Vorhandensein und die Bedeutung von Helicobacter spp. in der Magenschleimhaut von portugiesischen Hunden

Präsenz und Bedeutung von Helicobacter spp.
In der Magenschleimhaut der portugiesischen Hunde
Abstrakt
Hintergrund
Nicht Helicobacter pylori
Helicobacters (NPSH) sind auch in der Lage Krankheit beim Menschen verursachen. Hunde sind ein natürliches Reservoir für viele dieser Arten. Schließen und intensiven menschlichen Kontakt mit den Tieren wurde als Risikofaktor identifiziert und somit eine wichtige Zoonose Bedeutung hat NPSH zugeschrieben worden.
Methoden
die Prävalenz von Helicobacter
Arten und der Magen-histopathologischen Veränderungen festzustellen assoziiert , Magenschleimhaut Proben von 69 Hunden wurden ausgewertet.
Ergebnisse
ein Hund präsentiert eine normale histopathologischen Schleimhaut mit der Abwesenheit von spiralförmigen Organismen. Eine normale Magenschleimhaut und das Vorhandensein von spiralförmigen Bakterien wurde in zwei Hunden beobachtet. Alle übrigen Tiere präsentiert histopathologischen Veränderungen Vertreter der Gastritis. Helicobacter
Arten wurden in 60 Hunde (87,0%) durch mindestens eine Detektionsverfahren detektiert. Histologische, histochemische und immunhistochemische Auswertungen ergaben, dass Helicobacter
spp. in 45 (65.2%) waren anwesend, 52 (75,4%) und 57 (82,6%) Hunde sind. Spiralförmige Bakterien wurden durch qPCR-Analyse in 33 (47,8%) Hunden nachgewiesen. H. heilmannii-
wie Organismen wurden in 22 Tieren (66,7%) identifiziert und vor allem in der antralen Magengegend. H. Salomonis
war die zweithäufigste Art (51,5%), obwohl es vor allem in Verbindung mit anderen Helicobacter
spp gefunden wurde. und im Körper Magengegend. H. bizzozeronii und H. felis
wurden weniger häufig nachgewiesen. Schlussfolgerungen
Es geschlossen wurde, dass trotz der hohen Inzidenz und den weltweiten Vertrieb von Magen-NPSH bei Hunden, das Vorhandensein von spezifischen Helicobacter
Spezies variieren zwischen geographischen Regionen. NPSH-Infektionen signifikant durch milde begleitet intraepitheliale Lymphozyten-Infiltration und mild moderate Magenepithelzellen bis mäßigen Verletzungen, aber eine klare Beziehung zwischen Gastritis und Helicobacter
Infektion konnte nicht hergestellt werden.
Schlüsselwörter Canine Magenschleimhaut Hunde Non- Helicobacter pylori
helicobacters (NPSH) Histochemie Immunhistochemie (IHC) Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Magen Einleitung
der Gattung Helicobacter
von mindestens 40 Arten zusammengesetzt ist [1]. Unter diesen sind H. pylori
gilt als ein wichtiger Erreger, deren natürliche Wirt ist der Mensch, aber seine Präsenz auf dem Eckzahn Magen wurde selten berichtet [2-4].
Eine große Anzahl von Nicht-Helicobacter pylori Helicobacter
species (NPSH) haben auch beim Menschen und bei mehreren Tieren erkannt. Bisher wurden NPSH allgemein als H. heilmannii sensu lato
(sl) und enthalten H. suis
, eine Spezies, die Mägen von Schweinen und eine Gruppe von Arten bekannt Kolonisierung der Magenschleimhaut von Hunden und Katzen zu kolonisieren : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. Salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
und H. heilmannii sensu stricto
(ss) [5] . Die meisten dieser Magen NPSH sind auch in der Lage Krankheit beim Menschen verursachen [6,7]. Schließen und intensiven menschlichen Kontakt mit den Tieren wurde als Risikofaktor identifiziert und somit eine wichtige Zoonose Bedeutung hat NPSH zugeschrieben worden [6,8,9].
Heimtieren, Magen Helicobacter
spp. wurden mit einer Prävalenz im Bereich von 67 bis 86% bei klinisch gesunden Hunden und 61-100% bei Tieren präsentiert chronischen Erbrechen [10-14] häufig beschrieben. Diese Mikroorganismen wurden im Magen von etwa 100% der Labor Beagle-Hunden und Katzen aus den lokalen Schutz [15-17] nachgewiesen. Die vorherrschende Magen Helicobacter spp.
Bei Katzen und Hunden sind H. felis
, H. bizzozeronii
und H. heilmannii sensu stricto
(ss
), während H. Salomonis
wird weniger häufig erkannt und die Prävalenz von H. cynogastricus
und H. baculiformis hat
noch nicht untersucht worden [9,18-20]. Mischinfektionen mit verschiedenen Arten können auch auftreten, [3,19].
Während viele Studien haben berichtet, dass der Fundus und Körper haben eine höhere Bakteriendichte und eine höhere Wahrscheinlichkeit Helicobacter
spp zu finden. [17,21,22] andere haben keine signifikanten Unterschiede zwischen der Dichte der NPSH im Fundus, Körper und Antrum [2,23-26] des Eckzahn Magen gefunden. Die Abweichungen in diesen Ergebnissen können die von den verschiedenen Forschergruppen zu den verschiedenen diagnostischen Labormethoden zurückgeführt werden. Die Diagnoseverfahren für Helicobacter
spp
.
Können nicht-invasive und invasive [24]. Nicht-invasive Methoden wie Serologie oder den Nachweis von Bakterien-DNA und Antigenen im Stuhl nicht über eine Magen-Biopsie oder Anästhesie erfordern. Die invasiven Methoden, wie Bakterienkulturen, Histopathologie, Abstriche, Elektronenmikroskopie oder Polymerase-Kettenreaktion (PCR) kann eine Magen-Biopsie erfordern, die häufig durch Endoskopie unter Narkose oder mittels Obduktion erhalten wird. Typischerweise werden Helicobacter
Organismen nicht leicht mit Hämatoxylin und Eosin (HE) Beize sichtbar gemacht und so ihre direkte Beobachtung in biopsierten Proben wird durch die Verwendung von speziellen Flecken, wie beispielsweise die modifizierte Giemsa (MG) stain hervorgehoben. Kompliziertere und sensible Helicobacter
-Detektion Methoden wie Immunhistochemie (IHC) oder Polymerase-Kettenreaktion (PCR) sind selten in einem diagnostischen Einstellung verwendet Forschungsinstrumente. Mehrere Untersuchungen
die Prävalenz von Helicobacter spp besprochen haben.
bei Hunden [2,10,11,14,16], aber in nur wenigen Studien, die spezifische Arten, die in den Eckzahn Magen bestimmt [4,19,27,28]. Die genaue Identifizierung der Magen helicobacters zur Speziesebene ist wesentlich, um die Prävalenz und klinische Bedeutung aller Taxa zu bestimmen. Das Ziel dieser Studie war es, die Prävalenz von verschiedenen Magen Helicobacter
Arten in verschiedene Magen Regionen des Hundemagen (Körper und Antrum) unter Verwendung von histologischen, histochemischen, immunhistochemischen und molekulardiagnostischen Techniken zu bestimmen. Der Grad der Kolonisation wurde in der Eckzahn Magenschleimhaut mit den jeweiligen histopathologischen Veränderungen gekennzeichnet und korreliert.
Methoden
Probensammlung
Magengewebe wurden von 69 Hunden erhalten (45 männlich und 24 weiblich, im Alter von 3 Monate bis 15 Jahre). Die Proben wurden aus den Archiven des Labors für Tierpathologie, ICBAS-UP (Portugal) zufällig ausgewählt, wo sie zwischen 2010 und 2013 Proben erhalten wurden, wurden bei endoskopischen Eingriffen von 20 Hunden erhalten, aus fünf während der Operation und von 44 Hunden während der Obduktion Untersuchungen. Alle Verfahren (chirurgische Exzision und Obduktion Prüfung) wurden in einem klinischen Kontext ausgeführt versucht, die Tiere zu behandeln auf der Grundlage der besten klinischen Beurteilung ihrer Teilnahme an Praktiker. Die Verwendung der ausgeschnittene Gewebe für Forschung wurde an die Eigentümer erklärt und eine informierte Zustimmung wurde für jeden Fall erhalten. Keine der Maßnahmen wurden lediglich zu Forschungszwecken entnommen und die Forscher hatten keinen Einfluss auf die Auswahl und Durchführung solcher Verfahren. Nur Magen-Proben in einem guten Zustand der Erhaltung wurden in die Studie eingeschlossen.
Gewebe wurden in 10% neutral gepuffertem Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet. Drei aufeinanderfolgende Abschnitte von 3 &mgr; m hergestellt wurden, eine mit HE gefärbt ist, ein weiteres mit einem MG-Färbung und die dritte für immunhistochemischen Färbung verwendet wurde.
Probenauswertung
Die Magen-Proben wurden unabhängig voneinander von zwei Beobachtern (IA ausgewertet und FG ). Histopathologische Parameter wie Veränderungen in der Zellularität, Fibrose der Lamina propria
und Drüse Atrophie wurden nach dem World Small Animal Veterinary Association (WSAVA) Leitlinien analysiert [29]. Der Grad der morphologischen Merkmale und entzündliche Veränderungen wurde als normal eingestuft, mild, moderat oder gekennzeichnet durch die zur Verfügung stehende WSAVA Magen-Darm-Standardisierung visuellen Analog mit [29].
Die mikroskopische Auswertung durch die Analyse des gesamten Abschnitts des Magengewebe durchgeführt wurde. Das Vorhandensein von Helicobacter
spp.
Wurde von HE und MG Flecken und durch IHC bewertet. Ein Hund wurde als Helicobacter
klassifiziert positiv, wenn eine dieser Methoden ein positives Ergebnis gab. Zusätzlich wurde bakterielle Kolonisation Dichte quantifiziert: +, wenige Organismen (< 10 Organismen /400x); ++, Moderate Anzahl von Organismen (10 bis 50 Organismen /400x); +++, Eine große Anzahl von Organismen. (≫ 50 Organismen /400x) [24]
Immunhistochemie
Für die immunhistochemischen Studie wurden die Schnitte deparaffinised, hydratisiert und Antigen-Retrieval in einem Dampfkochtopf in 10 durchgeführt wurde mmol /L Natriumcitrat-Puffer, pH 6,0, für 2 Minuten (min). Die Objektträger wurden für 10 min bei Raumtemperatur abgekühlt und zweimal in Triphosphat-gepufferter Salzlösung (TBS) für 5 min gespült. Die NovolinkTM Max-Polymer-Detektionssystem (Novocastra, Newcastle, UK) wurde für die Visualisierung verwendet wird, gemäß den Anweisungen des Herstellers. (; Zytomed, German RBK012), die Immunreaktivität mit einem breiten Spektrum zeigt endogener Peroxidase mit 3% Wasserstoffperoxid in Methanol für 10 min Nach dem Blockieren wurden die Schnitte über Nacht bei 4 ° C, mit einem polyklonalen Antiserum gegen H. pylori
inkubiert Bakterien der Gattung Helicobacter gehören. Schnitte wurden mit TBS zwischen jedem Schritt des Verfahrens gespült. Die Farbe wurde für bis zu 7 Minuten bei Raumtemperatur entwickelt mit 3,3'-Diamino-Benzidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) und Schnitte wurden dann mit Hämatoxylin, dehydriert und montiert leicht gegengefärbt. Positive Immunreaktivität wurde als eigenständige goldbraune Markierung der Bakterien auf der Schleimhautoberfläche, wurde aus 5 aufeinanderfolgenden Scheiben extrahiert in Magengruben oder Drüsen und in Parietalzellen.
Extraktion, PCR-Amplifikation und Sequenzierung von DNA DNA
befindet aufgezeichnet von 20 uM eine DNeasy Blut und Gewebe Kit (Qiagen) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Helicobacter
artspezifischen qPCRs basierend auf einem kurzen Fragment der Urease A und B-Gene wurden zur Identifizierung von H. heilmannii ss
entwickelt, H. felis
, H. bizzozeronii Karten und H. Salomonis
. Zur Erzeugung von Standards für jede qPCR, ein großer Teil des ureAB Gencluster aus H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis CS1
(1228 bp), H. Salomonis
R1053 (1224 bp) und H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) wurde unter Verwendung von Primern und U430F U1735R amplifiziert, wie zuvor beschrieben [30]. Der Standard bestand aus 10-fach-Verdünnungen bei 10 beginnend 8 PCR-Produkte für jeweils 10 &mgr; l Reaktionsmischung. Ein ul der extrahierten DNA-Matrize wurde in einer 10 &mgr; l Reaktionsgemisch suspendiert, bestehend aus 0,25 ul von Vorwärts- und Rückwärts-Primer (Tabelle 1), 3,5 ul HPLC-Wasser und 5 ul SensiMix ™ SYBR No-ROX (Bioline Reagenzien Ltd, UK). Beide Standards und Proben wurden in doppelter Ausführung auf einem CFX96 ™ RT-PCR-System mit einem C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules CA, USA) durchgeführt. Die Bio-Rad CFX Manager (Version 1.6) Software wurde für die Berechnung von Schwellenzyklen (Ct) -Werte und Schmelzkurvenanalyse von amplifizierte DNA verwendet. Die Durchschnittswerte der Duplikate wurden für die Quantifizierung von Helicobacter
DNA in den Gewebeproben verwendet. Um auszuschließen, falsch positiven Proben waren die Amplicons von jeder positiven Probe sequenced.Table 1 Liste der Primer für qPCR
Primer-Name
Nucleotid-Sequenz verwendet
Spezifität
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. Salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC H. Salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

statistische Analyse
Pearson Chi-Quadrat-Test und der exakte Fisher-Test wurden verwendet, um die Abhängigkeit zwischen zwei Kategorien zu bestimmen. p-Werte < 0,05 wurden als statistisch signifikant angesehen. Die statistische Analyse wurde das Statistikpaket SPSS 16.0 durchgeführt unter Verwendung von (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lissabon, Portugal).
Ergebnis einschränken insgesamt 117 Magen-Proben (66 aus dem Körperbereich und 51 aus der Antrum-Region) wurden analysiert.
Unter den 69 Tieren waren beide Magen-Regionen in 48 Hunde zur Auswertung zur Verfügung, während nur Körper oder Antrum Regionen waren in 18 und drei Hunde vorhanden sind.
Von den 69 Hunden, nur ein eine normale histopathologische Schleimhaut mit Abwesenheit von spiralförmigen Organismen dargestellt. Eine normale Magenschleimhaut und das Vorhandensein von spiralförmigen Bakterien wurde in zwei Hunde (2,9%) beobachtet. Die übrigen Tiere präsentierte histopathologischen Veränderungen Vertreter der Gastritis (66/69 oder 95,7%) (Tabelle 2). Auf der Basis von histopathologischen Veränderungen in der Magenschleimhaut, wir diagnostiziert eine milde chronische Gastritis in 88,4% (61/69) Beeinflussung der Magenkörper von 51,5% (34/66) und der antralen Bereich von 92,2% (47/51 bis mäßig ) der animals.Table 2 Tabelle der histopathologischen Veränderungen und Besiedlungsdichte in den Eckzahn Magen beobachtet zusammenfasst, nach den positiven NPSH Spezies-spezifische PCR-Ergebnisse, positive Ergebnisse Gattung und negative Ergebnisse
PCR positive Ergebnisse mit bestimmten Spezies Identifizierung, unabhängig Magen-Standort (in Prozent & Zahl) (n = 33)
Positive Ergebnisse für Helicobacter spp. (Prozent & Zahl) (n = 27)
Negative Ergebnisse (Prozent & Zahl) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs

Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
Histopathologie Grading
(Day et al., 2008)
Normale
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
0
7.4 (27.2)
11.1 (1/9 )
NS
Mild Gastritis
15,2 (5/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
Moderate Gastritis
12,1 (4/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Markierte Gastritis
0
0
0
0
0
6.1 (2/33)
0
0
0
0
11.1 (1/9)
Epithelial Verletzung
Mild
27,3 (9/33)
3.0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Moderate
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 (1 /33)
0
0
14.8 (27.4)
11.1 (1/9)
Fibrosis /Schleimhautatrophie
Mild
18,2 (6/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Moderate
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
3.7 (27.1)
11.1 (1/9)
intraepitheliale Lymphozyten
Mild
15,2 (5/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15,2 (5 /33)
0
0
6.1 (2/33)
29.6 (27.8)
11.1 (1/9)
0,016
Moderate
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14.8 (27.4)
0
Mild
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0
Lymphofollicular Hyperplasie ( 1/33)
0
0
0
0
29.6 (27.8)
11.1 (1/9)
NS
Bakteriendichte (basierend auf die IHC Ergebnisse)
NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14.8 (27.4)
++
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
25.9 (27.7)
+++
24,2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legende: Hh
, H. heilmannii-like
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. Salomonis
Bakteriendichte.: +, Wenige Organismen; ++, Moderate Anzahl von Organismen; +++, Eine große Anzahl von Organismen. NA, nicht anwendbar. NS, nicht signifikant (p > 0,05).
Sowohl milde epithelialen Verletzungen zu moderieren und milden intraepitheliale Lymphozyten-Infiltration zu moderieren wurden in 88,4% (61/69)
Magenschleimhaut Atrophie, Drüsen-Verschachtelung oder Fibrose gefunden war. in 44,9% Hunden (31/69). In 18,2% der diese Veränderung Tiere wurde im Körperbereich (12/66) und 47,1% im Antrum-Bereich (24/51) des Eckzahn Magen beobachtet. Abnormal neutrophile Infiltration
wurde nur im Magen Antrum entdeckt zwei Tiere: in einem, war diese Veränderung mild und in der anderen wurde markiert und mit Magenulzeration verbunden. Andere Entzündungszellen, die aus in leichten Infiltration von Mastzellen wurden im Körperbereich von vier Tieren und in der Kieferhöhle von zwei Tieren beobachtet.
Unter allen Tieren, 87,0% waren positiv (60/69) (Abbildung 1A) und 13,0% waren negativ für Helicobacter
spp. (9/69), und zwar unabhängig von dem Test verwendet, um die Bakterien zu detektieren. Unabhängig von der Magen Lage, Helicobacter
spp. mit HE, MG und IMC in 65,2% beobachtet (45/69), 75,4% (52/69) und 82,6% (57/69) der Hunde sind. Mit HE-Färbung, spiralförmige Bakterien wurden in 62,1% der Körperproben (41/66) und in 70,6% der antralen Proben (36/51) nachgewiesen. Unter Verwendung des MG Fleck war dies 68,2% für die Körperproben (45/66) und 78,4% für die antralen Proben (40/51). Helicobacter
Antigen wurde durch Immunochemie in 84,9% (56/66) der Körperproben und in 80,4% (41/51) der antralen Proben (Tabelle 3) nachgewiesen. Abbildung 1 Helicobacter
spp. in Eckzahn Magen. A) Zahlreiche spiralförmige Bakterien, die das Oberflächenepithel der Magengrube zu kolonisieren. ER. Bar = 10 &mgr; m; B) Man beachte die intraepitheliale Lymphozyten-Infiltration in den tieferen Magendrüsen in der Antrum-Schleimhaut eines NPSH-positiven Hund. ER. Bar = 20 &mgr; m. C) das Vorhandensein von NPSH innerhalb der Belegzellen des Hundemagenkörperbereich (schwarzer Pfeil). MG. Bar = 10 &mgr; m; D) Große Mengen von Helicobacter
Antigen innerhalb der oberflächlichen Magenschleim und im Lumen der Magendrüsen in dem Body-Bereich der Hunde-Magen. Immunperoxidase-Diaminobenzidin Fleck mit Mayers Hämatoxylin counterstain. Bar = 50 &mgr; m. Inset zeigt Helicobacter
Antigen innerhalb Belegzellen, manchmal nachweisbar als gut erhaltene spiralförmige Organismen oder braune runde Punkte. Immunperoxidase-Diaminobenzidin Fleck mit Mayers Hämatoxylin counterstain. Bar = 10 &mgr; m.
Tabelle 3: Nachweis von Helicobacter spp. in den verschiedenen Magen Abteile des Hunde Magen zu verschiedenen diagnostischen Methoden wiederkehrende
Magenregion
Nachweisverfahren Bei
Positive
(Prozent & Nummer)
HE

MG
IHC *
PCR
Körper (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legende: HE: Hämatoxylin-Eosin; MG: Giemsa modifiziert; IHC: Immunhistochemie; PCR:.. Polymerase-Kettenreaktion
* Die positiven Ergebnisse mit IHC erhalten nicht signifikant über jeden Bauchbereich unterscheiden (p > 0,05)
auf Artniveau Weitere Identifizierung wurde mit Helicobacter
durchgeführt artspezifischen qPCRs . Helicobacter
spp. wurden in 47,8% der Tiere (33/69) (Tabelle 3) nachgewiesen. Die Mehrheit der Proben waren positiv in der H. heilmannii spezifischen qPCR
. Jedoch zeigten die Amplicons nur etwa 92% Homologie mit H. heilmanni S.S.
. Daher wurden als H. umklassifiziert diese Fälle heilmannii-
mögen.
In 51,5% (17/33) der positiven Proben nur eine Helicobacter
Spezies identifiziert wurde, während Mischinfektionen erfasst wurden 48,5% (16/33) (Tabelle 2). H. heilmannii-
wie Organismen die am häufigsten vorkommende (22/33 oder 66,7%) waren, in zehn Hunde als eine einzige Infektion identifiziert werden und in 12 Hunden als Mischinfektionen. H. Salomonis
war die zweithäufigste Art (17/33 oder 51,5%), obwohl es vor allem in Verbindung mit anderen NPSH (42%) und nicht allein gefunden wurde (9,1%). Gleiche Anteile von H. felis
und H. bizzozeronnii
nachgewiesen wurden (6/33 oder 18,2%), entweder als einzelne (6,3%) oder Mischinfektionen (12,1%). Mischinfektionen mit H.
heilmannii -ähnlich und H. Salomonis
wurden am häufigsten anzutreff (33,3%) (Tabelle 2). Im Körperbereich, die am häufigsten identifizierten Arten war H. Salomonis
(44,0%), während in der Kieferhöhle die am weitesten verbreitete Art wurde H. heilmannii-
wie (57,7%) (Tabelle 4) .Tabelle 4 Spezifische Helicobacter-Spezies durch PCR in den verschiedenen Magen Fächer des Hunde Magen
Spezifische PCR- Helicobacter spp nachgewiesen. positive Ergebnisse
Magenregion (in Prozent & Zahl)
Körper
Antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-like
24.0 (25.6)
57,7 (15/26)
H. Salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8.0 (25.2)
3.8 (26.1)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11.5 (26.3)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3.8 (26.1)
H . heilmannii-like + H. Salomonis
8.0 (25.2)
11.5 (26.3)
H. heilmannii-like + H. felis
4.0 (1 /25)
3.8 (26.1)
H. felis + H. Salomonis
4.0 (1/25)
0
eine signifikante Korrelation zwischen dem Vorhandensein von Es war Helicobacter
spp. und beide milde epithelialen Verletzungen und leichten bis mittleren intraepitheliale Lymphozyten-Infiltration (1B) des Hundemagen (; 0,05 p <) zu moderieren. Keine statistisch signifikant Korrelationen zwischen Helicobacter
Infektion und der Magenschleimhaut Atrophie oder Fibrose, Lamina propria
lymphoplasmacytic Infiltration oder lymphofollicular Hyperplasie gefunden. Wurden keine signifikanten Unterschiede in Bezug auf die bakterielle Besiedlung Dichte zwischen den beiden Magen-Regionen (p > 0,05) nachgewiesen.
Die Zahl der Helicobacter
-positiver Fälle mit den verschiedenen Methoden nachgewiesen unterschieden sich signifikant (p < 0,05). Positive IHC Ergebnisse unterschieden sich nicht signifikant über jeden Bauchbereich (p > 0,05), während die Zahlen mit HE erhalten, GM und qPCR signifikant zwischen dem Körper unterschieden und der Kieferhöhle (p < 0,05).
Diskussion
in dieser Studie wurde eine hohe Prävalenz von Gastritis beobachtet (95,7%). Diese Ergebnisse sind in Übereinstimmung mit anderen Studien das Auftreten von Gastritis als häufiger Befund bei Hunden berichtet [14,31,32]. Im Gegensatz dazu wurden Magen-Erosionen oder Geschwüre selten bei diesen Tieren gefunden.
Wurde von vier Methoden bestimmt NPSH-Infektion (HE, MG, IHC und qPCR) und einer Prävalenz von 87,0% bei Hunden nachgewiesen wurde. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit den in der Literatur, die hohe Prävalenz von NPSH in der Eckzahn Magenschleimhaut [12,19,33-35] dokumentiert. Magenepithelzellen bis mäßigen Verletzungen, unabhängig von der Magen Lage In unserer Studie Hunde wurde NPSH-Infektion signifikant durch milde begleitet intraepitheliale Lymphozyten-Infiltration und leicht bis mäßig. Eine klare Beziehung zwischen Eckzahn Gastritis und Helicobacter
Infektion wurde jedoch nicht festgelegt, welche in Übereinstimmung mit den Ergebnissen der anderen ist [11,14,15,34]. In einer früheren Untersuchung
der Anteil der Helicobacter
-positiver Fällen nach HE-Färbung von Eckzahn Magenproben nachgewiesen betrug 17,5% [24]. In der vorliegenden Studie wurden alle Proben durch zwei Pathologen untersucht hoch in der Detektion von Helicobacter erfahren
spp.
Organismen nach Routinefärbung. Dies kann in der höheren Erkennungsrate (65.2%) berichteten hier eine Rolle gespielt haben. Mit früheren Studien Im Einvernehmen
, NPSH wurden oft in den oberflächlichen Schleim und innerhalb der Magendrüsen nicht nur beobachtet, sondern auch intrazellulär, im Zytoplasma Belegzellen [31,33,36] (Abbildung 1C und D). Spiralförmige Organismen in dieser besonderen subzellulären Ort waren schwierig, nachdem er und MG-Färbung zu erkennen aufgrund der Zytoplasma Granulation der Belegzellen. In unseren Händen, erschien IHC eine sehr wertvolle Technik zu sein NPSH innerhalb dieser Zellen (1D) zu identifizieren. Insgesamt zeigten IHC-Färbung die höchsten Werte -positiver Helicobacter (82,6%). Dieser Befund ist in Übereinstimmung mit anderen Ergebnissen, die im Handel erhältliche Antikörper gegen H. pylori
zeigen, sind für den Nachweis von Helicobacter
spp nützlich. . In Paraffin eingebettete Proben von Hundemägen [24,26,36]
Frühere Studien keinen statistisch signifikanten Unterschied zwischen der Detektion von Helicobacter
Organismen durch IHC und PCR-Techniken berichtet (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) berichtet, dass die PCR-Assay eine höhere Empfindlichkeit und Spezifität als die anderen Verfahren waren [4]. in unserer Studie
spp die Prävalenzrate von Helicobacter jedoch.
mit der qPCR erhalten wurde, war die niedrigste (47,8%). Frühere Untersuchungen haben gezeigt, dass Formalinfixierung und Paraffineinbettung PCR-Analyse behindern [37,38]. Sjödin et al.
(2011) verglichen, um die Effizienz der DNA-Amplifikation aus frisch (n = 28) und in Paraffin eingebettete (n = 28) Proben zur Identifizierung von Helicobacte
r spp.
Aus verschiedenen Organen ( feline Magen, Duodenum, Leber und Pankreas) und festgestellt, daß der Mittelwert der erzielten DNA-Konzentration höher war, als aus frischem Gewebe erhalten wird [39]. DNA-Analyse von in Paraffin eingebetteten Gewebeproben unter Verwendung von PCR /qPCR können durch DNA-Fragmentierung, inhibierenden Substanzen beeinträchtigt sein, oder eine Kombination von beiden. Die Formalinfixierung kann in der Tat eine DNA-Fragmentierung sowie teilweise Zerstörung der DNA [38,40] und die PCR-Reaktionen verursachen können auch durch Formalin Rest [37] gehemmt werden. Die negativen Auswirkungen von Formalin zu der Dauer der Fixierung in direkter Beziehung [40]. Obwohl die Proben in dieser Studie enthalten waren alle im gleichen Labor verarbeitet und daher den gleichen Standardprotokollen unterzogen, die Dauer der Fixierung zwischen den Proben aufgrund einer Variation in dem Zeitintervall zwischen Probennahme und ihrer Ankunft im Labor variieren.
Different molekulare Ansätze zur Identifizierung von NPSH Spezies behandelt wurden [4,14,24,28]. Techniken, basierend auf der Erfassung oder Sequenzierung von 16S oder 23S-rRNA-Gene kodieren, können jedoch nicht zwischen den verschiedenen Hunden und Katzen Magen Helicobacter
Spezies unterscheiden, während Tests basierend auf der Erfassung oder Sequenzierung des hsp60
-Gen, das Urease A- und B-Gene oder gyrB-
Gens ermöglichen Identifizierung dieser Bakterien auf Artenebene [9]. in unserer Studie
erhaltenen Amplikons in der H. heilmannii
nur bestimmte qPCR mit H etwa 92% Homologie zeigte . heilmannii hat
die bisher nur aus der Magenschleimhaut von Katzen kultiviert worden. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

• Molekulare Mechanismen der Magenepithelzellen Zelladhäsion und Injektion von CagA durch Helicobacter pylori
• Die Häufigkeit und das Überleben von Speiseröhre und Magen-Krebs in England zwischen 1998 und 2007 eine bevölkerungsbasierte study