Prítomnosť a význam Helicobacter spp. v žalúdočnej sliznici portugalských psov

Prítomnosť a význam Helicobacter spp.
V žalúdočnej sliznici portugalských psov
abstraktné
pozadia
Non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) sú tiež schopné vyvolať ochorenie u ľudí. Psy sú prirodzeným rezervoárom mnoho z týchto druhov. Zatvorte a intenzívny ľudský kontakt so zvieratami bol identifikovaný ako rizikový faktor, a preto dôležitým ZOONOTICKÉ význam bol pripočítaný NHPh.
Metódy
Pre určenie prevalencie Helicobacter
druhov, ako aj žalúdočných histopatologické zmeny spojené , boli vyhodnocované vzorky žalúdočnú sliznicu 69 psi.
Výsledky
iba jeden pes zobrazená normálny histopatologické sliznicu s absenciou špirálovitá organizmami. Normálny žalúdočnej sliznice a prítomnosť v tvare špirály baktérií bola pozorovaná u dvoch psov. Všetky zostávajúce zvieratá prezentované histopatologické zmeny zástupcu gastritídu. Helicobacter
druhy boli v 60 psi (87,0%) detekované aspoň raz detekčnej metódy. Histologické, histochemické a imunohistochemické hodnotenie ukázalo, že Helicobacter
spp. boli prítomné u 45 (65,2%), 52 (75,4%) a 57 (82,6%), psov, v danom poradí. Špirálovitá baktéria boli detekované analýzou qPCR u 33 (47,8%) psov. H. heilmannii-
podobných organizmov boli zistené u 22 zvierat (66,7%) a prevažne v antrálnej žalúdočnej regióne. H. Salomonis
bol druhý najrozšírenejší druh (51,5%), aj keď sa zistilo, hlavne v spojitosti s inými Helicobacter
spp. a v tele žalúdka regióne. H. bizzozeronii a H. felis
boli menej často zistené.
Závery
Dospelo sa k záveru, že napriek vysokému výskytu a celosvetovú distribúciu žalúdočné NHPh u psov, prítomnosť konkrétnych druhov Helicobacter
máj rozlišujú medzi geografických oblastí. NHPh infekcie boli významne sprevádzané miernym až stredne intraepiteliálnej lymfocytov infiltrácie a mierne až stredne ťažké žalúdočné epitelu zranenia, ale nebolo možné stanoviť jasný vzťah medzi žalúdka a Helicobacter
infekcie.
Kľúčové
Psie žalúdočnej sliznice Psy Ne- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) Histochemistry imunohistochémia (IHC) polymerázová reťazová reakcia (PCR) žalúdka Úvod
rodu Helicobacter
sa skladá z najmenej 40 druhov [1]. Medzi nimi H. pylori
je považovaná za dôležitý patogén, ktorého prirodzeným hostiteľom je človek, ale jej prítomnosť v psom žalúdku boli hlásené zriedkavo [2-4].
Veľké množstvo non-Helicobacter pylori Helicobacter
druhy (NHPh) boli tiež uznané v ľuďoch av niekoľkých zvierat. Predtým NHPh boli všeobecne označované ako H. heilmannii sensu lato
(SL) a zahŕňal H. suis
, druh kolonizovať žalúdky ošípaných a skupina druhov je známe, že kolonizovať žalúdočnú sliznicu psov a mačiek : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. Salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis stroje a H. heilmannii sensu stricto
(ss) [5] , Väčšina z týchto žalúdočné NHPh sú tiež schopné vyvolať ochorenie u ľudí [6,7]. Zatvorte a intenzívny ľudský kontakt so zvieratami bol identifikovaný ako rizikový faktor, a preto dôležitým ZOONOTICKÉ význam bol pripočítaný NHPh [6,8,9].
V spoločenských zvierat, žalúdočné Helicobacter
spp. Boli popísané často s prevahou v rozmedzí od 67-86% u klinicky zdravých psov a 61-100% v roku zvieratami, ktoré predstavujú chronické zvracanie [10-14]. Tieto mikroorganizmy boli zistené v žalúdku asi 100% laboratórnych psov Beagle a psov z útulkov miestnych [15-17]. Prevládajúce žalúdka Helicobacter spp.
U mačiek a psov sú H. felis
, H. bizzozeronii stroje a H. heilmannii sensu stricto
(ss
), zatiaľ čo H. Salomonis
je menej často detekovaný a prevalencia H. cynogastricus stroje a H. baculiformis
doteraz nebol študovaný [9,18-20]. môže dôjsť aj zmiešané infekcie s rôznymi druhmi [3,19].
Zatiaľ čo mnohé štúdie preukázali, že fundus a telo majú vyššiu bakteriálne hustotu a vyššiu pravdepodobnosť nálezu Helicobacter
spp. [17,21,22] iní nezistil žiadne významné rozdiely medzi hustotou NHPh v fundu, tela a antra [2,23-26] psieho žalúdka. Rozdiely v týchto výsledkov možno pripísať na vrub rôznych laboratórnych diagnostických metód rôznymi výskumnými skupinami.
Diagnostické metódy používané na Helicobacter
spp.
Môže byť neinvazívne a invazívne [24]. Neinvazívne metódy, ako je serology alebo zisťovanie bakteriálnej DNA a antigény v stolici nevyžadujú žalúdočné biopsia alebo anestézii. Tieto invazívne metódy, ako sú bakteriálne kultúry, histopatológie, náteroch, elektrónová mikroskopia alebo polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) môže vyžadovať žalúdočné biopsia, ktorý je často získané endoskopia v anestézii alebo pitve. Typicky Helicobacter
organizmy nie sú ľahko vizualizovaný s hematoxylínom a eosínu (HE) a farbivom tak, ich priame pozorovanie vo vzorkách biopsiou je podčiarknutá použitím špeciálnych škvŕn, ako je modifikovaný Giemsa (MG) škvrna. Komplikovanejšie a citlivé Helicobacter
-detection metódy, ako je imunohistochémia (IHC) alebo polymerázovú reťazovou reakciou (PCR) sú výskumné nástroje zriedka používané v diagnostickom prostredí.
Niekoľko šetrenie diskutovali výskytu Helicobacter spp.
u psov [2,10,11,14,16], ale len v niekoľkých štúdiách boli stanovené špecifické druhy prítomné v žalúdku psie [4,19,27,28]. Presná identifikácia žalúdočných helicobacters na úrovni druhu je nevyhnutné, za účelom zistenia výskytu a klinický význam všetkých taxónov. Cieľom tejto štúdie bolo zistiť výskyt rôznych druhov žalúdočných Helicobacter
prítomných v žalúdku odlišných oblastiach psieho žalúdka (tela a antra) za použitia histologických, histochemického imunohistochemické a molekulárnej diagnostických techník. Stupeň kolonizácie sa vyznačuje a korelované s príslušnými histopatologických zmien v psej žalúdočnej sliznici.
Metódy
pre zhromažďovanie vzorky sa
žalúdočné tkaniva boli získané od 69 psi (45 samcov a 24 žien, vo veku od 3 mesiacov až 15 rokov). Vzorky boli náhodne vybrané z archívu laboratória veterinárnej patológie, ICBAS-UP (Portugalsko), kde boli prijaté v rokoch 2010 a 2013. Vzorky boli získané z 20 psov pri endoskopických postupov, z piatich počas chirurgického zákroku a zo 44 psov počas pitvy vyšetrenie. Všetky postupy (chirurgické odstránenie a pitva skúška) boli vykonané v klinickom kontexte pokúša na liečbu zvierat na základe najlepšie klinickom posúdení ošetrujúceho praktického lekára. Použitie vyrezaných tkanív pre výskum bol vysvetlený na majiteľa a bol získaný informovaný súhlas pre každý prípad. Žiadna z týchto akcií boli nadobudnuté výhradne na účely výskumu a vyšetrovatelia nemal žiadny vplyv na výber a vykonávanie týchto postupov. Iba žalúdočné vzorky v dobrom stave uchovanie boli zahrnuté v tejto štúdii.
Tkanivá boli fixované v 10% neutrálnom pufrovanom formalínu a vložené do parafínu. Tri po sebe idúce časti 3 um boli vykonané, jeden bol zafarbený HE, ďalší farebnú škvrnou mg a tretí bol použitý pre imunohistochemické farbenie.
Vyhodnotenie vzorky
žalúdočné vzorky boli hodnotené nezávisle na sebe dvaja pozorovatelia (IA a FG ). Histopatologické parametre, ako sú zmeny v bunkovom profile, fibróza lamina propria stroje a žľazy atrofia boli analyzované podľa Svetovej malé zviera veterinárna asociácia (WSAVA) usmernení [29]. Stupeň morfologických znakov a zápalových zmien bola hodnotená ako normálne, mierne, stredné alebo označené pomocou dostupných WSAVA gastrointestinálne normalizačné vizuálnej analógovej [29].
Mikroskopické vyhodnotenie bolo vykonané na základe analýzy pre celý oddiel žalúdočné tkaniva. Prítomnosť Helicobacter spp.
Bola hodnotená HE a MG škvrny a IHC. Pes bol klasifikovaný ako Helicobacter
pozitívne, keď jeden z týchto metód dal pozitívny výsledok. Navyše bakteriálne hustota kolonizácie bola kvantifikovaná: +, málo organizmov (menej ako 10 organizmov /400x); ++, Stredná počet organizmov (10 až 50 organizmov /400x); +++, Veľký počet organizmov. (Viac ako 50 organizmov /400x) [24]
Imunohistochémia
Pre imunohistochemické štúdie boli deparaffinised úseky, hydratovaná a antigén získavanie sa vykonáva v tlakovom hrnci v 10 mmol /L citrát sodný, pH 6,0, po dobu 2 minút (min). Sklíčka sa chladí počas 10 minút pri teplote miestnosti a premyje dvakrát trifosfát pufrovaného fyziologického roztoku (TBS) po dobu 5 minút. bol použitý systém detekcie NovolinkTM Max-Polymer (Novocastra, Newcastle, UK) pre vizualizáciu, v súlade s pokynmi výrobcu. Po blokovanie endogénnej peroxidázou s 3% peroxidu vodíka v metanole po dobu 10 minút, boli rezy inkubované cez noc pri 4 ° C, s polyklonálne antisérum proti H. pylori
(RBK012; Zytomed, NJ), ktorý ukazuje imunoreaktivitu s širokú škálu baktérie patriace k rodu Helicobacter
. Rezy sa prepláchne TBS medzi každom kroku tohto postupu. Farba bola vyvinutá až 7 minút pri teplote miestnosti s 3,3'-diamino-benzidínu (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) a úseky sa potom ľahko kontrastné hematoxylínom, dehydratáciu a montáž. Pozitívne imunoreaktivita bola zaznamenaná ako samostatný zlatohnedá označovanie baktérií umiestnených na povrch sliznice, v žalúdočných jám a žliaz a v parietálnych bunkách.
Extrakcia, PCR amplifikáciu a sekvenovanie DNA
DNA bola extrahovaná z 5 po sebe idúcich rezov 20 uM za použitia DNeasy krvi a tkanív Kit (Qiagen) podľa inštrukcií výrobcu. Helicobacter
druhovo špecifické qPCRs založené na krátku časť génov ureázy A a B boli vyvinuté pre identifikáciu H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii stroje a H. Salomonis
. Pre výrobu štandardov pre každý qPCR, veľká časť klastra UreaB génov z H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. Salomonis
R1053 (1224 bp) a H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) bol amplifikovaný za použitia primérov U430F a U1735R, ako bolo opísané skôr [30]. Štandardné sa skladala z 10-rozkladací riedenie od 10 8 PCR amplikónov za každých 10 ul reakčnej zmesi. Jeden ul extrahovaného templátu DNA sa suspenduje v 10 ul reakčnej zmesi obsahujúcej 0,25 ul dopredu a reverzných primerov (tabuľka 1), 3,5 ul HPLC vody a 5 ul SensiMix ™ SYBR No-ROX (Bioline činidlá Ltd, UK). Obaja štandardy a vzorky boli v duplikátoch na RT-PCR System ™ CFX96 s C1000 termocykléra (Bio-Rad, Hercules CA, USA). The (1,6 verzia) softvér Bio-Rad CFX Manažér bol použitý pre výpočet prahových cyklov (CT) -hodnoty a analýza krivky topenia amplifikovanej DNA. Boli použité priemerné hodnoty duplikátov pre kvantifikáciu Helicobacter
DNA vo vzorkách tkanív. Ak chcete vylúčiť falošne pozitívnych vzoriek, amplikóny z každej pozitívnej vzorky bolo sequenced.Table 1 Zoznam primérov použitých pre qPCR
Primer názvom
nukleotidovej sekvencie
Špecifickosť
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT CTT GGA GGT GCT CAC CAA T
H. Salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. Salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC SCS GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Štatistická analýza
testu chí-kvadrát Pearsona a Fisherovho exaktného testu boli použité pre stanovenie závislosť medzi dvoma kategóriami. Hodnoty p < 0,05 boli považované za štatisticky významné. Štatistická analýza bola vykonaná pomocou štatistického balíka SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisabon, Portugalsko).
Výsledky
celkom 117 vzoriek žalúdočných (66 z regiónu tela a 51 podaná boli analyzované Antrum región).
Medzi 69 zvierat, obaja žalúdočné regióny boli k dispozícii pre vyhodnotenie do 48 psov, zatiaľ čo jediný subjekt alebo dutine regióny boli k dispozícii v 18 a tri psy, resp.
z celkového počtu 69 psov, jediný predstavila normálne histopatologické sliznici s absenciou v tvare špirály organizmy. Normálny žalúdočnej sliznice a prítomnosť v tvare špirály baktérií bola pozorovaná u dvoch psov (2,9%). Zostávajúce zvieratá, predstavila histopatologické zmeny reprezentatívny gastritídy (66/69 alebo 95,7%) (tabuľka 2). Na základe histopatologických zmien v žalúdočnej sliznici bola zistená mierne až stredne závažnej chronickej gastritídy v 88,4% (61/69) má vplyv na žalúdočné telo 51,5% (34/66) a antrálnej oblasť 92,2% (47/51 ) v tabuľke animals.Table 2 sumarizuje histopatologické zmeny a kolonizačné hustotu pozorované v psom žalúdku, v súlade s pozitívnym NHPh druhovo špecifické výsledky PCR pozitívnych výsledkov rodu a negatívnych výsledkov
PCR pozitívne výsledky so špecifickými druhmi identifikácia, poloha bez ohľadu na žalúdočné (percento & číslo) (n = 33)
Pozitívne výsledky za Helicobacter spp. (Percento & číslo) (n = 27)
Negatívne výsledky (percento & číslo) (n = 9)
p
Hh

KV
Hb
Hs
KV + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
HB + Hs
KV + HB + Hs
histopatológie triedenie
(Day et al., 2008)
Normálny
3,0 (1/33) NETHRY.cz 0 NETHRY.cz 0
3,0 (1/33) NETHRY.cz 0
0
0
0
0
7,4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
Mierny zápal žalúdka
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33) NETHRY.cz 0
18,2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
44,4 (12/27)
33.3 ( 3/9)
Mierny zápal žalúdka
12,1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33) NETHRY.cz 0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33) NETHRY.cz 0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Označené gastritídu
0
0
0
0
0
6,1 (2/33)
0
0
0
0
11,1 (1/9)
poranenie epitelové
Mierna
27,3 (9/33)
3,0 (1/33) NETHRY.cz 0
9.1 (3/33)
3,0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6,1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Stredná
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33) NETHRY.cz 0
0
0
3.0 (1 /33) NETHRY.cz 0
0
14,8 (4/27)
11.1 (1/9)
fibróza /slizničnej atrofia
Mierna
18,2 (6/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3,0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Stredná
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33) NETHRY.cz 0
0
0
0
3,7 (1/27)
11.1 (1/9)
intraepiteliálna lymfocyty
Mierna
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33) NETHRY.cz 0
15.2 (5 /33)
0
0
6,1 (2/33)
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
0,016
Stredná
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27) NETHRY.cz 0
Lymphofollicular hyperplázia
Mild
6,1 (2/33)
0
0
0
3.0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
NS
bakteriálnej hustota (na základe výsledky IHC)
nA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27)
++
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0 NETHRY.cz 0
0
25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
9,1 (3/33) NETHRY.cz 0
33,3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legenda: Hh
, H. heilmannii-like
; Hf
, H.felis
; HB
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. Salomonis
bakteriálne hustota :. +, Niekoľko organizmov; ++, Mierne počet organizmov; +++, Veľký počet organizmov. NA, nepoužiteľné. NS, nie sú významné (p > 0,05).
Oba mierne až stredne ťažké poranenie epitelové a mierne až stredne ťažkej intraepiteliálnej lymfocytov infiltráciu boli zistené u 88,4% (61/69)
atrofia žalúdočnej sliznice, žliaz hniezdenia alebo fibrózu bol. prítomný v 44,9% psov (31/69). V 18,2% zvierat Táto zmena bola pozorovaná v tejto oblasti tela (12/66), a na 47,1% v oblasti antra (24/51) z psieho žalúdka.
Abnormálne neutrofilné infiltrácie bola zistená len v žalúdočnej dutine z dvoch zvierat: v jednej, to zmena bola mierna, a v druhej, to bolo označené, a spojený s žalúdočné vredy. V prípade iných zápalových buniek, spočívajúci v miernom infiltrácie mastocytov, boli pozorované v oblasti tela štyroch zvierat a v dutine dvoch zvierat.
Zo všetkých zvierat, 87,0% bolo pozitívnych (60/69) (obrázok 1A) a 13,0% boli negatívne na Helicobacter
spp. (9/69), a to bez ohľadu na teste použiť na detekciu baktérií. Bez ohľadu na umiestnenie, žalúdka Helicobacter
spp. boli pozorované pomocou on mg a IMC v 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) a 82,6% (57/69) zo psov, resp. S HE farbenie, špirálovitá baktéria boli zistené v 62,1% vzoriek telových (41/66), a 70,6% z antrálnej vzoriek (36/51). Využitie škvrnu MG, to bolo 68,2% pre vzorky telových (45/66) a 78,4% pre antrálnej vzoriek (40/51). Helicobacter
antigén bol detekovaný imunochemicky v 84,9% (56/66) vzoriek tela a v 80,4% (41/51) z antrálnej vzoriek (tabuľka 3). Obrázok 1 Helicobacter
spp. v psom žalúdku. A) Početné špirálovitá baktéria kolonizujúcich povrchový epitel žalúdočnej jamy. HE. Bar = 10 um; B) Poznámka: intraepiteliálnej lymfocytov infiltráciu počas hlbších žalúdočných žliaz v antrálnej sliznici NHPh pozitívneho psa. HE. Bar = 20 um. C) Prítomnosť NHPh vnútri parietálnych buniek psieho žalúdka časti tela (čierna šípka). MG. Bar = 10 um; D) Veľké množstvo Helicobacter
antigénu vo povrchné žalúdočnej sliznice a lumen žalúdočných žliaz v oblasti tela psieho žalúdka. Imunoperoxidázovému-Diaminobenzidine škvrna s Mayer hematoxylín kontrastným farbivom. Bar = 50 um. Vsadenie ukazuje Helicobacter
antigénu vo vnútri parietálnych buniek, niekedy zistiteľných ako dobre zachovalé špirálovitá organizmov alebo hnedých okrúhlych bodiek. Imunoperoxidázovému-Diaminobenzidine škvrna s Mayer hematoxylín kontrastným farbivom. Bar = 10 um.
Tabuľka 3 Detekcia Helicobacter spp. v rôznych oddieloch žalúdku psieho žalúdka opakujúce sa do rôznych diagnostických metód
Žalúdočné oblasť
detekčných metód
Pozitívna správa (percentá & číslo)
HE

MG
IHC *
PCR
tela (n = 66)
62,1 (štyridsať jedna šesťdesiat šestina)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
dutine (n = 51)
70,6 (tridsaťšesť päťdesiat jedentin)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (štyridsať jedna päťdesiat jedentin)
Legenda: HE: hematoxylín-eozín; MG: modifikovaný Giemsa farbivo; IHC: imunohistochémia; PCR: .. Polymerázová reťazová reakcia
* Pozitívne výsledky získané s IHC sa významne nelíšili v rámci každej oblasti žalúdka (p 0,05)
Ďalšie identifikácie na úrovni druhov sa vykonáva za použitia Helicobacter
druhovo špecifický qPCRs , Helicobacter
spp. boli zistené u 47,8% zvierat (33/69) (tabuľka 3). Väčšina vzoriek bolo pozitívnych na H. heilmannii
konkrétne qPCR experimentu. Avšak, amplikóny ukázali iba približne 92% homológie s H. Heilmann S. S.
. Preto sa tieto prípady boli preradené ako H. heilmannii-
páči.
V roku 51,5% (17/33) pozitívnych vzoriek, len jeden druh Helicobacter
bol identifikovaný, zatiaľ čo zmiešané infekcie boli zistené v 48,5% (16/33) (tabuľka 2). H. heilmannii-
podobné organizmy boli najviac obyčajne nájdené (22/33 alebo 66,7%), pričom bolo zistené v desiatich psov ako jediný infekcie a v 12 psov a zmiešané infekcie. H. Salomonis
bol druhý najrozšírenejšie druhy (17/33 alebo 51,5%), aj keď sa zistilo, hlavne v spojení s iným NHPh (42%) skôr než samotné (9,1%). Rovným dielom H. felis stroje a boli zistené H. bizzozeronnii
(6/33 alebo 18,2%), a to buď ako samostatné (6,3%) alebo zmiešaných infekcií (12,1%). Zmiešané infekcie H. heilmannii
-Ako a H. Salomonis
boli najčastejšie (33,3%) (tabuľka 2). V oblasti tela, najčastejšie identifikovať druh bol H. Salomonis
(44,0%), zatiaľ čo v dutine najviac prevláda druh bol H. heilmannii-
ako (57,7%) (tabuľka 4) .Table 4 Specific druhom Helicobacter pomocou PCR zistené v rôznych oddeleniach žalúdku psieho žalúdok
Specific PCR- Helicobacter spp. Pozitívne výsledky
Žalúdočné oblasť (percentá & číslo)
Telo
dutine
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-like
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. Salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii-like + H. Salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii-like + H. felis
4,0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. Salomonis
4,0 (1/25)
0
Tam bola významná korelácia medzi prítomnosťou Helicobacter
spp. a to ako mierne až stredne ťažké poranenie epitelové a mierne až stredne závažné intraepiteliálnej lymfocytov infiltráciu (obrázok 1B) z psieho žalúdka (p menšie ako 0,05). Nebol preukázaný štatisticky významne boli nájdené korelácia medzi Helicobacter
infekcií a žalúdočné slizničnej atrofia alebo fibrózy, lamina propria
lymfoplasmacytická infiltráciu alebo lymphofollicular hyperplázia. neboli zistené žiadne významné rozdiely, pokiaľ ide o bakteriálnu kolonizácie hustoty medzi oboma žalúdočné regiónmi (p 0,05).
počet Helicobacter
-pozitívne prípadov zistených s rôznymi metódami líšil signifikantne (p menšie ako 0,05). Pozitívne IHC výsledky sa významne nelíšili v rámci jednotlivých žalúdku regiónu (p > 0,05), zatiaľ čo čísla získaná s HE, GM a qPCR významne líšili medzi telom a antra (p menšie ako 0,05).
Diskusia
v tejto štúdii, bol pozorovaný vysoký výskyt gastritídy (95,7%). Tieto výsledky sú v súlade s inými štúdiami hlási výskyt gastritídy ako bežný nález u psov [14,31,32]. Naproti tomu, žalúdočné erózie alebo vredy sa vyskytujú zriedka v týchto zvierat.
NHPh infekcii bola stanovená pomocou štyroch metód (HE, MG, IHC a qPCR) a prevalencia 87,0%, u psov bola zistená. Tieto výsledky sú v súlade s tými, k dispozícii v literatúre, ktorý dokumentoval vysokú prevalenciu NHPh v psej žalúdočnej sliznice [12,19,33-35]. V našej štúdii psov bola infekcia NHPh významne sprevádzaná miernou až stredne ťažkou intraepiteliálna lymfocytov infiltrácie a mierne až stredne ťažké poranenie žalúdočnej epitelu, bez ohľadu na umiestnenie žalúdka. Jasný vzťah medzi psieho žalúdka a Helicobacter
infekcie bol však nepreukázala, čo je v súlade s výsledkami iných [11,14,15,34].
V predchádzajúcom prešetrovaní, percento Helicobacter
-pozitívnych zistených prípadov potom, čo farbenie psích žalúdočných vzoriek bola 17,5% [24]. V tejto štúdii, všetky vzorky boli skúmané dvoma patológmi, ktorí ovládajú detekciu Helicobacter
spp.
Organizmu po rutinnom farbením. To môže hrali rolu vo vyššej miere detekcie (65,2%) tu hlásené.
V súlade s predchádzajúcimi štúdiami, NHPh boli často pozorované nielen v povrchových hlienu a v žalúdočných žľazách, ale aj vo vnútri buniek, v cytoplazme parietálnej bunky [31,33,36] (Obrázok 1 C a D). Špirálovitá organizmy prítomné v tomto konkrétnom subcelulárnu lokality bolo ťažké odhaliť potom, čo sa MG farbenie vzhľadom k cytoplazme granulácii parietálnych buniek. V našich rukách, IHC sa zdá byť veľmi cenná metóda pre identifikáciu NHPh v týchto bunkách (Obrázok 1d). Celkovo možno povedať, IHC farbenie ukázal najvyššiu Helicobacter
-pozitívne hodnoty (82,6%). Toto zistenie je v súlade s ostatnými výsledky ukazujú, že komerčne dostupné protilátky proti H. pylori
sú užitočné pre detekciu Helicobacter
spp. . V parafínu vložených vzoriek zo psích žalúdkov [24,26,36]
Predchádzajúce štúdie hlásený žiadny štatisticky významný rozdiel medzi detekciu Helicobacter
organizmov IHC a PCR techniky (p > 0,05) [24]. Chung a kol.
(2014) uvádza, že test PCR mali vyššie senzitivitu a špecifickosť ako iné metódy [4]. Avšak, v našej štúdii sa prevalencia Helicobacter
spp.
Získaný pomocou qPCR bola najnižšia (47,8%). Predchádzajúce výskumy ukázali, že formol fixácia a zaliatie do parafínu bráni PCR analýza [37,38]. Sjödin et al.
(2011) porovnávali účinnosť amplifikácia DNA z čerstvej (n = 28) a vložený parafínu (n = 28) vzoriek pre identifikáciu Helicobacte
r spp. Predaj z rôznych orgánov ( mačacie žalúdka, dvanástnika, pečene a pankreasu), a dospel k záveru, že stredná hodnota koncentrácie DNA dosiahnutá vyššia, ak boli získané z čerstvej tkaniva [39]. DNA analýza parafínu vložené tkanivových vzoriek s použitím PCR /qPCR experimentu môže byť ohrozená v dôsledku fragmentácie DNA, látky znižujúce, alebo kombináciou oboch. Fixačné formol môže skutočne dôjsť k fragmentácii DNA, rovnako ako čiastočnú deštrukciu DNA [38,40] a PCR reakcia môže byť tiež inhibovaná formalínu zvyšku [37]. Negatívne účinky formalínu sa priamo vzťahujú k dobe trvania fixácie [40]. Hoci vzoriek zaradených do tejto štúdie boli všetky spracované v rovnakom laboratóriu, a preto podliehajú rovnakým štandardných protokolov, doba fixácie sa môže pohybovať medzi vzorkami kvôli zmene v časovom intervale medzi odber vzoriek a ich príchode do laboratória.
Different molekulárnej prístupy na identifikáciu druhov NHPh boli riešené [4,14,24,28]. Techniky založené na detekciu alebo sekvencovanie 16S alebo 23S rRNA-kódujúcich génov môže však nerozlišuje medzi rôznymi psov a mačiek Helicobacter
druhov žalúdočných, zatiaľ čo testy založené na detekciu alebo sekvenovanie hsp60
génu sa ureázy a a B gény alebo génové GyrB
umožňujú identifikáciu týchto baktérií na úrovni druhu, [9].
v našej štúdii, amplikóny získané v H. heilmannii
špecifické qPCR preukázali iba približne 92% homológie s H . heilmannii,
ktorá doteraz bola len kultivované z žalúdočnej sliznice mačiek. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Molekulárne mechanizmy žalúdočného epitelu adhézie buniek a vstrekovanie ČAGA Helicobacter pylori
• Výskyt a prežívanie pažeráka a rakoviny žalúdka v Anglicku v rokoch 1998 a 2007, study