Ploche ONE: katepsin E je markerom diferenciácie žalúdočné a Signet-Ring karcinóm žalúdka: Román Návrh na žalúdočné Tumorigenesis

abstraktné

Karcinóm žalúdka (GC) predstavuje rôzne histologické rysy, hoci mechanizmus stojaci jej rozmanitosť je zriedkakedy objasnený. Je zaradený hlavne na dobre diferencované rúrkového adenokarcinóm (tub1), mierne diferencované rúrkový adenokarcinóm (tub2), zle diferencovaný adenokarcinóm (por), karcinóm Signet-ring buniek (SIG), mucinózního adenokarcinóm (MUC) a papilárnej adenokarcinóm (PAP). Tým skríningu sme zistili, katepsin E (CTSE)
vyjadruje univerzálne sig typu, občas v por typu, a zriedka v GC bunkových línií tub1 /tub2 typu. V chirurgicky resekcii vzoriek, CTSE bol imunologicky do 50/51 sig typu (98,0%), 3/10 tub1 typu (30,0%), 7/18 tub2 typu (38,9%), 15/26 por typu ( 57,7%), 4/10 pap typu (40,0%), a 0/3 MUC-type (0,0%) GC. V endoskopicky-resekcii vzoriek, 6/7 sig-type (85,7%), 7/52 tub1 typu (13,7%), 5/12 tub2 typu (41,7%), 2/7 pap typu (28,6%) GC a 0/6 adenóm (0,0%), vyjadrené CTSE. Pre non-malígnych tkanivách, CTSE je všeobecne exprimovaný v normálnej fundu, pyloru a srdcové žliaz žalúdka, ale ťažko v iných tráviacich orgánov. V prekancerózne črevnej metaplázia žalúdka, CTSE je väčšinou pozorovaná v zmiešanom žalúdočné-a-intestinálneho typu, a nedostatok výhradne-črevného typu. CTSE expresia pozitívne koreluje s žalúdočné markerov MUC5AC ( p Hotel &0,0001) a negatívne koreláciu s črevnej markerov MUC2 ( p
= 0,0019). Pre sig typu GC, v oboch nádorov a pozadia sliznice, expresie a MUC5AC CTSE je vysoká vzhľadom na to, že z MUC2 je nízka, čo naznačuje, že sig typu GC odráža vlastnosti pozadia sliznice. Pre žalúdočné adenómom a tub1 /tub2 typu GC, viac nediferencovanej nádory majú tendenciu vykazovať vyššiu expresie CTSE s MUC5AC a nižšou expresiu v nádoroch MUC2, ale majú tendenciu predstavovať nižšiu expresiu CTSE, MUC5AC a MUC2 na pozadí sliznicu. Tie naznačujú, že viac malígne adenokarcinóme žalúdka sa silnejší žalúdočné a črevné slabšie vlastnosti majú tendenciu vznikať z pozadia sliznice so zníženou obe žalúdočné a črevné funkcie. Záverom možno povedať, CTSE je ukazovateľ ako žalúdka diferenciácie a karcinómu Signet-bunka prsteňa, ktorý by mal osvetliť mechanizmus žalúdočnej vzniku nádorov

Citácia :. Konno-Shimizu M, N Yamamichi, Inada Ki, Kageyama- Yahara N, Shiogama K, Takahashi Y, et al. (2013) katepsin E je markerom diferenciácie žalúdočné a Signet-Ring karcinóm žalúdka: Román návrh na žalúdočné vzniku nádorov. PLoS ONE 8 (2): e56766. doi: 10,1371 /journal.pone.0056766

Editor: Anthony W.I. Lo, čínsky University of Hong Kong, Hong Kong

prijatá: 20.novembra 2012; Prijaté: 14. január 2013; Publikované: 22. februára 2013

Copyright: © 2013 Konno-Shimizu et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporovaný z časti grantom z Sato Memorial Foundation pre výskum rakoviny, z časti výskumný grant z Cancer Research Institute, Nakayama z časti výskumný grant od nadácie na podporu výskumu rakoviny, a tiež sčasti grant-in podpora pre mladých vedcov (b) z ministerstva školstva, kultúry, športu, vedy a technológie (MEXT). Ale všetci investori mali žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

rakovina žalúdka (GC) je štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou príčinou úmrtí na nádorové ochorenie na celom svete, a to napriek postupným znižovaním jeho incidencie a mortality [1], [2]. Je dobre známe, že zhubný nádor žalúdka predstavuje rôzne histologické vlastnosti [3]. Najrozšírenejšie klasifikácie karcinómu žalúdka je Lauren klasifikácia, ktorá rozlišuje črevnej (diferencované) typ GC a difúzne (nediferencovanej) typ GC [4]. Lauren písanie je hladká a ľahko pochopiteľné, aj keď jeho zjednodušením často vedie k neschopnosti odráža presné znaky žalúdočné malignity [3]. V podrobnejšom japonskej klasifikácii rakovinou žalúdka [5], ktorá je podobná klasifikácie WHO [6], adenokarcinóme žalúdka je zaradený do šiestich kategórií: dobre diferencovaný rúrkový adenokarcinóm (tub1), mierne diferencované rúrkový adenokarcinóm (tub2), zle diferencované adenokarcinóm (por), karcinóm Signet-ring buniek (SIG), mucinouse adenokarcinóm (MUC), a papilárny adenokarcinóm (PAP). Všeobecne povedané, Lauren difúzny (nediferencovanej) typ zahŕňa Porterova, sig- a MUC typu GC, zatiaľ čo Lauren črevnej (rozlíšené) typu obsahujú tub1-, tub2- a pap typu GC [3].

Medzi rôznymi histologických typov GC, sme sa zamerali na Signet-ring karcinómu (SRCC) žalúdka (sig typu GC). SRCC je mucín secernujúcich adenokarcinóm, v ktorej intracytoplazmatická mucín komprimuje svoje jadra dáva bunkám vlastnosť "Signet-krúžok" vzhľad [7]. Kým SRCC bolo popísané, že pochádza z rôznych tkanív, žalúdka je najčastejšou orgán pôvodu [7], [8]. Napriek častému výskytu SRCC medzi žalúdočných malignít, klinicko-patologické rysy sig typu GC sú stále kontroverzné; Niektoré predchádzajúce štúdie uvádzajú, že Signet-ring bunka histológia prináša lepšiu prognózu [9], [10], [11], zatiaľ čo iné štúdie uvádzajú, že histológie SRCC je znamením skôr horšie prognózou [8], [12], [ ,,,0],13], [14]. V rámci takéhoto pozadí, snažili sme sa nájsť nové špecifický marker gény pre sig typu GC. Vo väčšine predošlých štúdií [15], [16], [17], sig typu GC boli analyzované spolu s por typu a MUC typu, pretože tieto tri typy GC sú rozdelené do kategórií typu difúzna Lauren. Avšak, veľa správ navrhol, že sig typu GC je úplne odlišný od Porterova alebo MUC typu GC, z hľadiska molekulárnych znakov alebo malígnych potenciálov [3], [13], [18]. Preto sme analyzovali sig typu GC nezávisle na časť dovo- a MUC typu GC.

Medzi obrovské množstvo génov sme premietali niekoľko tých, napríklad cadherin
rodinných génov [19 ], [20], ľudské mucín
gény [21], vimentin
[22], katepsin
rodinných génov [23], [24], [25] , atď., ktorých prejavy boli hlásené byť rôzne medzi Lauren črevné a difúzneho typu GC. Hlavným cieľom našej štúdie je nájsť kľúč k nevyriešeným karcinogenity sig typu GC určením svoje špecifické gény markery. Predpokladali sme, že naše štúdie by viedlo k neznámym proti prúdu regulačných génov (ako sú určité transkripčné faktory), ktoré určujú vlastnosti sig typu GC. Niektoré transkripčné faktory spojené s gastrointestinálne vlastnosti boli spresnené, ako CDX
rodinných génov [26], [27], gli
rodinné gény [28], a sox2
[29], ale veríme, že nemálo kľúčové gény pre gastrointestinálne diferenciácie a žalúdočné onkogenézy stále zostanú bez povšimnutia. Ďalším cieľom našej štúdie je analyzovať veľmi skorom štádiu žalúdočné vzniku nádorov na základe vyjadrenia identifikovaných nových markerových génov. Nielen, že sa zameria na sig typu GC, budeme ďalej vyzvaní, aby zhodnotiť všetky typy skorých prípadoch GC analýzou identifikovaný markeru génovej expresie ako v nádorovej lézie a priľahlé sliznice. Sme presvedčení, že naša práca by mala byť kľúčom k blížiacej sa kontroverzný funkcie sig typu GC, a tiež by mal byť viesť k objasneniu rôzne histologické vlastnosti žalúdočné malignity.

Materiály a metódy

Cell Culture

Dvadsať žalúdka, kolorektálny desať, a dva non-gastrointestinálne rakovina bunkové línie boli udržiavané v médiu DMEM s 10% fetálneho teľacieho séra (Gibco /Invitrogen, Carlsbad, CA) pri 37 ° C [30], [31]. Všetky bunkové línie boli zakúpené od American Type Culture Collection, Riken bunkové banky, alebo bunka Resource Center for Biomedical Research Institute rozvoja, starnutie a rakovine, Tohoku University. Mená a histologické typy používaných rakovinových bunkových línií boli popísané nadrobno v podporný dokument S1. Pre DNA demetylovaného činidla a inhibítora Histon deacetylázy (HDAC), 5-aza-2'-deoxycytidínu (5-Aza-DC, Sigma-Aldrich) pri 2 ug /ml alebo trichostatin A (TSA, Sigma-Aldrich) pri 100 ng /ml boli pridané do kultivačného média.

RT-PCR

Celková bunková RNA bola pripravená za použitia izolácie RNA ISOGEN reaent (Wako, Osaka, Japan), ako bolo opísané skôr [30]. Semi-kvantitatívnej RT-PCR bola vykonaná pomocou Superscript One-Step reakciou za použitia Platinum Taq (Gibco /Invitrogen). Tieto páry primérov a RT-PCR postupy použité pre detekciu hladiny expresie v E-cadherinu (CDH-1)
, LI-cadherin (CDH-17)
, MUC5AC
MUC6
MUC2
CTSE (katepsin E)
CTSD (kathepsin D)
CTSB (katepsin B)
CTsl (katepsin L) stroje a GAPDH
sú uvedené v tabuľke S1.

Western Blotting

Celé bunkové extrakty (20 ug každého) lyžovanie a varí s 1x rozpúšťadla [30] boli oddelené elektroforézou na 12,5% SDS polyakrylamidových géloch, prenesené na nitrocelulózové membránu (Hybond-N, Amersham, Freiburg, Nemecko), a imunologicky farbené s anti-ľudského kathepsinu E protilátok (# AF1294, R &D Systems, Minneapolis, MN) alebo anti-ľudský β-aktínu (C4) protilátku (# sc-47778, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Po druhé protilátky, chrenová peroxidáza (HRP) konjugovanou anti-kozie IgG (H + L) somárov protilátky (ˁ-035-003, Jackson, Baltimore, PA) a chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou anti-myšou IgG (H + L) kozie protilátky (# A90-216P, BETHYL, Montgomery, TX) boli použité resp. Špecifické pásy boli detekované Immunostar LD (Wako, Osaka, Japonsko) a LAS-4000 (Fuji Film, Tokyo, Japonsko).

Imunohistochémia

boli vykonané Deparafinizace a endogénne peroxidáza deaktivácia klinických tkanív ako bolo opísané skôr [3]. Pre CTSE, primárny imunobarvení s anti-ľudským CTSE kozie polyklonálnou protilátkou (# AF1294, R &D Systems) pri 1: 100 riedenie bola vykonávaná po dobu 16 hodín pri teplote miestnosti. Po premytí v PBS (fosfátom pufrovaný-soli) trikrát, sekundárne imunologické s Histofine Simple Stain MAX PO (G) (Nichirei, Tokyo, Japonsko) bola vykonávaná počas 30 minút pri teplote miestnosti. Po premytí v PBS trikrát, reakčné produkty boli vizualizované na 20 mg /dl 3,3'-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride roztokom obsahujúcim kvapku 30% H 2O _{2, nasledovanou premytím PBS. Jadrová kontrastným bolo vykonané s Mayer hematoxilinem. Pre MUC5AC a MUC2, hydratovaný vykurovanie v 1 mM EDTA (pH 8,0) pri teplote 120 ° C sa najprv vykonáva v tlakovom hrnci (deliacimi 6L T-FAL, Rumil, Francúzsko) počas 10 minút na získanie antigénu. Primárne imunologické značenie s anti-MUC5AC protilátky (NCL-MUC-5AC, Novocastra, Newcastle-upon-Tyne, UK) v riedení 1: 200 alebo anti-MUC2 protilátky (NCL-NUC-2, Novocastra) pri 1: 500 riedenie bola vykonávaná po dobu 16 hodín pri teplote miestnosti. Po premytí v PBS trikrát, sekundárne imunologické s Histofine Simple Stain MAX PO (G) (Nichirei) bola vykonávaná počas 30 minút pri teplote miestnosti. V nasledujúcom kroku bol rovnaký ako CTSE imunologické farbenie. Všetky imunologicky úseky boli hodnotené nezávisle dvoma patológmi, spolu s HE-zafarbia a PAS škvrnami rezy z rovnakých lézií.}

Nádorové vzorky

Medzi rakovinou žalúdka tkanív naklonených na Fujita zdravotníctvo University School of Medicine, sme vybrali 51 karcinóm žalúdka Signet-ring buniek (SIG) vzorky chirurgicky resekciou. Okrem toho, 67 rakovina žalúdka Chirurgické vzorky ďalších päť typov adenokarcinóme žalúdka (tub1, tub2, por, PAP, a MUC) bolo náhodne vybraných z rovnakej banky. Pre endoskopicky resekcii vzoriek, sme vybrali 84 vzoriek (78 prípadov rakoviny žalúdka a 6 žalúdočných prípadov adenóm), ktoré boli spracované na University of Tokyo nemocnice od roku 2005 do roku 2011. Pri všetkých klinických vzoriek, písomný informovaný súhlas boli získané z zodpovedajúcich pacientov podľa Helsinskej deklarácie. Táto štúdia bola schválená etickou inštitucionálnej etickou komisiou pre ľudskú šetrenie v Fujita zdravie University a bol tiež schválený etickými výbormi University of Tokyo.

retrovírus Vectors

Ak chcete generovať retrovírusových vektorov exprimujúce Cdx2
Gli1
Gli3
CTSE stroje a Sox2
príslušné cDNA boli vložené do pMXs-IRES -puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA), ako nasleduje. Pre Cdx2
, pMXs-Cdx2-IRES-Puro bola generovaná ako bola opísaná skôr [26]. Gli1
cDNA bola získaná z PCR-XL-TOPO-Gli1 (Open Biosystems, Huntsville, AL) pomocou PCR amplifikácie za použitia primérov 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 'a 5'-agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3'. Po dvojité štiepenie BGL II a Not I, získaný fragment bol vložený do /Not I miesta BamH I pMXs-IRES-Puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) pre generovanie pMXs-Gli1-IRES-Puro. Gli3
cDNA bola získaná z PCR-XL-TOPO-Gli3 (Open Biosystems) pomocou PCR amplifikácie za použitia primérov 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 'a 5'-tgcggatcctacgtgggcatttttg-3'. Po dvojité štiepenie BamH I a Not I, získaný fragment bol vložený do BamH I /Nie pozemky Aj podľa pMXs-IRES-Puro generovať pMXs-Gli3-IRES-Puro. CTSE
cDNA bola získaná z pCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Scientific, Madison, WI) prostredníctvom PCR amplifikácia za použitia primérov 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 'a 5'-gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3'. Po dvojité štiepenie BGL II a Xho I, získaný fragment bol vložený do miest BamH I /Xho I pMXs-IRES-puro vytvárať pMXs-CTSE-IRES-Puro. Sox2
cDNA bola získaná z MKN-7 genómovej DNA pomocou PCR amplifikácie za použitia primérov 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'a 5'-tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3'. Amplifikovanej fragment bol vložený do miest ECOR V pT7Blue-T vektora (Novagen, Darmstadt, Nemecko) pre generovanie pT7Blue-Sox2. Po dvojité štiepenie BamH I a Sal I, získaný fragment bol vložený do miest BamH I /Xho I pMXs-IRES-puro vytvárať pMXs-Sox2-IRES-Puro. Kotransfekcí týchto plazmidov sa vírus vezikulárnej stomatitídy obálky G proteínom (VSV-G) expresného plazmidu do PLAT-GP v spotrebiteľskom balení bunkové línie (Cell Biolabs Inc.), respektíve, VSV-G-pseudotyped Mulva založené na retrovirusove vektory vyjadrujúce Cdx2
, Gli1
Gli3
CTSE stroje a Sox2
boli pripravené.

Výsledky

vyjadrenie katepsin E (CTSE)
významne koreluje s Vznikol Histologické Typ Žalúdočné nádorových bunkových línií

Ak chcete hľadať markerovej gény pre sig typu GC sme premietali expresiu niekoľkých génov hlásených ukázať výraznú expresiu medzi Lauren črevné a difúzneho typu GC. Vyjadrenie E-cadherin
( CDH-1
) [19], LI-cadherin
( CDH-17
) [20], MUC5AC
[21], MUC6
[21], MUC2
[21], vimentin
[22], CTSD
( katepsin D
) [23], [24], CTSE
( katepsin E
) [23], [24], CTSB
( katepsin B
) [25], CTsl
( katepsin L
) [25], a GAPDH
(interná kontrola) gény boli hodnotená pomocou RT-PCR v 20 GC linky spolu s 12 nádorových bunkových línií odvodených z iných orgánov (obrázok 1A). Potom sme zameraná pozornosť na CTSE
, ako to vyjadruje v oboch Kato-III a NUGC-4 odvodený od sig typu GC, a tiež preto, že nikdy vyjadruje v MKN-7 a H-111-TC známe, že pochádzal z dobre diferencovaného rúrkového adenokarcinóm žalúdka (tub1 typu GC, podporný dokument S1).

Pri ostatných skúmaných génov, expresia CDH-1
( E-
cadherin) uvádza, že je často deficitný na Lauren typu difúzna GC [19], [32], [33], bolo neočakávane zistené v dvoch bunkách sig typu GC-odvodené (obrázok 1A). To bolo tiež očakávať, že CDH-17
( LI-cadherin
), myšlienka byť markerovou gén črevnej [20], [26], [27], vyjadruje takmer vo všetkých bunkových línií karcinómu žalúdka vrátane sig-typu (obrázok 1A). Pre iných katepsin rodinných génov, CTSD
bolo publikované, že vysoko exprimovaný v difúznym typu GC a tiež prognostické faktory pre pacientov karcinómu žalúdka [23], [34], ale výsledky RT-PCR bolo zistené, že všetky skúmanej rakovinové bunkové línie rovnako express CTSD
(obrázok 1A). CTSB stroje a CTsl
boli hlásené byť zvýšené u karcinómu žalúdka [35] a koreluje s jeho malígny vlastníctva [36], ale zvláštnym výrazom ani CTSB
alebo CTsl
v GC-bunkových línií odvodených sig typu by mohli byť detekované (1A). Ako celok, výraz profil CTSE
sa zdá byť úplne odlišné od iných kathepsin rodinných génov.

Ďalej sme vyhodnotili vzťah medzi expresiou CTSE a histologických typov bunkových línií 20 GC. na detailné dohľadu nad literatúr popísaných v kapitole "histologických typov žalúdočné nádorových bunkových línií" z podporný dokument S1 založený, 19 GC bunkové línie možno radiť podľa Lauren a japonský klasifikácie [3], [4], [5] (pozri tabuľku 1) , Podľa klasifikácie Lauren, 7 z 11 typu difúznej bunky GC-odvodil a 1 z 5 typ črevnej bunky GC-odvodený vyjadriť CTSE (tabuľka 1): CTSE
gén má tendenciu byť vyjadrený v difúznym typu a s nedostatkom črevnej typ GC. Súvislosť medzi CTSE prejavu a histologické vlastnosti žalúdočné malignity dostane jasnejšie, keď sa použije presnejšie japonský klasifikácie. Medzi bunkové línie z difúzneho typu GC, je pozoruhodné, že NUGC-4 a Kato III pochádzal z sig typu GC silne exprimujú CTSE, vzhľadom k tomu, SH-10-TC a KE-97 pochádza z MUC typu GC majú nedostatok CTSE výrazom. Pre bunky odvodené z por typu GC, najčastejší histologický typ žalúdočnej malignity [3], CTSE výraz je rozmanitá: MKN-45, KE-39, HuG1-PI, HuG1-N, a AGS silne exprimujú CTSE, zatiaľ čo GCIY a HGC-27 majú nedostatok CTSE výrazu. Naopak, u bunkových línií z Lauren črevnej typu GC, a to tub1 a tub2 japonskej klasifikácie, MKN-7, H-111-TC, MKN-74, a AZ521 postrádajú CTSE výraz, s jedinou výnimkou NCI-N87 zrejmému CTSE výraz.

z týchto Výsledkom je, že špekuluje, že expresia CTSE významne koreluje s histologickým typom rakoviny žalúdka. Pre iné vzácne typy GC bunkových línií, MKN-1, ECC-10, a ECC-12 sú úplne nedostatočné v CTSE expresie (obrázok 1A, tabuľka 1).

Expresia katepsin E (CTSE )
Gene je regulovaná majorly na prepis úrovni

pomocou 13 žalúdka, kolorektálny 5 a 2 iných nádorových bunkových línií, výroba CTSE proteín bol analyzovaný westernovým prenosom (obrázok 1B). 7 z 20 bunkových línií boli tiež hodnotené pomocou imunohistochémia (obr S1). V oboch analýz CTSE
mRNA expresie a produkcie proteínov CTSE boli väčšinou spojené, čo naznačuje, CTSE
expresie je regulovaná hlavne na úrovni transkripcie. Okrem toho, všetko alebo nič expresie CTSE je znázornené na RT-PCR, Western blot a imunohistochemické vyšetrenie navrhol, že rakovinové bunky žalúdka, by boli jasne rozdelené do dvoch kategórií :. CTSE-exprimujúcich typu a CTSE deficitného typ

vyšetrovať regulácia CTSE
génu, dve hlavné epigenetické lieky, demetyláciou činidlo 5-aza-2'-deoxycytidínu a inhibítor Histon Deacetylase trichostatin a [37], boli aplikované na päť GC bunkové línie (obrázok 1C) , Tri CTSE expresiou a dve GC bunkové línie CTSE s deficitom boli liečení, ale nemohli sme zistiť akúkoľvek zmenu CTSE
transkripcie (obrázok 1C). Pre metylácie sme tiež hľadal CPG ostrovy v sugestívne promotorové oblasti ľudského CTSE
génu pomocou dvoch internetových stránkach: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx~~HEAD=pobj" preukazujúce CPG ostrov hľadajúceho a " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "podporovaný National Center for Biotechnology Information (NCBI). Výsledky oboch vyhľadávania navrhnuté, že promótor ľudského CTSE
gén je charakterizovaný nižšie percento CPG dinukleotid (55%) a žiadna CPG ostrova, ktoré sú v súlade s našimi výsledkami (obrázok 1C).

Okrem toho sme vyhodnotili vplyv štyroch transkripčných faktorov, ktoré boli hlásené regulovať veľa gastrointestinálne génov: cdx2
[26], [27], gli
rodinné gény ( gli1 stroje a gli3
) [28], a sox2
[29]. Pod stabilný transdukciu cdx2
gli1
gli3 stroje a sox2
sme však nemohli odhaliť zrejmú zmenu CTSE
expresie (obrázok 1D). V súčasnej dobe sa nám nepodarilo objasniť regulačný mechanizmus CTSE
gén, ktorý by mal byť vyriešený do budúcnosti.

katepsin E (CTSE) jasne vyjadril v Signet-ring karcinóm žalúdka

Ak chcete overiť špekulácie z GC bunkových línií (tabuľka 1, obrázok 1A), sme analyzovali ďalšie CTSE vyjadrenie v klinických vzoriek. Spočiatku bolo hodnotené 51 vzoriek sig typu GC chirurgicky operaciindikováni. Pozoruhodné je, zrejmé, farbenie CTSE bolo pozorované u všetkých 51 vzoriek skúmaných, a v 50 z 51 prípadov, CTSE-pozitívne bunky obsadené viac ako 90% nádorových buniek v nádoru (tabuľka 2).

Ďalej boli analyzované 67 chirurgické vzorky získanej z iných zdrojov ako sig typu GC prípadoch, ktorý predstavoval rôzne vzory CTSE expresie (tabuľka 2). CTSE expresie v por typu GC sa samozrejme vyššia v porovnaní s ostatnými štyrmi typmi GC, aj keď to bolo oveľa nižšie ako u SIG typu GC (tabuľka 2). Prevalencia CTSE pozitívnych buniek v tub1-, tub2-, pap- a MUC typu GC je samozrejme nižšia, ale to nie je tak nízka ako iné bežné tráviacich orgánov (tabuľka 2). Typické imunologické obrazy CTSE v šiestich typov GC sú znázornené na obrázku 2 (SIG a tub1) a obr S2 (tub2, pap, por a MUC).

o výsledku chirurgických vzoriek, sme ďalej založený analyzované CTSE expresie 84 endoskopicky resekcii žalúdka nádorových vzoriek. V porovnaní s chirurgicky vzoriek, histológie endoskopicky resekované tkaniva je oveľa viac homogénny; bolo odtiaľ očakáva sa, že spojenie medzi CTSE prejavu a histológia rakoviny žalúdka, ktorú je možné ďalej analyzovať presnejšie. Jednalo sa o 78 prípadov v ranej fáze adenokarcinóm (7 sig typu, 52 tub1 typu, 12 tub2 typu, a 7 pap typu GC) a 6 prípadov prekancerózne adenómu (tabuľka 3). CTSE vyjadrenie zaťažení, tub1-, tub2- a PAP typu GC v endoskopicky po resekcii tkanív podobá chirurgicky resekcii tie so zodpovedajúcim histológia (Tabuľka 2 a 3). Vypočítané CTSE expresné skóre (tabuľka 3) jasne ukazujú, že tendencia CTSE rozhodne vyjadruje v SIG typu GC vzhľadom na to, že má tendenciu byť deficitný na tub1- a tub2 typu GC. Malo by tiež byť poznamenané, že žalúdočné adenóm, ktoré môžu byť považované za viac diferencovaný histologické vlastnosti v porovnaní s tub1 typu GC ukázala najsilnejšiu nedostatok CTSE (tabuľka 3).

CTSE nie je len ukazovateľom SIGNET krúžkom karcinóm žalúdka, ale aj žalúdočné Diferenciácia Marker

preskúma rozdelenie CTSE v normálnom čreve a prekancerózne žalúdka, imunologické z CTSE bola ďalej aplikovaná na non-rakovinové žalúdka a iných orgánov zažívacieho traktu. V žalúdku bez atrofia a črevné metaplázia, expresia CTSE je jasne pozorovať v fundusu a pyloric žliaz žalúdka (obr S3D /S3A a S3E /S3B). Srdcové žľazy žalúdka vyjadriť tiež CTSE, aj keď je to skôr slabší ako expresie v fundusu alebo pyloru žliaz (obr S3F /S3C). Contrastively, CTSE je zriedka vyjadrené v pažeráku, duodena, tenkého čreva a hrubého čreva (obr S4).

Ďalej hodnotené CTSE expresiu v žalúdočnej sliznici črevnej metaplázia, známy prekancerózne stav žalúdka [26 ], [29], [38]. Ako je znázornené na obrázku 3A, žalúdočné fundic žľazy a črevných metaplastická žľazy vykazujú kontrastné farbenie CTSE. Typicky, črevné metaplázia je rozdelená do dvoch kategórií: zmiešané žalúdočné-a-intestinálneho typu (neúplný typ) a iba črevnú typu (kompletné typ) [29], [38]. Je dobre známe, že bývalý jeden vyjadruje ako MUC5AC (žalúdočné značka mucínu) a MUC2 (črevné značka mucínu), zatiaľ čo tá druhá vyjadruje nie je MUC5AC ale MUC2 [29]. U oboch typov črevnej metaplázia v žalúdku, sme potvrdili, že expresia CTSE je podobný MUC5AC a proti MUC2 (obrázok 3B a 3C).

Pre posúdenie pridružení CTSE expresie s MUC5AC a MUC2 prejavu, ich imunologické bola štatisticky vyhodnotená pomocou endoskopicky resekovány 84. žalúdočné nádorové tkanivá (tabuľka S2). Korelačný analýzy ukázali, že expresia CTSE je pozitívne spojená s žalúdočné markerov MUC5AC ( p Hotel &0,0001) a negatívne spojené s črevné markerov MUC2 ( p
= 0,0019). Synteticky, sme dospeli k záveru, že CTSE, rovnako ako MUC5AC, je jedným z žalúdočných diferenciačných markerov.

Ďalšie nešpecifikované Tubular adenocarcinoma Inklinuje, že vzniknú z pozadia sliznice so zníženou Obaja "žalúdočné" a "črevá" Funkcia

skúmať iniciačný krok žalúdočné vzniku nádorov, pozadia sliznice včasného karcinómu a adenómu bola ďalej hodnotená pomocou 84 endoskopicky resekciou vzorky. CTSE expresia bez rakoviny žalúdočnej sliznice priľahlé k nádorovej lézie bola vyhodnotená spolu s MUC5AC a MUC2 (tabuľka 4). Pre sig typu GC, ako nádor lézie a pozadia sliznice väčšinou ukázala silnú expresiu CTSE a MUC5AC, zatiaľ čo expresia MUC2 bola veľmi slabá, v oboch z nich (tabuľka 4). Podobné expresné vzory troch markerov v nádore a priľahlé sliznice ukazujú, že začatie SIG typu GC odráža vlastnosti pozadia sliznice, z pohľadu "žalúdočné" a "črevnú" diferenciácie. To znamená, že, sig typu GC s non-črevné žalúdočné vlastností spočiatku dochádza od pozadia sliznice s non-črevných a žalúdočných funkcií.

žalúdočné adenómu a tubulárnej adenokarcinóm (tub1 /tub2 typu GC), contrastively expresné profily troch markerov sú veľmi zaujímavé (tabuľka 4). Viac nediferencovanej žalúdočné nádory majú tendenciu zvyšovať expresiu CTSE a MUC5AC v nádorových lézií (tub2 > > tub1 adenóm), ale znižujú expresiu týchto žalúdočných markerov v pozadí sliznice (tub2 < tub1 < adenóm). Tie naznačujú, že viac nediferencovanej (teda i zhubné nádory), žalúdočné apt ukázať silnejšie žalúdočné majetok, zatiaľ čo oni inklinujú sa vynoriť z pozadia sliznice so zníženou žalúdočné funkcie. Na druhej strane, viac diferencované gastrických nádorov majú tendenciu sa vyjadriť MUC2 v oboch nádorových lézií a pozadia sliznice (adenómu > tub1 > tub2). To naznačuje, že črevné diferenciácia pozadie žalúdočnej sliznice vedie k intestinally rozlíšených (teda menej zhubných nádorov žalúdka).

PAP typu GC, výrazy CTSE, MUC5AC a MUC2 boli značne silný ako v nádorovej lézie a okolité sliznice, ktoré sú úplne odlišné od expresných vzorov tub1 /tub2 typu GC (tabuľka 4). Pap typu GC je zaradený do črevného typu Lauren spolu s tub1 /tub2 typu GC, ale naše súčasné analýzy viedli k záveru, že PAP typu a tub1 /tub2 typu GC by nemali zachádzať do rovnakej kategórie, z hľadiska žalúdočné a črevné Vlastnosti. V našej predchádzajúcej správy analýze BRM
[3], je možné kľúč markerovou gén črevnej diferenciácie, expresiu brm žalúdka papilárna adenokarcinóm (PAP) sa značne líši od rúrkového adenokarcinóme žalúdka (tub1 a tub2). V súčasnej dobe sme presvedčení, že histologické rozdiel medzi PAP typu GC a tub1 /tub2 typu GC by malo byť prísne uznaný.

Diskusia

Úloha a nariadenia kathepsinu E (CTSE) v ľudskom žalúdku

katepsin E (CTSE), non-lysozomálnej intracelulárnej asparágovej proteáza, je jednou z proteáz kathepsinu rodinných [39], [40]. Ďalšie proteázy asparágovej cathespin D (CTSD), homológy CTSE, predstavuje hlavný proteolytické aktivity v komponente lysozomálnych, ale funkčné role CTSE neboli objasnené [24], [39]. Rozdelenie oboch proteináz je úplne odlišná: CTSD je všeobecne existoval v lyzozómoch rôznych tkanív (v súlade s výsledkom v obrázku 1 A), vzhľadom k tomu, CTSE je prevažne exprimovaný v bunkách imunitného systému, ako sú macropahges, lymfocytov, dendritických buniek, a pod [39 ]. Expresie CTSE v žalúdku bola tiež hlásená [23], [24], aj keď fyziologické a patologické funkcie žalúdka CTSE je v súčasnej dobe známy [39], [40]. V tejto štúdii hodnotiacej toľko ako 202 klinických vzoriek žalúdočnej sme jasne ukázal CTSE je ako žalúdočné diferenciácie značka a žalúdočné Signet-ring karcinómu strážca, ale význam žalúdočné CTSE prejavu zostáva neistý.

analyzovať vzťah CTSE prejavu a onkogénny potenciál, sme vyrobili na Mulva založené retrovírus vektor [26], ktoré CTSE
gén a transduced ju do CTSE deficitných bunkových línií karcinómu žalúdka: MKN-74, SH-10 -TC a MKN-1. Hodnotili sme možnosť meniť žalúdočného hlienu výrobu (obr S5) alebo ich morfologické zmeny, ale nebola pozorovaná žiadna zmena. Použitie týchto bunkových línií sme ďalej vykonáva ako tvorby kolónií v mäkkom agare [30] a indukcie apoptózy pomocou liečenie aktinomycín D, camptothecin a staurosporinu [41]. Avšak, mohli by sme zistiť účinok CTSE prejave na žiadnom adhéziu nezávislého rastu ani rezistenciu k apoptóze vyvolanej lieky (dáta nie sú uvedené)

V nedávnej štúdii, CTSE bola hlásená mať nejaký anti-onkogénny potenciál .: Kwakubo et al. preukázali, že
CTSE špecificky indukuje zastavenie rastu a apoptózy v rakovinových bunkových línií ľudskej prostaty katalýzou proteolytické uvoľňovanie rozpustných nádorový nekrotický faktor súvisiaci s ligandu indukujúceho apoptózu (TRAIL) z bunkového povrchu [42 ]. Avšak, CTSE-myší s deficitom urobil ani vykazujú rakoviny náchylné fenotyp ani súčasnej zjavné žalúdočných ochorení [43], [44], [45]. V súčasnej dobe, to je vec dohadu nahlásených Protinádorová účinnosť CTSE mohol uplatniť žalúdočné rakovina, vrátane rakoviny Signet-krúžkom buniek. Spolu s jeho unelucidated regulácie a fyziologické funkcie, účinky CTSE na žalúdočné diferenciáciu a vzniku nádorov sú základnými problémami, ktoré by mali byť vyriešené v budúcnosti.

Žalúdočné Canceration z hľadiska "žalúdočné" a "črevá" majetku Pozadie

• Ploche ONE: kyselina retinová-Activated Ndrg1a potláča Wnt /beta-katenin Povoliť Xenopus pankreasu, pažeráka, žalúdka, dvanástnika a Specification
• Ploche ONE: Pooperačný chemorádiotarapia v kombinácii s Epirubicín-Based triplet chemoterapie pre lokálne pokročilým adenokarcinómom žalúdka alebo gastroezofageálneho spojenia