La presencia y la importancia de Helicobacter spp. en la mucosa gástrica de perros portugués

La presencia y la importancia de Helicobacter spp.
En la mucosa gástrica de perros portuguesas
Resumen Antecedentes

no Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPH) también son capaces de causar enfermedades en los seres humanos. Los perros son un reservorio natural de muchas de estas especies. el contacto humano estrecha e intensa con los animales ha sido identificada como un factor de riesgo y, por tanto, un importante significado zoonótica se ha atribuido a NHPH.
Métodos
Para determinar la prevalencia de Helicobacter
las especies y los cambios histopatológicos gástricos asociados , se evaluaron muestras de mucosa gástrica de 69 perros.
: resultados de la Sólo un perro presentan una mucosa histopatológico normal con ausencia de organismos en forma de espiral. Se observó una mucosa gástrica normal y la presencia de bacterias en forma de espiral en dos perros. Todos los animales restantes presentaron cambios histopatológicos representante de la gastritis. se detectaron Helicobacter
especies en 60 perros (87,0%) por al menos un método de detección. Histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos evaluaciones reveló que la Helicobacter spp
. estaban presentes en 45 (65,2%), 52 (75,4%) y 57 (82,6%) de los perros, respectivamente. bacteria en forma de espiral se detectaron por análisis de qPCR en 33 (47,8%) de los perros. H. heilmannii-
como los organismos fueron identificados en 22 animales (66,7%) y predominantemente en la región del antro gástrico. H. salomonis
fue la segunda especie de mayor prevalencia (51,5%) a pesar de que se encuentra principalmente en asociación con otros Helicobacter spp
. y en la región gástrica cuerpo. H. bizzozeronii y H. felis
se detectan con menor frecuencia.
Conclusiones
Se concluyó que, a pesar de la alta incidencia y la distribución mundial de NHPH gástrico en perros, la presencia de Helicobacter
especie determinada puede variar entre regiones geográficas. infecciones NHPH se acompañaron de manera significativa por leve a moderada infiltración de linfocitos intraepiteliales y de leve a moderada lesión epitelial gástrica, pero no se pudo establecer una relación clara entre la gastritis y Helicobacter
infección.
Palabras clave
mucosa gástrica canina perros que no son Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPH) histoquímica La inmunohistoquímica (IHC) la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Introducción de estómago Francia El género Helicobacter
se compone de al menos 40 especies [1]. Entre éstos, el H. pylori
se considera como un importante patógeno cuyo huésped natural es el hombre, pero su presencia en el estómago canino Raramente se han descrito [2-4].
Un gran número de no-Helicobacter pylori Helicobacter
especies (NHPh) también han sido reconocidos en los seres humanos y en varios animales. Anteriormente, NHPH se refiere generalmente como H. heilmannii sensu lato gratis (sl) e incluyó H. suis
, una especie que colonizan el estómago de los cerdos y un grupo de especies conocidas para colonizar la mucosa gástrica de perros y gatos : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
y H. heilmannii stricto sensu gratis (ss) [5] . La mayoría de estos NHPH gástrico también son capaces de causar enfermedades en los seres humanos [6,7]. el contacto humano estrecha e intensa con los animales ha sido identificada como un factor de riesgo y, por tanto, un importante significado zoonótica se ha atribuido a NHPH [6,8,9]. Hoteles en animales de compañía, gástrica por Helicobacter spp
. se han descrito con frecuencia con una prevalencia que oscila entre 67-86% en perros clínicamente sanos y 61-100% de los animales que presenten vómitos crónicos [10-14]. Estos microorganismos se detectaron en el estómago de aproximadamente el 100% de perros Beagle de laboratorio y los perros de los refugios locales [15-17]. La predominante Helicobacter spp gástrico.
En los gatos y los perros son H. felis
, H. bizzozeronii Opiniones y stricto sensu H. heilmannii gratis (ss
), mientras que H. salomonis
se detectó con menos frecuencia y la prevalencia de H. cynogastricus
y H. baculiformis
aún no se ha estudiado [9,18-20]. También pueden producirse infecciones mixtas con diferentes especies [3,19].
Aunque muchos estudios han informado de que el fundus y el cuerpo tienen una mayor densidad bacteriana y un mayor probabilidad de encontrar Helicobacter spp
. [17,21,22] personas no han encontrado diferencias significativas entre la densidad de NHPH en el fundus, cuerpo y antro [2,23-26] del estómago canino. Las discrepancias en estos resultados se pueden atribuir a las diferentes metodologías de diagnóstico de laboratorio utilizados por los distintos grupos de investigación. México La métodos de diagnóstico utilizados para Helicobacter spp
.
Puede ser no invasivo e invasivo [24]. Los métodos no invasivos, como la serología o la detección de ADN bacteriano y los antígenos en las heces no requieren una biopsia gástrica o la anestesia. Los métodos invasivos, como cultivos bacterianos, histopatología, frotis, microscopía electrónica o reacción en cadena de la polimerasa (PCR) pueden requerir una biopsia gástrica, que se obtiene con frecuencia a través de la endoscopia bajo anestesia o por necropsia. Típicamente Helicobacter
organismos no se visualizan fácilmente con la hematoxilina y eosina (HE) y mancha así, su observación directa en muestras de biopsia se pone de relieve por el uso de colorantes especiales, tales como la tinción de Giemsa modificado (MG). Helicobacter
métodos -Detección más complejo y sensible como la inmunohistoquímica (IHC) o reacción en cadena de la polimerasa (PCR) son herramientas de investigación rara vez se utiliza en un entorno de diagnóstico.
Varias investigaciones han examinado la prevalencia de Helicobacter spp.
en perros [2,10,11,14,16] pero en sólo unos pocos estudios se determinaron las especies específicas presentes en el estómago canino [4,19,27,28]. La identificación precisa de los Helicobacters gástricos a nivel de especie es esencial con el fin de determinar la prevalencia y la importancia clínica de todos los taxones. El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de diferentes especies de Helicobacter
gástricos del estómago presentes en regiones distintas del estómago canino (cuerpo y antro) usando histológico, histoquímico, inmunohistoquímico y técnicas de diagnóstico molecular. El grado de colonización se caracterizó y se correlacionó con los respectivos cambios histopatológicos en la mucosa gástrica canina.
Métodos COLECCIÓN Muestra
tejidos gástricos se obtuvieron de 69 perros (45 hombres y 24 mujeres, con edades comprendidas entre 3 meses a 15 años). Las muestras fueron seleccionadas al azar de los archivos del Laboratorio de Patología Veterinaria, ICBAS-UP (Portugal), donde fueron recibidos entre 2010 y 2013. Las muestras se obtuvieron de 20 perros durante los procedimientos endoscópicos, de cinco durante la cirugía y de 44 perros durante la necropsia exámenes. Todos los procedimientos (excisión quirúrgica y el examen de necropsia) se realizaron en un contexto clínico de intentar tratar a los animales con base en el mejor juicio clínico de los médicos que asisten. El uso de los tejidos extirpados para la investigación fue explicado a los propietarios y se obtuvo un consentimiento informado para cada caso. Ninguna de las acciones se tomaron únicamente con fines de investigación y los investigadores no tenían influencia en la selección y ejecución de dichos procedimientos. Sólo las muestras gástricas en buen estado de conservación se incluyeron en este estudio.
Tejidos fueron fijados en formalina al 10% tamponada neutra y embebidos en parafina. Tres secciones consecutivas de 3 micras fueron hechas, uno se tiñeron con HE, otro con una mancha MG y el tercero se utilizó para la tinción inmunohistoquímica.
Evaluación de la muestra
Las muestras gástricas fueron evaluados de forma independiente por dos observadores (IA y FG ). parámetros histopatológicos tales como alteraciones en la celularidad, la fibrosis de la lámina propia y la glándula
atrofia fueron analizados de acuerdo con la Asociación Mundial de Veterinarios de Pequeños Animales (WSAVA) directrices [29]. El grado de características morfológicas y cambios inflamatorios se calificó como normal, leve, moderada o marcada utilizando la WSAVA normalización gastrointestinal analógica visual disponible [29]. México La evaluación microscópica se realizó mediante el análisis de toda la sección del tejido gástrico. La presencia de Helicobacter spp
.
Fue evaluada por HE y manchas MG y por IHC. Un perro fue clasificado como Helicobacter
positivo cuando uno de estos métodos dio un resultado positivo. Además, la colonización densidad bacteriana se cuantificó: +, algunos organismos (< 10 organismos /400x); ++, Número moderado de organismos (10 a 50 organismos /400x); +++, Gran número de organismos. (≫ 50 organismos /400x) [24]
Inmunohistoquímica
Para el estudio inmunohistoquímico, las secciones se deparaffinised, recuperación hidratado y el antígeno se realizó en una olla a presión en 10 mmol /L de sodio tampón de citrato, pH 6,0, durante 2 minutos (min). Los portaobjetos se enfrió durante 10 min a temperatura ambiente y se enjuagó dos veces en solución salina tamponada trifosfato (TBS) durante 5 min. Se utilizó el sistema de detección de NovolinkTM Max-Polymer (Novocastra, Newcastle, Reino Unido) para la visualización, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de bloquear la peroxidasa endógena con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol durante 10 min, las secciones se incubaron durante la noche a 4 ° C, con un antisuero policlonal contra H. pylori
(RBK012; Zytomed, alemán) que muestra inmunoreactividad con una amplia gama de bacterias que pertenecen al género Helicobacter
. Las secciones fueron lavadas con TBS entre cada paso del procedimiento. Color fue desarrollado para un máximo de 7 minutos a temperatura ambiente con 3,3-diamino-bencidina (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) y secciones fueron ligeramente counterstained con hematoxilina, deshidratadas y montadas. inmunorreactividad positiva se registró como el etiquetado de oro-marrón clara de las bacterias localizadas en la superficie de la mucosa, en las fosas gástricas o glándulas y en las células parietales.
extracción, amplificación por PCR y secuenciación del ADN El ADN se extrajo de
5 cortes consecutivos de 20 mM utilizando un sangre DNeasy Tissue Kit y (Qiagen), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se desarrollaron Helicobacter
específico de la especie qPCRs sobre la base de un breve fragmento de los genes A y B de ureasa para la detección de H. heilmannii ss
, H. felis
, H. y H. bizzozeronii
salomonis
. Para la generación de estándares para cada qPCR, una gran parte de la agrupación de genes ureAB de H. heilmannii
ASB1 (1224 pb), H. felis CS1
(1228 pb), H. salomonis
R1053 (1224 pb) y H. bizzozeronii
R1051 (1230 pb) se amplificó usando cebadores U430F y U1735R, tal como se describe anteriormente [30]. El estándar constaba de 10 veces diluciones a partir de 10 8 amplicones de PCR por cada 10 l de mezcla de reacción. Una l de plantilla de ADN extraído se suspendió en una mezcla de reacción 10 l que consiste en 0,25 l de cebadores directo e (Tabla 1), 3,5 l de agua HPLC y 5 l SensiMix ™ SYBR No-ROX (Bioline Reactivos Ltd, UK) inversa. Ambos patrones y las muestras se realizaron por duplicado en un sistema CFX96 ™ RT-PCR con un termociclador de C1000 (Bio-Rad, Hercules CA, EE.UU.). El (versión 1.6) de software Bio-Rad CFX Manager fue utilizado para el cálculo de los ciclos umbral (Ct)-valores y análisis de curva de fusión del ADN amplificado. Los valores medios de los duplicados se utilizaron para la cuantificación de ADN Helicobacter
en las muestras de tejido. Para excluir falsas muestras positivas, los amplicones de cada muestra positiva fueron sequenced.Table 1 Lista de los cebadores utilizados para la PCR cuantitativa
Nombre Primer
Secuencia de nucleótidos
Especificidad
Hfel_F2
GCT GGT GGC GAT ATC ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CAG CTA AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC GAT TGT AGG TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. salomonis
Hsal_RQ
TTT TTT GCC ATC AAT AAT TCC GTC GGC
H. salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GGC GTG CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii
el análisis estadístico

prueba de chi-cuadrado de Pearson y la prueba exacta de Fisher se utilizó para determinar la dependencia entre dos categorías. los valores < p 0,05 se consideraron como estadísticamente significativo. El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete estadístico SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisboa, Portugal).
: Resultados de la Un total de 117 muestras gástricas (66 desde la región del cuerpo y 51 de la región antro) fueron analizados. Estar entre los 69 animales, ambas regiones gástricas fueron evaluados en 48 perros, mientras que sólo las regiones del cuerpo o el antro estaban disponibles en 18 y tres perros, respectivamente.
de los 69 perros, sólo uno presentado una mucosa histopatológico normal con ausencia de organismos en forma de espiral. Se observó una mucosa gástrica normal y la presencia de bacterias en forma de espiral en dos perros (2,9%). Los animales restantes, presentado cambios histopatológicos representativos de la gastritis (66/69 o 95,7%) (Tabla 2). Sobre la base de cambios histopatológicos en la mucosa gástrica, se diagnosticó un leve a moderada gastritis crónica en 88,4% (61/69) que afectan al cuerpo gástrico de 51,5% (34/66) y la región antral del 92,2% (47/51 ) de la animals.Table 2 Tabla resumen de la colonización y alteraciones histopatológicas densidad observada en el estómago canino, de acuerdo con los resultados positivos NHPH especies específicas PCR, resultados positivos género y los resultados negativos
PCR resultados positivos con especies específicas identificación, localización, independientemente gástrica (por ciento & número) (n = 33) guía empresas resultados positivos para Helicobacter spp. (Ciento & número) (n = 27)
Los resultados negativos (por ciento & número) (n = 9) guía empresas p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs

Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + HB + Hs
Histopatología de calificaciones gratis (Day et al., 2008)
normal
3.0 (1/33): perfil 0
0
3.0 (1/33)
0 0

0 0

0
7,4 (2/27)
11,1 (1/9 )
NS
gastritis leve
15.2 (5/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33) 0

18.2 (6/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
44,4 (12/27)
33.3 ( 3/9)
gastritis moderada
12.1 (4/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0 0

0
48.1 (13/27)
44,4 (4/9): perfil del Marcado gastritis
0
0 0

0 0

6.1 (2/33)
0 0

0 0

11,1 (1/9)
lesión epitelial leve

27.3 (9/33)
3.0 (1/33): perfil 0
9.1 (3/33)
3.0 (1/33) 30,3
(10/33)
0
3.0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9) 0,003

Moderado
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
0 0

0
3.0 (1 /33)
0 0

14.8 (4/27)
11,1 (1/9)
fibrosis atrofia /mucosa
leve
18.2 (6/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
0 0

3.0 (1/33)
55,6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
Moderado
3.0 (1/33)
0 0

0
3.0 (1/33)
0 0

0 0

3.7 (1/27)
11,1 (1/9): perfil linfocitos intraepiteliales
leve
15.2 (5/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33): perfil 0
15.2 (5 /33)
0 0

6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
0,016
Moderado
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
0 0

3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0 0

0
14.8 (4/27)
0
linfofolicular hiperplasia leve

6.1 (2/33)
0 0

0
3.0 ( 1/33)
0 0

0 0

29,6 (8/27)
11,1 (1/9)
NS
densidad bacteriana (basado en los resultados de IHC): perfil NA
+
0 0

0 0

0 0

0 0

0
14.8 (4/27)
++
3.0 (1/33)
0
0 0

3.0 (1/33)
0 0

0 0

25.9 (7/27)
+++
24.2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33,3 (11/33)
3.0 (1/33)
3.0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Leyenda: Hh
, H. heilmannii-como
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. salomonis
densidad bacteriana:. +, Pocos organismos; ++, Número moderado de organismos; +++, Gran número de organismos. NA, no aplicable. NS, no significativo (p > 0,05).
Tanto leve a moderada lesiones epiteliales y de leve a moderada infiltración de linfocitos intraepiteliales se encontraron en 88,4% (61/69): perfil atrofia de la mucosa gástrica, de anidación glandular o fibrosis fue. presente en el 44,9% (31/69) perros. En 18,2% de los animales se observó esta alteración en la región del cuerpo (12/66) y en 47,1% en la región antro (24/51) del estómago canino.
Infiltración neutrofílica anormal sólo se detectó en el antro del estómago de dos animales: en una, esta alteración era suave y en el otro, se marcó y se asocia con la ulceración gástrica. Otras células inflamatorias, que consiste en la infiltración leve de los mastocitos, se observaron en la región del cuerpo de cuatro animales y en el antro de dos animales.
Entre todos los animales, 87,0% fueron positivos (60/69) (Figura 1A) y 13,0% fueron negativos para Helicobacter spp
. (9/69), con independencia de la prueba utilizada para detectar la bacteria. Independientemente de la ubicación de estómago, Helicobacter
spp. se observaron utilizando HE, MG e IMC de 65,2% (45/69), el 75,4% (52/69) y 82,6% (57/69) de los perros, respectivamente. Con tinción HE, no se detectaron bacterias en forma de espiral en el 62,1% de las muestras del cuerpo (41/66) y en el 70,6% de las muestras de antro (36/51). Utilizando la mancha MG, este fue el 68,2% de las muestras corporales (45/66) y el 78,4% de las muestras de antro (40/51). Helicobacter
antígeno se detectó por inmunoquímica en 84,9% (56/66) de las muestras corporales y en 80,4% (41/51) de las muestras antrales (Tabla 3). Figura 1 Helicobacter
spp. en el estómago canino. A) Las numerosas bacterias en forma de espiral que colonizan la superficie del epitelio de la boca del estómago. ÉL. Bar = 10 micras; B) Tenga en cuenta la infiltración de linfocitos intraepiteliales dentro de las glándulas gástricas más profundas de la mucosa del antro de un perro NHPH-positivo. ÉL. Bar = 20 micras. C) La presencia de NHPH dentro de las células parietales de la región del cuerpo gástrico canino (flecha negro). MG. Bar = 10 micras; D) grandes cantidades de antígeno de Helicobacter
dentro de la mucosa gástrica superficial y en el lumen de las glándulas gástricas en la región del cuerpo de estómago canino. tinción de inmunoperoxidasa -Diaminobencidina con contratinción de hematoxilina de Mayer. Bar = 50 micras. El recuadro muestra Helicobacter
antígeno dentro de las células parietales, organismos en forma de espiral, así conservados veces detectables o puntos redondos de color marrón. tinción de inmunoperoxidasa -Diaminobencidina con contratinción de hematoxilina de Mayer. Bar = 10 micras.
Tabla 3 Detección de Helicobacter spp. en los diferentes compartimentos del estómago del estómago canino recurrir a diferentes métodos de diagnóstico de la región gástrica
Los métodos de detección
Positivo (ciento & número)
HE

MG
IHC *
PCR
corporal (n = 66)
62.1 (41/66)
68,2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
antro (n = 51)
70,6 (36/51)
78,4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51,0 (41/51)
Leyenda: HE: hematoxilina-eosina; MG: tinción de Giemsa modificado; IHC: inmunohistoquímica; qPCRs
más identificación de su especie se realizó a través de Helicobacter
cada especie; reacción en cadena de la polimerasa
* Los resultados positivos obtenidos con IHC no difirieron significativamente entre cada región del estómago (0,05 p >): PCR.. . Helicobacter spp
. se detectaron en el 47,8% de los animales (33/69) (Tabla 3). La mayoría de las muestras fueron positivas en el H. heilmannii
qPCR específica. Sin embargo, los amplicones mostraron sólo aproximadamente el 92% de homología con H. heilmanni S. S.
. Por lo tanto, estos casos fueron reclasificadas como H. heilmannii-
gusta.
En el 51,5% (17/33) de las muestras positivas, sólo se identificó un Helicobacter
especies mientras que las infecciones mixtas fueron detectados en 48,5% (16/33) (Tabla 2). H. heilmannii-
como los organismos fueron los más comúnmente encontrado (22/33 o 66,7%), siendo identificado en diez perros como una sola infección y en 12 perros como infecciones mixtas. H. salomonis
fue la segunda especie más prevalentes (17/33 o 51,5%) a pesar de que se encuentra principalmente en asociación con otros NHPH (42%) más que por sí sola (9,1%). Iguales proporciones de H. felis
y no se detectaron H. bizzozeronnii gratis (6/33 o el 18,2%), ya sea como infecciones simples (6,3%) o mixtas (12,1%). Las infecciones mixtas con H. heilmannii
-como y H. salomonis
fueron observadas con mayor frecuencia (33,3%) (Tabla 2). En la zona del cuerpo, la especie más frecuentemente identificados fue H. salomonis gratis (44,0%), mientras que en el antro la especie más frecuente fue H. heilmannii-
similares (57,7%) (Tabla 4) .Tabla 4 Específica especies de Helicobacter detectado por PCR en los diferentes compartimentos del estómago del estómago canino
específico PCR Helicobacter spp. resultados positivos
La región gástrica (por ciento & número)
Cuerpo
antro gratis (n = 25) gratis (n = 26)
H. heilmannii-como
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. salomonis
44.0 (11 /25)
7,7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3.8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
11.5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4.0 (1/25)
3.8 (1/26)
H . heilmannii parecido + H. salomonis
8,0 (2/25)
11.5 (3/26)
H. heilmannii parecido + H. felis
4.0 (1 /25)
3.8 (1/26)
H. felis + H. salomonis
4.0 (1/25)
0
Hubo una correlación significativa entre la presencia de Helicobacter spp
. y ambos de leve a moderada lesión epitelial y leve a moderada intraepitelial infiltración de linfocitos (Figura 1B) del estómago canino (p < 0,05). No estadísticamente significativa se encontraron correlaciones entre Helicobacter
infecciones y atrofia de la mucosa gástrica o fibrosis, infiltración de la lámina propia
linfoplasmocítica o hiperplasia linfofolicular. No se detectaron diferencias significativas en cuanto a la densidad de la colonización bacteriana entre las dos regiones del estómago (p > 0,05). Francia El número de casos de Helicobacter
-positivos detectados con los diferentes métodos difieren significativamente (p < 0,05). resultados positivos IHC no difirieron significativamente entre cada región del estómago (p > 0,05), mientras que los números obtenidos con HE, GM y qPCR difirieron significativamente entre el cuerpo y el antro (p < 0,05).
Discusión
en este estudio, se observó una alta prevalencia de gastritis (95,7%). Estos resultados están de acuerdo con otros estudios que informan de la aparición de gastritis como un hallazgo frecuente en los perros [14,31,32]. Por el contrario, erosiones gástricas o úlceras se encuentran raramente en estos animales.
Infección NHPH se determinó mediante cuatro métodos (HE, MG, IHC y qPCR) y una prevalencia de 87,0% en los perros fue detectado. Estos resultados son consistentes con los que están disponibles en la literatura, que documentó alta prevalencia de NHPH en la mucosa gástrica canina [12,19,33-35]. En nuestro estudio canino infección NHPH fue acompañado de manera significativa por leve a moderada infiltración de linfocitos intraepiteliales y leve a moderada lesión epitelial gástrica, independientemente de la ubicación del estómago. Una clara relación entre la gastritis canina y la infección por Helicobacter
fue, sin embargo, no se ha establecido que está de acuerdo con los resultados de otros [11,14,15,34].
En una investigación anterior, el porcentaje de Helicobacter
-positivos casos detectados después de que él la tinción de muestras gástricas caninas fue 17,5% [24]. En el estudio actual, todas las muestras fueron examinadas por dos patólogos con gran experiencia en la detección de Helicobacter spp
.
Organismos, tras la tinción de rutina. Esto puede haber jugado un papel en la tasa de detección más alta (65,2%) se informó aquí.
De acuerdo con estudios anteriores, NHPH se observa a menudo no sólo en la mucosa superficial y dentro de las glándulas gástricas, sino también de forma intracelular, en el citoplasma de células parietales [31,33,36] (Figura 1C y D). organismos en forma de espiral presentes en esta localización subcelular particular eran difíciles de detectar después de que él y MG tinción debido a la granulación citoplasma de las células parietales. En nuestras manos, IHC parecía ser una técnica muy valiosa para identificar NHPH dentro de estas células (Figura 1D). En general, la tinción inmunohistoquímica mostró los mayores valores de Helicobacter
-positivas (82,6%). Esta conclusión está de acuerdo con otros resultados que muestran que los anticuerpos disponibles comercialmente contra H. pylori ¿Cuáles son útiles para la detección de Helicobacter spp
. . En muestras incluidas en parafina de los estómagos de perros [24,26,36]
Anteriores estudios informaron diferencias estadísticamente significativas entre la detección de Helicobacter
organismos mediante técnicas de inmunohistoquímica y PCR (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) informaron de que el ensayo de PCR tenía mayor sensibilidad y especificidad que los otros métodos [4]. Sin embargo, en nuestro estudio, la tasa de prevalencia de Helicobacter spp
.
Obtiene con la qPCR fue la más baja (47,8%). Investigaciones anteriores han demostrado que la fijación con formalina y parafina obstaculizar el análisis de PCR [37,38]. Sjödin et al.
(2011) compararon la eficacia de la amplificación de ADN de fresco (n = 28) y embebidos en parafina (n = 28) muestras para la identificación de Helicobacte
r spp.
De diferentes órganos ( estómago felino, duodeno, hígado y páncreas) y la conclusión de que el valor medio de la concentración de ADN alcanzado fue mayor cuando se obtienen de tejidos frescos [39]. análisis de ADN de muestras de tejido embebidas en parafina utilizando PCR /qPCR puede estar comprometida debido a la fragmentación del ADN, sustancias inhibidoras, o una combinación de ambos. La fijación con formalina de hecho puede causar la fragmentación del ADN, así como la destrucción parcial de ADN [38,40] y las reacciones de PCR también puede ser inhibida por residuo formalina [37]. Los efectos negativos de formalina están directamente relacionados con la duración de la fijación de [40]. Aunque las muestras incluidas en este estudio fueron todos procesados ​​en el mismo laboratorio y por lo tanto sometido a los mismos protocolos estándar, la duración de la fijación puede variar entre las muestras debido a la variación en el intervalo de tiempo entre la recolección de la muestra y su llegada al laboratorio.
Different se han abordado enfoques moleculares para la identificación de especies NHPh [4,14,24,28]. Las técnicas basadas en la detección o la secuenciación de 16S o 23S rRNA genes que codifican pueden, sin embargo, no distinguir entre los diferentes canino y Helicobacter
especies gástricas felinos, mientras que las pruebas basado en la detección o la secuenciación del gen hsp60
, la ureasa los genes a y B o gyrB
gen permiten la identificación de estas bacterias a nivel de especie [9].
en nuestro estudio, los amplificados obtenidos en el H. heilmannii
específica qPCR sólo mostró aproximadamente un 92% de homología con H . heilmannii, España, que hasta ahora sólo se ha cultivado desde la mucosa gástrica de los gatos. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• Mecanismos moleculares de la adhesión de las células epiteliales gástricas e inyección de CagA de Helicobacter pylori
• La incidencia y la supervivencia de esófago y cáncer gástrico en Inglaterra entre 1998 y 2007, un study