen tilastollista pakettia SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lissabon, Portugali).
Results
Kaikkiaan 117 mahalaukun näytteistä (66 kehosta alueella ja 51 päässä antrum alue) analysoitiin.
joukossa 69 eläimet, sekä mahalaukun alueet olivat käytettävissä arviointia 48 koirilla taas ainoa yksikkö tai antrum alueilla oli saatavilla 18 ja kolme koiraa, vastaavasti.
Niistä 69 koiraa, vain yksi esitti normaali histopatologinen limakalvon puuttuminen spiraalin muotoinen organismeja. Normaali mahan limakalvon ja läsnäolo spiraalin muotoisia bakteereita havaittiin kahdella koiralla (2,9%). Loput eläimet esitteli histopatologisten muutosten edustaja gastriitti (66/69 eli 95,7%) (taulukko 2). Perusteella histopatologisia muutoksia mahalaukun limakalvon, me diagnosoitu lievä tai kohtalainen krooninen gastriitti 88,4% (61/69), jotka vaikuttavat mahalaukun runko 51,5% (34/66) ja antral alue 92,2% (47/51 ) on animals.Table 2 Taulukko, histopatologisen muutokset ja kolonisaatio tiheyden havaittiin koiran vatsassa, mukaan positiivisen NHPh lajikohtaisia ​​PCR tuloksia, positiivisia suku tuloksia ja negatiiviset tulokset
PCR positiivisia tuloksia tiettyjen lajien tunnistaminen riippumatta mahan sijainti (prosenttia & numero) (n = 33)
Positiiviset tulokset Helicobacter spp. (Prosenttia & numero) (n = 27)
Negatiiviset tulokset (prosenttia & numero) (n = 9)
s
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
histopatologia luokittelu
(Day et al., 2008)
Normaali
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
0
7,4 (2/27) B 11,1 (1/9 ) B NS
Lievä gastriitti
15,2 (5/33) B 3,0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 6,1 (2/33) B-0
18,2 (6/33) B 3,0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 6,1 (2/33) B 44,4 (12/27) B 33,3 ( 3/9) B Kohtalainen gastriitti
12,1 (4/33) B 3,0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27) B 44,4 (4/9) B merkittyjen gastriitti
0
0
0
0
0
6,1 (2/33) B 0
0
0
0
11,1 (1/9) B epiteelivamma
Lievä
27,3 (9/33) B 3,0 (1/33)
0
9,1 (3/33) B 3,0 (1/33) B 30,3 (10/33) B 0
3.0 1/3 (3) B 6,1 (2/33) B 77,8 (21/27) B 33,3 (3/9) B 0,003
Kohtalainen
3,0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 6,1 (2/33) B 0
0
0
3,0 (1 /33) B 0
0
14,8 (4/27) B 11,1 (1/9) B fibroosi /limakalvon surkastuminen
Lievä
18,2 (6/33)
6,1 (2/33) B 6,1 (2/33) B 6,1 (2/33) B 0
18,2 (6/33) B 0
0
3.0 (1/33) B 55,6 (15/27) B 33,3 (3/9) B NS
Kohtalainen
3,0 (1/33) B 0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27) B 11,1 (1/9) B epiteelinsisäisen lymfosyyttien
Lievä
15,2 (5/33) B 3,0 (1/33) B 6,1 (2/33) B 6,1 (2/33)
0
15,2 (5 /33) B 0
0
6,1 (2/33) B 29,6 (8/27) B 11,1 (1/9) B 0,016
Kohtalainen
3.0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 0
0
3,0 (1/33) B 9.1 (3/33) B 0
0
0
14,8 (4/27)
0
Lymphofollicular liikakasvu
Lievä
6,1 (2/33) B 0
0
0
3.0 ( 1/33) B 0
0
0
0
29,6 (8/27) B 11,1 (1/9) B NS
Bakteerien tiheys (perustuen IHC tulokset)
NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27) B ++
3,0 (1/33) B 0
0
0
3,0 (1/33) B 0
0
0
0
25,9 (7/27) B +++
24,2 (8/33) B 6,1 (2/33) B 6,1 (2/33)
9,1 (3/33)
0
33,3 (11/33) B 3,0 (1/33) B 3,0 (1/33) B 6,1 (2/33)
51,9 (14/27) B Selitykset: Hh
, H. heilmannii kaltainen
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis.
Bakteeri tiheys: +, harvat organismeja; ++, Kohtalainen määrä organismeja; +++, Suuri määrä organismeja. NA, ei sovelleta. NS, ei merkittävää (p > 0,05).
Molemmat lieviä tai kohtalaisia ​​epiteelin vammoja ja lieviä tai kohtalaisia ​​intraepiteliaalisten lymfosyyttien tunkeutumisen todettiin 88,4% (61/69).
Mahalaukun limakalvon surkastuminen, rauhas pesiä tai fibroosi oli läsnä 44,9% koirilla (31/69). In 18,2% eläimistä tämä muutos havaittiin kehon alueella (12/66), ja 47,1%: antrumissa alue (24/51) ja koiran vatsassa.
Epänormaali neutrofiiliseen tunkeutumisen havaittiin vain mahassa antrumissa kahden eläimet: yhdessä, tämä muutos oli lievä ja toisessa se oli merkitty ja liittynyt mahahaava. Muut tulehdussolujen, joka koostuu lievä tunkeutumisen syöttösolujen, havaittiin kehon alueella neljä eläintä ja antrumin kaksi eläintä.
Kaikista eläimistä, 87,0% oli positiivisia (60/69) (kuvio 1A) ja 13,0% oli negatiivinen Helicobacter
spp. (9/69), riippumatta siitä, testiä käytetään havaitsemaan bakteereita. Riippumatta mahan sijainti, Helicobacter
spp. havaittiin käyttäen HE, MG ja IMC vuonna 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) ja 82,6% (57/69) koirista, vastaavasti. Jossa HE värjäystä, spiraalimainen bakteeri havaittiin 62,1% kehon näytteistä (41/66) ja 70,6% antraalivaurioiden näytteistä (36/51). Hyödyntämällä MG tahra, tämä oli 68,2% kehon näytteistä (45/66) ja 78,4% varten antral näytteistä (40/51). Helicobacter
antigeeni havaittiin immunokemia on 84,9% (56/66) kehon näytteistä ja 80,4% (41/51) ja antrumin näytteet (taulukko 3). Kuvio 1 Helicobacter
spp. koiran vatsassa. A) Lukuisat spiraalin muotoisia bakteereita asettumaan pintakudosta mahalaukun pit. HÄN. Bar = 10 m; B) Huomaa intraepiteliaalisten lymfosyyttien tunkeutumisen sisällä syvemmällä mahalaukun rauhaset antral limakalvolle NHPh-positiivinen koira. HÄN. Bar = 20 um. C) läsnäolo NHPh sisällä parietaalisolujen koiraeläin mahalaukun runko alue (musta nuoli). MG. Bar = 10 m; D) Suuria määriä Helicobacter
antigeenin sisällä pinnallinen mahan limaa ja ontelon maharauhanen kehossa alueella koiran vatsassa. Immunoperoksidaasitesti-diaminobentsidiinitetrahydrokloraattia tahra Mayerin hematoksyliinillä vastavärinä. Bar = 50 pm. Inset osoittaa Helicobacter
antigeeni sisällä parietaalisoluissa, joskus havaittavissa sekä säilynyt spiraalimainen organismeja tai ruskea pyöreä pisteitä. Immunoperoksidaasitesti-diaminobentsidiinitetrahydrokloraattia tahra Mayerin hematoksyliinillä vastavärinä. Bar = 10 pm.
Taulukko 3 Detection of Helicobacter spp. eri mahaosastoa koiraeläin vatsan toistuvia eri diagnostisten menetelmien
Mahalaukun alue
OSOITUSMENETELMÄT
Positiivinen (prosenttia & numero)
HE

MG
IHC *
PCR
Body (n = 66) B 62,1 (41/66) B 68,2 (45/66)
84,8 (56/66) B 37,9 (25/66) B antrum (n = 51) B 70,6 (36/51)
78,4 (40/51) B 80,4 (41 /51) B 51,0 (41/51) B Selitykset: HE: hematoksyliinillä-eosiini; MG: muunnettu Giemsa tahra; IHC: immunohistokemia; PCR: polymeraasiketjureaktio.
* Positiiviset tulokset, jotka saatiin IHC ei eronnut merkittävästi eri kunkin vatsan alueen (p > 0,05).
Tarkempi yksilöinti loislajin tehtiin käyttämällä Helicobacter
lajikohtaisia ​​qPCRs . Helicobacter
spp. havaittiin 47,8%: lla eläimistä (33/69) (taulukko 3). Valtaosa näytteistä oli positiivinen H. heilmannii
erityisiä qPCR. Kuitenkin amplikoneista osoitti vain noin 92% homologiaa H. heilmanni S.S.
. Siksi nämä tapaukset luokiteltiin uudelleen H. heilmannii-
pidä.
In 51,5% (17/33) ja positiivisten näytteiden, vain yksi Helicobacter
laji tunnistettiin samalla Sekainfektioissa havaittiin 48,5% (16/33) (taulukko 2). H. heilmannii-
kaltaiset organismit olivat yleisin (22/33 eli 66,7%), tunnistetaan kymmenen koirilla yhtenä infektio ja 12 koirille sekainfektioita. H. salomonis
oli toiseksi yleisin laji (17/33 eli 51,5%), vaikka se esiintyy lähinnä yhdessä muiden NHPh (42%) kuin yksinään (9,1%). Saman verran H. felis
ja H. bizzozeronnii
havaittiin (6/33 eli 18,2%), joko yksittäisinä (6,3%) tai Sekainfektioissa (12,1%). Sekainfektioissa H. heilmannii
-kuten ja H. salomonis
olivat yleisimpiä (33,3%) (taulukko 2). Kehossa alueella, eniten tunnistetuista lajeista oli H. salomonis
(44,0%), kun taas antrumiin yleisin laji H. heilmannii-
kuten (57,7%) (taulukko 4) .table 4 Erityiset Helicobacter lajit havaittiin PCR: llä eri mahaosastoa koiraeläin mahan
Erityiset PCR- Helicobacter spp. positiiviset tulokset

Mahalaukun alue (prosenttia & numero)
Body
antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii kaltainen
24,0 (6/25) B 57,7 (15/26) B H. salomonis
44,0 (11 /25) B 7,7 (2/26) B H. felis
8,0 (2/25) B 3,8 (1/26) B H. bizzozeronnii
4.0 (1/25) B 11,5 (3/26) B H. felis + H. bizzozeronnii
4,0 (1/25) B 3,8 (1/26) B-H . heilmannii kaltainen + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26) B H. heilmannii kaltainen + H. felis
4,0 (1 /25) B 3,8 (1/26) B H. felis + H. salomonis
4,0 (1/25) B 0
oli merkittävä korrelaatio läsnäollessa Helicobacter
spp. ja molemmat lievä tai kohtalainen epiteelivamma ja lievä tai kohtalainen epiteelinsisäisen lymfosyyttien infiltraatio (kuvio 1 B) koiraeläin mahaan (p < 0,05). Tilastollisesti merkitsevästi korrelaatioita välillä ei havaittu Helicobacter
infektio ja mahalaukun limakalvon surkastuminen tai fibroosia, lamina propria
lymfoplasmasyyttinen tunkeutumisen tai lymphofollicular liikakasvu. Mitään merkittäviä eroja ei havaittu koskien bakteerikolonisaatiota tiheys molempien vatsan alueiden (p > 0,05).
Määrä Helicobacter
positiivisten tapausten havaita eri menetelmillä erosivat merkittävästi (p < 0,05). Positiiviset IHC tulokset eivät eroa merkittävästi jokaisen eri vatsan alueen (p > 0,05), kun taas luvut saatiin HE, GM ja qPCR erosivat toisistaan ​​merkittävästi rungon ja antrum (p < 0,05).
Keskustelu
tässä tutkimuksessa korkea esiintyvyys gastriitti havaittiin (95,7%). Nämä tulokset ovat yhtäpitäviä muiden tutkimusten raportointi esiintyminen gastriitti kuin yleinen löydös koirilla [14,31,32]. Sen sijaan, mahaeroosiota tai haavaumia harvoin löytyy näillä eläimillä.
NHPh-infektio määritettiin neljällä menetelmällä (HE, MG, IHC ja qPCR) ja esiintyvyys 87,0% koirilla havaittiin. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​saatavilla kirjallisuudessa, joka dokumentoitu hyvin yleisiä NHPh että koiran mahalaukun limakalvon [12,19,33-35]. Tutkimuksessamme koira NHPh tartunta merkittävästi mukana lievää tai kohtalaista intraepiteliaalisten lymfosyyttien tunkeutumisen ja lievä tai kohtalainen mahalaukun epiteelin vammoja, riippumatta mahan sijainti. Selkeä suhde koiran gastriitti ja helikobakteeri
infektio oli kuitenkaan perustettu mikä on tulosten mukaisesti toisten [11,14,15,34].
Aikaisemmassa tutkimuksessa, prosenttiosuus Helicobacter
positiivisia tapauksia havaitaan sen jälkeen HE-värjäys koiran mahalaukun näytteistä oli 17,5% [24]. Nykyisessä tutkimuksessa, kaikki näytteet tutkittiin kaksi patologia erittäin kokeneita havaitsemiseksi Helicobacter
spp.
Organismit jälkeen rutiini värjäystä. Tämä voi vaikuttaa tähän korkeampi tunnistus korko (65,2%) ilmoitti täällä.
Suostumuksella aiemmissa tutkimuksissa, NHPh olivat usein havaittu paitsi pinnallinen limaa ja sisällä maharauhanen mutta myös solun, sytoplasmassa parietaalisolujen [31,33,36] (kuvio 1C ja D). Spiraalin muotoinen organismien läsnä tässä erityisesti si- jaintia solussa oli vaikea havaita jälkeen HE ja MG värjäys, koska sytoplasmaan rakeistus parietaalisolujen. Meidän käsissämme, IHC näytti olevan hyvin arvokas tekniikka tunnistaa NHPh näissä soluissa (kuvio 1 D). Kaiken IHC värjäys osoitti korkeimman Helicobacter
positiivisia arvoja (82,6%). Tämä havainto on yhtäpitävä muut tulokset osoittavat, että kaupallisesti saatavilla vasta-aineita H. pylori
ovat hyödyllisiä havaitsemiseksi Helicobacter
spp. parafiiniin upotetut näytteet koira vatsat [24,26,36].
Aiemmissa tutkimuksissa on raportoitu tilastollisesti merkittävää eroa havaitsemiseksi Helicobacter
organismien IHC ja PCR-tekniikoita (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) raportoi, että PCR-määrityksen oli suurempi herkkyys ja spesifisyys kuin muut menetelmät [4]. Kuitenkin meidän tutkimuksessa esiintyvyys Helicobacter
spp.
Saavutetut qPCR oli alhaisin (47,8%). Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että formaliinin kiinnitys ja parafiiniupotusta vaikeuttaa PCR-analyysi [37,38]. Sjödin et al.
(2011) verrattuna tehokkuus DNA: n monistuksen tuoreista (n = 28) ja parafiiniin (n = 28) näytteiden tunnistamiseen Helicobacte
r spp.
Eri elimiin ( kissan mahalaukku, pohjukaissuoli, maksa ja haima) ja totesi, että keskiarvo DNA pitoisuus saavutetaan oli suurempi, kun saadaan tuoreista kudoksista [39]. DNA-analyysi parafiiniin kudosnäytteiden käyttämällä PCR /qPCR saattaa heikentyä DNA pirstoutuminen, estämään aineita, tai molempia. Formaliinialtistuksen kiinnitys voi todellakin aiheuttaa DNA: n fragmentoituminen sekä osittainen tuhoutuminen DNA [38,40] ja PCR-reaktioissa voi myös estyä formaliinilla jäännös [37]. Kielteisiä vaikutuksia formaliinia liittyvät suoraan kesto tallennuksesta [40]. Vaikka näytteet mukana tässä tutkimuksessa olivat kaikki käsitellään samassa laboratoriossa ja siksi saatettiin samaan vakioprotokollia, kesto kiinnitys saattaa vaihdella näytteiden vaihtelun vuoksi aikaväli näytteenoton sekä niiden saavuttua laboratorioon.
Different molekyylitason lähestymistapoja tunnistamiseksi NHPh lajien on käsitelty [4,14,24,28]. Tekniikat perustuvat havaitsemiseen tai sekvensoinnilla 16S tai 23S rRNA-koodaavat geenit voidaan kuitenkin tehdä eroa eri kissojen ja koirien mahan Helicobacter
lajeja, kun taas perustuvat testit havaitsemiseen tai sekvensointi hsp60
geeni, ureaasitekniikan A- ja B-geenejä tai gyrB
geeni voidaan tunnistaa näiden bakteerien lajitasolla [9].
tutkimuksessamme amplikonien saatu H. heilmannii
erityisiä qPCR oli vain noin 92% homologiaa H . heilmannii,
joka toistaiseksi on vasta viljeltiin mahalaukun limakalvon kissojen. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Molekyylimekanismeja mahalaukun epiteelisolujen tarttumista ja injektio CagA Helicobacter pylori
• Ilmaantuvuus ja selviytyminen ruokatorven ja mahalaukun syövän Englannissa vuosien 1998 ja 2007 väestöpohjaisen tutkimus