Buvimas ir reikšmė Helicobacter spp. skrandžio gleivinės Portugalijos dogs

buvimą ir svarbą Helicobacter spp.
į skrandžio gleivinę Portugalijos šunys
Anotacija pervežimas Background pervežimas Ne Helicobacter pylori pervežimas Helicobacters (NHPH) taip pat galėtų sukelti žmonių ligų. Šunys yra natūralus rezervuaras daugelis iš šių rūšių. Uždaryti ir intensyvus žmogaus sąlytis su gyvūnų buvo nustatyta kaip rizikos veiksnys, todėl svarbus zoonozes reikšmė buvo priskirtas NHPH.
Metodai
Norėdami nustatyti Helicobacter
rūšių paplitimą ir skrandžio histopatologinių pokyčius, susijusius buvo įvertintas skrandžio gleivinės mėginiai 69 šunų.
rezultatai
Tik vienas šuo pristatė normalų histopatologiniam gleivinę su nesant spiralės formos organizmams. Normalus skrandžio gleivinės ir spiralės formos bakterijų buvimą buvo pastebėtas dviejų šunų. Visi likę gyvūnai pateikti histopatologinių pokyčių atstovas gastritas. Helicobacter
rūšių buvo aptikta 60 šunų (87,0%) bent vieną aptikimo metodą. Histologinis, histocheminės ir imunohistocheminius vertinimai parodė, kad Helicobacter
spp. dalyvavo 45 (65,2%), 52 (75,4%) ir 57 (82,6%) šunims, atitinkamai. Spiraliniai formos bakterijos buvo aptikta qPCR analizė 33 (47,8%) šunims. H. heilmannii-
panašių organizmų buvo nustatyta 22 gyvūnams (66,7%) ir daugiausia antralinių skrandžio regione. H. salomonis
buvo antra labiausiai paplitusi rūšis (51,5%), nors ji buvo daugiausia randama kartu su kitais Helicobacter
spp. ir kūno skrandžio regione. H. bizzozeronii ir H. felis
buvo rečiau aptinkami.
Išvadas
Buvo padaryta išvada, kad, nepaisant didelio sergamumo ir platinti visame pasaulyje skrandžio NHPH šunims, konkrečių Helicobacter
rūšių buvimas gali skirtis tarp geografinių regionų. NHPH infekcijos buvo žymiai lydi lengvas ar vidutinio sunkumo intraepitelinei limfocitų infiltracija ir lengvo ar vidutinio sunkumo skrandžio epitelio žalos, tačiau negali būti nustatytas aiškus ryšys tarp gastritas ir Helicobacter
infekcijos.
Raktiniai žodžiai
šunų skrandžio gleivinė Šunys Ne Helicobacter pylori
helicobacters (NHPH) histocheminio imunohistocheminis (IHC) polimerazės grandininė reakcija (PGR) Skrandžio Įvadas
genties Helicobacter
sudaro ne mažiau kaip 40 rūšių [1]. Tarp jų H. pylori
laikomas svarbiu patogeno, kurio natūralus kompiuteris žmogus, bet jo buvimas šunų skrandžio buvo retai [2-4].
A daug ne Helicobacter pylori Helicobacter
rūšys (NHPH) taip pat buvo pripažintas žmogaus ir kelių gyvūnų. Anksčiau NHPH paprastai buvo vadinama H. ​​heilmannii sensu lato pervežimas (SL) ir įtraukti H. suis
, rūšies kolonizavimo kiaulių skrandžiai ir rūšių grupės, žinomos kolonizuoti skrandžio gleivinę šunų ir kačių H. felis
H. bizzozeronii
, H. salomonis
H. cynogastricus
, H. baculiformis parsisiųsti ir H. heilmannii sensu stricto
(SS) [5] , Dauguma šių skrandžio NHPH taip pat gali sukelti ligą žmonėms [6,7]. Uždaryti ir intensyvus žmogaus sąlytis su gyvūnų buvo nustatyta kaip rizikos veiksnys, todėl svarbus zoonozes reikšmė buvo priskirtas NHPH [6,8,9].
Naminių gyvūnėlių, skrandžio Helicobacter
spp. dažnai buvo aprašyta su paplitimas svyruoja nuo 67-86% kliniškai sveikų šunų ir 61-100% gyvūnų, keliančių lėtinis vėmimo [10-14]. Šie mikroorganizmai buvo aptikta apie 100% laboratorinių biglių veislės šunimis ir šunims nuo vietos prieglaudų [15-17] skrandį. Vyraujantis skrandžio Helicobacter spp.
Katėms ir šunims, H. felis
H. bizzozeronii parsisiųsti ir H. heilmannii sensu stricto
(SS
), o H. salomonis
yra rečiau aptinkami ir H. cynogastricus
paplitimas ir H. baculiformis
dar nebuvo ištirtas [9,18-20]. Mišrios infekcijos su skirtingų rūšių, taip pat gali atsirasti [3,19].
Nors daugelis tyrimų, pranešė, kad dugnas ir kūnas turi aukštąjį bakterijų tankį ir didesnę tikimybę rasti Helicobacter
spp. [17,21,22] kiti nerado reikšmingų skirtumų tarp NHPH tankis dugno, kūno ir šunų skrandžio antralinėje dalyje [2,23-26]. Į šiuos rezultatus neatitikimai gali būti priskirta prie naudojamų įvairių mokslinių tyrimų grupių skirtingų laboratorinių diagnostinių metodikų.
Diagnostikos metodai, kurie naudojami Helicobacter
spp.
Gali būti neinvazinis ir invazinės [24]. Neinvaziniai metodai, tokie kaip serologinius ar aptikti bakterijų DNR ir antigenai išmatose nereikia skrandžio biopsija ar anesteziją. Invazinių metodų, pavyzdžiui, bakterijų kultūros, histopatalogiją, tepinėlius, elektronų mikroskopijos arba polimerazės grandininė reakcija (PGR) gali reikalauti, skrandžio biopsija, kuri dažnai gautas per endoskopija taikant anesteziją arba skrodimą. Paprastai Helicobacter
organizmai nėra lengvai vizualizuoti su hematoksilinu ir eozinas (He) dėmių ir pan, jų tiesioginis stebėjimas biopsiją egzempliorių išryškina specialių dėmes, pavyzdžiui, keistas Giemsa (mg) dėmių naudojimui. Išsamesnis ir jautrios Helicobacter
-detection metodai, tokie kaip imunohistocheminis (IHC) arba polimerazės grandininės reakcijos (PGR) yra mokslinių tyrimų priemones, retai naudojami diagnostikos nustatymas.
Keletas tyrimų aptarė Helicobacter spp.
šunims [2,10,11,14,16] bet tik keletą tyrimų buvo nustatyti konkretūs rūšių, esančių šunų skrandžio [4,19,27,28]. Tikslus nustatymas skrandžio helicobacters iki rūšies lygyje yra labai svarbus siekiant nustatyti, paplitimą ir klinikinė reikšmė visų taksonų. Šio tyrimo tikslas buvo nustatyti, esančių skirtingų skrandžio regionuose šunų skrandžio (kūno ir Ertmė), naudojant histologinis, histocheminės, Imunohistocheminiais ir molekulinės diagnostikos metodus įvairių skrandžio Helicobacter
rūšių paplitimą. Kolonizacijos laipsnis buvo būdingas ir koreliuoja su atitinkamomis histopatologinių pokyčių šunų skrandžio gleivinę.
Metodai
mėginio paėmimo
Skrandžio audiniai buvo gauti iš 69 šunų (45 vyrų ir 24 moterų, kurių amžius nuo 3 mėnesių iki 15 metų). Mėginiai buvo atsitiktinai parinkti iš veterinarinės patologijos ICBAS-UP (Portugalija), kur jie buvo gauti tarp 2010 ir 2013 m mėginiai buvo paimti iš 20 šunų per endoskopinių procedūrų, nuo penkių operacijos metu ir nuo 44 šunų per skrodimas laboratorija archyvuose egzaminai. Visos procedūros (Chirurginės iškirpimas ir skrodimas tyrimas) buvo atlikti klinikinį kontekste bando gydyti gyvulius, remiantis geriausia klinikinės jų lankančių praktikų sprendimo. Iš akcizais apmokestinamų audinių naudoti moksliniams tyrimams buvo paaiškinta savininkams ir sutikimas buvo gautas kiekvienu atveju. Nė vienas iš veiksmų buvo imtasi tik mokslinių tyrimų tikslais ir tyrėjai neturėjo įtakos atrankos ir vykdymo tokių procedūrų. Tik skrandžio mėginius geros būklės išsaugojimo buvo įtrauktos į šį tyrimą.
Audiniai buvo nustatytas 10% neutralus buferiniame formalino ir įdėta į parafinas. Trys iš eilės skyriai 3 mkm buvo pagaminti, kurių viena yra tamsintas su HE, kitas su MG dėmių ir trečiasis imunohistochemiškai dažymo.
Imties vertinimas
skrandžio mėginius buvo vertinami nepriklausomai du stebėtojus (IA ir FG ). Histopatologiniai parametrai, tokie kaip pokyčių ląstelių skaičius, fibrozė Lamina Propria parsisiųsti ir liaukos atrofija buvo analizuojamas atsižvelgiant į Pasaulio Small Animal Veterinary Association (WSAVA) gaires [29]. Meteorologinių funkcijų ir uždegiminių pokyčių laipsnis buvo įvertintas kaip normalus, lengvas, vidutinio sunkumo ar pažymėtos naudojant turimą WSAVA virškinimo standartizacijos vizualinę analoginę [29].
Mikroskopinis vertinimas buvo atliekamas analizuojant visą skyrių skrandžio audinio. Helicobacter
spp.
Buvimas buvo įvertintas jis ir MG dėmių ir IHC. Šuo buvo klasifikuojama kaip Helicobacter
teigiamas, kai vienas iš šių metodų davė teigiamą rezultatą. Be to, bakterijų tankis kolonizacija buvo įvertintas: + keletas organizmai (< 10 organizmai /400X); ++, Vidutinio sunkumo skaičius organizmų (nuo 10 iki 50 organizmai /400X); +++ Daug organizmams. (≫ 50 organizmai /400X) [24]
imunohistocheminis
Dėl imunohistocheminio tyrimo skyriai buvo deparaffinised, hidratuotas ir antigeno paieška buvo atlikta greitpuodyje 10 mmol /L natrio citratas buferiu, kurio pH 6,0, 2 minutes (min). Skaidres buvo aušinamas 10 min kambario temperatūroje ir skalaujami du kartus trifosfato buferio druskų tirpalu (TBS) 5 min. NovolinkTM Max Polimeras aptikimo sistema (Novocastra Newcastle, UK) buvo naudojama vizualizacija, pagal gamintojo instrukcijas. Po blokavimo endogeninio peroksidaze su 3% vandenilio peroksido tirpalą metanolyje 10 min, dalys buvo inkubuotos per naktį 4 ° C, su polikloniniu antiserumo su H. pylori
(RBK012; Zytomed, Vokietijos), kuriame parodytas reaktyvumas su įvairių bakterijos, priklausančios Helicobacter
genties. Dalys buvo praplautos TBS tarp kiekvienos procedūros etape. Spalva buvo sukurtas iki 7 min kambario temperatūroje su 3,3'-diamino-Benzidino (DAB) (Sigma, St Louis, MO) ir skyriuose buvo tada švelniai counterstained hematoksilinu, dehidratuoti ir sumontuoti. Teigiamas reaktyvumas buvo įrašytas kaip atskira aukso rudos ženklinimo bakterijų, esančių ant gleivinės paviršiaus, skrandžio duobes ar liaukų ir pakauškaulio ląsteles.
Gavyba, PGR ir sekos DNR
DNR buvo išskirta iš 5 eilės griežinėliais 20 mikromolių naudojant DNeasy kraujo ir audinių rinkinį (QIAGEN), pagal gamintojo nurodymus. Helicobacter
rūšims būdingas qPCRs remiantis trumpą fragmentą ureazės A ir B genai buvo sukurtas H. heilmannii ss
, H. felis pervežimas, H. bizzozeronii
ir H. identifikavimo salomonis
. Dėl kartos standartus kiekvienam qPCR, didelė dalis ureAB genų klasterius nuo H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 BP), H. salomonis
R1053 (1224 BP) ir H. bizzozeronii
R1051 (1230 BP) buvo papildyta naudojant pradmenis U430F ir U1735R, kaip aprašyta anksčiau [30]. Standartinė sudarė 10-sulankstomomis skiedinių pradedant 10 8 PGR Amplikonų kiekvienam 10 įxL reakcijos mišinio. Vienas mikrol išgautos DNR šabloną buvo sustabdytas 10 iL reakcijos mišinio, sudaryto iš 0,25 įxL pirmyn ir atgal pradmenis (1 lentelė) 3,5 iL HPLC vandens ir 5 iL SensiMix ™ SYBR Ne-rox (Bioline Reagentai Ltd ", Jungtinė Karalystė). Abu standartai ir mėginiai buvo paleisti dviem egzemplioriais dėl CFX96 ™ AT-PGR sistema su C1000 termocikleriu (Bio-Rad, Hercules CA, JAV). Bio-Rad CFX direktorius (versija 1.6) programinė įranga buvo naudojama skaičiuojant ribinius ciklų (CT) k dydžiai ir lydymosi kreivės analizė papildyta DNR. Vidutinėmis vertėmis, dublikatai, buvo naudojamas kiekybinis Helicobacter
DNR audinių pavyzdžius. Norėdami pašalinti klaidingus teigiamus pavyzdžius, kad amplikonų nuo kiekvieno teigiamo mėginio buvo sequenced.Table 1 Sąrašas gruntai naudojami qPCR
Primer pavadinimas
nukleotidų seką
specifiškumas
Hfel_F2
GCT GGT GGC, ATC GAT ACG CAT
H. felis pervežimas pervežimas Hfel_R2 pervežimas TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAA KTG CTA PVG ARG BTK TC
H. heilmannii SS
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii SS

Hsal_FQ
BTK TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT ŠMC CAA, T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT Persijos įlankos, ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC BMT GCT AKTAS GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
KTG GCA AAT GCT GTG ggg PGS TGT TGG
H. bizzozeronnii

Statistinė analizė
Pearson chi-square testą ir tikslios Fišerio testas buvo naudojamos siekiant nustatyti ryšį tarp dviejų kategorijų priklausomybę. P vertes < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Statistinė analizė atlikta naudojant statistinį paketą "SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos E Serviços de Estatística Lda, Lisabona, Portugalija).
Rezultatai
117 skrandžio mėginius iš viso (66 iš kūno regione ir 51 iš išanalizuoti Ertmė regionas).
Tarp 69 gyvūnų, tiek skrandžio regionai buvo galima įvertinti 48 šunų kadangi vienintelė institucija arba Ertmė regionuose buvo galima 18 ir trys šunys, atitinkamai.
iš 69 šunų, tik vienas pateikti normalų histopatologiniam gleivinę su nesant spiralės formos organizmams. Normalus skrandžio gleivinės ir spiralės formos bakterijų buvimą buvo pastebėtas dviejų šunų (2,9%). Likusios gyvūnai pristatė histopatologiniai pokyčiai atstovybės gastritas (66/69 arba 95,7%) (2 lentelė). Dėl histopatologinių pokyčių skrandžio gleivinės pagrindu, mes diagnozuotas lengvas ar vidutinio sunkumo lėtiniu gastritu ir 88,4% (61/69) įtakos skrandžio kūno 51,5% (34/66) ir antralinių regionas 92,2% (47/51 ) iš animals.Table 2 lentelė, apibendrinanti histopatologiniai pakeitimus ir kolonizuojamą tankis pastebėtas šunų skrandžio, atsižvelgiant į teigiamus NHPH rūšiai būdingus PGR rezultatus, teigiamus genties rezultatus ir gauti neigiami rezultatai

PGR teigiami rezultatai, kurių konkrečių rūšių identifikavimas, nepriklausomai skrandžio vietą (proc & skaičius) (n = 33)

Teigiami rezultatai Helicobacter spp. (Proc & skaičius) (n = 27)
Neigiami rezultatai (proc & skaičius) (n = 9)
psl
Hh

HF
Hb
Hs
HF + Hb

Hh + Hs
Hh + HF
HB + Hs
HF + ss + Hs
Histopatologiniai rūšiavimas
(diena ir kt., 2008)
Normalus
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
0
7.4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
Lengvas gastritas
15,2 (5/33) pervežimas 3.0 (1/33) pervežimas 3.0 (1/33) pervežimas 6.1 (2/33) pervežimas 0
18,2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
Vidutinis gastritas
12.1 "(4/33) pervežimas 3.0 (1/33) pervežimas 3.0 (1/33) pervežimas 0
3,0 (1/33)
9,1 (3/33)
0
0
0
48,1 (13/27)
44,4 (4/9)
Pažymėtas gastritas
0
0
0
0
0
6.1 (2/33) 0 0 0 0

11,1 (1/9) epitelio traumos
Lengvas
27,3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Vidutinis
3.0 (1/33) pervežimas 3.0 (1/33) pervežimas 6.1 (2/33) pervežimas 0
0
0
3.0 (1 /33)
0
0
14,8 (4/27)
11.1 (1/9)
fibrozė /gleivinės atrofija
Lengvas
18,2 (6/33)
6,1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18,2 (6/33)
0
0
3,0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Vidutinis
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
3,7 (1/27)
11.1 (1/9)
intraepitelinei limfocitus
Lengvas
15,2 (5/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15,2 (5 /33)
0
0
6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
0,016
Vidutinis
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
0
3,0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27)
0
Lymphofollicular hiperplazija
Mild
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
NS
Bakterinė tankis (remiantis kad IHC rezultatai)
NP
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
14,8 (4/27)
++
3,0 (1/33)
0
0
0
3,0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (7/27)
+++
24,2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legenda: Hh
H. heilmannii-kaip
; Hf
, H.felis
; Ss
H. bizzozeronnii
; Hs
H. salomonis
Bakterinė Tankis:. +, Mažai organizmus; ++ Vidutinio sunkumo skaičius organizmų; +++, Didelis skaičius organizmų. NP, netaikoma. NS, nėra reikšmingi (p > 0,05).
Tiek lengvas ar vidutinio sunkumo epitelio traumų ir lengvo ar vidutinio sunkumo intraepitelinei limfocitų infiltracija buvo rasta 88,4% (61/69)
skrandžio gleivinės atrofija, liaukinio lizdus arba fibrozė buvo. dalyvauja 44,9% šunims (31/69). Be 18,2% gyvūnų šis pakeitimas buvo pastebėtas kūno regione (12/66) ir 47,1% į Ertmė regione (24/51) nuo šunų skrandžio.
Nenormalus neutrofilinių infiltracija buvo aptiktas tik skrandžio antralinėje dalyje iš dviejų gyvūnų: vienoje, tai pakeitimas buvo lengvas ir, kita vertus, ji buvo pažymėta ir susijęs su skrandžio opų. Kitos uždegiminės ląstelės, sudarytos iš lengvo įsiskverbimo putliųjų ląstelių, buvo pastebėtas kūno regione keturių gyvūnų ir dviejų gyvūnų antralinėje dalyje.
Tarp visų gyvūnų, 87,0% buvo teigiamas (60/69) (1A pav) ir 13,0% buvo neigiamas Helicobacter
spp. (9/69), neatsižvelgiant į bandymo naudojamas aptikti bakterijas. Nepriklausomai nuo skrandžio vietą, Helicobacter
spp. buvo stebimas naudojant jis mg ir IMC 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) ir 82,6% (57/69), iš šunų, atitinkamai. Su JE dažymo, spiralės formos bakterijos buvo aptikta 62,1% kūno mėginių (41/66) ir 70,6% nuo antralinių mėginių (36/51). Naudojant MG dėmę, tai buvo 68,2% kūno mėginių (45/66) ir 78,4% per antralinių mėginių (40/51). Helicobacter
antigeno buvo aptikta imunochemijos į 84,9% (56/66) kūno mėginių ir 80,4% (41/51) iš antralinių mėginių (3 lentelė). 1 pav Helicobacter
spp. į šunų skrandį. A) Daugybė spiralės formos bakterijos kolonizavimo paviršiaus epitelio skrandžio duobę. JIS. Baras = 10 mkm; B) Pastaba intraepitelinei limfocitų infiltracija per gilesnius skrandžio liaukos antralinių gleivinės tam NHPH-teigiamas šuo. JIS. Baras = 20 mkm. C), buvimas NHPH viduje pakauškaulio ląstelių šunų skrandžio kūno regione (juoda rodyklė). "MG. Baras = 10 mkm; D) Didelio sumos Helicobacter
antigeno, kaip paviršutiniškai skrandžio gleivių o skrandžio liaukų organizme regiono šunų skrandžio spindį. Imunoperoksidaziniu-diaminobenzidinas dėmių su Mayer hematoksilinu kontrasto. Baras = 50 mkm. Intarpas rodo Helicobacter
antigeną per pakauškaulio ląsteles, kartais galima aptikti taip pat konservuoti spiralės formos organizmų arba rudos apvalios taškais. Imunoperoksidaziniu-diaminobenzidinas dėmių su Mayer hematoksilinu kontrasto. Baras = 10 mkm. 3
lentelė aptikimas Helicobacter spp. skirtingose ​​skrandžio skyriuose šunų skrandžio pasikartojančių skirtingų diagnostinių metodų
Skrandžio regioną
aptikimo metodus
Teigiamas (proc & numeris)
JE

"MG
IHC *
PGR
Kūno (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Ertmė (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Legenda: JE: hematoksilinu-eozinas; "MG: keistas Giemsa dėmę; IHC: imunohistocheminis; PGR.. Polimerazės grandininė reakcija
* Gauti su IHC teigiami rezultatai reikšmingai nesiskyrė tarp kiekvieno skrandžio regione (p > 0,05)
Daugiau identifikavimą rūšiai buvo atliekama naudojant Helicobacter
rūšiai būdingus qPCRs , Helicobacter
spp. buvo aptikta 47,8% gyvūnų (33/69) (3 lentelė). Pavyzdžių dauguma buvo teigiamas H. heilmannii
konkretų qPCR. Tačiau amplikonų parodė tik apie 92% homologiją H. heilmanni S.S.
. Todėl šie atvejai buvo perklasifikuoti kaip H. heilmannii-
patinka.
Be 51,5% (17/33) teigiamų mėginių, tik vienas Helicobacter
rūšis buvo nustatyta, o mišrios infekcijos buvo aptikta 48,5% (16/33) (2 lentelė). H. heilmannii-
kaip organizmai buvo dažniausiai aptinkami (22/33 arba 66,7%), identifikuojamos per dešimt šunų kaip vieną infekcijos ir 12 šunų kaip mišrios infekcijos. H. salomonis
buvo antra labiausiai paplitusiais rūšys (17/33 arba 51,5%), nors ji buvo daugiausia randama kartu su kitais NHPH (42%), o ne vien (9,1%). Lygiomis dalimis H. felis
ir H. bizzozeronnii
buvo aptikta (6/33 arba 18,2%), arba kaip vieno (6,3%) ar mišrios infekcijos (12,1%). Mišrios infekcijos H. heilmannii
-kaip ir H. salomonis
buvo dažniausiai pasitaikančios (33,3%) (2 lentelė). Be kūno srityje, dažniausiai identifikuotų rūšių buvo H. salomonis
(44,0%), o į antralinėje dalyje labiausiai paplitę rūšys buvo H. heilmannii-
kaip (57,7%) (4 lentelė) .table 4 Specifinis aptiktų PGR skirtingose ​​skrandžio skyriuose šunų skrandžio
specialiosios PCR- Helicobacter spp Helicobacter rūšys. teigiami rezultatai

Skrandžio regioną (proc & number)
Kūno
Ertmė
(n = 25)
(N = 26)
H. heilmannii-kaip
24,0 (6/25) pervežimas 57,7 (15/26)
H. salomonis
44,0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
11,5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3,8 (1/26)
O . heilmannii-kaip + H. salomonis
8,0 (2/25)
11,5 (3/26)
H. heilmannii-kaip + H. felis
4,0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4.0 (1/25)
0
Nebuvo reikšminga koreliacija tarp buvimo Helicobacter
spp. ir tiek lengvas ar vidutinio sunkumo epitelio žalos ir lengvo ar vidutinio sunkumo intraepitelinei limfocitų infiltracija (1b paveikslas) šunų skrandžio (p < 0,05). Nėra statistiškai reikšmingai buvo rasta koreliacija tarp Helicobacter
infekcijos ir skrandžio gleivinės atrofijos ar fibrozės, plonų sluoksnių propria pervežimas limfoplazmacitinė infiltracija arba lymphofollicular hiperplazija. Jokių reikšmingų skirtumų nebuvo nustatyta dėl bakterinės kolonizacijos tankio abiejų skrandžio regionuose (p > 0,05).
Aptiktų su skirtingais metodais Helicobacter
-positive atvejų skyrėsi reikšmingai (p < 0,05). Teigiamas IHC rezultatai reikšmingai nesiskyrė tarp kiekvieno skrandžio regione (p > 0,05), o gautus rezultatus su HE numeriai GM ir qPCR reikšmingai skyrėsi tarp kūno ir antralinėje dalyje (p < 0,05).
Diskusijos
šiame tyrime, buvo stebima daug paplitimas gastritas (95,7%). Šie rezultatai sutampa su kitų tyrimų ataskaitų gastritas atsiradimą kaip bendra išvada šunims [14,31,32]. Priešingai, skrandžio erozijų, opų ar buvo retai šių gyvūnų.
NHPH infekcija lėmė keturių metodų (HE, Mg, IHC ir qPCR) ir iš 87,0% paplitimą šunų buvo aptikta. Šie rezultatai sutampa su prieinami literatūros, kurių dokumentais aukštą paplitimą NHPH į šunų skrandžio gleivinės [12,19,33-35]. Mūsų studijų šunų NHPH infekcija buvo gerokai lydi lengvas ar vidutinio sunkumo intraepitelinei limfocitų infiltracija ir lengvo ar vidutinio sunkumo skrandžio epitelio žalos, nepriklausomai nuo skrandžio vietą. Aiškus ryšys tarp šunų gastritas ir Helicobacter
infekcijos buvo, tačiau nenustatyta, kuris yra pagal rezultatus kitiems [11,14,15,34].
Ankstesniame tyrime, Helicobacter aptikti po to, kai dažymo šunų skrandžio mėginius -positive atvejų buvo 17,5% [24]. Atsižvelgiant į dabartinę studijų, visi mėginiai buvo tiriami du patologai labai patyręs Helicobacter
spp aptikti.
Organizmus po įprasto dažymo. Tai gali suvaidino vaidmenį aukštojo aptikimo norma (65,2%) nurodė, čia.
Sutikus ankstesniais tyrimais, NHPH dažnai buvo pastebimas ne tik paviršutiniškų gleivių ir per skrandžio liaukų, bet ir ląstelėse, į citoplazmą parietalinės ląstelės [31,33,36] (1C ir D pav.) Spiralės formos organizmai ir šiame ypač pavienių ląstelių tyri- mas vietą buvo sunku aptikti po to, kai jis ir "MG dažymo dėl to, kad citoplazmos granuliavimo parietalinių ląstelių. Mūsų rankose, IHC pasirodė labai vertinga technika identifikuoti NHPH per šių ląstelių (1d pav). Apskritai, IHC dažymo parodė aukščiausius Helicobacter
-positive vertes (82,6%). Ši išvada yra susitaręs su kitu rezultatai rodo, kad komerciškai laisvų antikūnus prieš Helicobacter pylori
yra naudinga Helicobacter
spp aptikti. . Parafinu įterptųjų mėginių iš šunų skrandžiai [24,26,36]
Ankstesni tyrimai pranešė, statistiškai reikšmingo skirtumo tarp Helicobacter
organizmų aptikimo IHC ir PGR metodais (p > 0,05) [24]. Chung et al.,
(2014) pranešė, kad PGR turėjo aukštąjį jautrumą ir specifiškumą, nei kitais metodais [4]. Tačiau, mūsų tyrimo duomenimis, sergamumas Helicobacter
spp.
Gauti su qPCR buvo mažiausia (47,8%). Ankstesni tyrimai parodė, kad formalinas burna ir parafino įdėjimas trukdyti PGR analizė [37,38]. Sjodin et al.,
(2011) palygino DNR amplifikacijos efektyvumą iš šviežių (n = 28) ir parafino įterptųjų (n = 28) mėginius identifikuoti Helicobacte
r spp.
Iš įvairių organų ( kačių skrandžio, dvylikapirštės žarnos, kepenys ir kasa) ir padarė išvadą, kad vidutinė vertė DNR koncentracija pasiekti buvo didesnis, kai gaunamas iš šviežių audiniuose [39]. DNR analizė parafino įdėta audinių mėginių, naudojant PGR /qPCR gali būti pažeista dėl DNR fragmentacijos, slopinančių medžiagų, arba abiejų derinys. Formalinas burna iš tikrųjų gali sukelti DNR fragmentaciją, taip pat dalinio sunaikinimo DNR [38,40] ir PGR reakcijos taip pat gali būti slopinamas formalino liekanos [37]. Neigiamas poveikis formalinu yra tiesiogiai susijęs su fiksacijos [40] trukmę. Nors mėginiai įtraukti į šį tyrimą visi buvo tvarkomi toje pačioje laboratorijoje ir todėl taikomos tos pačios standartiniais protokolais, trukmė fiksavimo gali skirtis mėginių dėl variacijos laiko intervalas tarp mėginio paėmimo ir atvežimo į laboratoriją.
Įvairūs buvo skirta molekulinių požiūriai į NHPH rūšių identifikavimo [4,14,24,28]. Metodus, paremtus nustatymo ar eiliškumo 16S ar 23S rRNR kodavimas genų gali, tačiau ne atskirti skirtingų šunų ir kačių skrandžio Helicobacter
rūšių, o testai remiantis nustatyti ar sekos iš Hsp60 pervežimas geno, ureazės A ir B genai ar gyrB
genas leidžia identifikuoti šių bakterijų rūšių lygiu [9].
mūsų tyrimo duomenimis, amplikonų gauti H. heilmannii
specifinis qPCR parodė tik apie 92% homologiją su H . heilmannii
, kurios iki šiol buvo tik išauginti iš skrandžio gleivinės kačių. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Molekuliniai mechanizmai skrandžio epitelio ląstelių sukibimą ir injekcijos CagA Helicobacter pylori
• Sergamumas ir išlikimui stemplės ir skrandžio vėžio Anglijoje nuo 1998 iki 2007, visuma pagrįstą studijų