PLoS ONE: катепсина E является маркером Желудочный дифференциацию и перстень карциномой Желудок: Роман Предложение на желудочную Tumorigenesis

Абстрактный
<р> Рак желудка (GC) представляет различные гистологические особенности, хотя механизм, лежащий в основе его разнообразие редко выяснены. Это в основном подразделяются на хорошо дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы (tub1), умеренно дифференцированные трубчатые аденокарциномы (tub2), слабо дифференцированы аденокарциномы (POR), карцинома печатка кольцо клетки (сиг), муцинозной аденокарциномы (MUC), и папиллярный аденокарциномы (PAP). По скрининге, мы обнаружили, катепсина Е (CTSE)
выражает универсально в сиг-типа, иногда в Пор-типа, и редко в линиях GC клеток tub1 /tub2 типа. В хирургически резецированных образцах, CTSE был иммуноокрашиванию в 50/51 сиг-типа (98,0%), 3/10 tub1 типа (30,0%), 7/18 tub2 типа (38,9%), 15/26 Пор-типа ( 57,7%), 4/10 PAP-типа (40,0%), и 0/3 MUC типа (0,0%) GC. В эндоскопически-резецированных образцов, 6/7 сиг типа (85,7%), 7/52 tub1 типа (13,7%), 5/12 tub2 типа (41,7%), 2/7 PAP-типа (28,6%) GC и 0/6 аденома (0,0%), выраженная CTSE. Для доброкачественных тканей, CTSE повсеместно выражается в нормальной фундальный, привратника и сердечных желез желудка, но вряд ли в других органах пищеварения. В предраковое кишечной метаплазии желудка, CTSE в основном наблюдается в смешанных желудочно-кишечного тракта и-типа и дефицит только-кишечного типа. Выражение CTSE положительно коррелирует с маркером желудка MUC5AC ( р
&л; 0,0001) и отрицательно коррелирует с кишечным маркером MUC2 ( р = 0,0019
). Для сиг типа GC, в обоих опухолей и фоновой слизистой оболочки, экспрессия MUC5AC и CTSE высока, тогда как у MUC2 низка, что указывает, что сиг типа GC отражает особенности фоновой слизистой оболочки. Для желудка аденомы и tub1 /tub2 типа GC, более недифференцированные опухоли, как правило, показывают более высокую экспрессию CTSE с MUC5AC и нижней экспрессии MUC2 в опухолях, но они, как правило, представляют более низкую экспрессию CTSE, MUC5AC и MUC2 в фоновом режиме слизистой оболочки. Они предполагают, что более злокачественные аденокарциномы желудка с более сильным желудка и кишечника более слабыми свойствами, как правило, возникают из фона слизистой оболочки со снижением как желудка и кишечника особенности. В заключение CTSE является маркером как желудка дифференцировки и карциномы перстень клеток, которые должны пролить свет на механизм желудка онкогенеза
<р> Образец цитирования:. Конно-Shimizu M, Ямамити N, Inada Ки, Kageyama- Яхара N, Сиогама K, Takahashi Y, и др. (2013) катепсина E является маркером Желудочный дифференциацию и перстень карциномой Желудок: роман Предложение о Желудочный онкогенеза. PLoS ONE 8 (2): e56766. DOI: 10.1371 /journal.pone.0056766
<р> Редактор: Энтони W.I. Ло, Китайский университет Гонконга, Гонконг
<р> Поступило: 20 ноября 2012 года; Принято: 14 января, 2013 года; Опубликовано: 22 февраля 2013
<р> Copyright: © 2013 Конно-Shimizu и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была частично поддержана грантом от Фонда памяти Сато по исследованию рака, частично исследовательского гранта от Накаяма исследовательского института рака, частично исследовательского гранта от Фонда содействия исследованию рака, а также частично грантом-in помощь для молодых ученых (B) из Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологии (МПКСНТ). Но все спонсоры не имели никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным видом рака и второй причиной, связанной с раком смерти во всем мире, несмотря на постепенное снижение его заболеваемости и смертности [1], [2]. Хорошо известно, что злокачественных опухолей желудка представляет различные гистологические особенности [3]. Наиболее широко используется классификация рака желудка Лорен классификации, которая отличает кишечником (дифференцированный) типа GC и диффузный (недифференцированные) типа GC [4]. Лорен набрав просто и легко понять, хотя его упрощением часто приводит к недееспособности отражающие точные особенности злокачественных опухолей желудка [3]. В более подробной японской классификации рака желудка [5], которая аналогична классификации ВОЗ [6], аденокарциномы желудка подразделяются на шесть категорий: хорошо дифференцированы трубчатые аденокарциномы (tub1), умеренно дифференцированные трубчатые аденокарциномы (tub2), слабо дифференцированы аденокарциномы (Por), карцинома печатка кольцо клетки (сиг), mucinouse аденокарциномы (MUC), и папиллярные аденокарциномы (PAP). Грубо говоря, диффузное Лорен (недифференцированные) тип включает Пор-, сиг- и MUC типа GC, в то время как кишечная Лорен типа (дифференцированные) включает tub1-, tub2- и PAP типа GC [3].
<Р> Среди различных гистологических типов GC, мы сосредоточились на перстень-кольцо-клеточного рака (НИВЦ) желудка (сиг типа GC). НИВЦ является муцин-секретирующие аденокарциномы, в котором интрацитоплазматическая муцин сжимает их ядра, чтобы дать клеткам характеристику "перстень" вид [7]. В то время как НИВЦ Сообщалось, что быть возникла из различных тканей, желудка является наиболее распространенным органом происхождения [7], [8]. Несмотря на частое преобладание НИВЦ среди злокачественных опухолей желудка, клинико-патологические особенности сиг типа GC до сих пор противоречивы; некоторые предыдущие исследования сообщили, что печатка кольцо клеток гистология представляет лучший прогноз [9], [10], [11], в то время как другие исследования сообщили, что гистология НИВЦ является признаком довольно плохим прогнозом [8], [12], [ ,,,0],13], [14]. При таком фоне, мы пытались найти новые специфические гены-маркеры для сиг типа GC. В большинстве предыдущих исследований [15], [16], [17], сиг типа GC были проанализированы вместе с Пор-типа и MUC-типа, так как эти три типа GC, классифицированы по типу диффузного Лорен. Тем не менее, многие сообщения о том, что сиг типа GC довольно сильно отличается от Пор- или MUC типа GC, с точки зрения молекулярных особенностей или злокачественных потенциалов [3], [13], [18]. Таким образом, мы проанализировали сиг типа ГХ независимо от предопределило и MUC типа GC.
<Р> Среди огромного числа генов, мы скринингу несколько из них, такие как кадерин
семейных генов [19 ], [20], человека муцина
генов [21], виментин
[22], катепсина
семейных генов [23], [24], [25] и т.д., чьи выражения, как сообщается, отличается от кишечной и диффузного типа GC Лорен. Основной целью нашего исследования является поиск ключ к нерешенной канцерогенеза сиг типа GC путем выявления его специфических маркеров генов. Мы ожидали, что наше испытание приведет к неизвестным вверх по течению регуляторных генов (например, специфические факторы транскрипции), определяющих свойства сиг типа GC. Некоторые факторы транскрипции, связанные с желудочно-кишечного тракта свойств были выяснены, такие как CDX
генов семейства [26], [27], Gli
генов семейства [28], и Sox2
[29], но мы считаем, не мало важные гены для желудочно-кишечного тракта и желудка дифференцировки канцерогенеза до сих пор остаются нераскрытыми. Другая цель нашего исследования заключается в анализе очень ранней стадии онкогенеза желудка, основанный на экспрессии определенных новых генов-маркеров. Мало того, сосредоточив внимание на сиг типа GC, мы также задача оценить все типы ранних случаев GC путем анализа выявленных маркеров экспрессии генов в обоих поражения опухоли и прилегающей к слизистой оболочке. Мы убеждены в том, наша работа должна быть ключом к приближались к спорным особенности сиг типа GC, а также должен быть привести к выяснению различных гистологических свойств желудка новообразованиях.

Материалы и методы

Культура клеток
<р> Двадцать желудка, ободочной и прямой кишки десять, и два из не означающих желудочно-кишечные линии раковых клеток поддерживали в среде DMEM с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка (Gibco /Invitrogen, Carlsbad, CA) при 37 ° с [30], [31]. Все клеточные линии были приобретены из Американской коллекции типовых культур, RIKEN Cell Bank или Cell ресурсный центр для биомедицинских исследований института развития, старения и рака, Университет Тохоку. Имена и гистологические типы используемых линий раковых клеток были описаны поминутно в вспомогательном документе S1. Для ДНК-деметилирования реагента и гистондезацетилазы (HDAC), ингибитора 5-аза-2'-дезоксицитидин (5-аза-ПСТ, Sigma-Aldrich) в 2 мкг /мл или трихостатин A (TSA, Sigma-Aldrich) при 100 нг /мл добавляли к культуральной среде.

RT-PCR

Общую клеточную РНК получали с использованием изоляции ISOGEN РНК reaent (Вако, Осака, Япония), как описано ранее [30]. Полуколичественное ОТ-ПЦР проводили с помощью надиндексе реакции One-Step с использованием Платиновый Taq (Gibco /Invitrogen). Процедуры пар праймеров и RT-PCR использовали для определения уровней экспрессии E-кадгерина (CDH-1)
, LI-кадгерин (CDH-17)
, MUC5AC
, MUC6
, MUC2
, CTSE (катепсина Е)
, КПУР (катепсина D)
, CTSB (катепсина B)
, CTSL (катепсина L)
и GAPDH
приведены в таблице S1.

Вестерн-блоттинга

экстракты Цельноклеточные (20 мкг каждого) лизируют и кипятили с 1x буфера выборок [30] были разделены с помощью электрофореза на 12,5% полиакриламидном геле, переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Hybond-N, Amersham, Фрайбург, Германия), и иммунологически окрашивали с античеловеческой катепсина Е антител (# AF1294, R &Amp; D Systems, Minneapolis, MN) или β-актина (С4) антитела против человеческого (# SC-47778, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Для вторых антител, пероксидаза хрена (HRP) анти-козий IgG (H + L) ослиного антитела (ˁ-035-003, Джексон, Балтимор, штат Пенсильвания) и пероксидазы хрена (HRP) антитела против мышиных IgG (H + L) антитела козы (# A90-216P, были соответственно использованы BETHYL, Монтгомери, штат Техас). Специфические полосы были обнаружены с Immunostar LD (WAKO, Осака, Япония) и LAS-4000 (Fuji Film, Токио, Япония).

Immunohistochemistry
<р> Депарафинирование и эндогенного инактивация пероксидазы клинических тканей были проведены как было описано ранее [3]. Для CTSE, первичного иммунного окрашивания с античеловеческой CTSE козьи поликлональные антитела (# AF1294, R &Amp; D Systems) при 1:100 разведении проводили в течение 16 ч при комнатной температуре. После промывки в PBS (фосфатно-буферном-соли) три раза, вторичное иммунное окрашивание с Histofine Простые Stain MAX-PO (G) (Nichirei, Токио, Япония) проводили в течение 30 мин при комнатной температуре. После промывки в PBS три раза, продукты реакции визуализировали в 20 мг /дл 3,3'-диаминобензидина раствора тетрагидрохлорид, содержащего каплю 30% Н <к югу> 2О <суб> 2, с последующим промыванием PBS. Ядерный counterstaining была выполнена с гематоксилином Майера. Для MUC5AC и MUC2, гидратированный нагревании в 1 мМ ЭДТА буфере (рН 8,0) при 120 ° C была сначала выполнена в скороварке (Delicio 6L, T-FAL, Rumily, Франция) в течение 10 мин для извлечения антигена. Первичный иммунное с анти-MUC5AC антителом (NCL-MUC-5AC, Novocastra, Ньюкасл-апон-Тайн, Великобритания) на 1:200 разбавления или анти-MUC2 антитела (NCL-NUC-2, Novocastra) на 1:500 разбавление проводили в течение 16 ч при комнатной температуре. После промывки в PBS в три раза, вторичное иммунное с Histofine Простые Stain MAX-PO (G) (Nichirei) проводили в течение 30 мин при комнатной температуре. Следующий шаг был таким же, как CTSE иммунологического окрашивания. Все иммуноокрашиванию участки были оценены независимо друг от друга двумя патологоанатомами, наряду с HE-окрашенных и PAS-окрашенные участки из одних и тех же поражений.

Опухолевые Образцы
<р> Среди желудочных раковых тканей накренился на Фуджита здравоохранения школы медицины университета, мы выбрали 51 желудочное кольцо с печаткой-клеточная карцинома (Sig) образцы хирургическим резецировали. Кроме того, 67 рак желудка хирургические образцы пяти других типов аденокарциномы желудка (tub1, tub2, ПОР, PAP, и MUC) были выбраны случайным образом из того же банка. Для эндоскопически резецированных образцов, мы отобрали 84 образцов (78 случаев рака желудка и 6 желудка случаев аденома), которые были обработаны в Университете Токио больницы с 2005 по 2011 год для всех клинических образцов, письменное информированное согласие было получено от соответствующих больных в соответствии с Хельсинской декларацией. Это исследование было одобрено институциональной этической комиссией по рассмотрению человеческого расследования в Университете Здоровья Фуджита, а также был утвержден этическими комитетами Университета Токио.

ретровируса векторы
<р> Для создания ретровирусных векторов экспрессирующие Cdx2
, Gli1
, Gli3
, CTSE
и Sox2
, соответствующие кДНК были вставлены в pMXs-IRES -puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) следующим образом. Для Cdx2
, pMXs-Cdx2-IRES-Puro создавался как сообщалось ранее [26]. Gli1
кДНК получали из ПЦР-XL-ТОРО-Gli1 (Open Biosystems, Huntsville, AL) с помощью ПЦР-амплификации с использованием праймеров 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 'и 5'-agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3'. После двойного переваривания с Bgl II и Not I, полученный фрагмент был вставлен в /Not I сайт BamH I из pMXs-IRES-Puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) для создания pMXs-Gli1-IRES-Puro. Gli3
кДНК получали из ПЦР-XL-ТОРО-Gli3 (Open Biosystems) с помощью ПЦР-амплификации с использованием праймеров 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 'и 5'-tgcggatcctacgtgggcatttttg-3'. После двойного переваривани BamH I и Not I, полученный фрагмент был вставлен в BamH I /Not I сайтов pMXs-IRES-Puro для генерации pMXs-Gli3-IRES-Puro. CTSE
кДНК была получена из PCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Scientific, Madison, WI) с помощью ПЦР-амплификации с использованием праймеров 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 'и 5'-gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3'. После двойного переваривани Bgl II и Xho I, полученный фрагмент встраивали в сайты BamHI-I /Xho I из pMXs-IRES-Puro для генерации pMXs-CTSE-IRES-Puro. Sox2
кДНК была получена из MKN-7 геномной ДНК с помощью ПЦР-амплификации с использованием праймеров 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'и 5'-tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3'. Амплифицированный фрагмент был вставлен в сайты EcoR V в pT7Blue-T вектора (Novagen, Дармштадт, Германия) для создания pT7Blue-Sox2. После двойного переваривани BamH I и Sal I, полученный фрагмент встраивали в сайты BamHI-I /Xho I из pMXs-IRES-Puro для генерации pMXs-Sox2-IRES-Puro. По котрансфекции этих плазмид с вирусом везикулярного стоматита оболочки G белка (VSV-G) выражение плазмиды в Плат-GP расфасовка линии клеток (Cell Biolabs Inc.), соответственно, VSV-G-pseudotyped ретровирусные векторы MuLV основе, выражающую Cdx2
, Gli1
, Gli3
, CTSE
и Sox2
были подготовлены.

Результаты

выражение катепсина Е (CTSE)
достоверно коррелирует с Originated гистологическим типом рака желудка клеточных линий

Для поиска генов-маркеров для сиг типа GC, мы просеивали экспрессию нескольких генов сообщили, чтобы показать отличительные выражение между кишечной и диффузного типа GC Лорен. Выражение E-кадгерина
( CDH-1
) [19], LI-кадгерин
( CDH-17
) [20], MUC5AC
[21], MUC6
[21], MUC2
[21], виментин
[22], КПУР <бр> ( катепсина D
) [23], [24], CTSE
( катепсина E
) [23], [24], CTSB <бр> ( катепсина B
) [25], CTSL
( катепсина L
) [25], и GAPDH
(внутренний контроль) гены были оценивали с помощью оТ-ПЦР в 20 ГЦ линии вместе с линиями клеток рака 12, полученных из других органов (Рис. 1А) Затем мы направили наше внимание на CTSE
, так как она выражает как в Като-III и NUGC-4 получают из сиг типа GC, а также потому, что он никогда не выражает в MKN-7 и Н-111-TC как известно, возник из хорошо дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы желудка (tub1 типа GC, подтверждающим документом S1).
<р> для других изученных генов, экспрессия CDH-1
( E- кадерин
), как сообщается, часто дефицитные по типу диффузного GC Лорена [19], [32], [33], неожиданно был обнаружен в двух GC-клеток, полученных сиг-типа (рис 1А). Кроме того, было неожиданно, что CDH-17
( LI-кадгерин
), считается кишечная маркерный ген [20], [26], [27], выражает почти во всех желудочные клеточные линии рака, включая сиг-типа (рис. 1А) Для других генов катепсина семьи, КПУР
сообщалось, высоко выражена в диффузного типа GC, а также прогностический параметр для карциномы желудка пациентов [23], [34], но результаты ОТ-ПЦР показал, что все исследованные линии клеток рака одинаково выражают КПУР
(Рисунок 1А). CTSB
и CTSL
Сообщалось быть повышен при желудочной карциномы [35] и коррелирует с его злокачественной собственности [36], но специфическая экспрессия ни CTSB
или CTSL
в GC-клеточных линиях сиг типа могут быть обнаружены (рис 1А). В целом, выражение профиля CTSE
кажется, довольно сильно отличается от других генов катепсина семьи.
<Р> Далее мы оценивали соотношение между выражением CTSE и гистологического типа линий 20 GC клеток. На основе детального наблюдения за литератур, описанных в "гистологического типа рака желудка клеточных линий» Поддержка документов S1, 19 линий GC ячейки могут быть отсортированы по Lauren и японской классификации [3], [4], [5] (таблица 1) , Согласно классификации Lauren, 7 из 11 типа диффузного GC-клетки, полученные и 1 из 5 типа кишечной GC-клетки, полученные из выражения CTSE (таблица 1): CTSE
ген имеет тенденцию быть выражены в диффузного типа и дефицитных в кишечного типа GC. Ассоциация между экспрессией CTSE и гистологическим признаком злокачественного новообразования желудка становится яснее, когда применяется более точная классификация японский язык. Среди клеточных линий диффузного типа GC, следует отметить, что NUGC-4 и Като-III возник из сиг типа GC сильно выражают CTSE, тогда как SH-10-ТК и KE-97 возникла из MUC типа GC являются несовершенными в CTSE выражение. Для клеток, полученных из Пор типа GC, наиболее частый гистологический тип злокачественных опухолей желудка [3], выражение CTSE разнообразен: MKN-45, КЭ-39, HuG1-ПИ, HuG1-N, и АГС сильно выражают CTSE, в то время как GCIY и ГГК-27 являются несовершенными в выражении CTSE. Напротив, среди клеточных линий кишечного типа GC Лорен, а именно tub1 и tub2 японской классификации, MKN-7, H-111-TC, MKN-74, и AZ521 лишены экспрессии CTSE, только с одним исключением NCI-N87 показывая явное выражение CTSE.
<р> из этих результата, мы предположили, что экспрессия CTSE достоверно коррелирует с гистологическим типом рака желудка. Для других редких типов ГХ клеточных линий, MKN-1, ЕСС-10, и ЕСС-12 являются абсолютно дефицитных в экспрессии CTSE (Фигура 1А, таблица 1).

Выражение катепсина Е (CTSE )
Джин регулируется главно на транскрипция уровне

с помощью 13 желудка, колоректальный рак, 5 и 2 других клеточных линий рака, продуцирования белка CTSE анализировали с помощью Вестерн-блоттинга (рис 1B). 7 из 20 клеточных линий также оценивали с помощью иммуногистохимии (рис S1). В обоих анализах CTSE
экспрессии мРНК и продуцирования белка CTSE в основном были связаны между собой, предлагая CTSE
выражение в основном регулируется на уровне транскрипции. К тому же, все или ничего выражение CTSE показано в RT-PCR, вестерн-блоттинга и иммуногистохимии предположил, что желудочные раковые клетки будут четко разделены на две категории:. CTSE-выражающей типа и CTSE-дефицитных типа
<р> Для того, чтобы исследовать регулирование CTSE
гена, два основных эпигенетические препараты, деметилирующий агент 5-аза-2'-дезоксицитидин и ингибитор гистондеацетилазы трихостатин A [37], были применены к пяти GC клеточных линий (рис 1C) , Три CTSE-выражения и две линии CTSE-дефицитные GC клеток обрабатывали, но мы не смогли обнаружить какие-либо изменения CTSE
транскрипции (рис 1C). Для метилирования, мы также искали CpG острова в наводящий промоторной области человеческого CTSE
гена с использованием двух сайтов: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx~~HEAD=pobj", демонстрирующего CpG острова поисковика и " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "при поддержке Национального центра биотехнологической информации (NCBI). Результаты обоих поисков предположили, что промотор человека CTSE
ген характеризуется более низким процентом CpG динуклеотидах (55%) и не острова CpG, которые согласуются с нашими результатами (рис 1C).

Кроме того, мы оценили эффект четырех факторов транскрипции, которые были зарегистрированы, чтобы регулировать многие желудочно-кишечные гены: CDX2
[26], [27], Gli
генов семейства ( Gli1
и Gli3
) [28], и Sox2
[29]. Под стабильной трансдукции CDX2
, Gli1
, Gli3
и Sox2
, однако, мы не смогли обнаружить очевидное изменение CTSE
выражение (рис 1D). В настоящее время мы не могли пролить свет на механизм регулирования CTSE
ген, который должен быть решен в будущем.

катепсина Е (CTSE) определенно Выраженный в перстень карциномой желудка
<р> Чтобы проверить предположение из ГХ клеточных линий (таблица 1, рис 1А), мы затем анализировали экспрессию CTSE в клинических образцах. Во-первых, 51 образцов GC сиг типа хирургически удаленных были оценены. Поразительно, наблюдалось окрашивание очевидным CTSE во всех 51 образцах исследованных и в 50 из 51 случаев, CTSE-позитивные клетки занимали более 90% раковых клеток в опухоли (таблица 2).
<Р> Далее, 67 хирургические образцы, полученные из других, чем сиг типа GC случаев были проанализированы, что были представлены различные паттерны экспрессии CTSE (таблица 2). Выражение CTSE в Пор-типа GC был явно выше по сравнению с четырьмя другими типами GC, хотя она была значительно ниже, чем у сиг типа GC (таблица 2). Распространенность CTSE положительных клеток в tub1-, tub2-, pap- и MUC типа GC, конечно, ниже, но это не так низко, как другие нормальные органы пищеварения (таблица 2). Типичные изображения иммунным CTSE в шести типов ГХ показаны на рисунке 2 (сиг и tub1) и рис S2 (tub2, PAP, Пор и MUC).
<Р> На основании результата хирургических образцов, мы далее анализировали экспрессию CTSE 84 эндоскопически резецированных желудка образцов опухолей. По сравнению с хирургически образцами, гистология эндоскопа резекцию ткани гораздо более однородным; это было оттуда ожидать, что связь между выражением CTSE и гистологии рака желудка могут быть проанализированы более точно. Они составили 78 случаев ранней стадии аденокарциномы (7 из сиг-типа, 52 tub1 типа, 12 tub2 типа и 7 Пап типа GC) и 6 случаев предраковых аденомы (Таблица 3). CTSE выражение SIG-, tub1-, tub2- и PAP типа GC в эндоскопически резецированных тканях напоминает хирургическим резецированных те, с соответствующей гистологии (таблицы 2 и 3). Рассчитанные выражение оценки CTSE (таблица 3) ясно показывают тенденцию, что CTSE определенно выражающее в сиг типа GC в то время как она имеет тенденцию быть несовершенными в tub1- и tub2 типа GC. Следует также отметить, что желудочный аденома, который можно рассматривать как более дифференцированной гистологической особенностью по сравнению с tub1 типа GC, показал сильнейший дефицит CTSE (таблица 3).

CTSE является не только индикатором Перстень -кольцом карциномой желудка, но и Желудочный Дифференциация Маркер
<р> чтобы проверить распределение CTSE в нормальном кишечнике и предраковых желудка, иммунное CTSE дополнительно применяется к нераковая желудка и других органов желудочно-кишечного тракта. В желудке без атрофии и кишечной метаплазии, экспрессия CTSE отчетливо наблюдается в фундального и пилорического желез желудка (рис S3D /S3A и S3E /S3B). Сердечные железы желудка также выражают CTSE, хотя это скорее слабее, чем выражение в фундального или пилорического желез (рис S3F /S3C). Контрастно, CTSE редко выражается в пищеводе, двенадцатиперстной кишки, тонкой кишки и толстой кишки (рис S4).
<Р> Далее мы оценили экспрессию CTSE в слизистой оболочке желудка с кишечной метаплазией, известный предраковое состояние желудка [26 ], [29], [38]. Как показано на фигуре 3А, желудочные фундальную железы и кишечника метапластические железы обнаруживают контрастивный окрашивание CTSE. Как правило, кишечная метаплазия подразделяется на две категории: смешанная желудочно-кишечного тракта и-типа (неполный тип) и исключительно кишечного типа (полный тип) [29], [38]. Хорошо известно, что прежний выражает как MUC5AC (желудочный муцин маркер) и MUC2 (кишечная маркер муцин), тогда как последний один выражает не MUC5AC но MUC2 [29]. В обоих типах кишечной метаплазии в желудке, мы подтвердили, что экспрессия CTSE подобна MUC5AC и противоположно MUC2 (рис 3В и 3С).
<Р>, чтобы оценить связь выражения CTSE с выражением MUC5AC и MUC2, их иммунное статистически оценивали с использованием эндоскопа резекция желудка 84 ткани опухоли (Таблица S2). Корреляционного анализа показали, что экспрессия CTSE положительно связана с маркером желудка MUC5AC ( р
&л; 0,0001) и отрицательно связан с кишечным маркером MUC2 ( р = 0,0019
). Искусственно, мы пришли к выводу, что CTSE, как MUC5AC, является одним из маркеров дифференцировки желудка.

Подробнее Недифференцированный Трубчатые Аденокарцинома Склонен воскресни из фона слизистой снизилась как "желудочный" и "кишечная" Особенности
<р> Для исследования стадии инициирования желудочного онкогенеза, фон слизистая ранней диагностики рака и аденомы далее оценивали, используя 84 эндоскопически резецировали образцов. CTSE экспрессия нераковая слизистой оболочки желудка, прилегающей к опухоли поражения оценивали, вместе с MUC5AC и MUC2 (таблица 4). Для сиг типа GC, как повреждение опухоли и фон Слизистая оболочка в основном показал сильную экспрессию CTSE и MUC5AC, тогда как экспрессия MUC2 была очень слабой в обоих из них (таблица 4). Подобные паттерны экспрессии трех маркеров в опухоли и прилегающей к слизистой оболочке позволяют предположить, что инициирование сиг типа GC отражает особенности фоновой слизистой оболочки, с точки зрения "желудочный" и "кишечной" дифференциации. То есть, сиг типа GC с не-кишечными желудочных свойств первоначально происходит от фоновой слизистой оболочки с не-кишечных и желудочных функций
. <Р> Для желудка аденомы и аденокарциномы трубчатых (tub1 /tub2 типа GC), контрастно, профили экспрессии трех маркеров очень интересны (Таблица 4). Более недифференцированные опухоли желудка имеют тенденцию к увеличению экспрессии CTSE и MUC5AC в опухолевых поражений (tub2 &GТ; tub1 &GТ; аденома), но уменьшают экспрессию этих маркеров желудка в фоновом режиме слизистой оболочки (tub2 &ЛТ; tub1 &Лт; аденома). Они предполагают, что более недифференцированные (следовательно, более злокачественные) опухоли желудка склонны показать сильное свойство желудка, в то время как они, как правило, возникают из фоновой слизистой оболочки желудка с пониженной функции. С другой стороны, более дифференцированные опухоли желудка, как правило, выражают MUC2 в обоих опухолевых поражений и фоновой слизистой оболочки (аденома > tub1 > tub2). Это наводит на мысль, что кишечная дифференциация фоне слизистой оболочки желудка приводит к кишечно дифференцированных (следовательно, менее злокачественных опухолей желудка).
<Р> Для PAP типа GC, выражения CTSE, MUC5AC и MUC2 были значительно сильны в обоих поражения опухоли и окружающих слизистую оболочку, которые довольно сильно отличаются от паттернов экспрессии tub1 /tub2 типа GC (таблица 4). Мазок типа GC классифицируется в кишечном типа Лорен вместе с tub1 /tub2 типа GC, но наши нынешние анализ позволяет предположить, что мазок типа и tub1 /tub2 типа GC не должны рассматриваться в той же категории, с точки зрения желудка и кишечника функции. В наших предыдущих докладах анализа Brm
[3], возможный ключевой ген-маркер кишечной дифференцировки, экспрессия Brm в желудочном папиллярные аденокарциномы (PAP) довольно сильно отличается от трубчатой ​​аденокарциномы желудка (tub1 и tub2). В настоящее время, мы убеждены в том, что гистологическое различие между PAP типа GC и tub1 /tub2 типа GC должен быть строго распознано.

Обсуждение

Роли и регулирование катепсина Е (CTSE) в Желудок человек
<р> катепсина Е (CTSE), не-лизосомальная внутриклеточная аспарагиновой протеазы, является одним из катепсина семьи протеаз [39], [40]. Другой аспарагиновой протеазы cathespin D (КПУР), гомолог CTSE, представляет собой серьезную протеолитическую активность в компоненте лизосомной, но функциональная роль CTSE не выяснены [24], [39]. Распределение обоих протеиназ довольно сильно отличается: СиТСД повсеместно существовали в лизосомах различных тканей (в соответствии с результатом, на фиг.1А), в то время как CTSE в основном экспрессируется в клетках иммунной системы, такие как macropahges, лимфоциты, дендритные клетки и т.д. [39 ]. Выражение CTSE в желудке также сообщалось [23], [24], хотя физиологические и патологические функции желудка CTSE в настоящее время неизвестно [39], [40]. В настоящем исследовании оценки больше, чем 202 клинических образцов желудка, мы ясно показали CTSE является как желудочный маркера дифференцировки и желудка кольцо с печаткой карцинома маркером, но значение желудочной выражения CTSE остается неопределенной.
<Р> Для проанализировать отношение выражения CTSE и онкогенного потенциала, мы изготовили вектор MuLV на основе ретровирус [26], перевозящего CTSE
гена и трансдуцированная его в CTSE-дефицитных желудка линий раковых клеток: MKN-74, SH-10 -TC и MKN-1. Мы оценили возможность изменения желудочного муцина производства (рис S5) или их морфологические изменения, но не наблюдалось никаких изменений. С помощью этих установленных клеточных линий, мы также проводили как образование колоний в мягком агаре [30] и индукции апоптоза при лечении актиномицин D, камптотецина и стауроспорином [41]. Тем не менее, мы могли бы обнаружить эффект экспрессии CTSE на ни анкерного независимого роста, ни устойчивость к апоптозу медикаментозного (данные не показаны)
<р> В недавнем исследовании, CTSE было сообщено иметь некоторые анти-онкогенных потенциал.: Кавакубо <ЕМ> и др. показали, что
CTSE специфически индуцирует остановку роста и апоптоз в раковых клеточных линиях простаты человека путем катализировать протеолитическое высвобождение растворимого фактора некроза опухоли, связанные с индуцирующего апоптоз лиганд (TRAIL) с клеточной поверхности [42 ]. Тем не менее, CTSE-дефицитных мышей сделали ни экспонат рака подверженных фенотип, ни присутствующие очевидные расстройства желудка [43], [44], [45]. В настоящее время речь идет о гипотезе ли сообщили противоопухолевая активность CTSE может применяться рак желудка, включая рак перстень клеток. Вместе с его невыясненными регулирования и физиологической функции, эффекты CTSE на желудочную дифференциации и онкогенеза являются фундаментальные проблемы, которые должны быть решены в будущем.

Желудочный злокачественного с точки зрения "желудка" и "кишечной" собственности Справочная информация

• PLoS ONE: ретиноевой кислоты-активированный Ndrg1a репрессирует Wnt /-катенин сигнализации для обеспечения Xenopus подже…
• PLoS ONE: Послеоперационный Химиолучевая терапия в сочетании с Эпирубицин-Based триплетных Химиотерапия местно-ра…