Présence et signification de Helicobacter spp. dans la muqueuse gastrique de la présence de dogs

portugais et l'importance de Helicobacter spp.
dans la muqueuse gastrique du Résumé
Contexte chiens portugais
non Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPh) sont également en mesure de causer des maladies chez les humains. Les chiens sont un réservoir naturel pour beaucoup de ces espèces. Fermer et intense contact humain avec les animaux a été identifié comme un facteur de risque et, par conséquent, une signification zoonotique importante a été attribuée à NHPh.
Méthodes
Pour déterminer la prévalence des espèces Helicobacter et les changements histopathologiques gastriques associés , des échantillons de muqueuse gastrique de 69 chiens ont été évalués.

Résultats un seul chien a présenté une muqueuse histopathologique normale avec absence d'organismes en forme de spirale. Une muqueuse gastrique normale et la présence de bactéries en forme de spirale a été observée chez deux chiens. Tous les animaux restants ont présenté des modifications histopathologiques représentant de la gastrite. Les espèces Helicobacter ont été détectées chez 60 chiens (87,0%) par au moins une méthode de détection. Histologiques, histochimiques et évaluations immunohistochimiques ont révélé que Helicobacter spp. étaient présents dans 45 (65,2%), 52 (75,4%) et 57 (82,6%) chiens, respectivement. les bactéries en forme de spirale ont été détectées par analyse qPCR dans 33 (47,8%) des chiens. H. de la
comme des organismes ont été identifiés dans 22 animaux (66,7%) et principalement dans la région gastrique antrale. H. de la
était la deuxième espèce la plus répandue (51,5%), mais il a été trouvé principalement en association avec spp autre Helicobacter. et dans la région du corps gastrique. Les
H. de bizzozeronii et H. ont été moins fréquemment détectés.
Conclusions
Il a été conclu que, en dépit de la forte incidence et la distribution mondiale de NHPh gastrique chez le chien, la présence d'espèces Helicobacter
spécifiques peuvent varier selon les régions géographiques. infections NHPh étaient significativement accompagnées d'intensité légère à modérée infiltration lymphocytaire intraépithéliale et légère à modérée lésion épithéliale gastrique, mais une relation claire entre la gastrite et Helicobacter de l'infection n'a pu être établie.
Mots-clés
Canine muqueuse gastrique Chiens Non- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPh) histochimie immunohistochimie (IHC) réaction en chaîne par polymérase (PCR) estomac Présentation
Le genre Helicobacter
est composé d'au moins 40 espèces [1]. Parmi ceux-ci, H. pylori
est considéré comme un agent pathogène important dont l'hôte naturel est l'homme, mais sa présence dans l'estomac canine a été rarement rapportée [2-4].
Un grand nombre de non-Helicobacter pylori Helicobacter
espèces (NHPh) ont également été reconnu chez l'homme et chez plusieurs animaux. Auparavant, NHPh ont été généralement appelé H. heilmannii sensu lato
(sl) et inclus H. suis
, une espèce colonisatrice l'estomac des porcs et un groupe d'espèces connues pour coloniser la muqueuse gastrique des chiens et des chats : H. de la
, H. bizzozeronii
, H. de la
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
et H. heilmannii de stricto
(ss) [5] . La plupart de ces NHPh gastrique sont également capables de provoquer une maladie chez l'homme [6,7]. Fermer et intense contact humain avec les animaux a été identifié comme un facteur de risque et, par conséquent, une signification zoonotique importante a été attribuée à NHPh [6,8,9].
Chez les animaux de compagnie, spp gastrique Helicobacter. ont souvent été décrit avec une prévalence allant de 67 à 86% chez les chiens cliniquement sains et 61-100% chez les animaux présentant des vomissements chroniques [10-14]. Ces micro-organismes ont été détectés dans l'estomac d'environ 100% du laboratoire des chiens beagles et des chiens provenant de refuges locaux [15-17]. La prédominance gastrique Helicobacter spp.
Chez les chats et les chiens sont H. de
, H. bizzozeronii
et H. heilmannii de stricto
(ss
), tandis que H. de
est moins souvent détectée et la prévalence de H. cynogastricus
et H. baculiformis
n'a pas encore été étudié [9,18-20]. Les infections mixtes avec des espèces différentes peuvent également se produire [3,19].
Bien que de nombreuses études ont rapporté que le fond et le corps ont une densité bactérienne plus élevée et une plus grande probabilité de trouver Helicobacter spp. [17,21,22] d'autres ont trouvé aucune différence significative entre la densité de NHPh dans le fond, le corps et l'antre [2,23-26] de l'estomac du chien. Les écarts dans ces résultats peuvent être attribués aux différentes méthodes de diagnostic de laboratoire utilisés par les différents groupes de recherche.
Les méthodes de diagnostic utilisées pour Helicobacter spp.
Peut être non invasive et invasive [24]. Les méthodes non invasives comme la sérologie ou la détection de l'ADN bactérien et des antigènes dans les selles ne nécessitent pas une biopsie gastrique ou l'anesthésie. Les méthodes invasives, comme les cultures bactériennes, histopathologie, frottis, microscopie électronique ou de réaction en chaîne par polymérase (PCR) peuvent nécessiter une biopsie gastrique, qui est souvent obtenue par endoscopie sous anesthésie ou par nécropsie. Typiquement les organismes Helicobacter ne sont pas facilement visualisées avec l'hématoxyline et l'éosine (HE) aux taches et ainsi, leur observation directe dans les échantillons de biopsie est mis en évidence par l'utilisation de colorants spéciaux, tels que le Giemsa modifié (MG). méthodes de -Détection
Helicobacter plus élaborées et sensibles telles que l'immunohistochimie (IHC) ou réaction en chaîne par polymérase (PCR) sont des outils de recherche rarement utilisés dans un cadre de diagnostic.
Plusieurs enquêtes ont discuté de la prévalence de Helicobacter spp.
chez le chien [2,10,11,14,16], mais dans seulement quelques études espèces spécifiques présentes dans l'estomac canin ont été déterminés [4,19,27,28]. L'identification précise des helicobacters gastriques au niveau de l'espèce est essentielle afin de déterminer la prévalence et la signification clinique de tous les taxons. Le but de cette étude était de déterminer la prévalence des différentes espèces Helicobacter
gastriques présents dans les régions de l'estomac distinctes de l'estomac canin (corps et antre) en utilisant histologique, histochimique, immunohistochimique et techniques de diagnostic moléculaire. Le degré de la colonisation a été caractérisée et en corrélation avec les changements histopathologiques respectifs dans la muqueuse gastrique canine.
Tissus gastriques de l'échantillon de la collection de méthodes ont été obtenues à partir de 69 chiens (45 hommes et 24 femmes, âgés de 3 mois à 15 ans). Les échantillons ont été choisis au hasard dans les archives du Laboratoire de pathologie vétérinaire, ICBAS-UP (Portugal) où ils ont été reçus entre 2010 et 2013. Les échantillons ont été obtenus à partir de 20 chiens au cours des procédures endoscopiques, de cinq au cours de la chirurgie et de 44 chiens pendant la nécropsie examens. Toutes les procédures (excision chirurgicale et d'examen nécropsie) ont été réalisées dans un contexte clinique de tenter de traiter les animaux basés sur le meilleur jugement clinique de leurs médecins traitants. L'utilisation des tissus excisés pour la recherche a été expliqué aux propriétaires et un consentement éclairé a été obtenu pour chaque cas. Aucune des mesures ont été prises uniquement à des fins de recherche et les enquêteurs n'a eu aucune influence sur la sélection et l'exécution de ces procédures. Seuls les échantillons gastriques en bon état de conservation ont été inclus dans cette étude.
Tissues ont été fixés à 10% du formol tamponné neutre et noyée dans la cire de paraffine. L'évaluation de l'échantillon de trois sections de 3 um consécutives ont été faites, l'une étant colorées avec HE, une autre avec une tache MG et le troisième a été utilisé pour la coloration immunohistochimique.
Les échantillons gastriques ont été évalués indépendamment par deux observateurs (IA et FG ). paramètres histopathologiques tels que des altérations de la cellularité, une fibrose de la lamina propria
et la glande atrophie ont été analysées selon l'Association mondiale des petits animaux vétérinaires (WSAVA) lignes directrices [29]. Le degré de caractéristiques morphologiques et des changements inflammatoires a été classé comme normal, légère, modérée ou marquée en utilisant le WSAVA normalisation gastro-visuelle analogique disponibles [29].
L'évaluation microscopique a été réalisée en analysant toute la section du tissu gastrique. La présence de spp. De
Helicobacter a été évaluée par HE et les taches MG et par IHC. Un chien a été classé comme Helicobacter
positif quand une de ces méthodes ont donné un résultat positif. En outre, la colonisation de la densité bactérienne a été quantifiée: +, peu d'organismes (< 10 organismes /400x); ++, Nombre modéré d'organismes (10 à 50 organismes /400x); +++, Un grand nombre d'organismes. (≫ 50 organismes /400x) [24]
immunohistochimie
Pour l'étude immunohistochimique, les coupes ont été déparaffinées, la récupération et de l'antigène hydraté a été effectuée dans une cocotte-minute dans 10 mmol /L sodium du tampon citrate, pH 6,0, pendant 2 minutes (min). Les lames ont été refroidie pendant 10 min à température ambiante et on rince deux fois dans une solution saline tamponnée triphosphate (TBS) pendant 5 min. Le système de détection NovolinkTM Max-polymère (Novocastra, Newcastle, Royaume-Uni) a été utilisé pour la visualisation, conformément aux instructions du fabricant. Après blocage peroxydase endogène avec 3% de peroxyde d'hydrogène dans du methanol pendant 10 minutes, les coupes ont été mises en incubation pendant une nuit à 4 ° C avec un antisérum polyclonal contre H. pylori
(RBK012; Zytomed, allemand) qui présente une immunoréactivité avec une large gamme de les bactéries appartenant au genre des Helicobacter. Les coupes ont été rincées avec du TBS entre chaque étape de la procédure. La couleur a été développé pour jusqu'à 7 min à température ambiante avec 3,3'-diamino-benzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) et sections ont été ensuite légèrement de contraste avec l'hématoxyline, déshydratées et montées. immunoréactivité positive a été enregistrée comme un étiquetage brun doré distinct des bactéries situées sur la surface de la muqueuse, dans des fosses ou des glandes gastriques et dans les cellules pariétales.
Extraction, amplification par PCR et séquençage de l'ADN ADN a été extrait de 5 tranches consécutives de 20 pm en utilisant un kit de sang et DNeasy Tissue (Qiagen), selon les instructions du fabricant. ont été développés Helicobacter
espèces-spécifiques de RCQP basées sur un court fragment des gènes uréase A et B pour l'identification de H. heilmannii ss
,
, H. bizzozeronii
et H. H. Salomonis
. Pour la génération de normes pour chaque qPCR, une grande partie du groupe de gènes ureAB de H. heilmannii
ASB1 (1224 pb),
CS1 H. (1228 pb), H. Salomonis
R1053 (1224 pb) et H. bizzozeronii
R1051 (1230 pb) a été amplifiée en utilisant des amorces et U430F U1735R, comme décrit précédemment [30]. La norme est composée de 10 fois-dilutions à partir de 10 8 amplicons PCR pour chaque 10 pi de mélange réactionnel. Un pi de matrice d'ADN extrait a été mis en suspension dans un mélange réactionnel de 10 ul constitué de 0,25 ul d'amorces sens et antisens (Tableau 1), de l'eau HPLC 3,5 ul et 5 ul SensiMix ™ SYBR® n-ROX (Bioline réactifs Ltd, UK). Les deux étalons et les échantillons ont été analysés en double sur un système CFX96 ™ RT-PCR avec un cycleur thermique C1000 (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Le (version 1.6) du logiciel Bio-Rad CFX Manager est utilisé pour le calcul du seuil cycles (Ct) -values ​​et analyse de la courbe de fusion de l'ADN amplifié. Les valeurs moyennes des doublons ont été utilisées pour la quantification d'Helicobacter de l'ADN dans les échantillons de tissus. Pour exclure des échantillons faux positifs, les amplicons de chaque échantillon positif étaient sequenced.Table 1 Liste des amorces utilisées pour le nom Primer de qPCR
séquence nucléotidique
Spécificité
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT de Hsal_FQ CAC CAA T
H. Salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. de
l'AAT
Hbizz_FQ CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

analyse statistique
chi carré test de Pearson et le test exact de Fisher ont été utilisés pour déterminer la dépendance entre les deux catégories. valeurs < p 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives. Résultats de l'analyse statistique a été effectuée à l'aide du logiciel statistique SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisbonne, Portugal).
Un total de 117 échantillons gastriques (66 de la région du corps et 51 de la région de antrum) ont été analysés.
Parmi les 69 animaux, les deux régions gastriques étaient disponibles pour l'évaluation en 48 chiens, alors que seules les régions du corps ou antre étaient disponibles en 18 et trois chiens, respectivement.
sur les 69 chiens, un seul présenté une muqueuse histopathologique normale avec absence d'organismes en forme de spirale. Une muqueuse gastrique normale et la présence de bactéries en forme de spirale a été observée chez deux chiens (2,9%). Les animaux restants, présenté des modifications histopathologiques représentatives de la gastrite (66/69 ou 95,7%) (tableau 2). Sur la base des changements histopathologiques dans la muqueuse gastrique, nous avons diagnostiqué une légère à modérée gastrite chronique dans 88,4% (61/69) affectant le corps gastrique de 51,5% (34/66) et la région antrale de 92,2% (47/51 ) du animals.Table 2 Tableau récapitulatif des modifications histopathologiques et la colonisation densité observée dans l'estomac canin, selon les résultats positifs NHPh espèces spécifiques PCR, les résultats de genre positifs et des résultats négatifs
PCR des résultats positifs avec des espèces spécifiques identification, la localisation, indépendamment gastrique (pour cent & nombre) (n = 33)
résultats positifs pour Helicobacter spp. (Pour cent & nombre) (n = 27)
résultats négatifs (pour cent & nombre) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
histopathologie classement
(Day et al., 2008)
normal
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
0
7.4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
gastrite Mild
15.2 (5/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33,3 ( 3/9)
gastrite modérée
12.1 (4/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
48.1 (13/27)
44,4 (4/9)
Marqué gastrite
0
0
0
0
0
6.1 (2/33)
0
0 0

0
11.1 (1/9)
lésion épithéliale de Mild
27,3 (9/33)
3.0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
Modéré
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 (1 /33)
0
0
14,8 (4/27)
11.1 (1/9)
fibrose /atrophie de la muqueuse
de
Mild 18.2 (6/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
0
0
3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Modéré
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
3.7 (1/27)
11.1 (1/9)
lymphocytes intraépithéliaux
Mild 15.2 (5/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15.2 (5 /33)
0
0
6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
0,016
Modéré
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14,8 (4/27)
0
hyperplasie de Lymphofollicular Mild
6.1 (2/33)
0
0
0
3.0 ( 1/33)
0
0
0
0
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
NS
densité bactérienne (basée sur les résultats IHC)
NA
+
0
0
0
0
0
0
0 0

0
14,8 (4/27)
++
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0
0
0
0
25,9 (7/27)
+++
24.2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Légende: Hh
, H. heilmannii-like
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. Salomonis
densité bactérienne:. +, Peu d'organismes; ++, Nombre modéré d'organismes; +++, Un grand nombre d'organismes. NA, non applicable. NS, non significatif (p > 0,05).
Deux légère à modérée blessures épithéliales et légère à modérée infiltration lymphocytaire intraépithéliale ont été trouvés dans 88,4% (61/69)
gastrique atrophie de la muqueuse, la nidification glandulaire ou de la fibrose était. présent dans 44,9% des chiens (31/69). Dans 18,2% des animaux cette altération a été observée dans la région du corps (12/66) et à 47,1% dans la région de antrum (24/51) de l'estomac canine.
Infiltration neutrophile anormale n'a été détectée dans l'antre de l'estomac de deux animaux: dans l'un, cette modification était douce et dans l'autre, il a été marqué et associée à des ulcères gastriques. D'autres cellules inflammatoires, consistant en légère infiltration des mastocytes, ont été observées dans la région du corps de quatre animaux et dans l'antre de deux animaux. Le plus Parmi tous les animaux, 87,0% étaient positifs (60/69) (figure 1A) et 13,0% étaient négatifs pour Helicobacter spp. (9/69), quel que soit le test utilisé pour détecter les bactéries. Indépendamment de l'emplacement de l'estomac, Helicobacter spp. ont été observés en utilisant HE, MG et IMC à 65,2% (45/69) 75.4% (52/69) et 82,6% (57/69) des chiens, respectivement. Avec coloration HE, les bactéries en forme de spirale ont été détectés dans 62,1% des échantillons de corps (41/66) et 70,6% des échantillons antraux (36/51). En utilisant la tache MG, il était de 68,2% pour les échantillons de corps (45/66) et de 78,4% pour les échantillons antraux (40/51). Helicobacter
antigène a été détectée par immunochimie dans 84,9% (56/66) des échantillons corporels et 80,4% (41/51) des échantillons antraux (tableau 3). La figure 1 Helicobacter spp. dans l'estomac du chien. A) De nombreuses bactéries en forme de spirale qui colonisent l'épithélium de surface de la fosse gastrique. IL. Bar = 10 pm; B) Notez l'infiltration lymphocytaire intraépithéliale dans les glandes gastriques plus profondes dans la muqueuse antrale d'un chien NHPh positif. IL. Bar = 20 pm. C) Présence de NHPh à l'intérieur des cellules pariétales de la région canine du corps gastrique (flèche noire). MG. Bar = 10 pm; D) De grandes quantités de l'antigène Helicobacter au sein de la muqueuse gastrique superficielle et dans la lumière des glandes gastriques dans la région du corps de l'estomac du chien. Immunoperoxydase-diaminobenzidine tache avec hématoxyline de Mayer de contraste. Bar = 50 pm. Encart montre Helicobacter de l'antigène dans les cellules pariétales, les organismes en forme de spirale ainsi conservés parfois détectables ou ronds points bruns. Immunoperoxydase-diaminobenzidine tache avec hématoxyline de Mayer de contraste. Bar = 10 pm.
Tableau 3 Détection de Helicobacter spp. dans les différents compartiments de l'estomac de l'estomac canine récurrente à différentes méthodes de diagnostic
région gastrique
méthodes de détection
positive (pour cent & nombre)
HE

MG
IHC *
PCR
Body (n = 66)
62,1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Antrum (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80.4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Légende: HE: hématoxyline-éosine; MG: modifié Giemsa; IHC: immunohistochimie; RCQP
plus l'identification au niveau de l'espèce a été réalisée en utilisant Helicobacter espèces spécifiques; réaction en chaîne par polymérase
* Les résultats positifs obtenus avec IHC ne diffèrent pas significativement dans chaque région de l'estomac (0,05 p >): PCR.. . Helicobacter spp. ont été détectées chez 47,8% des animaux (33/69) (tableau 3). La majorité des échantillons étaient positifs dans le H. heilmannii
qPCR spécifique. Cependant, les amplicons ont montré qu'environ 92% d'homologie avec H. heilmanni S.S.
. Par conséquent, ces cas ont été reclassés comme H. heilmannii-
aime.
Dans 51,5% (17/33) des échantillons positifs, une seule espèce Helicobacter
a été identifié alors que les infections mixtes ont été détectés dans 48,5% (16/33) (tableau 2). H. heilmannii-
comme des organismes ont été les plus fréquemment trouvés (22/33 ou 66,7%), étant identifié dans dix chiens comme une seule infection et de 12 chiens infections comme mixtes. H. de la
était la deuxième espèce la plus répandue (17/33 ou 51,5%) bien qu'il ait été principalement trouvé en association avec d'autres NHPh (42%) plutôt que seul (9,1%). Des proportions égales de H.
et H. bizzozeronnii
ont été détectés (6/33 ou 18,2%), soit en tant que simples infections (6,3%) ou mixtes (12,1%). infections mixtes avec H. heilmannii
-comme et les
H. de ont été les plus fréquemment rencontrés (33,3%) (tableau 2). Dans la zone du corps, les espèces les plus fréquemment identifiées était H. de
(44,0%) alors que dans l'antre des espèces les plus répandues est H. heilmannii-
comme (57,7%) (tableau 4) .Table 4 spécifique espèces Helicobacter détectées par PCR dans les différents compartiments de l'estomac de Specific PCR Helicobacter spp l'estomac du chien. résultats positifs
Le région gastrique (pour cent & nombre)
Body
Antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii-like
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. Salomonis
44,0 (11 /25)
7.7 (2/26)
H. felis
8.0 (2/25)
3.8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11.5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3.8 (1/26)
H . heilmannii-like + H. Salomonis
8.0 (2/25)
11.5 (3/26)
H. heilmannii-like + H. felis
4.0 (1 /25)
3.8 (1/26)
H. felis + H. Salomonis
4.0 (1/25)
0
Il y avait une corrélation significative entre la présence de helicobacter spp. et à la fois légère à modérée lésion épithéliale et légère à modérée intraépithéliale infiltration lymphocytaire (figure 1B) de l'estomac canin (p < 0,05). Non statistiquement significative des corrélations ont été trouvées entre l'infection et la muqueuse gastrique atrophie ou de fibrose de Helicobacter, lamina propria
lymphoplasmocytaire infiltration ou hyperplasie lymphofollicular. Aucune différence significative n'a été décelée en ce qui concerne la densité de la colonisation bactérienne entre les deux régions de l'estomac (p > 0,05).
Le nombre de cas de -positifs Helicobacter détectés avec les différentes méthodes différaient significativement (p < 0,05). Discussion de
résultats positifs IHC ne diffèrent pas significativement dans chaque région de l'estomac (p > 0,05), tandis que les chiffres obtenus avec HE, GM et qPCR différaient significativement entre le corps et l'antre (0,05 p <). Dans cette étude, une forte prévalence de la gastrite a été observée (95,7%). Ces résultats sont en accord avec d'autres études indiquant l'apparition de la gastrite comme une conclusion commune chez les chiens [14,31,32]. En revanche, les érosions ou les ulcères gastriques ont été rarement trouvés chez ces animaux. Le plus NHPh infection a été déterminée par quatre méthodes (HE, MG, et IHC qPCR) et une prévalence de 87,0% chez le chien a été détectée. Ces résultats sont cohérents avec ceux disponibles dans la littérature, qui a documenté la prévalence élevée de NHPh dans la muqueuse gastrique canine [12,19,33-35]. Dans notre étude canine infection NHPh était significativement accompagnée de légère à modérée infiltration lymphocytaire intraépithéliale et légère à modérée lésion épithéliale gastrique, indépendamment de l'emplacement de l'estomac. Une relation claire entre la gastrite canine et Helicobacter
infection était cependant pas établi, qui est conforme aux résultats des autres [11,14,15,34].
Dans une enquête précédente, le pourcentage de Helicobacter
cas -positifs détectés après HE coloration d'échantillons gastriques canins était de 17,5% [24]. Dans l'étude actuelle, tous les échantillons ont été examinés par deux pathologistes hautement expérimentés dans la détection de Helicobacter spp.
Organismes après coloration de routine. Cela peut avoir joué un rôle dans le taux de détection plus élevé (65,2%) ont déclaré ici.
En accord avec les études antérieures, NHPh ont souvent été observée non seulement dans le mucus superficiel et dans les glandes gastriques, mais aussi au niveau intracellulaire, dans le cytoplasme des cellules pariétales [31,33,36] (Figure 1 C et D). organismes en forme de spirale présents dans cette localisation subcellulaire particulier étaient difficiles à détecter après HE et MG coloration en raison de la granulation de cytoplasme des cellules pariétales. Dans nos mains, IHC semblait être une technique très précieuse pour identifier NHPh au sein de ces cellules (Figure 1D). Dans l'ensemble, la coloration IHC a montré les valeurs -positifs
Helicobacter les plus élevés (82,6%). Cette conclusion est en accord avec d'autres résultats montrant que les anticorps disponibles dans le commerce contre H. pylori
sont utiles pour la détection de Helicobacter spp. . En paraffine échantillons embarqués de l'estomac de chien [24,26,36]
Des études antérieures ont rapporté aucune différence statistiquement significative entre la détection des organismes Helicobacter par des techniques IHC et PCR (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) a rapporté que le test PCR avait une plus grande sensibilité et de spécificité que les autres méthodes [4]. Cependant, dans notre étude, le taux de prévalence de Helicobacter spp.
Obtenue avec la qPCR était le plus bas (47,8%). Des recherches antérieures ont montré que la fixation du formol et inclusion en paraffine entraver l'analyse PCR [37,38]. Sjödin et al.
(2011) ont comparé l'efficacité de l'amplification de l'ADN de frais (n = 28) et inclus en paraffine (n = 28) des échantillons pour l'identification des r spp Helicobacte.
De différents organes ( félin estomac, le duodénum, ​​le foie et le pancréas) et ont conclu que la valeur moyenne de la concentration d'ADN obtenu a été plus élevée lorsqu'ils sont obtenus à partir de tissus frais [39]. analyse de l'ADN d'échantillons de tissu inclus en paraffine en utilisant la PCR /PCR quantitative peut être compromise en raison de la fragmentation de l'ADN, substances inhibitrices, ou une combinaison des deux. La fixation au formol peut en effet provoquer une fragmentation de l'ADN, ainsi que la destruction partielle de l'ADN [38,40], et les réactions de PCR peut également être inhibée par le résidu du formol [37]. Les effets négatifs de la formaline sont directement liées à la durée de la fixation du [40]. Bien que les échantillons inclus dans cette étude ont tous été traités dans le même laboratoire, et donc soumis aux mêmes protocoles standard, la durée de fixation peut varier entre les échantillons due à la variation de l'intervalle de temps entre le prélèvement des échantillons et leur arrivée au laboratoire. Le plus Different approches moléculaires pour l'identification des espèces NHPh ont été abordées [4,14,24,28]. Des techniques basées sur la détection ou le séquençage des gènes 16S ou ARNr 23S codant peut toutefois pas faire la distinction entre les différentes espèces canines et félines Helicobacter
gastriques, tandis que les tests basés sur la détection ou le séquençage du gène hsp60
, l'uréase les gènes A et B ou le gène gyrB de permettre l'identification de ces bactéries au niveau de l'espèce [9].
dans notre étude, amplicons obtenus dans le H. heilmannii
qPCR spécifique seulement montré environ 92% d'homologie avec H . heilmannii,
qui, jusqu'ici, n'a été cultivé à partir de la muqueuse gastrique de chats. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

• Mécanismes moléculaires de l'adhérence cellulaire de l'épithélium gastrique et l'injection de CagA par Helicobacter pylori
• L'incidence et la survie de l'œsophage et le cancer gastrique en Angleterre entre 1998 et 2007, une study