Tilstedeværelse og betydningen av Helicobacter spp. i mageslimhinnen av portugisisk dogs

tilstedeværelse og betydningen av Helicobacter spp.
i mageslimhinnen av portugisiske hunder
Abstract
Bakgrunn
Non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) er også i stand til å forårsaker sykdom hos mennesker. Hunder er en naturlig reservoar for mange av disse artene. Lukk og intens menneskelig kontakt med dyr har blitt identifisert som en risikofaktor, og har derfor en viktig zoonotiske betydning blitt tilskrevet NHPh.
Metoder
å bestemme utbredelsen av Helicobacter
arter og mage histopatologiske forandringer assosiert , gastrisk mucosa prøver av 69 hunder ble undersøkt. Search Results
Bare en hund presentert en normal slimhinne histopatologisk med fravær av spiralformede organismer. En normal gastrisk mucosa og nærværet av spiralformede bakterier ble observert hos to hunder. Alle gjenværende dyrene presenteres histopatologiske forandringer representant for gastritt. ble påvist Helicobacter
arter i 60 hunder (87,0%) ved hjelp av minst en deteksjonsfremgangsmåte. Histologisk, histochemical og immunhistokjemiske evalueringer viste at Helicobacter
spp. var til stede i 45 (65,2%), 52 (75,4%) og 57 (82,6%) hunder, respektivt. Spiralformede bakterier ble påvist ved qPCR-analyse i 33 (47,8%) hunder. H. heilmannii-
like organismer ble identifisert i 22 dyr (66,7%) og hovedsakelig i antrum mage regionen. H. salomonis
var den nest mest utbredte arter (51,5%) selv om det ble hovedsakelig funnet i sammenheng med andre Helicobacter
spp. og i kroppen mage-regionen. H. bizzozeronii og H. felis
ble sjeldnere oppdaget.
Konklusjoner
Det ble konkludert med at til tross for den høye forekomsten og verdensomspennende distribusjon av mage NHPh i hunder, tilstedeværelse av spesifikke Helicobacter
arter kan variere mellom geografiske regioner. NHPh infeksjoner ble betydelig ledsaget av mild til moderat intraepitelial lymfocytter infiltrasjon og mild til moderat gastrisk epitelial skade, men en klar sammenheng mellom gastritt og Helicobacter
infeksjon kan ikke opprettes.
Nøkkelord
Canine mageslimhinnen Dogs Ikke- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) histokjemi Immunohistochemistry (IHC) Polymerase kjedereaksjon (PCR) magen Innledning
slekten Helicobacter
består av minst 40 arter [1]. Blant disse, H. pylori
er ansett som en viktig patogen som naturlig vert er mann, men dens tilstedeværelse i canine magen har blitt rapportert i sjeldne tilfeller [2-4]., En stort antall ikke-Helicobacter pylori Helicobacter
arter (NHPh) har også blitt anerkjent hos mennesker og i flere dyr. Tidligere NHPh ble vanligvis referert til som H. heilmannii sensu lato product: (sl) og inkludert H. suis
, en art koloniserende magen på griser og en gruppe av arter kjent for å kolonisere mage mucosa av hunder og katter : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
og H. heilmannii strengt tatt plakater (ss) [5] . De fleste av disse gastrisk NHPh er også i stand til å forårsake sykdom hos mennesker [6,7]. Lukk og intens menneskelig kontakt med dyr har blitt identifisert som en risikofaktor, og har derfor en viktig zoonotiske betydning blitt tilskrevet NHPh [6,8,9].
I kjæledyr, mage Helicobacter
spp. er ofte blitt beskrevet med en utbredelse som strekker seg 67-86% i klinisk friske hunder og 61-100% hos dyr presentere kronisk oppkast [10-14]. Disse mikroorganismer ble detektert i magen på omtrent 100% av laboratorie Beagle-hunder og hunder fra lokale tilfluktsrom [15-17]. Den dominerende mage Helicobacter spp.
I katter og hunder er H. felis
, H. bizzozeronii Hotell og H. heilmannii strengt tatt plakater (ss
), mens H. salomonis
er sjeldnere oppdaget og utbredelsen av H. cynogastricus Hotell og H. baculiformis
har ennå ikke studert [9,18-20]. Blandingsinfeksjoner med ulike arter kan også forekomme [3,19].
Mens mange studier har rapportert at fundus og kropp har høyere bakterietetthet og en høyere sannsynlighet for å finne Helicobacter
spp. [17,21,22] andre har funnet noen signifikante forskjeller mellom tettheten av NHPh i fundus, kropp og antrum [2,23-26] av hjørnetann magen. Avvikene i disse resultatene kan tilskrives de ulike laboratorie diagnostiske metoder som brukes av de ulike forskningsgrupper.
Den diagnostiske metoder som brukes for Helicobacter
spp.
Kan være ikke-invasiv og invasiv [24]. Ikke-invasive metoder som serologi eller påvisning av bakteriell DNA og antigener i avføring ikke krever en mage biopsi eller anestesi. De invasive metoder, som bakteriekulturer, histopatologi, render, elektronmikroskopi eller polymerase kjedereaksjon (PCR) kan kreve en gastrisk biopsi, som ofte oppnås ved endoskopi under bedøvelse eller ved obduksjon. Vanligvis Helicobacter
organismer som ikke er lett visualisert med hematoksylin og eosin (HE) flekk og så blir deres direkte observasjon i vevsprøve prøver markert ved bruk av spesielle flekker, slik som den modifiserte Giemsa (MG) flekk. Mer forseggjorte og sensitive Helicobacter
-detection metoder som immunhistokjemi (IHC) eller polymerase chain reaction (PCR) er forskning verktøy sjelden brukt i en diagnostisk innstilling.
Flere undersøkelser har diskutert utbredelsen av Helicobacter spp.
hos hunder [2,10,11,14,16] men i bare noen få studier av spesifikke arter til stede i canine magen ble bestemt [4,19,27,28]. Den nøyaktig identifikasjon av mage helicobacters til artsnivå er avgjørende for å fastslå utbredelsen og kliniske betydningen av alle taxa. Målet med denne studien var å fastslå utbredelsen av ulike mage Helicobacter
arter som finnes i forskjellige mage regioner av canine magen (body og antrum) med histologisk, histokjemisk, immunhistokjemiske og molekylære diagnostiske teknikker. Graden av kolonisering ble karakterisert og korrelert med de respektive histopatologiske forandringer i canine mageslimhinnen
. Metoder
Prøvetaking
Gastric vev ble hentet fra 69 hunder (45 mannlige og 24 kvinnelige, som varierer i alder fra 3 måneder til 15 år). Prøvene ble tilfeldig valgt fra arkivene til Laboratory of Veterinary patologi, ICBAS-UP (Portugal), hvor de ble mottatt mellom 2010 og 2013. Prøvene ble hentet fra 20 hunder i løpet av endoskopiske prosedyrer, fra fem under operasjonen og fra 44 hunder under obduksjon undersøkelser. Alle prosedyrer (kirurgisk fjerning og obduksjon undersøkelse) ble utført i en klinisk sammenheng forsøker å behandle dyrene basert på den beste klinisk vurdering av sine deltar utøvere. Bruken av de skåret vev til forskning ble forklart til eierne og et informert samtykke ble innhentet for hvert tilfelle. Ingen av de handlinger ble tatt utelukkende for forskningsformål og etterforskerne hadde ingen innflytelse på valg og gjennomføring av slike prosedyrer. Kun gastriske prøver i god stand for bevaring ble inkludert i denne studien.
Vevet ble fiksert i 10% nøytral buffret formalin og innstøpt i parafin voks. Tre sammenhengende deler av 3 um ble gjort, som blir farget med HE, en annen med en MG flekk, og den tredje ble brukt for immunhistokjemisk farging.
Prøve evaluering
Den gastriske prøver ble bedømt uavhengig av to observatører (IA og FG ). Histopatologiske parametre som endringer i cellularity ble fibrose av lamina propria Hotell og kjertel atrofi analysert ifølge World Small Animal Veterinary Association (WSAVA) retningslinjer [29]. Graden av morfologiske trekk og betennelsesforandringer ble gradert som normalt, mild, moderat eller markert ved hjelp av tilgjengelige WSAVA gastrointestinal standardisering visuell analog [29].
Mikroskopisk vurdering ble utført ved å analysere hele delen av mage vev. Tilstedeværelsen av Helicobacter
spp.
Ble vurdert av HE og MG flekker og ved IHC. En hund ble klassifisert som Helicobacter
positiv når en av disse metodene ga et positivt resultat. I tillegg ble bakterietettheten kolonisering kvantifisert: +, få organismer (< 10 organismer /400x); ++, Moderat antall organismer (10 til 50 organismer /400x); +++, Stort antall organismer. (≫ 50 organismer /400x) [24]
Immunhistokjemi
For immunhistokjemisk undersøkelse ble snittene deparaffinised, ble hydratisert og antigen gjenfinning utføres i en trykkoker i 10 mmol /L natriumcitrat-buffer, pH 6,0, i 2 minutter (min). Objektglass ble avkjølt i 10 min ved romtemperatur og skylt to ganger i trifosfat bufret saltvann (TBS) i 5 minutter. Den NovolinkTM Max-Polymer deteksjonssystem (Novocastra, Newcastle, UK) ble brukt for visualisering, i henhold til produsentens instruksjoner. Etter blokkering endogen peroksidase med 3% hydrogenperoksid i metanol i 10 min ble snittene inkubert over natten ved 4 ° C, med et polyklonalt antiserum mot H. pylori plakater (RBK012; Zytomed, tysk) som viser immunoreaktivitet med en lang rekke bakterier som hører til slekten Helicobacter
. Snittene ble skylt med TBS mellom hvert trinn av prosedyren. Farge ble utviklet i opp til syv minutter ved romtemperatur med 3,3'-diamino-benzidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO), og delene ble deretter lett motfarget med hematoxylin, dehydratisert og montert. Positiv immunoreaktivitets ble registrert som en distinkt gylden-brun merking av bakterier som ligger på slimhinnen i mage groper eller kjertler og i parietalcellene.
Utvinning, PCR forsterkning og sekvensering av DNA
DNA ble ekstrahert fra 5 sammenhengende skiver fra 20 um ved anvendelse av en DNeasy blod og vev Kit (Qiagen) ifølge produsentens instruksjoner. Helicobacter
artsspesifikke qPCRs basert på en kort fragment av urease A- og B-genene ble utviklet for identifikasjon av H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii
og H. salomonis
. For generering av standarder for hver qPCR, en stor del av ureAB genet cluster fra H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. salomonis
R1053 (1224 bp) og H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) ble amplifisert ved anvendelse av primere U430F og U1735R, som tidligere beskrevet [30]. Standarden besto av 10-gangers-fortynninger som starter ved 10 8 PCR-amplikoner for hver 10 pl av reaksjonsblandingen. En ul av ekstrahert DNA-templat ble suspendert i en 10 pl reaksjonsblanding bestående av 0,25 mL av forover og revers primere (tabell 1), 3,5 pl HPLC-vann og 5 pl SensiMix ™ SYBR No-ROX (Bioline Reagents Ltd., UK). Begge standarder og prøver ble kjørt i duplikat på en CFX96 ™ RT-PCR System med en C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Bio-Rad CFX Manager (versjon 1.6) programvare ble benyttet for beregning av terskel sykluser (CT) -verdier og smeltekurve analyse av amplifisert DNA. De gjennomsnittlige verdier av duplikater ble anvendt for kvantifisering av Helicobacter
DNA i vevsprøver. For å utelukke falske positive prøver, de amplikonene fra hver positive prøve ble sequenced.Table en Liste over primere som brukes for qPCR
Primer navn
Nukleotidsekvens
spesifisitet
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT Tags CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG Tags GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Statistisk analyse
Pearsons chi-kvadrat-test og Fishers eksakte test ble anvendt for å bestemme avhengigheten mellom to kategorier. p-verdiene < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av statistikkpakken SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisboa, Portugal).
Resultater, En totalt 117 mage prøver (66 fra kroppen regionen og 51 fra antrum region) ble analysert.
Blant de 69 dyrene, både mage regionene var tilgjengelig for evaluering i 48 hunder, mens bare kroppen eller antrum regioner var tilgjengelig på 18 og tre hunder, henholdsvis.
av de 69 hundene, bare én presentert en normal slimhinne histopatologisk med fravær av spiralformede organismer. En normal gastrisk mucosa og nærværet av spiralformede bakterier ble observert hos to hunder (2,9%). De resterende dyr, presenteres histopatologiske forandringer representative for gastritt (66/69 eller 95,7%) (tabell 2). På bakgrunn av histopatologiske endringer i den gastriske slimhinne, vi diagnostisert en mild til moderat kronisk gastritt på 88,4% (61/69) som påvirker den gastriske legeme på 51,5% (34/66) og antral region på 92,2% (47/51 ) av animals.Table 2 Tabell som sammenfatter de histopatologiske forandringer og kolonisering tetthet observert i canine magen, i henhold til de positive NHPh artsspesifikke PCR-resultater, positive resultater genus og negative resultater
PCR positive resultater med spesifikke arter identifikasjon, uavhengig mage plassering (prosent & nummer) (n = 33)
Positive resultater for Helicobacter spp. (Prosent & nummer) (n = 27)
Negative resultater (prosent & antall) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs Book Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
Histopatologi gradering product: (Day et al., 2008)
Normal
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
0
7,4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
Mild gastritt
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
Moderat gastritt
12,1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Merket gastritt
0
0
0
0
0
6,1 (2/33)
0
0
0
0
11.1 (1/9)
epitelial skade
Mild
27,3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9,1 (3/33)
3,0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6,1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Moderat
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 (1 /33)
0
0
14,8 (4/27)
11.1 (1/9)
fibrose /slimhinnene atrofi
Mild
18,2 (6/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Moderat
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27)
11.1 (1/9)
intraepitelial lymfocytter
Mild
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
0
15,2 (5 /33)
0
0
6,1 (2/33)
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
0,016
Moderat
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27)
0
Lymphofollicular hyperplasia
Mild
6,1 (2/33)
0
0
0
3,0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
NS
Bakteriell tetthet (basert på IHC resultater) hoteller, NA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27)
++
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6,1 (2/33)
6,1 (2/33)
9,1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6,1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legend: Hh
, H. heilmannii lignende
; Hf
,
H.felis; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
Bakteriell tetthet. +, Få organismer; ++, Moderat antall av organismer; +++, Stort antall organismer. NA, ikke aktuelt. NS, ikke signifikant (p > 0,05).
Både mild til moderat epitel skader og mild til moderat intraepitelial lymfocytter infiltrasjon ble funnet i 88,4% (61/69)
Gastric slimhinnene atrofi, kjertel hekkende eller fibrose var. til stede i 44,9% hunder (31/69). I 18,2% av dyrene denne endring ble observert i kroppsregion (12/66) og på 47,1% i antrum region (24/51) av hjørnetann magesekken.
Unormal nøytrofil infiltrasjon ble bare detektert i magen antrum av to dyr: i en, denne forandring var mild og i den andre, ble det merket og forbundet med gastrisk sårdannelse. Andre inflammatoriske celler, som består i mild infiltrering av mastceller, ble observert i kroppsregion av fire dyr og i antrum av to dyr.
Blant alle dyr, 87,0% var positive (60/69) (figur 1A) og 13,0% var negative for Helicobacter
spp. (9/69), uavhengig av den test som brukes for å påvise bakterier. Uavhengig av magen beliggenhet, Helicobacter
spp. ble observert ved hjelp av HE, MG og IMC i 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) og 82,6% (57/69) av hundene, henholdsvis. Med HE flekker, ble spiralformede bakterier påvist i 62,1% av kroppsprøver (41/66) og i 70,6% av antrum prøver (36/51). Utnytte MG flekken, var dette 68,2% for kroppen prøver (45/66) og 78,4% for antrum prøver (40/51). Helicobacter
antigen ble påvist ved immunkjemi i 84,9% (56/66) av kroppsprøver og på 80,4% (41/51) av antrum prøvene (tabell 3). Figur 1 Helicobacter
spp. i canine magen. A) En rekke spiralformede bakterier som koloniserer overflaten epitelet av gastrisk gropen. HAN. Bar = 10 mikrometer; B) Merk intraepitelial lymfocytter infiltrasjon innenfor de dypere mage kjertler i antrum slimhinnene i en NHPh-positiv hund. HAN. Bar = 20 mikrometer. C) Tilstedeværelse av NHPh inne parietalceller canine mage kroppsregion (svart pil). MG. Bar = 10 mikrometer; D) Store mengder Helicobacter
antigen i den overfladiske gastrisk slim og i lumen av gastriske kjertler i kroppsregion av canine magen. Immunoperoxidase-diaminobenzidin flekken med Mayers hematoksylin counterstain. Bar = 50 mikrometer. Inset viser Helicobacter
antigen i parietalcellene, noen ganger detekterbare så vel bevarte spiralformede organismer eller brune runde prikker. Immunoperoxidase-diaminobenzidin flekken med Mayers hematoksylin counterstain. Bar = 10 mikrometer.
Tabell 3 Påvisning av Helicobacter spp. i de ulike mage avdelinger av hjørnetann magen tilbakevendende til ulike diagnostiske metoder
Gastric region
deteksjonsmetoder Book Positiv (prosent & nummer)
HE

MG
IHC *
PCR
Body (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legend: HE: haematoxylin-eosin; MG: endret Giemsa flekken; IHC: immunhistokjemi; PCR:.. Polymerase chain reaction product: * De positive resultatene som oppnås med IHC var ikke signifikant forskjellig over hver mage region (p > 0,05)
Ytterligere identifisering på artsnivå ble utført ved hjelp av Helicobacter
artsspesifikke qPCRs . Helicobacter
spp. ble påvist i 47,8% av dyrene (33/69) (tabell 3). De fleste av prøvene var positive i H. heilmannii
spesifikk qPCR. Men amplikonene viste bare ca 92% homologi med H. heilmanni S.S.
. Derfor ble disse tilfellene reklassifisert til H. heilmannii-
liker.
I 51,5% (17/33) av de positive prøvene ble bare en Helicobacter
arter identifisert mens blandingsinfeksjoner ble påvist i 48,5% (16/33) (tabell 2). H. heilmannii-
like organismer var det mest vanlig å finne (22/33 eller 66,7%), som er identifisert i ti hunder som en eneste infeksjon og i 12 hunder som blandingsinfeksjoner. H. salomonis
var den nest mest utbredte arter (17/33 eller 51,5%), selv om det ble hovedsakelig funnet i sammenheng med andre NHPh (42%) i stedet for alene (9,1%). Like andeler av H. felis Hotell og H. bizzozeronnii
ble oppdaget (6/33 eller 18,2%), enten som enkelt (6,3%) eller blandingsinfeksjoner (12,1%). Blandingsinfeksjoner med H. heilmannii
-liker og H. salomonis
ble oftest oppstått (33,3%) (tabell 2). I kroppen området, de hyppigst identifiserte arter var H. salomonis plakater (44,0%), mens i antrum de mest utbredte arten ble H. heilmannii-
like (57,7%) (tabell 4) .table 4 Spesifikk Helicobacter arter oppdages av PCR i de ulike mage avdelinger av hjørnetann magen
Spesifikk PCR Helicobacter spp. positive resultater

Gastric region (prosent & nummer)
Body
antrum product: (n = 25) product: (n = 26)
H. heilmannii lignende
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii lignende + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii lignende + H. felis
4,0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4,0 (1/25)
0
det var en signifikant sammenheng mellom tilstedeværelsen av Helicobacter
spp. og både mild til moderat epithelial skade og mild til moderat intraepitelial lymfocytter infiltrasjon (figur 1B) av hjørnetann magen (p < 0,05). Ingen statistisk signifikant korrelasjon ble funnet mellom Helicobacter
infeksjon og mage mucosal atrofi eller fibrose, lamina propria
Lymfoplasmacytær infiltrasjon eller lymphofollicular hyperplasia. Ingen signifikante forskjeller ble funnet med hensyn til bakteriekolonisering densitet mellom begge mage regioner (p 0,05).
Antallet Helicobacter
-positive tilfeller detektert med de forskjellige metodene var signifikant forskjellig (p 0,05). Positive IHC resultater var ikke signifikant forskjellig over hver mage region (p > 0,05), mens tallene oppnådd med HE, GM og qPCR signifikant forskjellig mellom kroppen og antrum (p < 0,05).
Diskusjon
i denne studien ble det observert en høy forekomst av gastritt (95,7%). Disse resultatene er i samsvar med andre studier rapporterer forekomst av gastritt som et vanlig funn hos hunder [14,31,32]. I motsetning til dette ble gastriske erosjoner eller sår sjelden finnes i disse dyrene.
NHPh infeksjon ble bestemt ved fire metoder (HE, MG, IHC og qPCR) og en utbredelse på 87,0% i hunder ble detektert. Disse resultatene er i overensstemmelse med de som er tilgjengelige i litteraturen, som dokumentert høy forekomst av NHPh i hjørnetann mageslimhinnen [12,19,33-35]. I vår studie canine NHPh infeksjon ble signifikant ledsaget av mild til moderat intraepitelial lymfocyttinfiltrasjon og mild til moderat gastriske epitel skade, uavhengig av magen sted. En klar sammenheng mellom hund gastritt og Helicobacter
infeksjon var imidlertid ikke etablert noe som er i samsvar med resultatene fra andre [11,14,15,34].
I en tidligere undersøkelse, hvor mange prosent av Helicobacter
-positive tilfeller oppdages etter HE farging av hjørnetann mageprøver var 17,5% [24]. I denne studien ble alle prøvene undersøkt av to patologer stor erfaring innenfor påvisning av Helicobacter
spp.
Organismer etter rutine farging. Dette kan ha spilt en rolle i høyere treffprosent (65,2%) rapporterte her.
Etter avtale med tidligere studier, ble NHPh ofte observert ikke bare i de overfladiske slim og innenfor mage kjertler, men også intracellulært, i cytoplasma parietalceller [31,33,36] (figur 1C og D). Spiral-formet organismene i denne subcellulære plassering var vanskelig å oppdage etter at han og MG flekker på grunn av cytoplasma granulering av parietalceller. I våre hender, IHC viste seg å være et meget verdifull teknikk for å identifisere NHPh i disse celler (figur 1D). Samlet sett viste IHC farging de høyeste Helicobacter
-positive verdier (82,6%). Dette funnet er i samsvar med andre resultater viser at kommersielt tilgjengelige antistoffer mot H. pylori
er nyttige for påvisning av Helicobacter spp
. . I parafin innebygde prøver fra hunden mager [24,26,36]
Tidligere studier rapporterte ingen statistisk signifikant forskjell mellom påvisning av Helicobacter
organismer ved IHC og PCR-teknikker (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) rapporterte at PCR-analyse hadde høyere sensitivitet og spesifisitet enn de andre metodene [4]. Men i vår studie, prevalens av Helicobacter
spp.
Oppnådd med qPCR var lavest (47,8%). Tidligere undersøkelser har vist at formalin fiksering og parafin innebygging hemme PCR-analyse [37,38]. Sjödin et al.
(2011) sammenlignet effektiviteten av DNA-amplifikasjon fra friske (n = 28) og parafin innebygd (n = 28) prøver for identifikasjon av Helicobacte
r spp.
Fra forskjellige organer ( feline magen, tolvfingertarm, lever og bukspyttkjertel) og konkluderte med at middelverdien av DNA-konsentrasjon oppnådd var høyere når det oppnås fra friske vev [39]. DNA-analyse av parafin innleiret vevsprøver ved hjelp av PCR /qPCR kan være kompromittert på grunn av DNA-fragmentering, inhiberende substanser, eller en kombinasjon av begge. Den formalinfiksering kan faktisk føre til DNA-fragmentering, så vel som delvis ødeleggelse av DNA [38,40] og PCR-reaksjonene kan også bli inhibert av formalin rest [37]. De negative effektene av formalin er direkte knyttet til varigheten av fiksering [40]. Selv om prøvene inkludert i denne studien ble alle behandlet i det samme laboratorium og derfor utsatt for de samme standard protokoller, varighet av fiksering kan variere mellom prøvene på grunn av variasjon i tidsintervallet mellom prøvetaking og deres ankomst til laboratoriet.
Forskjellige molekylære metoder for identifikasjon av NHPh arter har blitt adressert [4,14,24,28]. Teknikker basert på deteksjon eller sekvensering av 16S eller 23S rRNA-kodende gener kan imidlertid ikke skille mellom de forskjellige hund og katt gastriske Helicobacter
arter, mens tester basert på deteksjon eller sekvensering av de hsp60
genet, urease A- og B-gener eller gyrB
genet tillate identifikasjon av disse bakteriene til artsnivå [9].
i vår studie amplikonene innhentet i H. heilmannii
bestemt qPCR viste bare ca 92% homologi med H . heilmannii, etter som hittil bare har vært dyrket fra mageslimhinnen katter. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Molekylære mekanismer for gastrisk epitel celle adhesjon og injeksjon av CagA av Helicobacter pylori
• Forekomst og overlevelse for øsofagal og magekreft i England mellom 1998 og 2007, en populasjonsbasert studie