Prisotnost in pomen Helicobacter spp. v želodčni sluznici portugalskega dogs

prisotnost in pomen Helicobacter spp.
v želodčni sluznici portugalski psov
Abstract
Ozadje
Non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh), so prav tako lahko povzroči bolezen pri ljudeh. Psi so naravni rezervoar za mnoge od teh vrst. Tesno in intenzivno človeški stik z živalmi je bila opredeljena kot dejavnik tveganja, zato je pomembno zoonoza pomen pripisujejo NHPh.
Metode
Za določitev razširjenosti Helicobacter
vrst in želodčne histopatološke spremembe, povezane so bile ocenjene želodčne sluznice vzorcev 69 psov.
Rezultati
samo en pes predstavila normalno histopatološko sluznico z odsotnostjo-spiralnih obliki organizmov. Normalno želodčne sluznice in prisotnost-spiralno oblikovane bakterije opazili pri dveh psih. Vse ostale živali predstavila histopatoloških sprememb predstavnika gastritis. Helicobacter
vrste so pri 60 psih (87,0%) zazna z vsaj eno metodo odkrivanja. Histološka, ​​histokemijske in imunohistokemičnim ocene so pokazale, da Helicobacter
spp. so bili prisotni v 45 (65,2%), 52 (75,4%) in 57 (82,6%) psov, oz. -Spiral oblike bakterije so bile ugotovljene z analizo qPCR v 33 (47,8%) psih. H. heilmannii-
podobnih organizmov so bile ugotovljene v 22 živali (66,7%) in pretežno v antralnih želodca regiji. H. salomonis
je druga najbolj razširjena vrsta (51,5%), čeprav je bilo v glavnem najdemo v povezavi z drugimi Helicobacter
spp. in v telesu želodčni regiji. so redkeje zaznali H. bizzozeronii in H. felis
.
sklepe
je bilo sklenjeno, da se kljub visoki pojavnosti in distribucijo po vsem svetu želodca NHPh pri psih, konkretnimi Helicobacter
vrst lahko razlikujejo med geografskimi regijami. Okužbe NHPh so znatno spremlja blago do zmerno intraepitelijske limfocitov infiltracijo in blago do zmerno želodčne epitelne poškodbe, vendar ni bilo mogoče vzpostaviti jasno razmerje med gastritis in Helicobacter
okužbe.
Ključne besede
Pasja želodčne sluznice Psi Ne Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) histokemija Imunohistokemija (IHC) verižne reakcije s polimerazo (PCR) v želodcu Uvod
rodu Helicobacter
je sestavljeno iz vsaj 40 vrst [1]. Med njimi H. pylori
se šteje kot pomemben patogen, katerega naravni gostitelj je človek, vendar je njegova prisotnost v pasji želodec so redko poročali o [2-4].
Veliko število non-Helicobacter pylori Helicobacter
vrste (NHPh) so bila priznana tudi pri ljudeh in pri različnih živalih. Prej so bili NHPh splošno znan kot H. heilmannii sensu lato
(SL) in vključeni H. suis
, vrste, ki se naselijo v želodec prašičev in skupino vrst, je znano, da kolonizirajo želodčne sluznice psov in mačk H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
in H. heilmannii v ožjem pomenu
(ss) [5] . Večina teh želodca NHPh so prav tako lahko povzroči bolezen pri ljudeh [6,7]. Tesno in intenzivno človeški stik z živalmi je bila opredeljena kot dejavnik tveganja, zato je pomembno zoonoza pomen pripisujejo NHPh [6,8,9].
V hišnih živali, želodca s Helicobacter
spp. Pogosto so bili opisani z razširjenostjo v razponu od 67-86% v klinično zdravih psih in 61-100% pri živalih, ki predstavljajo kronično bruhanje [10-14]. Ti mikroorganizmi so bile odkrite v želodcu približno 100% laboratorijskih Beagle in psov iz lokalnih zavetiščih [15-17]. Prevladujoča želodca Helicobacter spp.
Za mačke in psi so H. felis
, H. bizzozeronii
in H. heilmannii v ožjem pomenu
(ss
), medtem ko je H. salomonis
manj pogosto odkrijejo in razširjenost H. cynogastricus
in H. baculiformis
še ni bila raziskana [9,18-20]. Mešane okužbe z različnimi vrstami se lahko pojavi tudi [3,19].
Medtem ko so številne študije poročajo, da ima fundus in telo večjo bakterijske gostoto in večjo verjetnost, da najdejo Helicobacter
spp. [17,21,22] drugi so brez pomembnih razlik med gostoto NHPh v fundusa, telesa in antruma [2,23-26] o pasji želodec. Neskladja v teh rezultatov je mogoče pripisati različnim laboratorijskih diagnostičnih metod z različnimi raziskovalnimi skupinami, ki se uporabljajo.
Diagnostične metode za Helicobacter
spp.
Lahko neinvazivno in invazivno [24]. Non-invazivne metode, kot so serologijo ali odkrivanje bakterijske DNA in antigeni v blatu ne zahtevajo želodčne biopsijo ali anestezijo. Med invazivne metode, kot so bakterijske kulture, histopatologijo, brisov, elektronske mikroskopije ali verižna reakcija s polimerazo (PCR) lahko zahteva v želodcu biopsijo, ki je pogosto pridobljene z endoskopijo pod anestezijo ali z obdukcijo. Običajno so Helicobacter
organizmi niso zlahka vidne tudi s hematoksilinom in eozin (HE) madež in tako je njihova neposredna opazovanja v biopsijo osebkov poudarjena z uporabo posebnih madežev, kot je spremenjena Giemsa (MG) madež. Več izdelajo in občutljiva Helicobacter
-detection metode, kot so imunohistokemiji (IHC) ali verižni reakciji s polimerazo (PCR), so raziskovalna orodja redko uporabljajo v diagnostične okolju.
Več preiskavah so razpravljali o razširjenosti Helicobacter spp.
pri psih [2,10,11,14,16], vendar le v nekaj študijah so bile določene posebne vrste, ki so prisotne v pasji želodec [4,19,27,28]. Natančna identifikacija želodčnih helicobacters na ravni vrste je bistvenega pomena, da se ugotovi razširjenost in klinični pomen vseh taksonov. Cilj te raziskave je bil ugotoviti razširjenost različnih želodčnih Helicobacter
vrst, ki so prisotne v različnih želodčne regijah pasji želodec (telesno in antruma) z histološkega, histokemičnih, imunohistokemičnim in molekularnih diagnostičnih tehnik. Stopnja kolonizacije je bila značilna in povezana z ustreznimi histopatoloških sprememb v pasji želodčne sluznice.
Metod
Zbiranje vzorcev
želodcu tkiva so bili pridobljeni od 69 psov (45 moških in 24 ženskih, starih od 3 mesecev do 15 let). Vzorci so bili naključno izbrani iz arhiva Laboratorija za Veterinary Pathology, ICBAS-UP (Portugalska), kjer so jih prejeli med 2010 in 2013. Vzorci so bili pridobljeni od 20 psov med endoskopskimi postopki, od pet med operacijo in od 44 psov med obdukcijo pregledi. Vsi postopki (kirurški izrezu in obdukcijo izpit) so bile izvedene v kliničnem kontekstu poskuša za zdravljenje živali, ki temeljijo na najboljših klinične presoje njihovih udeležujejo delavci. Uporaba izrežejo tkiv za raziskave, je bilo pojasnjeno, da lastniki in privolitev je bilo pridobljeno za vsak primer. Nobeden od ukrepov so bili izključno za raziskovalne namene in preiskovalci imeli nobenega vpliva na izbiro in izvedbo teh postopkov. Samo želodca vzorcev v dobrem stanju ohranitve so bili vključeni v to študijo.
Tkiva so bile določene v 10% nevtralnem zastalega formalinu in vgrajeni v parafinskega voska. Tri zaporedne dele 3 um so bile narejene, ena se obarvajo s HE, druga z MG madež in tretji je bil uporabljen za imunohistokemično barvanjem.
Ocena vzorca
želodčni vzorci so bili ocenjeni neodvisno dva opazovalca (IA in FG ). Histopatoloških parametri, kot so spremembe v celularnosti so fibrozo lamine Propria
in ščitnice atrofije analizirali po podatkih Svetovne mala veterinarskega združenja živali (WSAVA) smernic [29]. Stopnja morfoloških značilnosti in vnetnih sprememb je bila ocenjena kot običajno, blago, zmerno ali označi s pomočjo razpoložljivih WSAVA prebavil standardizacijo vizualno analogno [29].
Mikroskopske Oceno je izvedla analizo celoten odsek želodčnega tkiva. Prisotnost Helicobacter
spp.
Je bila ocenjena s HE in MG madeži in IHC. Pes je bil razvrščen kot Helicobacter
pozitiven, ko je eden od teh načinov je pozitiven rezultat. Poleg tega je kolonizacija bakterijske gostote kvantificirati: + nekaj organizmi (< 10 organizmi /400-krat); ++, Zmerno število organizmov (10 do 50 organizmi /400-krat); +++, Veliko število organizmov. (≫ 50 organizmi /400-krat) [24]
Imunohistokemija
Za imunohistokemičnim študiji so deparaffinised sekcije, je hidrirani in antigen pridobivanje izvaja v lonec, v 10 mmol /L natrijev citrat, pH 6,0, v 2 minutah (min). Ploščice smo ohladili 10 minut pri sobni temperaturi in dvakrat speremo v trifosfat pufrom (TBS), 5 minut. Sistem za odkrivanje NovolinkTM Max-Polymer (Novocastra, Newcastle, UK) je bila uporabljena za vizualizacijo, v skladu z navodili proizvajalca. Po blokiranje endogenega peroksidazo s 3% vodikovega peroksida v metanolu za 10 minut, smo sekcije inkubirali preko noči pri 4 ° C, s poliklonskimi protitelesi proti H. pylori
(RBK012; Zytomed, nemška), ki kaže radioinkorporacijo s široko paleto bakterije, ki pripadajo Helicobacter
rodu. Odseki smo splaknili z TBS med vsakim korakom postopka. Barva je bil razvit za do 7 minut pri sobni temperaturi z 3,3'-diamino-benzidinom (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) in oddelke smo nato rahlo jih nasprotno s hematoksilinom, dehidrirani in montiran. Pozitivna radioinkorporacijo smo zabeležili kot posebno zlato-rjavo označevanje bakterij, ki se nahajajo na površino sluznice v želodcu jame in žlez in v parietalnih celicah.
Ekstrakcijo, pomnoževanje in določanje zaporedja DNK
DNA je bila vzeta iz 5 zaporednih rezin 20 uM z uporabo DNeasy krvjo in tkivi Kit (Qiagen), v skladu z navodili proizvajalca. Helicobacter
za posamezne vrste qPCRs temeljijo na kratek fragment genov ureaze A in B so bili razviti za identifikacijo H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii
in H. salomonis
. Za generacijo standardov za vsak qPCR, velik del ureAB genski skupini od H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. salomonis
R1053 (1224 bp) in H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) smo pomnožili s pomočjo začetnih oligonukleotidov U430F in U1735R, kot je bilo prej [30] opisano. Standard je sestavljalo 10-kratnih-razredčitev od 10 8 PCR pomnožkov za vsakih 10 ul iz reakcijske zmesi. Eden ul ekstrakta matrični DNA smo suspendirali v 10 ml reakcijske zmesi, ki vsebuje 0,25 ul za naprej in nazaj začetnih oligonukleotidov (tabela 1), 3.5 ul HPLC vodo in 5 ul SensiMix ™ SYBR No-Rox (Bioline Reagenti Ltd, Velika Britanija). Oba standarda in vzorcev smo izvedli v dveh izvodih na CFX96 ™ RT-PCR System z C1000 Thermal ciklerja (Bio-Rad, Hercules CA, ZDA). The (različica 1.6) programska oprema Bio-Rad CFX Manager je bila uporabljena za izračun ciklov praga (CT) -values ​​in analize taljenja krivulja pomnožene DNA. Povprečne vrednosti dvojnikov so bili uporabljeni za količinsko Helicobacter
DNK v vzorcih tkiva. Da bi izključili lažno pozitivnih vzorcev, so bili amplikoni iz vsakega pozitivnega vzorca sequenced.Table 1 Seznam oligonukleotidov, ki se uporabljajo za qPCR
Primer ime
nukleotidnega zaporedja
Posebnosti
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA OAS AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC SCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

Statistična analiza
hi-kvadrat testa Pearson in Fisherjev test, so bili uporabljeni za določitev odvisnosti med dvema kategorijama. p vrednosti < 0,05 je štela za statistično značilne. Statistična analiza je bila izvedena z uporabo statističnega paketa SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística LDA, Lizbona, Portugalska).
Rezultati
A skupaj 117 želodčnih vzorcev (66 od regije telesa in 51 iz so bili analizirani antruma regija).
med 69 živali, sta bila oba v želodcu regije na voljo za oceno v 48 psov, medtem ko samo telesnih ali antruma regijah so bili na voljo v 18 in treh psov, oz.
od 69 psov, samo ena predstavila normalno histopatološko sluznico z odsotnosti-spiralnih obliki organizmov. Normalno želodčne sluznice in prisotnost-spiralno oblikovane bakterije opazili pri dveh psih (2,9%). Preostale živali, predstavljene histopatoloških sprememb predstavnik gastritis (66/69 oziroma 95,7%) (tabela 2). Na osnovi histopatoloških sprememb v želodčne sluznice, smo diagnosticirali blago do zmerno kroničnega gastritisa pri 88,4% (61/69), ki vpliva na želodčni telo 51,5% (34/66) in antralnih regijo 92,2% (47/51 ) o animals.Table 2 tabeli so povzeti gostoto histopatoloških sprememb in kolonizacija opaziti v pasji želodec, v skladu s pozitivnimi NHPh vrste specifičnih rezultatov PCR, pozitivnih rezultatov rodu in negativnih rezultatov
PCR pozitivne rezultate pri določenih vrst identifikacija, ne glede na želodcu lokacija (odstotek & število) (n = 33)
Pozitivni rezultati za Helicobacter spp. (Odstotek & število) (n = 27)
Negativni rezultati (odstotkov & število) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
HH + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
histopatologijo razvrščanje
(Day et al., 2008)
Normal
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
0
7.4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
blag gastritis
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 09/03)
Zmerna gastritis
12.1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48.1 (13/27)
44,4 (4/9)
Označeni gastritis
0
0
0
0
0
6.1 (2/33)
0
0
0
0
11.1 (1/9)
poškodbo epitelijskega
Blaga
27.3 (9/33)
3.0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33)
30.3 (10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0.003
Zmerna
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 (1 /33)
0
0
14.8 (4/27)
11,1 (1/9)
fibroza /atrofijo sluznice
Blaga
18.2 (6/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55.6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Zmerna
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
3.7 (1/27)
11,1 (1/9)
intraepitelijskih limfocitov
Blaga
15.2 (5/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15,2 (5 /33)
0
0
6.1 (2/33)
29,6 (27/08)
11.1 (1/9)
0,016
Zmerna
3,0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14.8 (27/04)
0
Lymphofollicular hiperplazija
Mild
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (27/08)
11.1 (1/9)
NS
Bakterijska gostote (na podlagi Rezultati IHC)
nA
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (27/04)
++
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (27/07)
+++
24.2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legenda: Hh
, H. heilmannii podobni
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
Bakterijska gostoto:. +, Nekaj ​​organizmov; ++, Zmerno število organizmov; +++, Veliko število organizmov. NA, ne uporablja. NS, ni pomembno (p > 0,05).
Tako blagi do zmerni epitelijske poškodbe in blago do zmerno intraepitelijske limfocitov infiltracijo so našli v 88,4% (61/69)
želodca sluznice atrofijo žlezami gnezdenje ali fibrozo je. prisotna pri 44,9% psov (31/69). V 18,2% živali je ta sprememba opazili v regiji telesa (12/66) in na 47,1% v antruma regiji (24/51) v pasji želodec.
Nenormalna nevtrofilnih infiltracijo je bila odkrita šele v želodcu antruma dve živali: v eni je ta sprememba blaga in po drugi strani, je bila označena in so povezana z razjedah želodca. Drugih vnetnih celic, ki so sestavljeni v blagi infiltracijo mastocitov so v telesu regiji štirih živali in v antruma dveh živalih opazili.
Med vsemi živalmi, 87,0% so bili pozitivni (60/69) (slika 1A) in 13,0% so bili negativni za Helicobacter
spp. (9/69), neodvisno od testa za odkrivanje bakterije. Ne glede na lokacijo želodcu, Helicobacter
spp. Opazili so z uporabo visoko šolstvo, MG in IMC v 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) in 82,6% (57/69) za pse, oz. Z HE obarvanje, so-spiralne oblike bakterije odkrili pri 62,1% vzorcev telesnih (41/66) in 70,6% za antralnih vzorcev (36/51). Uporaben MG madež, to je 68,2%, pri vzorcih telesnih (45/66) in 78,4% za antralnih vzorcev (40/51). Helicobacter
antigena odkril imunokemija v 84,9% (56/66) vzorcev telesa in pri 80,4% (41/51) od antralnih vzorcev (tabela 3). Slika 1 Helicobacter
spp. V pasji želodec. A) Številni-spiralno oblikovane bakterije kolonizacije površinsko epitel želodčne jamo. HE. Bar = 10 mikrometrov; B) Opomba intraepitelijske limfocitov infiltracijo v globljih želodčnih žlez antralnih sluznice NHPh pozitivnim psa. HE. Bar = 20 um. C) Prisotnost NHPh znotraj parietalnih celicah pasjega želodca telesa regiji (črna puščica). MG. Bar = 10 mikrometrov; D) Velike količine Helicobacter
antigena v površinskem želodčne sluz in v lumen želodčnih žlez v telesu regiji pasji želodec. Imunoperoksidazni-diaminobenzidine lazura z Mayer hematoksilinom za nasprotno. Bar = 50 um. Na notranji strani kaže Helicobacter
antigena v parietalnih celicah, včasih zaznavnih, kot je dobro ohranjenih spiralne oblike organizmov ali rjave okrogle pike. Imunoperoksidazni-diaminobenzidine lazura z Mayer hematoksilinom za nasprotno. Bar = 10 mikrometrov.
Tabela 3 Odkrivanje Helicobacter spp. v različnih želodčne predelkov pasji želodec ponavljajočo različnih diagnostičnih metod
želodca regija
metod odkrivanja Poslovni
Positive (odstotni & številka)
HE

MG
IHC *
PCR
telesa (n = 66)
62,1 (41/66)
68.2 (45/66)
84,8 (56/66)
37.9 (25/66)
antruma (n = 51)
70.6 (36/51)
78.4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51.0 (41/51)
Legenda: HE: hematoksilinom-eozin; MG: spremenjen Giemsu; IHC: imunohistokemija; PCR.. Verižna reakcija s polimerazo
* Pozitivni rezultati, pridobljeni z IHC ni pomembno razlikuje glede na posamezne želodčne regiji (p > 0,05)
Dodatne identifikacije na ravni vrste je bila narejena z Helicobacter
vrste za posebne qPCRs . Helicobacter
spp. so odkrili pri 47,8% živali (33/69) (tabela 3). Večina vzorcev je bilo pozitivnih na H. heilmannii
posebno qPCR. Vendar pa amplikoni pokazala le približno 92% homologijo s H. heilmanni s.s.
. Zato so bili ti primeri razvrsti kot H. heilmannii-
všeč.
V 51,5% (17/33) pozitivnih vzorcev, je bila ugotovljena le ena Helicobacter
vrste, medtem ko so bile mešane okužbe odkrili pri 48,5% (16/33) (tabela 2). H. heilmannii-
kot so organizmi najbolj pogosto pojavljajo (22/33 oziroma 66,7%), ki so bili opredeljeni v desetih psih kot eno samo okužbo in v 12 psov mešane okužbe. H. salomonis
je bila druga najbolj razširjena vrsta (17/33 ali 51,5%), čeprav je bilo večinoma mogoče najti v povezavi z drugimi NHPh (42%) kot pa sama (9,1%). Enake deleže H. felis
in so bile odkrite H. bizzozeronnii
(6/33 ali 18,2%), bodisi kot posamezne (6,3%) ali mešanih okužbah (12,1%). Mešane okužbe s H. heilmannii
Tretja pot in H. salomonis
Najpogosteje so se pojavile (33,3%) (tabela 2). Na področju telesa, je bila najpogosteje ugotovljene vrste H. salomonis
(44,0%), medtem ko je v antruma najbolj razširjena vrsta je bila H. heilmannii-
všeč (57,7%) (tabela 4) .table 4 Specifična Helicobacter vrste s PCR odkrite v različnih želodčnih oddelkih pasji želodca
posebnega PCR- Helicobacter spp. Pozitivni rezultati

želodca regija (odstotkov & številka)
Body
antruma
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii podobnih
24.0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7.7 (26/02)
H. felis
8.0 (25/02)
3.8 (26/01)
H. bizzozeronnii
4.0 (25/01)
11.5 (26/03)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (25/01)
3.8 (26/01)
H . heilmannii podobnih + H. salomonis
8.0 (25/02)
11.5 (26/03)
H. heilmannii podobno + H. felis
4.0 (1 /25)
3.8 (26/01)
H. felis + H. salomonis
4.0 (25/01)
0
obstaja statistično značilna korelacija med prisotnostjo Helicobacter
spp. in oba blage do zmerne epitelne škodo in blage do zmerne intraepitelijske limfocitov infiltracijo (slika 1B) te pasji želodec (p 0.05). Ni statistično značilno bile ugotovljene korelacije med Helicobacter
okužbe in želodčne sluznice atrofijo ali fibrozo, lamine proprie
Hodgkinova infiltracija ali lymphofollicular hiperplazijo. ni bilo zaznati bistvenih razlik glede bakterijske gostote kolonizacije med obema želodčne regijah (p > 0,05).
število Helicobacter
-positive primerih odkritih z različnimi metodami razlikovala značilno (p < 0,05). Pozitivni rezultati IHC ni pomembno razlikuje glede na posamezne želodčne regiji (p > 0,05), medtem ko so številke, pridobljene s HE, GM in qPCR bistveno razlikovale med telesom in antruma (p < 0,05).
Razprava
v tej študiji so opazili visoko razširjenost gastritis (95,7%). Ti rezultati so v dogovoru z drugimi študije poročanje o pojavu gastritisa kot skupna ugotovitev pri psih [14,31,32]. V nasprotju s tem pa so se želodčne erozije ali razjede redko najdemo v teh živali.
Okužbo NHPh je bila določena s štirimi metodami (HE, MG, IHC in qPCR) in razširjenosti 87,0%, pri psih je bila odkrita. Ti rezultati so skladni s tistimi, ki so v literaturi, ki je dokumentirana visoko prevalenco NHPh v pasji želodčne sluznice [12,19,33-35]. V naši raziskavi psih je bila okužba NHPh bistveno spremlja blago do zmerno intraepitelijske limfocitov infiltracijo in blago do zmerno želodčne epitelne škodo, ne glede na lokacijo želodca. Jasna povezava med udarci gastritis in Helicobacter
okužbe pa je bil, ni dokazala, kar je v skladu z rezultati drugih [11,14,15,34].
V prejšnji preiskavi, odstotek Helicobacter
-positive odkritih primerov, ko je obarvanje pasje želodca vzorcev je bilo 17,5% [24]. V sedanji raziskavi, so bili vsi vzorci pregledala dva patologi zelo izkušeni pri odkrivanju Helicobacter
spp.
Organizmov po rutinski obarvanje. To bi lahko igral vlogo v višjo stopnjo zaznavanja (65,2%) so poročali tukaj.
V skladu s predhodnimi študijami, so NHPh pogosto opazili ne le v površinske sluzi in v želodčnih žlez, pa tudi znotraj celice, v citoplazmi parietalnih celic [31,33,36] (slika 1C in D). -Spiralno oblikovane organizmi prisotni v tem konkretnem subcelično lokaciji je bilo težko odkriti po HE in MG obarvanjem zaradi citoplazmi granulacijo parietalnih celicah. V naših rokah, IHC zdi, da je zelo dragoceno tehniko za ugotavljanje NHPh znotraj teh celic (Slika 1D). Na splošno, IHC obarvanje pokazala najvišje Helicobacter
-positive vrednosti (82,6%). Ta ugotovitev je v dogovoru z drugimi rezultati prikazujejo, da so na voljo na tržišču protiteles proti H. pylori
so uporabni za odkrivanje Helicobacter
spp. . V parafinskih vgrajenih vzorcev psov želodcev [24,26,36]
Prejšnje študije poročajo ni statistično pomembne razlike med odkrivanje Helicobacter
organizmov z IHC in PCR tehnike (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) je poročal, da je PCR večjo občutljivost in specifičnost od drugih načinov [4]. Vendar pa je v naši raziskavi je stopnja razširjenosti Helicobacter
spp.
Pridobljen s qPCR je bil najnižji (47,8%). Prejšnje raziskave so pokazale, da formalin fiksiranje in parafin embedding ovirajo analizo PCR [37,38]. Sjödin et al.
(2011) je primerjala učinkovitost pomnoževanja DNA iz sveže (n = 28) in parafin vgrajeni (n = 28) vzorcev za identifikacijo Helicobacte
r spp.
Iz različnih organov ( mačji želodcu, dvanajstniku, jeter in trebušne slinavke) in ugotovil, da je bila povprečna vrednost koncentracije DNA doseči višje, če so pridobljeni iz svežega tkiva [39]. Analiza DNK parafinski vgrajenih vzorcev tkiva z uporabo PCR /qPCR je lahko ogrožena zaradi razdrobljenosti DNK, ki zavirajo snovi ali kombinacije obojega. Formalin posnetek lahko dejansko povzroči fragmentacijo DNA, kot tudi delno uničenje DNK [38,40] in reakcije PCR lahko zavre tudi s formalinom ostanka [37]. Negativni učinki formalina so neposredno povezane s trajanjem posnetka [40]. Čeprav so vzorci vključeni v to študijo, so bili vsi obdelani v istem laboratoriju in zato podvrženi istim standardnih protokolov, lahko trajanje posnetka razlikuje med vzorci zaradi razlik v časovnem intervalu med vzorčenjem in njihovem prihodu v laboratorij.
Different molekularne pristope za identifikacijo NHPh vrst, so bili obravnavani [4,14,24,28]. Tehnike, ki temeljijo na odkrivanju ali zaporedja 16S ali 23S rRNA-kodirajo geni lahko, pa ne razlikuje med različnimi psih in mačkah želodca Helicobacter
vrst, medtem ko testi na osnovi odkrivanja ali zaporedja
gena hsp60 je ureaze A in B geni ali gyrB
gen omogočajo identifikacijo teh bakterij na ravni vrste [9].
v naši raziskavi, amplikoni pridobljeni v H. heilmannii
posebno qPCR je pokazala le približno 92% homologijo s H . heilmannii
, ki je bila doslej kultivirani samo iz želodčne sluznice mačk. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Molekularni mehanizmi želodca epitelijskega oprijem in injekcijo CagA s Helicobacter pylori
• Pogostnost in preživetje požiralnika in želodca raka v Angliji med letoma 1998 in 2007, študijo, ki temelji na prebivalstvo