Наличие и значимость Helicobacter SPP. в слизистой оболочке желудка португальского dogs

Присутствия и значение Helicobacter SPP.
в слизистой оболочке желудка португальских собак
Аннотация
Справочная информация
Non-хеликобактер пилори
Helicobacters (NHPh) также способны вызывают заболевания у людей. Собаки являются естественным резервуаром для многих из этих видов. Закройте и интенсивный контакт человека с животными был идентифицирован как фактор риска и, следовательно, является важным зоонозных значение приписывается NHPh.
Методы
Чтобы определить распространенность Helicobacter
видов и желудочные гистопатологические изменения, связанные , оценивали желудка образцы слизистой 69 собак.

Результаты только одна собака представила нормальную гистопатологические слизистую оболочку с отсутствием спиралевидных организмов. Нормальная слизистая оболочка желудка и наличие спиралевидных бактерий наблюдалась у двух собак. Все остальные животные представлены гистопатологические изменения представителя гастрита. Helicobacter
видов были обнаружены у 60 собак (87,0%) по меньшей мере одного способа обнаружения. Гистологические, гистохимические и иммуногистохимические оценки показали, что Helicobacter
SPP. присутствовали в 45 (65,2%), 52 (75,4%) и 57 (82,6%) собак, соответственно. Спиралевидный бактерии были обнаружены с помощью анализа КПЦР в 33 (47,8%) собак. H. heilmannii- игры, как организмы были выявлены у 22 животных (66,7%) и преимущественно в антральном желудочной области. H. Salomonis
был вторым наиболее распространенным видов (51,5%), хотя это было в основном в сочетании с другими хеликобактером
SPP. и в области тела желудка. H. bizzozeronii и Г.Феликс
были обнаружены реже.
Выводы
Был сделан вывод о том, что, несмотря на высокую заболеваемость и распространение во всем мире желудка NHPh у собак, наличие специфических видов Helicobacter
может различаются между географическими регионами. NHPh инфекции значительно сопровождались легкой до умеренной интраэпителиальной инфильтрацией лимфоцитами и легкой до умеренной эпители желудка травмы, но не может быть установлена ​​четкая взаимосвязь между гастритом и Helicobacter
инфекции.
Ключевые слова
Собачий слизистой оболочки желудка Собаки Non- хеликобактер пилори
helicobacters (NHPh) Гистохимия Иммуногистохимия (IHC) полимеразная цепная реакция (ПЦР) Желудок Введение
рода Helicobacter
состоит, по меньшей мере, 40 видов [1]. Среди них, H. Pylori
рассматривается в качестве важного возбудителя которого естественный хозяин является человеком, но его присутствие в собачьем желудке редко сообщается [2-4].
Большое количество не Helicobacter Хеликобактерная <бр> виды (NHPh) также были признаны у людей и у нескольких животных. Ранее NHPh, как правило, называют H. heilmannii Sensu Лато
(SL) и включал H. суис
, вид колонизировать желудки свиней и группы видов, как известно, колонизирует слизистую оболочку желудка собак и кошек : Г.фелис ​​
, Х. bizzozeronii
Х. Salomonis
Х. cynogastricus
, H. baculiformis
и Х. heilmannii
в буквальном смысле, (сс) [5] , Большинство из них желудка NHPh также способны вызывать заболевания у человека [6,7]. Закройте и интенсивный контакт человека с животными был идентифицирован как фактор риска и, следовательно, является важным зоонозных значение приписывается NHPh [6,8,9].
В домашних животных, желудочный Helicobacter
SPP. были описаны часто с распространенностью в пределах от 67-86% у клинически здоровых собак и 61-100% у животных, у которых хронические рвота [10-14]. Эти микроорганизмы были обнаружены в желудке около 100% лабораторных гончих собак и собак из местных приютов [15-17]. Преобладающий желудка Helicobacter SPP.
У кошек и собак являются Г.фелис ​​
, H. bizzozeronii
и Х. heilmannii
в буквальном смысле, (сс
), в то время как H. Salomonis
менее часто обнаруживаются и распространенность H. cynogastricus
и H. baculiformis
еще не изучены [9,18-20]. Смешанные инфекции с различными видами может также произойти [3,19].
Хотя многие исследования показали, что на глазном дне и тела имеют более высокую бактериальную плотность и более высокую вероятность обнаружения Helicobacter
SPP. [17,21,22] другие не нашли никаких существенных различий между плотностью NHPh в глазном дне, тела и антрального [2,23-26] собачьего желудка. Расхождения в этих результатах могут быть отнесены к различным диагностических методик лабораторных, используемых различными исследовательскими группами.
Диагностические методы, используемые для Helicobacter
SPP.
Может быть неинвазивным и инвазивным [24]. Неинвазивные методы, такие как серологически или обнаружения бактериальной ДНК и антигенов в стуле, не требуют желудочной биопсии или анестезии. Инвазивные методы, такие как бактериальные культуры, гистопатологии, мазков, электронная микроскопия или полимеразной цепной реакции (ПЦР), может потребоваться желудочной биопсии, которая часто полученную через эндоскопии под наркозом или с помощью аутопсии. Обычно хеликобактером
организмы не легко визуализируют с гематоксилином и эозином (HE) штамме и таким образом, их непосредственное наблюдение в биопсию образцов подсвечивается использованием специальных красителей, таких как модифицированный Гимза (MG) красителем. Более сложные и чувствительные методы хеликобактером
-detection, такие как иммуногистохимии (IHC) или полимеразной цепной реакции (ПЦР) являются инструментами исследования редко используются в диагностической установке.
Несколько исследований обсудили распространенность Helicobacter SPP.
у собак [2,10,11,14,16], но только в нескольких исследованиях были определены конкретные виды, присутствующие в собачьем желудке [4,19,27,28]. Точное определение желудочного helicobacters до вида имеет важное значение для того, чтобы определить распространенность и клиническое значение всех таксонов. Цель данного исследования состояла в том, чтобы определить распространенность различных желудочных Helicobacter
видов, присутствующих в различных регионах желудка собачьего желудка (тела и антрального) с использованием гистологических, гистохимического, иммуногистохимического и молекулярных методов диагностики. Степень колонизации характеризовалась и соотнесены с соответствующими гистопатологических изменений в собачьем слизистой оболочки желудка.
Методами
заборе пробы
желудочные ткани были получены от 69 собак (45 мужского и 24 женского пола, в возрасте от 3 месяцев до 15 лет). Образцы были выбраны случайным образом из архивов Лаборатории ветеринарной патологии, ICBAS-UP (Португалия), где они были получены в период между 2010 и 2013. Образцы были получены из 20 собак во время эндоскопических процедур, от пяти во время операции и от 44 собак во время аутопсии экзамены. Все процедуры (хирургическое иссечение и аутопсии экспертизы) были проведены в клиническом контексте, пытающегося для лечения животных на основе наилучшей клинической оценки их посещающих практиков. Использование вырезанных тканей для исследования объяснили владельцев и информированное согласие было получено для каждого случая. Ни одно из действий не было предпринято исключительно для исследовательских целей и следователи не имели никакого влияния на выбор и выполнение таких процедур. Только желудочные образцы в хорошем состоянии сохранности, были включены в данное исследование.
Ткани фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине и заливали в парафин. Три последовательных секций 3 мкм были сделаны, один из которых окрашивали он, другой с пятном MG и третий использовали для иммуногистохимического окрашивания.
Оценка образца
образцов желудочного оценивали независимо друг от друга двумя наблюдателями (IA и FG ). Гистологические параметры, такие как изменения в клеточности, фиброзом собственной пластинки
и атрофии железы были проанализированы по данным Всемирной малых животных ветеринарной ассоциации (WSAVA) руководящих принципов [29]. Степень морфологических признаков и воспалительных изменений оценивали как нормальный, мягкий, умеренный или маркированных с использованием имеющейся WSAVA желудочно-кишечного тракта по стандартизации визуальный аналог [29].
Микроскопическая оценка была проведена на основе анализа весь участок желудка ткани. Наличие Helicobacter
SPP.
Оценивали он и MG пятен и IHC. Собака была классифицирована как хеликобактер
положительный, когда один из этих методов дал положительный результат. Кроме того, колонизация бактериальной плотности количественно: +, немногие организмы (&л; 10 организмов /400x); ++, Умеренное количество организмов (от 10 до 50 организмов /400x); +++, Большое количество организмов. (&Гт 50 организмов /400x) [24]
Иммуногистохимия
Для иммуногистохимического исследования срезы deparaffinised, гидратированные и антигена поиска проводили в скороварке в 10 ммоль /л цитрата натрия буфера, рН 6,0, в течение 2-х минут (мин). Слайды охлаждают в течение 10 мин при комнатной температуре и дважды промывают в трифосфат буферном солевом растворе (TBS) в течение 5 мин. Система обнаружения NovolinkTM Max-Полимер (Novocastra, Ньюкасл, Великобритания) был использован для визуализации, в соответствии с инструкциями изготовителя. После блокирования эндогенной пероксидазы с 3% -ной перекиси водорода в метаноле в течение 10 мин срезы инкубировали в течение ночи при температуре 4 ° С, с поликлональной антисывороткой против H. пилори
(RBK012; Zytomed, немецкий), который показывает иммунореактивности с широким диапазоном бактерии, принадлежащие к роду Helicobacter
. Срезы были промыты TBS между каждым шагом процедуры. Цвет был разработан в течение 7 мин при комнатной температуре с 3,3'-диамино-бензидина (DAB) (Sigma, St. Louis, МО) и секции были затем слегка контрастно гематоксилином, обезвожены и смонтированный. Положительная иммунореактивность была зарегистрирована как отдельное золотисто-коричневой классификации бактерий, расположенных на поверхности слизистой оболочки, в желудочных впадинах или желез и в париетальных клетках.
Экстракция, ПЦР-амплификации и секвенирования ДНК
ДНК экстрагировали из 5 последовательных срезов 20 мкМ с использованием DNeasy крови и тканей Kit (Qiagen), в соответствии с инструкциями изготовителя. Были разработаны хеликобактер
видоспецифичная qPCRs на основе короткого фрагмента гена уреазы А и В для идентификации H. heilmannii сс
,
Г.фелис, H. bizzozeronii
и H. Salomonis
. Для выработки стандартов для каждого кПЦР, большая часть кластера генов ureAB от H. heilmannii
ASB1 (1224 пар оснований), Г.фелис ​​
CS1 (1228 пар оснований), Х. Salomonis
R1053 (1224 п.н.) и Х. bizzozeronii
R1051 (1230 пар оснований) амплифицировали с использованием праймеров U430F и U1735R, как описано ранее [30]. Стандарт состоял из 10-Fold-разведениях, начиная с 10 8 ПЦР ампликонов на каждые 10 мкл реакционной смеси. Один мкл извлеченной ДНК-матрицы, суспендировали в 10 мкл реакционной смеси, состоящей из 0,25 мкл прямого и обратного праймеров (таблица 1), 3,5 мкл ВЭЖХ воды и 5 мкл SensiMix ™ SYBR No-ROX (БИОЛАЙН Реагент Ltd, UK). Оба стандарта и образцы были проведены в двух экземплярах на системе CFX96 ™ RT-PCR с Термоциклер C1000 (Bio-Rad, Hercules CA, США). (Версия 1.6) программного обеспечения Bio-Rad CFX менеджер был использован для расчета пороговых циклов (Ct) -значения и анализ кривой плавления амплифицированной ДНК. Средние значения дубликатах были использованы для количественного определения ДНК Helicobacter
в образцах ткани. Чтобы исключить ложные положительные образцы, ампликонов от каждого положительного образца были sequenced.Table 1 Список праймеров, используемых для кПЦР
Primer имени

нуклеотидная последовательность

Специфичность

Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
Г.Феликс

Hfel_R2
ТТТ TTA GAT TAG CGC CGG GTC GA
Г.фелис ​​

HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CAG CTA AAG CTC TC
H. heilmannii сс

HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii сс
<бр> Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. Salomonis

Hsal_RQ
ТТТ НКУ ATC TTT AAT AAT TCC GTC GGC
H. Salomonis

Hbizz_FQ
AAT СТТ ТГК GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii

Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Статистический анализ
хи-квадрат тест Пирсона и точный критерий Фишера были использованы для определения зависимости между двумя категориями. величины р и л; 0,05 считались статистически значимыми. Статистический анализ проводился с использованием статистического пакета SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos е Serviços де Lda и статистики, Лиссабон, Португалия).

Результаты в общей сложности 117 образцов желудочного (66 из области тела и 51 от Антрум область) были проанализированы.
Среди 69 животных, как желудочные области были доступны для оценки в 48 собак, тогда как только тела или антрального регионов были доступны в 18 и трех собак, соответственно.
из 69 собак, только один представил нормальную гистопатологические слизистую оболочку с отсутствием спиралевидных организмов. Нормальная слизистая оболочка желудка и наличие спиралевидных бактерий наблюдалась у двух собак (2,9%). Остальных животных, представлены гистологические изменения представительные гастрита (66/69 или 95,7%) (таблица 2). На основе гистологических изменений в слизистой оболочке желудка, мы поставили диагноз легкой до умеренной хронического гастрита в 88,4% (61/69), влияющих на желудочную тело 51,5% (34/66) и антрального область 92,2% (47/51 ) из animals.Table 2 Таблица, обобщающая гистопатологических изменений и колонизацию плотность наблюдается в собачьем желудке, в соответствии с положительным NHPh видовой конкретных результатов ПЦР, положительные результаты рода и отрицательными результатами

ПЦР-положительные результаты с конкретными видами идентификация, местоположение независимо от желудка (процент &Amp; число) (п = 33)

Положительные результаты для Helicobacter SPP. (Процент &Amp; число) (п = 27)

Отрицательные результаты (процент &Amp; номер) (п = 9)

р


Hh

Hf

Hb

Hs

Hf + Hb

Hh + Hs

Hh + Hf

Hb + Hs

Hf + Hb + Hs

гистопатология градация
(День и др., 2008)
Нормальный
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0 0

0 0

0
7.4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
Mild гастрит
15.2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
Умеренный гастрит
12.1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0 0

0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Вынесенная гастрит
0
0 0

0 0

6.1 (2/33)
0 0

0 0

11.1 (1/9)
эпителиальные травмы
Mild
27,3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3,0 (1/33)
30.3 (10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Умеренный
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0 0

0
3,0 (1 /33) 0

0
14.8 (4/27)
11.1 (1/9)
фиброз /атрофии слизистой оболочки
Mild
18,2 (6/33) <бр> 6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0 0

3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Умеренный
3,0 (1/33)
0
0 <бр> 0
3,0 (1/33)
0 0

0 0

3.7 (1/27)
11.1 (1/9)
внутриэпителиальные лимфоцитов
Mild
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15.2 (5 /33)
0 0

6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
0,016
Умеренный
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0 <бр> 0
14.8 (4/27)
0
Lymphofollicular гиперплазии
Mild
6.1 (2/33)
0 0

0
3.0 ( 1/33)
0
0 0

0
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
NS
бактериальная плотность (на основе результаты IHC)
NA
+
0 0

0 0

0 0

0 0

0 <бр> 14.8 (4/27)
++
3.0 (1/33)
0 0

0
3,0 (1/33)
0 0

0 0

25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Легенда: Hh
, H. heilmannii подобные
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. Salomonis
Бактериальный плотность. +, Несколько организмов; ++, Умеренное количество организмов; +++, Большое количество организмов. NA, не применяется. NS, не имеет существенного значения (р > 0,05). Оба
легкой до умеренной эпителиальные травм и легкой до умеренной интраэпителиальной инфильтрацией лимфоцитами были обнаружены в 88,4% (61/69)
атрофию слизистой оболочки желудка, железистой вложенности или фиброз. присутствует в 44,9% собак (31/69). В 18,2% животных это изменение наблюдалось в области тела (12/66) и в 47,1% в регионе антрального (24/51) собачьего желудка.
Аномальные нейтрофильный инфильтрацию был обнаружен только в антральном желудка двух животных: в одном, это изменение было умеренным, а в другом, он был отмечен и связанный с язвой желудка. Другие воспалительные клетки, состоящие из мягкой инфильтрацией тучных клеток, наблюдались в области тела четырех животных и в антральном двух животных.
Среди всех животных, 87,0% были положительными (60/69) (Фигура 1А) и 13,0% были отрицательными для Helicobacter
SPP. (9/69), независимо от того, тест используется для обнаружения бактерий. Независимо от расположения желудка, Helicobacter
SPP. наблюдались с помощью HE, MG и ИМК в 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) и 82,6% (57/69) из собак, соответственно. С Его окрашиванием, спиралевидные бактерии были обнаружены в 62,1% образцов тела (41/66) и в 70,6% антраля образцов (36/51). Используя пятно MG, это 68,2% для образцов тела (45/66) и 78,4% для антральных образцов (40/51). Хеликобактер
антиген был обнаружен иммунохимии в 84,9% (56/66) образцов тела и в 80,4% (41/51) из антральных образцов (таблица 3). Рисунок 1 хеликобактером
SPP. в собачьем желудке. А) Многочисленные спиралевидные бактерии колонизируют поверхности эпителия желудка ямы. ОН. Бар = 10 мкм; B) Обратите внимание на интраэпителиальной инфильтрацией лимфоцитами в течение более глубоких желудочных желез в антральном слизистой оболочки NHPh-положительной собаки. ОН. Бар = 20 мкм. C) Наличие NHPh внутри париетальных клеток собачьего желудка области тела (черная стрелка). MG. Бар = 10 мкм; D) Большие количества антигена Helicobacter
внутри поверхностной слизи желудка и в просвете желез желудка в области тела желудка у собак. Иммунопероксидазной-диаминобензидин пятно гематоксилин контрастирующая Майера. Бар = 50 мкм. Врезка показывает Helicobacter
антиген внутри париетальных клеток, иногда обнаруживаемых, как хорошо сохранившиеся спиралевидных организмов или коричневых круглых точек. Иммунопероксидазной-диаминобензидин пятно гематоксилин контрастирующая Майера. Bar = 10 мкм.
Таблица 3 Обнаружение Helicobacter SPP. в разных отделениях желудка собачьего желудка повторяющегося в различных диагностических методов
Желудочный область

методы обнаружения

Положительный (процентное &Amp; номер)

HE
Результаты
MG

IHC *

ПЦР

Body (п = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Антрум (п = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Легенда: ОН: гематоксилин-эозин; MG: модифицированный Гимза; IHC: иммуногистохимия; ПЦР.. Полимеразная цепная реакция
* Положительные результаты, полученные с помощью IHC существенно не различаются по каждой области желудка (р > 0,05)
Дальнейшая идентификация на уровне видов проводили с использованием Helicobacter
видоспецифична qPCRs , Хеликобактером
SPP. были обнаружены у 47,8% животных (33/69) (таблица 3). Большинство образцов были положительными в H. heilmannii
конкретный КПЦР. Тем не менее, ампликонов показали лишь приблизительно 92% гомологии с H. heilmanni S.S.
. Таким образом, эти случаи были классифицированы как H. heilmannii- игры, как.

В 51,5% (17/33) положительных образцов, только один хеликобактером
вид был идентифицирован в то время как смешанные инфекции были обнаружены в 48,5% (16/33) (Таблица 2). H. heilmannii- игры, как организмы были наиболее часто встречаются (22/33 или 66,7%), которые определены в десяти собак в качестве одной инфекции и в 12 собак в виде смешанных инфекций. H. Salomonis
был вторым наиболее распространенным видам (17/33 или 51,5%), хотя это было в основном в сочетании с другими NHPh (42%), а не в одиночку (9,1%). Равные пропорции Г.фелис ​​
и были обнаружены H. bizzozeronnii
(6/33 или 18,2%), либо в виде отдельных (6,3%) или смешанных инфекций (12,1%). Смешанные инфекции с H. heilmannii
-подобных и H. Salomonis
наиболее часто встречаются (33,3%) (таблица 2). В области тела, что наиболее часто вид был H. Salomonis
(44,0%), тогда как в антральном наиболее распространенных видов был H. heilmannii- игры, как (57,7%) (таблица 4) .table 4 Удельная Helicobacter виды, обнаруженные с помощью ПЦР в разных отсеках желудка собачьего желудка
Specific ПЦР Helicobacter SPP. Положительные результаты

Желудочный область (процент &Amp; номер)

Body

Антрум

(п = 25)

(п = 26)

H. heilmannii типа

24,0 (6/25)
57.7 (15/26)
H. Salomonis

44,0 (11 /25)
7.7 (2/26)
Г.фелис ​​

8.0 (2/25)
3.8 (1/26)
H. bizzozeronnii

4.0 (1/25)
11,5 (3/26)
Г.фелис ​​+ H. bizzozeronnii

4.0 (1/25)
3.8 (1/26)
H . heilmannii типа + H. Salomonis

8.0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii типа + H. Felis

4.0 (1 /25)
3.8 (1/26)
Г.фелис ​​+ H. Salomonis

4.0 (1/25)
0
был значимая корреляция между наличием хеликобактером
SPP. и как легкой до умеренной эпителиальную травмы и легкой до умеренной интраэпителиальной инфильтрацией лимфоцитами (Фигура 1В) собачьего желудка (р ≪ 0,05). Нет статистически значимо корреляции не было найдено между Helicobacter
инфекции желудка и атрофии слизистой оболочки или фиброз,
собственная пластинка слизистой оболочки lymphoplasmacytic инфильтрации или lymphofollicular гиперплазии. Никаких существенных различий не было обнаружено в отношении бактериальной плотности колонизации между обеих областей желудка (р &ГТ; 0,05).
Количество хеликобактером
-позитивных случаев, обнаруженных с помощью различных методов, различались существенно (р ≪ 0,05). Результаты Положительные IHC существенно не отличались по каждой области желудка (р ≫ 0,05), в то время как числа, полученные с помощью HE, GM и КПЦР значительно отличались между телом и антральном (р &л; 0,05).
Обсуждение
В этом исследовании наблюдалась высокая распространенность гастрит (95,7%). Эти результаты согласуются с результатами других исследований отчетности возникновение гастрита в качестве общего нахождения у собак [14,31,32]. В противоположность этому, желудочных эрозий или язвы редко встречаются у этих животных.
NHPh инфекции была определена четырьмя методами (HE, MG, IHC и КПЦР) и распространенность 87,0% у собак было обнаружено. Эти результаты согласуются с имеющимися в литературе, в котором документально высокую распространенность NHPh в собачьей слизистой оболочки желудка [12,19,33-35]. В нашем исследовании псовых NHPh инфекции достоверно сопровождается легкой до умеренной интраэпителиальной инфильтрацией лимфоцитами и легкой до умеренной эпители желудка травмы, независимо от места нахождения желудка. Четкая связь между собачьим гастрита и Helicobacter
инфекции, однако, не установлено, что в соответствии с результатами других [11,14,15,34].
В предыдущем исследовании, процент хеликобактером <бр> -положительные случаи, обнаруженные после того как он окрашиванием собачьих образцов желудочного составила 17,5% [24]. В текущем исследовании, все образцы были исследованы с помощью двух патологов большой опыт в выявлении Helicobacter
SPP.
Организмов после обычного окрашивания. Это, возможно, играет определенную роль в более высокой скорости обнаружения (65,2%) сообщили здесь.
В соответствии с предыдущими исследованиями, NHPh часто наблюдались не только в поверхностных слизи и в желудочных желез, но и внутриклеточно, в цитоплазме париетальные клетки [31,33,36] (рис 1C и D). Спиралевидный организмы, присутствующие в данном конкретном внутриклеточной локализации было трудно обнаружить после того, как он и MG окрашивания благодаря цитоплазмы грануляции париетальных клеток. В наших руках, IHC оказалась очень ценной техникой для идентификации NHPh внутри этих клеток (рис 1D). В целом, IHC окрашивание показали самые высокие хеликобактером
-положительным значения (82,6%). Этот вывод согласуется с другими результатами, показывая, что коммерчески доступные антитела против H. Pylori
полезны для обнаружения Helicobacter
SPP. . В парафиновых образцах из собачьих желудках [24,26,36]
Предыдущие исследования сообщили об отсутствии статистически значимых различий между обнаружением Helicobacter
организмов с помощью методов IHC и ПЦР (р ≫ 0,05) [24]. Chung и др.
(2014) сообщил, что анализ ПЦР имели более высокую чувствительность и специфичность, чем другие методы [4]. Тем не менее, в нашем исследовании, показатель распространенности Helicobacter
SPP.
Полученные с кПЦР был самым низким (47,8%). Предыдущие исследования показали, что формалин фиксации и парафин препятствуют ПЦР-анализа [37,38]. Sjödin и др.
(2011) сравнивали эффективность амплификации ДНК из свежих (п = 28) и парафином (п = 28) образцы для идентификации Helicobacte
г SPP.
Из различных органов ( кошачий желудок, двенадцатиперстную кишку, печени и поджелудочной железы) и пришли к выводу, что среднее значение концентрации ДНК достигается была выше, когда получают из свежих тканей [39]. Анализ ДНК парафином образцов ткани, с использованием ПЦР /КПЦР может быть поставлена ​​под угрозу из-за фрагментации ДНК, ингибирующих веществ, или комбинации обоих. Фиксация формалином в самом деле может привести к фрагментации ДНК, а также частичное разрушение ДНК [38,40], и ПЦР-реакций могут быть также ингибируется формалина остатка [37]. Отрицательное воздействие формалином непосредственно связаны с длительностью фиксации [40]. Хотя образцы включены в это исследование были обработаны в той же лаборатории, и поэтому подвергаются такому же стандартным протоколам, продолжительность фиксации может варьироваться от образцов из-за изменения в интервале времени между сбором проб и их прибытии в лабораторию.
Разное молекулярные подходы для идентификации видов NHPh были адресованы [4,14,24,28]. Методы, основанные на определении или последовательности генов 16S или 23S рРНК-кодирование может, тем не менее, не различия между разными собачьих и кошачьих желудка Helicobacter
видов, в то время как тесты на основе обнаружения или секвенирования гена hsp60
, уреазы гены а и в или GyrB
гена позволяют идентификацию этих бактерий до уровня видов [9].
в нашем исследовании, ампликонов, полученные в H. heilmannii
конкретных КПЦР показал примерно 92% гомологии с H . heilmannii,
который до сих пор только культивируют из слизистой оболочки желудка кошек. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Молекулярные механизмы эпителия желудка клеточной адгезии и инъекции CagA по Helicobacter Pylori
• Заболеваемость и выживание пищеводного и желудочного рака в Англии в период между 1998 и 2007 годах, исследование…