Plos ONE: katepsina E Je Marker želodčne Diferenciacija in Signet-Ring karcinom želodca: Roman Pobuda o želodca Tumorigenesis

Povzetek

rak želodca (PK) predstavlja različne histološke značilnosti, čeprav mehanizem temelji njena raznolikost se redko pojasnjen. To je v glavnem uvrščajo v dobro diferenciranega cevasto adenokarcinom (tub1), zmerno razlikuje cevni adenokarcinom (tub2), slabo diferencirani adenokarcinom (por), karcinom pečat obroč celic (SIG), mucinozni adenokarcinoma (MUC), in papilarnega adenokarcinoma (PAP). Z pregledu smo ugotovili, katepsina E (CTSE)
izraža splošno v sig tipa, občasno por tipa, in le redko v tub1 /tub2 tipa linije GC celic. V kirurško odstranjenimi osebkov, je CTSE imunoreaktivnosti v 50/51 sig tipa (98,0%), 3/10 tub1 tipa (30,0%), 18/07 tub2 tipa (38,9%), 15/26 por tipa ( 57,7%), 10/04 pap-type (40,0%), in 0/3 muc tipa (0,0%) GC. V endoskopsko-odstranjenimi osebkov, 6/7 sig-type (85,7%), 7/52 tub1 tipa (13,7%), 5/12 tub2 tipa (41,7%), 2/7 pap-type (28,6%) GC in 0/6 adenom (0,0%), izražena CTSE. Za ne-rakavih tkiv, je CTSE splošno izražena v normalnem fundic, pilorusa in srčne žlez želodec, ampak komaj v drugih prebavnih organov. V predrakavih intestinalno metaplazijo v želodcu, je CTSE večinoma opazili pri mešanem želodčno-in-črevesne vrste, primanjkuje le-črevesne tipa. CTSE izraz je v pozitivni korelaciji s želodca marker MUC5AC ( p
< 0,0001) in negativni korelaciji s črevesno marker MUC2 ( p
= 0,0019). Za sig tipa GC, v obeh tumorjev in ozadja sluznice, izražanja MUC5AC in CTSE je visoka, medtem ko se MUC2 je nizka, kar pomeni, da sig tipa GC odraža značilnosti ozadja sluznice. Za želodca adenoma in tub1 /tub2 tipa GC, bolj nediferencirani tumorji ponavadi pokažejo večjo izražanje CTSE z MUC5AC in nižje izražanje MUC2 v tumorjev, vendar se nagibajo k predstavi nižje izražanje CTSE, MUC5AC in MUC2 v ozadju sluznice. Ti kažejo, da več maligni želodca adenokarcinom z močnejšim želodca in šibkejše črevesne lastnosti ponavadi nastanejo iz ozadja sluznice z zmanjšano tako želodčnih in črevesnih funkcij. Skratka, CTSE je označevalec tako želodca diferenciacije in karcinom pečat-obroč celic, ki naj bi osvetlili mehanizma želodca tumorigeneze

Navedba. Konno-Shimizu M, Yamamichi N, Inada Ki, Kageyama- Yahara N Shiogama K, Takahashi Y, et al. (2013) katepsina E Je Marker želodčne Diferenciacija in Signet-Ring karcinom želodca: A Novel predlog o želodca tumorigeneze. PLoS ONE 8 (2): e56766. doi: 10,1371 /journal.pone.0056766

Urednik: Anthony W.I. Lo, kitajski University of Hong Kong, Hong Kong

Prejeto: 20. november 2012; Sprejeto: 14. januar 2013; Objavljeno: 22. februar 2013

Copyright: © 2013 Konno-Shimizu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo bila podprta v delu z donacijo Sato Memorial fundacije za raziskave raka, delno raziskovalni donacijo Nakayama Cancer Research Institute, v delu, ki jih raziskovalna nepovratnih sredstev iz sklada za spodbujanje raziskave raka, pa tudi v delu, ki ga Grant-in- pomoč za mlade znanstvenike (B) od Ministrstva za izobraževanje, kulturo, šport, znanost in tehnologijo (MEXT). Toda vsi financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Predstavitev

rak želodca (GC) je četrti najpogostejši rak in drugi vzrok smrti zaradi raka v svetu, kljub postopnemu zmanjšanju njene pojavnosti in umrljivosti [1], [2]. Znano je, da v želodcu malignost predstavlja različne histološke značilnosti [3]. Najpogosteje uporabljena klasifikacija raka želodca je razvrstitev Lauren, ki se razlikuje v črevesju (diferencirano) tip GC in difuzno (nediferencirani) tip VS [4]. Lauren tipkanje je enostavno in lahko razumljiva, čeprav se njegova poenostavljanje pogosto vodi do nezmožnosti odražajo natančne značilnosti malignega obolenja želodca [3]. V podrobnejši japonski klasifikacije raka želodca [5], ki je podoben klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije [6], se želodčni adenokarcinom razvrščena v šest kategorij: dobro diferenciran cevni adenokarcinom (tub1), zmerno razlikuje cevni adenokarcinom (tub2), slabo diferencirano adenokarcinom (por), karcinom pečat obroč celic (sig), mucinouse adenokarcinom (muc), in papilarni adenokarcinom (PAP). Na splošno Lauren je difuzna (nediferencirani) vrsta vključuje por-, smernika, in muc tipa GC, medtem ko je Lauren je črevesna (diferencirano) Tip obsega tub1-, tub2- in pap tipa GC [3].

med različnimi histoloških tipov GC, smo se osredotočili na pečat obroč karcinomom (SRCC) želodca (sig tipa GC). SRCC je, mucin izločajo adenokarcinom, v kateri intracitoplazemski mucin stisne svoje jeder, da dobimo celic značilno "pečat-obroč" izgled [7]. Medtem ko je SRCC poročali, da se izvira iz različnih tkiv, želodec je najpogostejša organ izvora [7], [8]. Kljub pogostim razširjenosti SRCC med želodca malignih bolezni, clinicopathological značilnosti sig tipa GC so še vedno sporen; Nekatere prejšnje študije so poročali, da pečat obroč histologiji predstavlja boljšo prognozo [9] [10] [11], medtem ko druge študije so poročali, da je histologijo SRCC znamenje precej slabše prognoze [8], [12], [ ,,,0],13], [14]. V skladu s takšno ozadje, smo poskušali najti nove posebne označevalne gene za sig tipa GC. V večini prejšnjih študijah [15] [16] [17], je bilo sig tipa GC analiziramo skupaj z por tipa in MUC-vrste, saj so te tri vrste GC razvrščene v Lauren tip razpršeni. Vendar pa mnogi poročila kažejo, da je sig-tip GC precej drugačna od por- ali MUC-tip GC, z vidika molekularne lastnosti ali malignih potencialov [3], [13], [18]. Zato smo analizirali sig tipa GC neodvisno od por- in muc tipa GC.

Med veliko število genov, smo pregledani več tisti, kot so kadherina
družinskih genih [19 ], [20], človekove mucin
geni [21], vimentin
[22], katepsina
družinskih genih [23] [24] [25] itd, ki izrazi so poročali, da je drugačen od črevesne in razpršenega tipa GC Lauren. Glavni namen naše študije je najti sled za nerešeno karcinogenosti sig tipa GC z določitvijo svoje posebne označevalne gene. Pričakovali smo, da bo naša preskušanje privedlo do neznanih nabavnih regulatornih genov (kot so posebni transkripcijskih faktorjev), ki določajo lastnosti sig tipa GC. Nekateri transkripcijski faktorji, ki se nanašajo na prebavilih lastnosti so bile pojasnjene, kot so cdx
družinskih genih [26], [27], gli
družinskih genih [28], in sox2
[29], vendar pa menimo, da ni nekaj ključni geni za prebavil diferenciacije in želodca onkogenezo še vedno neodkrita. Druga Namen naše študije je analizirati zelo zgodnji fazi želodčnega tumorigeneze, ki temelji na izražanju ugotovljenih novih označevalnih genov. Ne samo, da se osredotoča na sig tipa GC, smo dodatno izzvani, da oceni vse vrste primerov zgodnjega GC z analizo ugotovljeno dvojno podajo izražanje genov tako lezijo tumorja in sosednjih sluznice. Prepričani smo, da naše delo mora biti ključ do približuje spornih značilnosti sig tipa GC, in tudi mora biti vodilo za pojasnjevanje različne histološke lastnosti želodčne malignosti.

Materiali in metode

Cell Culture

Dvajset želodca, deset debelega črevesa in dva brez gastrointestinalne rakave celične linije smo ohranjali in DMEM z 10% fetalnega telečjega seruma (Gibco /Invitrogen, Carlsbad, CA) pri 37 ° C, [30] [31]. Vse celične linije so bile kupljene od American Type Culture Collection, RIKEN Cell banke ali Cell Resource Center za biomedicinske raziskave Inštituta za razvoj, staranje in rakava obolenja, Tohoku University. Imena in histološke vrste uporabljenih celičnih linij raka so podrobneje pojasnjen pri podpori dokumenta S1. Za DNA demetilacija reagenta in inhibitor histon-deacetilaze (HDAC), 5-aza-2'-deoksicitidinska (5-aza-DC, Sigma-Aldrich) pri 2 ug /ml ali trichostatin A (TSA, Sigma-Aldrich) v 100 ng /ml, dodamo mediju kulture.

RT-PCR

Skupaj celični RNA smo pripravili s pomočjo ISOGEN RNA izolacijo reaent (Wako, Osaka, Japonska), kot je opisano predhodno [30]. Semi-kvantitativno RT-PCR smo izvedli s pomočjo eksponent One-Step reakcijo z uporabo Platinum Taq (Gibco /Invitrogen). Primarnih parov in RT-PCR postopki zaposleni za odkrivanje ravni izraz E-kadherina (CDH-1)
, LI-kadherina (CDH-17)
, MUC5AC
, MUC6
, MUC2
, CTSE (katepsina E)
, CTSD (katepsina D)
, CTSB (katepsina B)
, CTSL (katepsina L)
in GAPDH
so prikazani v tabeli S1.

Western blot

Cela celične ekstrakte (20 mikrogramov vsak) liziramo in kuhamo s 1x vzorčnim pufrom [30] ločimo z elektroforezo na 12,5% SDS poliakrilamidnih gelih, prenese na nitrocelulozno membrano (Haybond-N, Amersham, Freiburg, Nemčija), ter imunoreaktivnosti z anti-humanega katepsina E protiteles (# AF1294, R &D Systems, Minneapolis, MN) ali anti-humani β-aktina (C4) protitelesa (# sc-47.778, santa Cruz Biotechnology, santa Cruz, CA). Za drugi protiteles, s hrenovo peroksidazo (HRP), označenih s anti-kozjega IgG (H + L) osel protitelesa (ˁ-035-003, Jackson, Baltimore, PA) in s hrenovo peroksidazo (HRP), označenih s anti-mouse IgG (H + L) koza protitelesa (# A90-216P, sta bila uporabljena BETHYL, Montgomery, TX). Posebni pasovi so bile ugotovljene z Immunostar LD (WAKO, Osaka, Japonska) in LAS-4000 (Fuji Film, Tokio, Japonska).
Imunohistokemija

smo izvedli

Deparaffinization in endogene peroksidaze inaktivacija kliničnih tkiv kot je opisano predhodno [3]. Za CTSE, primarni imunskim barvanjem s protitelesom anti-humani CTSE koza poliklonskega (# AF1294, R &D Systems) pri razredčenju 1:100 smo izvedli za 16 ur pri sobni temperaturi. Po spiranju v PBS (fosfat-Puferirana-Soli) trikrat, sekundarni imunskim barvanjem z Histofine Enostavno Stain MAX-PO (G) (Nichirei, Tokio, Japonska) je bila izvedena za 30 minut pri sobni temperaturi. Po spiranju v PBS trikrat so bili reakcijski produkti vizualizira v 20 mg /dl 3,3'-diaminobenzidine rešitev tetrahidroklorid vsebuje kapljico 30% H _{2O 2, nato pa speremo s PBS. Jedrska counterstaining je bilo izvedeno z hematoxilin Mayer. Za MUC5AC in MUC2, hidrirano ogrevanja v 1 mM EDTA (pH 8,0) pri 120 ° C, je bila prvič izvedena v lonec (Delicio 6L; T-FAL, Rumily, Francija), 10 min za pridobivanje antigena. Primarni imunskim barvanjem z anti-MUC5AC protitelesa (NCL-MUC-5AC, Novocastra, Newcastle-upon-Tyne, Velika Britanija) na 1:200 redčenje ali anti-MUC2 protitelesa (NCL-NUC-2, Novocastra) v 1:500 razredčenje smo izvedli 16 ur pri sobni temperaturi. Po spiranju v PBS trikrat, sekundarni imunskim barvanjem z Histofine Enostavno Stain MAX-PO (G) (Nichirei) smo izvedli 30 minut pri sobni temperaturi. Naslednji korak je bil enak kot CTSE imunološko barvanje. Vse imunoreaktivnosti odseki so neodvisno ocenjevati z dvema patologi, skupaj s HE-obarvajo in PAS obarvajo profili iz istih poškodb.}

bula Vzorci

Med želodčnega tkiva raka nagne na Fujita zdravje University School of Medicine, smo izbrali 51 želodca pečat obroč karcinoma (sIG) vzorcev kirurško odstranjenimi. Poleg tega je bilo 67 z rakom želodca kirurški primerki drugih pet vrst adenokarcinomom želodca (tub1, tub2, por, oče, in muc), naključno izbranih iz iste banke. Za endoskopsko odstranjenimi vzorcev, smo izbrali 84 primerkov (78 želodčni primerov raka in 6 želodčne primere adenom), ki so bile obravnavane na Univerzi v bolnišnici v Tokiu od leta 2005 do leta 2011. V vseh kliničnih vzorcev, so pisna obveščeni soglasja pridobljena iz ustreznih bolnikov po Helsinški deklaraciji. Ta študija je bila odobrena po institucionalnem etične presoje krovu za prehrano preiskavo na Univerzi Fujita zdravja, in je bil potrjen tudi s strani etičnih odborov Univerze v Tokiu.

retrovirusni vektorji

Za ustvarjanje retrovirusni vektorji ki kaže Cdx2
, Gli1
, Gli3
, CTSE
in Sox2
, ustrezne cDNA so bili vstavljeni v pMXs-dav- kom IRES -puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA), kot sledi. Za Cdx2
, pMXs-Cdx2-IRES-puro je bila ustvarjena kot prej [26] poročajo. Gli1
cDNA smo dobili od PCR XL-TOPO-Gli1 (odprto Biosystems, Huntsville, AL) s pomočjo PCR z uporabo primerjev 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 'in 5' agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3 ". Po dvojnem prebavo z Bgl II in ne jaz, je bil pridobljen fragment vstavimo v mestu /Ni I BamH I pMXs-IRES-puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) za ustvarjanje pMXs-Gli1-IRES-Puro. Gli3
cDNA smo dobili od PCR XL-TOPO-Gli3 (Open Biosystems) preko pomnoževanje uporabo začetnih oligonukleotidov 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 'in 5' tgcggatcctacgtgggcatttttg-3 ". Po dvojnem prebavo s BamH I in ne jaz, dobljeni fragment je bil vstavljen v BamH I /Ni mesta I za pMXs-IRES-Puro za ustvarjanje pMXs-Gli3-IRES-Puro. CTSE
cDNA smo dobili od pCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Scientific, Madison, WI) s pomočjo PCR z uporabo primerjev 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 'in 5' gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3 ". Po dvojnem prebavo z Bgl II in Xho I, je bil pridobljen fragment vstavimo v mestih BamH I /Xho I pMXs-IRES-Puro za ustvarjanje pMXs-CTSE-IRES-Puro. Sox2
cDNA smo dobili od MKN-7 genomske DNA s pomočjo PCR z uporabo primerjev 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'in 5' tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3 ". Pomnožene fragment je bila vstavljena v mestih EcoR V pT7Blue-T vektor (Novagen, Darmstadt, Nemčija) ustvarjanja pT7Blue-Sox2. Po dvojnem prebavo s BamH I in Sal I, je bil pridobljen fragment vstavimo v mestih BamH I /Xho I pMXs-IRES-Puro za ustvarjanje pMXs-Sox2-IRES-Puro. Z kotransfekcijo teh plazmidov z virus vezikularnega stomatitisa ovojnice G-proteina (VSV-G) plazmidov v PLAT-GP pakiranju oziroma, VSV-G-pseudotyped Retrovirusni vektorji, ki temeljijo na MuLV izraža Cdx2 , Gli1
, Gli3
, CTSE
in Sox2
bili pripravljeni.

Rezultati

izražanje katepsina E (CTSE)
je pomembno povezana z Izvira histološki Vrsta želodca rakave celične linije

Če želite iskati označevalne gene za sig tipa GC, smo pregledani izražanje številnih genov poročali, da prikazujejo poseben izraz med črevesno in razpršenega tipa GC Lauren. Izražanje E-kadherina
( CDH-1
) [19], LI-kadherina
( CDH-17
) [20], MUC5AC
[21], MUC6
[21], MUC2
[21], vimentin
[22], CTSD
( katepsina D
) [23], [24], CTSE
( katepsina E
) [23], [24], CTSB
( katepsina B
) [25], CTSL
( katepsina L
) [25], in GAPDH
(notranja kontrola) geni so bili ocenil RT-PCR v 20 GC linijah skupaj s 12 raka celičnih linij, pridobljenih iz drugih organov (Slika 1A). Nato smo usmeri našo pozornost na CTSE
, saj izraža tako v Kato-III in NUGC-4 izhaja iz sig tipa GC, in tudi zato, ker nikoli ne izraža v MKN-7 in H-111-TC znano je, da izvira iz dobro diferenciranega cevastega adenokarcinomom želodca (tub1 tipa GC, spremnega dokumenta, S1).

za druge pregledanih genov, izražanje CDH-1
( E- kadherina
), poročali, da pogosto primanjkuje Lauren tipa difuzna GC [19] [32] [33], je bilo nepričakovano odkrili v dveh celicah sig-type-GC izvira (slika 1A). Prav tako je bilo nepričakovano, da je CDH-17
( LI-kadherina
), misli, da je črevesna dvojno podajo gen [20] [26] [27], izraža v skoraj vseh linije želodca rakava celica vključno sig tipa (slika 1A). Za druge katepsina družinskih genih, CTSD
so poročali, da se zelo izražene v razpršenega tipa GC in tudi napovedni parameter za bolnike želodca karcinomom [23], [34], vendar rezultati RT-PCR je pokazala, da so vsi pregledani linije rakave celice enako hitre CTSD
(slika 1A). CTSB
in CTSL
so poročali, da se povišana želodčnega raka [35] in v korelaciji z malignim lastnine [36], vendar je poseben izraz niti CTSB
ali bi CTSL
in sig-tip GC izhaja celičnih linijah zaznati (slika 1A). Kot celota, izraz profil CTSE
zdi, da je precej drugačen od drugih katepsina družinskih genih.

Naslednja ocenili odnos med CTSE izražanja in histološki tip celičnih linij 20 GC. Na osnovi podrobnega nadzora literatur, opisanih v "histološko Vrsta želodca rakave celične linije" iz spremnega dokumenta, S1, bi 19 GC celične linije razporejene po Lauren in japonski razvrstitev [3] [4] [5] (tabela 1) . Po klasifikaciji Lauren, 7 od 11 celic-GC izhaja tipa difuzna in 1 od 5 celice tipa črevesnih-GC izhaja izražajo CTSE (tabela 1): CTSE
gen kaže, da je izražena v difuzni tip in pomanjkljiva v črevesna tip GC. Zveza med CTSE izražanja in histološka značilnost želodčne malignosti postane jasno, ko se uporablja bolj natančno japonski uvrstitev. Med celične linije iz razpršenega tipa GC, je treba omeniti, da NUGC-4 in Kato-III izvira iz sig tipa GC močno izražajo CTSE, medtem ko SH-10-TC in KE-97 izvira iz muc tipa GC primanjkuje CTSE izraz. Za celic, pridobljenih iz por tipa GC, najpogostejša histološka vrsta želodčnega maligne bolezni [3], CTSE izraz je raznolika: MKN-45, KE-39, HuG1-PI, HuG1-N, in AGS močno izražajo CTSE, medtem GCIY in HGC-27 primanjkuje CTSE izražanja. Ravno nasprotno, med celične linije iz Lauren črevesne tipa GC, in sicer tub1 in tub2 japonske klasifikacije, MKN-7, H-111-TC, MKN-74, in AZ521 nimajo CTSE izraz, z eno samo izjemo NCI-N87 ki kažejo očitne CTSE izraz.

iz teh rezultat, smo predvidevali, da je izraz CTSE pomembno povezana s histološko vrsto raka želodca. Za druge redke vrste GC celičnih linij, podjetja MKN-1, ECC-10, in ECC-12 so popolnoma primanjkuje CTSE izražanja (slika 1A, tabela 1).

Izražanje katepsina E (CTSE )
je Gene urejeno Majorly na ravni
Transcription

z 13 želodca, 5 debelega črevesa in 2 drugih rak celičnih linij, proizvodnja CTSE protein smo analizirali z Western blot analiza (slika 1B). 7 celičnih linij 20 smo ocenili tudi z imunohistokemijo (slika S1). V obeh analizah CTSE
mRNA izražanja in proizvodnja CTSE beljakovine so večinoma skupaj, kar kaže na je CTSE
izraz večinoma urejeno na transkripcijski ravni. Poleg tega vse ali nobena izraz CTSE prikazano na RT-PCR, zahodni s sušenjem in imunohistokemijo predlagal, da bi se v želodcu rakave celice jasno razdeljeni v dve kategoriji:. CTSE, ki izraža vrsto in tip CTSE-pomanjkljivo

da bi raziskali ureditev CTSE
gen, dve veliki epigenetske droge, demetiliranjem sredstvo 5-aza-2'-deoksicitidin in inhibitor histon-deacetilaze trichostatin A [37], so bili uporabljeni do pet GC celičnih linij (slika 1C) . Tri CTSE-izražanje in so bili zdravljeni dva CTSE s pomanjkanjem GC celične linije, vendar nismo mogli zaznati vsako spremembo CTSE
prepis (slika 1C). Za metilacije, smo iskali tudi CpG otokov v sugestivno promotorski regiji človeškega CTSE
gena, ki uporablja dve spletni strani: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx~~HEAD=pobj" dokazuje CpG otok iskalec in " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "podprl Nacionalni center za biotehnologijo informacije (NCBI). Rezultati obeh iskanj je predlagal, da promotor človeškega CTSE
gen je značilen nižji delež CpG dinukleotidov (55%) in brez otok CPG, ki so v skladu z našimi rezultati (slika 1C).

Poleg tega smo ocenili vpliv štirih transkripcijskih dejavnikov, ki so poročali, da uravnavajo številne prebavne gene: cdx2
[26], [27], gli
družinskih genov ( gli1
in gli3
) [28], in sox2
[29]. Pod stabilno transdukcije v cdx2
, gli1
, gli3
in sox2
, pa nismo mogli zaznati očitno spremembo CTSE
izraz (Slika 1D). Trenutno ne moremo pojasnitev regulativni mehanizem CTSE
gen, ki ga je treba rešiti v prihodnosti.

katepsina E (CTSE) je definitivno Izraženo v Signet-ring karcinomom želodec

Za potrditev špekulacij iz linije GC celic (tabela 1, slika 1A), smo poleg analizirali CTSE izraz v kliničnih vzorcih. Sprva so ovrednotili 51 sig tipa vzorca GC kirurško odstranjenimi. Presenetljivo smo ugotovili očitno obarvanje CTSE v vseh 51 osebkov preučenih in 50 v 51 primerih, CTSE-pozitivne celice v tumorju (tabela 2) zasedajo več kot 90% rakavih celic.

Nato smo analizirali 67 kirurški vzorci, ki izhajajo iz primerov GC razen sig-type, ki je predstavil različnih vzorcev iz CTSE izražanja (tabela 2). CTSE izraz v por tipa GC je očitno večja v primerjavi z drugimi štirimi vrstami GC, čeprav je bila precej nižja kot pri sig tipa GC (tabela 2). Razširjenost CTSE pozitivnih celic v tub1-, tub2-, pap- in muc tipa GC je gotovo nižja, vendar to ni tako nizko, kot druge običajne prebavil (tabela 2). Tipični imunskim barvanjem podobe CTSE v šest vrst GC so prikazani na sliki 2 (SIG in tub1) in sliki S2 (tub2, PAP, por in MUC).

Glede na rezultat kirurške osebkov, smo nadaljnjo analizirali CTSE izraz 84 endoskopsko odstranjenimi želodca vzorcev tumorjev. V primerjavi s kirurško osebkov, je histologijo endoskopsko izrezanega tkiva je veliko bolj homogena; je bilo od tam pričakuje, da povezava med CTSE izražanja in histologijo raka želodca je mogoče analizirati bolj natančno. Zajemajo 78 primerov v zgodnji fazi adenokarcinom (7 sig tipa, 52 tub1 tipa, 12 za tub2 tipa, in 7 pap tipa GC) in 6 primerov predrakavih adenom (tabela 3). CTSE izraz smernika, tub1-, tub2- in pap tipa GC v endoskopsko odstranjenimi tkivih spominja na kirurško odstranjenimi tiste z ustreznim histologijo (tabeli 2 in 3). Izračunana CTSE izraz rezultati (tabela 3) jasno kažejo težnjo, da CTSE zagotovo izraža v sig tipa GC ker kaže, da je pomanjkljiva v tub1- in tub2 tipa GC. Prav tako je treba opozoriti, da v želodcu adenom, ki se lahko štejejo za bolj diferenciran histološko funkcijo v primerjavi z tub1 tipa GC, je pokazala najmočnejšo pomanjkljivost CTSE (tabela 3).

CTSE ni le kazalnik pečat obročne karcinomom želodec, ampak tudi želodca Diferenciacija Marker

da bi preverili porazdelitev CTSE pri normalni črevesju in predrakavih želodcu, imunskim barvanjem CTSE je nadalje uporabljajo za ne-rakasto želodcu in drugih trakta organov prebavo. V želodcu brez atrofijo in intestinalno metaplazijo, se izraz CTSE jasno opazili v fundic in pilorusa žlez želodca (Slika S3D /S3A in S3E /S3B). Srčne žleze želodcu tudi izraziti CTSE, čeprav je precej šibkejša kot izražanja v fundic ali pilorično žlez (Slika S3F /S3C). Contrastively je CTSE redko izražena v požiralniku, dvanajstniku, tankem črevesu in debelem črevesu (slika S4).

Nadalje smo ocenili CTSE izraz v želodčne sluznice z intestinalno metaplazijo, znanem predrakavih stanja želodca [26 ], [29] [38]. Kot je prikazano na sliki 3A, želodčne fundic žleze in črevesne metaplastic žleze kažejo kontrastivno barvanje CTSE. Značilno je, da se črevesna metaplazija razdeljeni v dve kategoriji: mešane želodčno-in-črevesne tipa (nepopolni tip) in samo črevesni tip (popolna tip) [29], [38]. Znano je, da je nekdanji ena izraža tako MUC5AC (želodca dvojno podajo mucin) in MUC2 (črevesno dvojno podajo mucin), medtem ko je slednji eden izraža ne MUC5AC vendar MUC2 [29]. V obeh vrstah intestinalno metaplazijo v želodcu, smo potrdili, da je izraz CTSE podoben MUC5AC in nasproti MUC2 (slika 3B in 3C).

Za oceno združenje CTSE izražanja z MUC5AC in MUC2 izražanja, njihova imunskim barvanjem smo statistično ovrednotili z endoskopsko resekcija 84 želodčne tumorske tkiva (tabela S2). Korelacija analize so pokazale, da je CTSE izraz pozitivno povezana z želodca marker MUC5AC ( p
< 0,0001) in negativno povezana z črevesnih marker MUC2 ( p
= 0,0019). Sintetično, smo ugotovili, da, tako kot MUC5AC, je CTSE eden od želodca diferenciacije označevalcev.

Več Raznovrstna Tubular Adenokarcinom Kaže, da se bodo pojavili iz ozadja sluznico z zmanjšano Tako "v želodcu" in "črevesne" Značilnosti

Da bi raziskali korak začetku želodca tumorigeneze, je ozadje sluznico zgodnjega raka in adenom dodatno ovrednotiti z uporabo 84 endoskopsko odstranjenimi primerkov. CTSE ekspresijo ne-rakavo želodčne sluznice, ki mejijo na tumorske lezije smo ocenili, skupaj z MUC5AC in MUC2 (tabela 4). Za sig tipa GC, tako tumor lezije in ozadje sluznica predvsem pokazala močan izraz CTSE in MUC5AC, medtem ko je izraz MUC2 zelo šibka oba (tabela 4). Podobne izraz vzorci treh označevalcev v tumorju in sosednjih sluznice kažejo, da začetek sig tipa GC odraža značilnosti ozadja sluznice, z vidika "želodčnega" in "črevesne" diferenciacije. To se pravi, sig tipa GC z non-črevesnih želodca lastnosti najprej pojavi iz ozadja sluznice z non-črevesne in želodčne funkcije.

Za želodca adenoma in cevasto adenokarcinom (tub1 /tub2 tipa GC), contrastively, ekspresijski profili treh markerjev so zelo zanimive (tabela 4). Več nediferencirani želodca tumorji ponavadi poveča izražanje CTSE in MUC5AC v tumorskih lezij (tub2 > tub1 > adenom), vendar zmanjša izražanje teh želodčnih označevalcev v sluznici ozadju (tub2 < tub1 < adenom). Ti kažejo, da je bolj neopredeljeni (torej bolj maligni) želodčnih tumorjev apt pokazati močnejšo želodčne premoženja, medtem ko so ponavadi izhajajo iz sluznice ozadja z zmanjšano želodčne funkcije. Po drugi strani, bolj diferencirani želodca tumorji ponavadi izraziti MUC2 v obeh tumorskih lezij in ozadja sluznice (adenom > tub1 > tub2). To pomeni, da črevesno diferenciacija ozadju želodčne sluznice, vodi do intestinally diferenciranih (torej manj malignih) želodčnih tumorjev.

Za pap tipa GC, so izrazi CTSE, MUC5AC in MUC2 precej močna tako lezije tumorja in okoliških sluznice, ki se precej razlikuje od izražanja vzorcev tub1 /tub2 tipa GC (preglednica 4). Pap tipa GC razvrščena v črevesni vrste Lauren skupaj z tub1 /tub2 tipa GC, vendar naše sedanje analize kažejo, da pap-type in tub1 /tub2 tipa GC ne sme obravnavati v isti kategoriji, z vidika želodca ali črevesja Lastnosti. V naših prejšnjih poročilih analizira BRM
[3], morebitna ključna dvojno podajo gen diferenciacije črevesja, izražanje BRM v želodcu papilarni adenokarcinomom (PAP) je precej drugačen od cevastega adenokarcinomom želodca (tub1 in tub2). Trenutno smo prepričani, da je treba histološko razlika med pap tipa GC in tub1 /tub2 tipa GC strogo priznana.

Pogovor

Vloge in Uravnavanje katepsina E (CTSE) v Human Želodec

katepsina E (CTSE), ne-lizosomalne znotrajcelični aspartinska proteaze, je eden od katepsina družinskih proteaz v [39], [40]. Drugo aspartinske proteaza cathespin D (CTSD), ki je homolog CTSE, predstavlja velik proteolitično aktivnost v komponenti lizosoma, vendar niso bili pojasnjeni funkcionalni vlogi CTSE [24], [39]. Razporeditev obeh proteinaz je precej drugačna: CTSD je splošno obstajal v lizosomih različnih tkivih (skladno z rezultatom v sliki 1A), medtem ko je CTSE predvsem izražen v celicah imunskega sistema, kot macropahges, limfocitov, dendritičnih celic, itd [39 ]. Izraz CTSE v želodcu so poročali tudi [23], [24], čeprav fizioloških in patološko funkcija želodca CTSE trenutno ni znan [39], [40]. V pričujoči študiji ocenjevanje toliko kot 202 kliničnih želodčne vzorcev, smo jasno pokazali, CTSE je tako želodca razlikovanje dvojno podajo in želodca pečat obroč karcinom dvojno podajo, vendar je pomen želodca CTSE izražanja ostaja negotova.

analizirati odnos CTSE izražanja in onkogenih potencial, smo izdelali na osnovi MuLV retrovirusni vektor [26], ki nosi CTSE
gene in transduciramo v CTSE s pomanjkanjem želodčne raka celičnih linijah: podjetja MKN-74, SH-10 -TC in MKN-1. Smo ocenili možnost spreminjanja želodčne mucin proizvodnjo (slika S5) ali njihovih morfoloških sprememb, vendar niso opazili spremembo. Z uporabo teh uveljavljenih celičnih linij smo dodatno izvedli tako nastanek kolonij v mehki agar [30] in indukcijo apoptoze pri obdelavi aktinomicin D, kamptotecina in stavrosporina [41]. Vendar lahko zaznamo učinek CTSE izražanja na nobenem pritrditve neodvisnega rasti niti odpornosti na apoptozo inducirano drog (podatki niso prikazani)

V nedavni študiji, CTSE so poročali, da imajo nekaj anti-onkogenega potenciala.: Kawakubo sod.
dokazali, da CTSE specifično inducira aretacijo rasti in apoptozo v humani prostati raka celičnih linij, ki jih katalizira proteolitično sproščanje topen tumorske nekroze povezanih faktorjev apoptozo inducira ligand (TRAIL) iz celične površine [42 ]. Vendar pa miši CTSE s pomanjkanjem storil niti razstavnega raka nagnjeni fenotip niti sedanje očitne želodčnih bolezni [43], [44] [45]. Trenutno gre neznan ali bi poročali protitumorsko aktivnost CTSE uporabljajo raka želodca, vključno z rakom pečat obroča celic. Skupaj s svojim unelucidated uredbo in fiziološke funkcije, učinki CTSE na želodca diferenciacije in tumorigeneze so temeljni problemi, ki jih je treba rešiti v prihodnosti.

želodca canceration z vidika "želodčnega" in "črevesne" lastnino Ozadje

• Plos ONE: retinojsko kislo aktiviran Ndrg1a zatira NT /beta-catenin signalizacijo Dovoli Xenopus trebušno slinavko, požiralnik, želodec in dvanajsternik Specifikacija
• Plos ONE: Pooperativno kemoterapijo v kombinaciji z epirubicina-Based trojček kemoterapije za lokalno napredovalo adenokarcinom želodca ali gastroezofagealnega Junction