Aanwezigheid en betekenis van Helicobacter spp. in het maagslijmvlies van de Portugese honden

Aanwezigheid en betekenis van Helicobacter spp.
In het maagslijmvlies van de Portugese honden
Abstracte achtergrond
Non-Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) zijn ook in staat om ziekte te veroorzaken bij de mens. Honden zijn natuurlijk reservoir voor veel van deze soorten. Sluiten en intens menselijk contact met de dieren is geïdentificeerd als een risicofactor en daarom is een belangrijke zoönotische betekenis toegeschreven aan NHPh.
Methoden
Om de prevalentie van Helicobacter
soorten en de maag histopathologische veranderingen die gepaard gaan bepalen , maagslijmvlies monsters van 69 honden werden geëvalueerd.
Resultaten
Slechts één hond presenteerde een normale histopathologische slijmvlies met afwezigheid van spiraalvormige organismen. Een normale maagslijmvlies en de aanwezigheid van spiraalvormige bacteriën werd waargenomen bij twee honden. Alle overige dieren gepresenteerd histopathologische veranderingen vertegenwoordiger van gastritis. Helicobacter
species werden 60 honden (87,0%) gedetecteerd door ten minste één detectiemethode. Histologische, histochemische en immunohistochemische evaluatie toonde dat Helicobacter
spp. waren aanwezig in 45 (65,2%), 52 (75,4%) en 57 (82,6%) honden respectievelijk. Spiraalvormige bacteriën werden gedetecteerd door qPCR analyse in 33 (47,8%) honden. H. heilmannii-
achtige organismen werden geïdentificeerd in 22 dieren (66,7%) en vooral in de antral maag regio. H. salomonis
is de tweede meest voorkomende species (51,5%), hoewel het voornamelijk gevonden in associatie met andere Helicobacter
spp. en in het lichaam maagstreek. H. bizzozeronii en H. felis
werden minder vaak waargenomen.
Conclusies
Geconcludeerd werd dat, ondanks de hoge incidentie en de wereldwijde distributie van de maag NHPh bij honden, de aanwezigheid van specifieke Helicobacter
soort kan variëren geografische gebieden. NHPh infecties werden aanzienlijk gepaard met lichte tot matige intra-epitheliale lymfocyten infiltratie en milde tot matige maag epitheliale blessure, maar een duidelijke relatie tussen gastritis en Helicobacter
infectie kon niet worden vastgesteld.
Sleutelwoorden
Canine maagslijmvlies Dogs Niet- helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) Histochemistry Immunohistochemie (IHC) polymerase kettingreactie (PCR) Maag Inleiding
genus Helicobacter
bestaat uit ten minste 40 species [1]. Onder deze, H. pylori
wordt beschouwd als een belangrijke ziekteverwekker waarvan de natuurlijke gastheer is man, maar haar aanwezigheid in de hond maag is zelden gemeld [2-4].
Een groot aantal niet-Helicobacter pylori Helicobacter
soorten (NHPh) zijn ook opgenomen in de mens en in verschillende dieren. Voorheen werden NHPh algemeen aangeduid als H. heilmannii sensu lato
(sl) en inclusief H. suis
, een soort koloniseert de maag van varkens en een groep soorten waarvan de maagslijmvlies honden en katten koloniseren : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. Salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
en H. heilmannii sensu stricto
(ss) [5] . De meeste van deze gastrische NHPh kunnen ook ziekte bij mensen [6,7]. Sluiten en intens menselijk contact met de dieren is geïdentificeerd als een risicofactor en daarom is een belangrijke zoönotische betekenis toegeschreven aan NHPh [6,8,9].
In gezelschapsdieren, maag Helicobacter
spp. zijn vaak beschreven met een prevalentie variërend 67-86% in klinisch gezonde honden en 61-100% in dieren die chronische braken [10-14]. Deze micro-organismen werden gedetecteerd in de maag van ongeveer 100% van laboratorium Beagle honden en katten uit lokale schuilplaatsen [15-17]. De overheersende maag Helicobacter spp.
Bij katten en honden zijn H. felis
, H. bizzozeronii Kopen en stricto sensu H. heilmannii
(ss
), terwijl H. Salomonis
minder vaak gedetecteerd en de prevalentie van H. cynogastricus Kopen en H. baculiformis
is nog niet onderzocht [9,18-20]. Gemengde infecties met verschillende soorten kunnen ook optreden [3,19].
Hoewel veel studies hebben gemeld dat de fundus en het lichaam hogere bacteriële dichtheid en een hogere kans op het vinden
Helicobacter spp. [17,21,22] anderen geen significante verschillen tussen de dichtheid van NHPh in de fundus, antrum en lichaam [2,23-26] van de hond maag gevonden. De verschillen in deze resultaten kan worden toegeschreven aan de verschillende laboratorium diagnostische methoden die door de verschillende onderzoeksgroepen. Ondernemingen De diagnostische methoden voor Helicobacter
spp.
Kunnen non-invasieve en invasieve [24] zijn. Niet-invasieve methoden zoals serologie of detectie van bacteriële DNA en antigenen in ontlasting geen gastrische biopsie of verdoving. De invasieve werkwijzen, zoals bacterieculturen, histopathologie, uitstrijkjes, elektronenmicroscopie of polymerasekettingreactie (PCR) een gastrische biopsie, die vaak door middel van endoscopie is verkregen onder verdoving of necropsie vereisen. Typisch Helicobacter
organismen zijn niet gemakkelijk zichtbaar met hematoxyline en eosine (HE) kleuring en dergelijke, wordt de directe observatie biopsie specimens benadrukt door het gebruik van speciale vlekken, zoals de gemodificeerde Giemsa (MG) kleuring. Gedetailleerder en gevoelige Helicobacter
crisisdetectiesysteem werkwijzen zoals immunohistochemische (IHC) of polymerasekettingreactie (PCR) zijn onderzoeksinstrumenten zelden gebruikt in een diagnostische setting.
Verschillende onderzoeken de prevalentie van Helicobacter spp besproken.
bij honden [2,10,11,14,16], maar in slechts een paar studies van de specifieke soorten die aanwezig zijn in de hond maag werden bepaald [4,19,27,28]. De nauwkeurige identificatie van de maag helicobacters op soortniveau is essentieel om de prevalentie en klinische betekenis van alle taxa bepalen. Het doel van dit onderzoek was de mate waarin verschillende Helicobacter
soorten in verschillende gebieden van het maag canine maag (antrum lichaam) via histologische, histochemische, immunohistochemische en moleculaire diagnostische technieken te bepalen. De mate van kolonisatie werd gekarakteriseerd en gecorreleerd met de respectieve histopathologische veranderingen in de hond maagslijmvlies.
Methods
monsterafname
Gastric weefsels werden verkregen van 69 honden (45 mannen en 24 vrouwen, variërend in leeftijd van 3 maanden tot 15 jaar). De monsters werden willekeurig geselecteerd uit de archieven van het Laboratorium voor Veterinaire Pathologie, ICBAS-UP (Portugal) waar ze werden ontvangen tussen 2010 en 2013. De monsters werden verkregen uit 20 honden tijdens endoscopische procedures, van vijf tijdens de operatie en vanaf 44 honden tijdens autopsie examens. Alle procedures (chirurgische excisie en necropsie onderzoek) werden uitgevoerd in een klinische context poging om de dieren op basis van de beste klinisch oordeel van de behandelend artsen behandelen. Het gebruik van het uitgesneden weefsel voor onderzoek werd aan de eigenaren uitgelegd en een geïnformeerde toestemming werd verkregen voor elk geval. Geen van de acties uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden genomen en de onderzoekers had geen invloed op de selectie en uitvoering van dergelijke procedures. Slechts maag monsters in goede staat verkerend werden in deze studie opgenomen.
Weefsels werden in 10% neutrale gebufferde formaline gefixeerd en in paraffinewas ingebed. Drie opeenvolgende secties van 3 urn werden gemaakt, één is gekleurd met HE, andere met een MG vlek en de derde werd gebruikt voor immunohistochemische kleuring.
Sample evaluatie
maag monsters werden onafhankelijk door twee waarnemers geëvalueerd (IA en FG ). Histopathologische parameters zoals veranderingen in de cellulariteit, fibrose van de lamina propria Kopen en klier atrofie werden geanalyseerd volgens de World Small Animal Veterinary Association (WSAVA) richtlijnen [29]. De mate van morfologische kenmerken en inflammatoire veranderingen werd beoordeeld als normaal, mild, matig of gekenmerkt door de beschikbare WSAVA gastrointestinale normalisatie VAS [29]. Ondernemingen De microscopische evaluatie werd uitgevoerd door analyse van het gehele gedeelte van het maagweefsel. De aanwezigheid van spp. Helicobacter
werd beoordeeld door HE en MG vlekken en door IHC. Een hond werd geclassificeerd als Helicobacter
positief wanneer een van deze methoden een positief resultaat gaf. Daarnaast werd de bacteriële dichtheid kolonisatie gekwantificeerd: +, weinig organismen (< 10 organismen /400x); ++, Matig aantal organismen (10-50 organismen /400x); +++, Grote aantal organismen. (≫ 50 organismen /400x) [24]
Immunohistochemie
Voor de immunohistochemische studie, secties werden deparaffinised, werd gehydrateerd en antigen retrieval uitgevoerd in een snelkookpan in 10 mmol /L natriumcitraat, pH 6,0, gedurende 2 minuten (min). Objectglaasjes werden gekoeld gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur en tweemaal gespoeld in trifosfaat gebufferde zoutoplossing (TBS) gedurende 5 min. De NovolinkTM Max-Polymer detectiesysteem (Novocastra, Newcastle, UK) werd gebruikt voor visualisatie, volgens de instructies van de fabrikant. Na blokkeren van endogeen peroxidase met 3% waterstofperoxide in methanol gedurende 10 minuten werden secties overnacht geïncubeerd bij 4 ° C, met een polyklonaal antiserum tegen H. pylori
(RBK012, Zytomed, Duitsland) die immunoreactiviteit zien met een groot aantal bacteriën die behoren tot het genus Helicobacter
. Coupes werden gespoeld met TBS tussen elke stap van de procedure. Kleur werd ontwikkeld tot 7 minuten bij kamertemperatuur 3,3'-diamino-benzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) en coupes werden daarna licht tegengekleurd met hematoxyline gedehydrateerd en gemonteerd. Positieve immunoreactiviteit werd opgenomen als een afzonderlijke goudbruine labeling van de bacteriën op slijmvliesoppervlak, gastrische putjes of klieren en pariëtale cellen.
Extractie, PCR amplificatie en sequencing van DNA
DNA werd geëxtraheerd uit 5 opeenvolgende segmenten van 20 uM met een DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen) volgens de instructies van de fabrikant. Helicobacter
soortspecifieke qPCRs gebaseerd op een kort fragment van de urease A- en B-genen werden ontwikkeld voor de identificatie van H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii Kopen en H. Salomonis
. Voor het genereren van standaarden voor elke qPCR, een groot deel van de ureAB gencluster van H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis CS1
(1228 bp), H. salomonis
R1053 (1224 bp) en H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) werd geamplificeerd met behulp van primers U430F en U1735R, zoals eerder [30] beschreven. De standaard bestond uit 10-voudige verdunningen beginnend bij-10 8 PCR amplicons per 10 pl reactiemengsel. Eén pl geëxtraheerde DNA matrijs werd gesuspendeerd in een 10 gl reactiemengsel bestaande uit 0,25 ui voorwaartse en achterwaartse primers (Tabel 1), 3,5 gl HPLC water en 5 ui SensiMix SYBR ™ No-ROX (Bioline Reagentia Ltd, UK). Beide standaarden en monsters werden in duplo op een CFX96 ™ RT-PCR-systeem met C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules CA, USA). De Bio-Rad CFX Manager (versie 1.6) software werd gebruikt voor de berekening van de drempelwaarde cycli (Ct) -waarden en smeltcurve analyse van geamplificeerd DNA. De gemiddelde waarden van de duplo werden gebruikt voor het kwantificeren van Helicobacter
DNA in de weefselmonsters. Om vals positieve monsters uit te sluiten, de amplicons van elk positief monster waren sequenced.Table 1 Lijst van de primers gebruikt voor qPCR
Primer naam
Nucleotidesequentie
specificiteit
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG CTC AAG TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. Salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Statistische analyse
chikwadraattoets Pearson en Fisher's exact test werden gebruikt om de afhankelijkheid tussen twee categorieën te bepalen. p-waarden < 0,05 werden beschouwd als statistisch significant. Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van het statistisch pakket SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lissabon, Portugal).
Resultaten
In totaal werden 117 maag monsters (66 uit het lichaam regio en 51 uit de antrum regio) werden geanalyseerd.
Onder de 69 dieren, zowel de maag regio's waren beschikbaar voor evaluatie in 48 honden terwijl enige instelling of antrum regio's waren beschikbaar in 18 en drie honden, respectievelijk.
van de 69 honden, maar een gepresenteerd een normale mucosa met histopathologische zonder spiraalvormige organismen. Een normale maagslijmvlies en de aanwezigheid van spiraalvormige bacteriën werd waargenomen bij twee honden (2,9%). De resterende, aangeboden histopathologische veranderingen representatief gastritis (66/69 of 95,7%) (tabel 2). Op basis van histopathologische veranderingen in het maagslijmvlies, we gediagnosticeerd een milde tot matige chronische gastritis bij 88,4% (61/69) waardoor de gastrische lichaam van 51,5% (34/66) en antrale regio 92,2% (47/51 ) van de animals.Table 2 Matrix de histopathologische veranderingen en kolonisatie dichtheid waargenomen bij de hond maag, volgens de positieve NHPh soortspecifieke PCR resultaten, positieve en negatieve resultaten genus resultaten
PCR positieve resultaten van specifieke species identificatie, ongeacht de maag locatie (percent & getal) (n = 33)
Positieve resultaten voor Helicobacter spp. (Percent & getal) (n = 27)
Negatieve resultaten (percent & getal) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
Histopathologie grading
(Day et al., 2008)
Normal
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
0
7,4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
Mild gastritis
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 09/03)
Matige gastritis
12.1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3,0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Marked gastritis
0
0
0
0
0
6,1 (2/33)
0
0
0
0
11.1 (1/9)
epitheliale letsel
Mild
27,3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3,0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Matige
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 (1 /33)
0
0
14,8 (27/04)
11.1 (1/9)
Fibrosis /mucosale atrofie
Mild
18.2 (6/33)
6.1 (2/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
0
0
3,0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Matige
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27)
11.1 (1/9)
Intra-epitheliale lymfocyten
Mild
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
15,2 (5 /33)
0
0
6,1 (2/33)
29,6 (27/08)
11.1 (1/9)
0,016
Matige
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14,8 (27/04)
0
Lymphofollicular hyperplasie
Mild
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (27/08)
11.1 (1/9)
NS
Bacteriële dichtheid (gebaseerd op IHC resultaten)
NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (27/04)
++
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (27/07)
+++
24,2 (8/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legend: Hh
, H. heilmannii-achtige
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
Bacteriële dichtheid:. +, Weinig organismen; ++, Matig aantal organismen; +++, Grote aantal organismen. NA, niet van toepassing. NS, niet significant (p > 0,05).
Beide lichte tot matige epitheliale verwondingen en lichte tot matige intraepithelial lymfocyt infiltratie werden gevonden in 88,4% (61/69)
Gastric mucosale atrofie, klieren nesten of fibrose was. aanwezig in 44,9% honden (31/69). In 18,2% van de dieren deze verandering werd waargenomen in het lichaamsgebied (12/66) en 47,1% in het antrum regio (24/51) van de hond maag.
Abnormale neutrofiele infiltratie werd alleen gedetecteerd in de maag antrum twee dieren in een, deze verandering was mild en in de andere werd gemerkt en geassocieerd met maagzweren. Andere ontstekingscellen, bestaande uit milde infiltratie van mestcellen werden waargenomen in het lichaamsgebied van vier dieren en bij de antrum van twee dieren.
Van alle dieren, 87,0% positief (60/69) (Figuur 1A) en 13,0% waren negatief voor Helicobacter
spp. (9/69), ongeacht de test gebruikt om de bacteriën te detecteren. Ongeacht de maag locatie, Helicobacter
spp. werden waargenomen met behulp van HE, MG en IMC in 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) en 82,6% (57/69) van de honden, respectievelijk. Met HE kleuring werden spiraalvormige bacteriën gedetecteerd in 62,1% op lichaamsmateriaal (41/66) en 70,6% van antrale monsters (36/51). Gebruik makend van de MG vlek was dit 68,2% voor het lichaam monsters (45/66) en 78,4% voor de antral monsters (40/51). Helicobacter
antigen werd gedetecteerd door immunochemische in 84,9% (56/66) van het lichaamsmateriaal en 80,4% (41/51) van de antrale monsters (Tabel 3). Figuur 1 Helicobacter
spp. in honden maag. A) Talrijke spiraalvormige bacterie koloniseert het oppervlak epitheel van de maag put. HIJ. Bar = 10 micrometer; B) Let op de intra-epitheliale lymfocyten infiltratie binnen de diepere maag klieren in de antrale slijmvlies van een NHPh-positieve hond. HIJ. Bar = 20 urn. C) Aanwezigheid van NHPh in de pariëtale cellen van de hond maag lichaam regio (zwarte pijl). MG. Bar = 10 micrometer; D) Grote hoeveelheden Helicobacter
antigeen in de oppervlakkige maagslijmvlies en in het lumen van maagklieren in het lichaamsgebied van canine maag. Immunoperoxidase-diaminobenzidine vlek met Mayer's hematoxyline tegenkleuring. Bar = 50 urn. Inzet toont Helicobacter
antigeen binnen pariëtale cellen, soms detecteerbaar zo goed bewaard gebleven spiraalvormige organismen of bruine ronde stippen. Immunoperoxidase-diaminobenzidine vlek met Mayer's hematoxyline tegenkleuring. Bar = 10 pm.
Tabel 3 Detectie van Helicobacter spp. in de verschillende compartimenten maag van de hond maag terugkerende verschillende diagnostische methoden
Gastric regio
Detectiemethodes
Positive (percent & nummer)
HE

MG
IHC *
PCR
Body (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legend: HE: hematoxyline-eosine; MG: gemodificeerde Giemsa stain; IHC: immunohistochemie; PCR:.. Polymerase chain reaction
* De positieve resultaten verkregen met IHC niet significant verschillen tussen elke maagstreek (p > 0,05)
Verdere identificatie van de soort werd uitgevoerd met behulp van Helicobacter
soortspecifieke qPCRs . Helicobacter
spp. werden gedetecteerd in 47,8% van de dieren (33/69) (Tabel 3). Het merendeel van de monsters waren positief in de H. heilmannii
specifieke qPCR. De amplicons vertoonde slechts ongeveer 92% homologie met H. heilmanni S.S.
. Daarom werden deze gevallen heringedeeld als H. heilmannii-
willen.
In 51,5% (17/33) van de positieve monsters werd slechts één Helicobacter
soort geïdentificeerd, terwijl gemengde infecties in werden gedetecteerd 48,5% (16/33) (tabel 2). H. heilmannii-
achtige organismen waren de meest voorkomende (22/33 of 66,7%), geïdentificeerd in tien honden als één infectie en in 12 honden gemengde infecties. H. salomonis
is de tweede meest voorkomende species (17/33 of 51,5%), hoewel het voornamelijk gevonden in associatie met andere NHPh (42%) dan alleen (9,1%). Gelijke delen van H. felis Kopen en H. bizzozeronnii
werden gedetecteerd (6/33 of 18,2%), hetzij als single (6,3%) of gemengde infecties (12,1%). Gemengde infecties met H. heilmannii
-zoals en H. salomonis
werden het vaakst aangetroffen (33,3%) (tabel 2). In het lichaam gebied, de meest geïdentificeerde soorten was H. salomonis
(44,0%), terwijl in het antrum de meest voorkomende soort werd H. heilmannii-
zoals (57,7%) (tabel 4) .table 4 Specifieke Helicobacter species door PCR gedetecteerd in de verschillende compartimenten maag van de hond maag
Specifieke PCR Helicobacter spp. positieve resultaten Gids Gastric regio (percent & nummer)
Body
Antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-achtige
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii-achtige + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii-achtige + H. felis
4,0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4.0 (1/25)
0
Er was een significante correlatie tussen de aanwezigheid van Helicobacter
spp. en zowel milde tot matige epitheliale schade en milde tot matige intra-epitheliale lymfocyten infiltratie (Figuur 1B) van de hond maag (p < 0,05). Er werd geen statistisch significant correlaties gevonden tussen Helicobacter
infectie en maagslijmvlies atrofie of fibrose, lamina propria
lymphoplasmacytic infiltratie of lymphofollicular hyperplasie. Geen significante verschillen werden waargenomen met betrekking tot de bacteriële kolonisatie dichtheid tussen beide regio maag (p > 0,05).
Het aantal Helicobacter
-positieve gevallen gedetecteerd met verschillende methoden verschilden significant (p < 0,05). IHC positieve resultaten niet significant verschillen tussen elke maagstreek (p > 0,05), terwijl de resultaten verkregen met HE nummers, GM en qPCR aanzienlijk verschilden tussen het lichaam en het antrum (p < 0,05).
Discussie
in deze studie werd een hoge prevalentie van gastritis waargenomen (95,7%). Deze resultaten zijn in overeenstemming met andere studies melden van het optreden van gastritis zo vaak voorkomt bij honden [14,31,32]. Daarentegen werden gastrische erosies of zweren zelden in deze dieren.
NHPh infectie werd bepaald door vier werkwijzen (HE, MG, IHC en qPCR) en een prevalentie van 87,0% bij honden werd gedetecteerd. Deze resultaten zijn consistent met die in de literatuur beschikbaar, die een hoge prevalentie van NHPh in de hond maagslijmvlies [12,19,33-35] gedocumenteerd. In onze studie was canine NHPh infectie significant vergezeld van milde tot matige intra-epitheliale lymfocyten infiltratie en milde tot matige maagepitheel schade, ongeacht de locatie maag. Een duidelijke relatie tussen hond gastritis en Helicobacter
infectie werd echter niet aangetoond dat in overeenstemming is met de resultaten van anderen [11,14,15,34].
In een eerder onderzoek, het percentage van de Helicobacter
-positieve gevallen geconstateerd na HE kleuring van honden maag monsters bedroeg 17,5% [24]. In de huidige studie werden alle monsters onderzocht door twee pathologen zeer ervaren in het opsporen van Helicobacter
spp.
Organismen na routine kleuring. Dit kan een rol spelen bij de hogere detectiegraad (65,2%) hebben gespeeld gemeld hier.
In overeenstemming met eerdere studies, werden NHPh vaak niet alleen waargenomen in de oppervlakkige en slijm in de maagklieren maar ook intracellulair, in het cytoplasma van pariëtale cellen [31,33,36] (figuur 1C en D). Spiraalvormige organismen die aanwezig zijn in dit specifieke subcellulaire locatie waren moeilijk op te sporen nadat hij en MG vlekken als gevolg van het cytoplasma granulaat van de pariëtale cellen. In onze handen, IHC bleek een zeer waardevolle techniek om NHPh binnen deze cellen (figuur 1D) identificeren. Over het algemeen, IHC kleuring toonde de hoogste Helicobacter
-positieve waarden (82,6%). Deze bevinding is in overeenstemming met andere resultaten blijkt dat de handel verkrijgbare antilichamen tegen H. pylori Wat zijn bruikbaar voor de detectie van Helicobacter
spp. . In paraffine ingebedde monsters van hond magen [24,26,36]
Vorige studies geen statistisch significant verschil tussen de detectie van Helicobacter
organismen door IHC en PCR-technieken (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) dat de PCR-test hadden hogere gevoeligheid en specificiteit dan de andere methoden [4]. In onze studie was de prevalentie van Helicobacter
spp.
Verkregen met qPCR het laagst (47,8%). Eerdere onderzoeken hebben aangetoond dat formaline fixatie en paraffine inbedding belemmeren PCR analyse [37,38]. Sjödin et al.
(2011) vergeleek de efficiëntie van de DNA amplificatie van verse (n = 28) en in paraffine ingebedde (n = 28) monsters voor de identificatie van Helicobacte
r spp.
Van verschillende organen ( katachtige maag, twaalfvingerige darm, lever en pancreas) en concludeerde dat de gemiddelde waarde van DNA-concentratie bereikt was hoger wanneer verkregen uit verse weefsels [39]. DNA-analyse van paraffine ingebedde weefselmonsters onder toepassing van PCR /qPCR kan worden verstoord door DNA-fragmentatie, remmende stoffen of een combinatie van beide. De formalinefixatie daadwerkelijk kunnen DNA fragmentatie en gedeeltelijke vernieling van DNA [38,40] en de PCR-reacties kunnen ook worden geremd door formaline resten [37]. De negatieve effecten van formaline zijn direct gerelateerd aan de duur van de fixatie [40]. Hoewel de monsters in deze studie omvatte werden allemaal verwerkt in hetzelfde laboratorium en dus onderworpen aan dezelfde standaard protocollen, de duur van de fixatie kan variëren tussen de monsters als gevolg van de variatie in de tijd interval tussen de monstername en hun aankomst in het laboratorium.
Verschillende moleculaire benaderingen voor de identificatie van soorten NHPh zijn verholpen [4,14,24,28]. Technieken gebaseerd op detectie of sequentie van 16S of 23S rRNA-coderende genen kan echter geen onderscheid tussen de verschillende honden en katten
Helicobacter soorten, terwijl tests op basis van detectie of sequentiebepaling van het hsp60-gen
, de urease A en B genen of gyrB
gen identificatie mogelijk maken van deze bacteriën soortniveau [9].
in onze studie amplicons verkregen in de H. heilmannii
specifieke qPCR alleen bleek ongeveer 92% homologie met H . heilmannii,
die tot dusver alleen gekweekt uit het maagslijmvlies van katten. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Moleculaire mechanismen van de maag epitheelcellen adhesie en injectie van CagA door Helicobacter pylori
• Incidentie en overleving van de slokdarm en de maag kanker in Engeland tussen 1998 en 2007, een basis van de bevolking study